MATERIALES y METODOS

Luego de colocarnos los guantes y desinfectar el espacio de trabajo, se procedi a realizar el

master mix, con los reactivos y cantidades indicados en el siguiente cuadro:

REACTIVOS 1RX MASTER MIX( 8 RX)

Buffer PCR 10x 1.0 l 8.0 l
dNTPs 0,2 1,6
Primer c/u x4 0,0625 2.0
Taq 0,2 1,6
H2O NFW 7,45 59,6
DNA 0,5 4.0 c/u
Total 9,6 76,8

Luego de realizar el master mix habindolo mezclado en un vortex y centrifugado por segundos,
se dividi de manera equitativa en 7 microtubos, rotulando cada uno de estos. Luego, se procede
a aadirle a cada uno DNA (mejor muestra extrada en clases anteriores) o Mg segn se indica en
el cuadro siguiente:
TUBO Ta
1 DNA+ 0,4l DNA 44
2 DNA+ 0,4l DNA 55
3 DNA+ 0,4l DNA 63
4 DNA+ 0,4l Mg 44
5 DNA+ 0,4l Mg 55
6 DNA+ 0,4l Mg 63
7 Blanco

Al tener ya nuestros microtubos listos, se colocan en el termociclador y se ajusta la temperatura

de hibridacin de acuerdo a la secuencia de primers seleccionados y al ADN molde utilizado. Una
vez terminado el PCR (aproximadamente 2 horas), se evalan los resultados obtenidos.