FACULTAD DE

CIENCIAS ESCUELA DE CIENCIA

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ESCUELA SUPERIOR POLITCNICA DE CHIMBORAZO

Facultad De Ciencias
Escuela De Ciencias Qumicas
Ingeniera En Biotecnologa Ambiental
5to Semestre: Paralelo A
Informe De Laboratorio De Bioqumica

Prctica No 5
DATOS GENERALES
Alumnos:
Kevin Patricio Murillo Noboa 2479
Jhonatan Wladimir Tandapilco Llumitaxi 2460

Nota Informe:

TEMA: CARACTERIZACIN CUALITATIVA DE DOS ENZIMAS

(CATALASA Y AMILASA)

1. OBJETIVOS.

1.1. OBJETIVO GENERAL:

Caracterizar cualitativamente dos enzimas.

1.2. OBJETIVOS ESPECFICOS:

Determinar la presencia de la enzima catalasa en diversos tejidos.
Comprobar el efecto de la temperatura sobre la actividad
enzimtica.
Comprobar la accin hidroltica de la amilasa.
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2. MARCO TERICO
Los enzimas son protenas que catalizan reacciones qumicas en los
seres vivos. Los enzimas son catalizadores, es decir, sustancias que, sin
consumirse en una reaccin, aumentan notablemente su velocidad. No
hacen factibles las reacciones imposibles, sino que solamente aceleran
las que espontneamente podran producirse. Ello hace posible que en
condiciones fisiolgicas tengan lugar reacciones que sin catalizador
requeriran condiciones extremas de presin, temperatura o pH.
(Alejandro Porto Andion, s.f.)
Reconocimiento de la catalasa
La catalasa es una enzima; nmero 1.11.1.6. de la Unin Internacional
de Bioqumica. Nombre sistemtico: xido reductasa de perxido de
hidrgeno. Peso molecular 250000. La catalasa es una enzima que se
encuentra en las clulas de los tejidos animales y vegetales, pero es
especialmente abundante en la sangre y el hgado. De estos dos tejidos,
se obtienen en forma cristalina La funcin de esta enzima en los tejidos
es necesaria porque durante el metabolismo celular, se forma una
molcula txica que es el perxido de hidrgeno, H2O2 (agua
oxigenada). Esta enzima, la catalasa, lo descompone en agua y
oxgeno, por lo que se soluciona el problema. (Monica Gonzales, 2010)
La existencia de catalasa en los tejidos animales, se aprovecha para
utilizar el agua oxigenada como desinfectante, cuando se aplica sobre
una herida. Como muchas de las bacterias patgenas son anaerobias
(no pueden vivir con oxgeno), mueren con el desprendimiento de
oxgeno que se produce cuando la catalasa de los tejidos acta sobre el
agua oxigenada.
Desnaturalizacin
Se llama desnaturalizacin de las protenas a la prdida de las
estructuras de orden superior (secundaria, terciaria y cuaternaria),
quedando la cadena polipeptdicas reducida a un polmero estadstico sin
ninguna estructura tridimensional fija. (Ehu)
La catalasa qumicamente es una protena, podemos desnaturalizarla al
someterla a altas temperaturas. Puedes recordarlo en la prctica de
protenas. Al perder la estructura terciaria, perder tambin la funcin y
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como consecuencia su funcin cataltica, por lo que no podr

descomponer el agua oxigenada y no se observar ningn tipo de
reaccin cuando hagamos la experiencia anterior con muestras de tejidos
hervidos.
Amilasa
La amilasa (nombre comn); nmero 3.2.1.1. de la Unin
Internacional de Bioqumica. Nombre sistemtico: 1,4-glucano-4-
glucanohidrolasa. Peso molecular 45000.

Los rganos productores de amilasa srica son: Las glndulas salivares;

sobre todo en las glndulas partidas, que secretan amilasa que forma
parte de la saliva para degradar almidones y el pncreas.

La amilasa pancretica excretada por el pncreas mediante los

conducios de Wirsung y Santorini a la segunda porcin del duodeno.
Tiene un pH de 7. Cuando una de estas glndulas se inflama aumenta la
produccin de amilasa y aparece elevado su nivel en sangre.

Fue la primera enzima en ser identificada y aislada por Anselme Payen

en 1833, quien la bautiz en un principio con el nombre de diastasa.

Se cristaliz la amilasa de la saliva y del pncreas del hombre, y de

los microorganismos Pseudomonas y Aspergillus. Dentro de las
amilasas, existen dos grandes grupos, las amilasas y . Las amilasas
hidrolizan rpidamente la porcin amilsica del almidn hasta dar
maltosa. Rompen los enlaces 1 4 glucano de los polisacridos,
eliminando unidades sucesivas de maltosa a partir del extremo no
reductor de la cadena. A diferencia de la amilasas , las amilasas
suprimen rpidamente la propiedad de la amilosa de dar un color azul
con el yodo; adems, la aparicin de maltosa es mucho ms lenta en las
reacciones catalizadas por amilasa que en las catalizadas por amilasas
.
Dichas amilasas hidrolizan los enlaces 1,4, o ms, dando una serie
de productos. La saliva producida por las glndulas submaxilares,
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sublingual y partida, y tambin por las glndulas que se encuentran en

las mucosas de la boca, garganta y esfago, contienen
aproximadamente 99.5 por 100 de agua; la substancia slida est
representada por amilasa salival (ptialina), varias protenas (una de las
cuales es la mucina, una glucoprotena), varios iones inorgnicos como
Ca++, Na+, K+, Mg++, Cl-, HCO3- y PO4-3, y compuestos orgnicos
como cidos aminados, urea, cido rico y colesterol.

3. MATERIALES, REACTIVOS, EQUIPOS

MATERIALES: REACTIVOS:
-Tubos de ensayo (5) -Trozos de hgado de pollo.
-Gradilla -Agua oxigenada
-Reverbero -Sol. diluida de almidn
-vaso de precipitacin de 25 mL -Reactivo de Fehling
-Pipeta de 10 mL -Reactivo de Lugol
-Termmetro

4. GRFICO:
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5. PROCEDIMIENTO:

A. RECONOCIMIENTO DE LA CATALAZA
1. Se coloca en un tubo de ensayo unos trocitos de hgado.
2. Se aade 5 mL de agua oxigenada.
3. Se observa un intenso burbujeo debido al desprendimiento de
oxgeno.

B. DESNATURALIZACIN
1. Se coloca en un tubo de ensayo varios trocitos de hgado.
2. Se aade agua para hervir la muestra. Hervir durante unos
minutos.
3. Despus de este tiempo, se retira el agua sobrante.
4. Se aade el agua oxigenada.

HIDRLISIS DEL ALMIDN

1. Se toman cuatro tubos de ensayo, numerados del 1 al 4.
2. Se aade a cada tubo 5 mL de una solucin diluida de almidn.
3. A los tubos 3 y 4 se aade una pequea cantidad de saliva.
Para ayudarle a formar ms saliva, piense en un limn o en algo que
le apetezca mucho comer. As favorece que forme ms saliva.
En el tubo 1, se realiza la Reaccin de Fehling.
En el tubo 2, se realiza la Reaccin de Lugol.
Los resultados son los esperados para un polisacrido como el
almidn.
Los tubos 3 y 4 que contienen el almidn, al que le hemos echado la
saliva, ponerlos en un vaso de precipitacin al bao Mara,
controlando la temperatura del agua que no hierva, ya que lo que
intentamos, es que la enzima de la saliva trabaje a unos 37C .
Dejarlo unos 15 minutos.
A continuacin realizar las siguientes reacciones:
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En el tubo nmero 3, se realiza la Reaccin de Fehling.

En el tubo nmero 4, se realiza la Prueba de Lugol

6. CLCULOS, REACCIONES Y RESULTADOS:

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Resultados
Accin enzimtica Hgado Hgado
de la catalasa crudo cocinado
H2O2 + -

+ = Reaccin positiva
- = Reaccin negativa

Sol. almidn Rx. de Fehling. Rx. de Lugol

Sin amilasa - +
Con amilasa + -

+ = Reaccin positiva
- = Reaccin negativa
7. OBSERVACIONES
Tubo de ensayo con trozos de
hgado de pollo, crudo y con
aproximadamente 5 mL de
perxido de hidrogeno, presenta
espuma blanca que se origin
con un burbujeo (Izquierda)

Gradilla con tubos de ensayo

que contiene trozos de hgado
de pollo, la gradilla esta
introducida en el bao mara
con agua hirviendo para que se
cocine el hgado luego,
precedemos a colocar el
perxido de hidrogeno
(Derecha)
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Tubo 1
Tubo de ensayo con solucin de
almidn y reactivo de Fehling, la
solucin presenta un naranja y
no existe precipitado

Tubo 2

Tubo de ensayo con solucin de

almidn y reactivo de lugol
(yodo), la solucin cambia de
color y torna una solucin de
color negro azulado

Tubo 3
Solucin hidrolizada de almidn
en presencia de saliva, ms la
presencia de reactivo de
Fehling, la positivo se evidencia
la presencia de precipitado color
rojo ladrillo sobre una parte
acumula que permanece en el
fondo
Tubo 4
Tubo de ensayo con solucin
hidrolizada de almidn en
presencia de saliva ms
reactivo de lugol, el reactivo de
lugol no cambia de color y se
precipita el pigmento al fondo y
queda un sobrenadante
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8. CONCLUSIONES:

Se determin la presencia de la enzima catalasa en el hgado de

pollo, se hizo mediante una prueba sencilla que consisti aadir
trozos del hgado de pollo junto con agua oxigenada, donde se vio
un rpido desprendimiento de oxgeno, se manifest con
presencia de espuma que contenan pequeas burbujas

Comprobamos que la temperatura ejerce un papel importante en

la actividad enzimtica de manera que se puede llevar a cabo un
proceso a una temperatura optima, o bien si se excede en la
cantidad de calor la enzima se inactiva por la hidrolisis que sufre
su estructura proteica, luego no puede cumplir su funcin cataltica

Se comprob el efecto hidroltico al llevar a colocar en un tubo de

ensayo 5 ml de solucin de almidn y saliva (contiene amilasa) y
llevar a bao mara para simular las condiciones corporales en
cuanto a temperatura, luego de 25 minutos aproximadamente
comprobamos la hidrolisis del almidn mediante las pruebas de
lugol que dio negativa y la de Fehling que manifest la presencia
de azucares reductores, que no es caracterstica del almidn.

9. CUESTIONARIO:

9.1. Describa la catalasa

La catalasa es una enzima perteneciente a la categora de las
oxidorreductasas que cataliza la descomposicin del perxido de
hidrgeno (H202) en oxgeno y agua.
Esta enzima utiliza como cofactor al grupo hemo y al manganeso. La
catalasa en una enzima que la podemos encontrar en muchos
organismos vivos.
El perxido de hidrgeno es uno de los productos del metabolismo
celular en diversos organismos, pero dada su potencial toxicidad, es
transformado enseguida por la enzima catalasa.
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9.2. Describa la amilasa

Enzima que fragmenta el almidn en sus componentes. La amilasa,

denominada tambin ptialina o tialina, es un enzima hidrolasa que tiene
la funcin de digerir el glucgeno y el almidn para formar azcares
simples.
Los rganos productores de amilasa srica son: Las glndulas salivares;
sobre todo en las glndulas partidas, que secretan amilasa que forma
parte de la saliva para degradar almidones y el pncreas.
La amilasa pancretica excretada por el pncreas mediante los
conducios de Wirsung y Santorini a la segunda porcin del duodeno.
Tiene un pH de 7. Cuando una de estas glndulas se inflama aumenta la
produccin de amilasa y aparece elevado su nivel en sangre.
Fue la primera enzima en ser identificada y aislada por Anselme Payen
en 1833, quien la bautiz en un principio con el nombre de diastasa.
(Pablo Cordero)

9.3. Indique que factores afectan la velocidad de una reaccin

catalizada por una enzima.
Las reacciones qumicas catalizadas por enzimas, dependen del pH,
la temperatura, el efecto de la concentracin de la enzima y de la
concentracin del sustrato. (UNAD, s.f.)

a) Efecto del pH

Debido a que las enzimas son de naturaleza proteica, las alteraciones en el pH

del medio modificarn profundamente el carcter inico de los grupos aminos y
carboxilos de los aminocidos que constituyen la protena y en consecuencia
afectarn su poder cataltico. Es decir, a valores extremos de pH se produce
una inactivacin de la enzima. Por lo tanto, es importante establecer m pH
ptimo en estudios enzimticos, en el cual, la actividad cataltica de la enzima
presenta un rendimiento alto, conociendo este valor, la reaccin se debe
mantener en este rango de pH por medio de un buffer o solucin
amortiguadora, lo mismo ocurre en la clula, ya que un pequeo cambio en el
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valor de pH produce tambin graves efectos sobre la actividad enzimtica,

incidiendo como es obvio en el metabolismo del animal.

La grfica anterior nos muestra que cuando se modifica el pH en el

transcurso de una reaccin enzimtica, aparece un valor en el cual la velocidad
es mxima, este punto se denomina pH ptimo y por encima o debajo de dicho
valor, la velocidad disminuye.

b) Efecto de la Temperatura

Al igual que el pH, las temperaturas extremas, afectan las reacciones enzimticas,
dada su naturaleza proteica. Debido a esto, se observa que a
diversas temperaturas, la velocidad de la reaccin cambia, tal como lo
demuestra la ecuacin de Arrhenius. Sin embargo, a un cierto valor la velocidad
de la reaccin es mxima, lo cual nos indica una temperatura ptima de la misma,
por encima o por debajo de esta temperatura la enzima pierde actividad y la
velocidad disminuye

c) Efecto de la Concentracin de la Enzima

La velocidad de una reaccin enzimtica vara, directamente proporcional a

la concentracin de la enzima, por lo tanto a mayor [E] se incremente la
velocidad, esto es vlido en presencia de un exceso de sustrato.

d) Efecto de la Concentracin del Sustrato

S mantenemos la concentracin de la enzima constante y variamos

la concentracin del sustrato, podemos observar que cuando se aumenta
la concentracin de ste, inicialmente hay un incremento notable en la velocidad de
la reaccin, hasta alcanzar una velocidad mxima estable, despus de la
cual permanece invariable por ms sustrato que se le agregue. La curva hiperblica
de la figura nos muestra que a baja concentracin de sustrato la relacin entre V y
[S] es prcticamente lineal y por lo tanto obedece a una cintica de primer orden
con respecto al sustrato, es decir: V =[ K]
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10. RECOMENDACIONES:

Al momento de hacer la desnaturalizacin asegurarse de que el

hgado este completamente hervido para observar mejores
resultados en la visualizacin

Controlar que la temperatura del agua en el bao Mara se

mantenga constante a 37C que es la temperatura a la cual se
encuentra el cuerpo humano

El tubo de ensayo que contiene la saliva dejarlo por ms tiempo en

el bao Mara del que se recomienda en la gua debido a que la
prctica no puede salir del todo satisfactoria

11. Bibliografa

Alejandro Porto Andion. (s.f.). Bionova. Recuperado el 05 de Julio de 2016, de Curso de

Biologia: http://www.bionova.org.es/biocast/tema14.htm
Ehu. (s.f.). Ehu. Recuperado el 05 de Julio de 2016, de Desnaturalizacion de Proteinas:
http://www.ehu.eus/biomoleculas/proteinas/desnaturalizacion.htm
Monica Gonzales. (25 de Octubre de 2010). La Guia. Recuperado el 05 de Julio de
2016, de Quimica: http://quimica.laguia2000.com/conceptos-basicos/enzima-
catalasa
Pablo Cordero. (s.f.). Apuntes Bioquimica Humana. Recuperado el 05 de Julio de 2016,
de Universidad de Cuenca - Medicina: http://www.salud180.com/salud-
z/amilasa
UNAD. (s.f.). Universidad Nacional Abierta y a Distancia. Recuperado el 05 de Julio de
2016, de Datateca:
http://datateca.unad.edu.co/contenidos/200002/MODULO%20SISTEMAS%20
METABOLICOS%20NUTRICIONALES/leccin_8_factores_que_afectan_la_cintica_
enzimtica.html