Biorremediacin

EIA 980-1

Informe

Prctica de Laboratorio N1

Aislamiento de microorganismos
andinos

Cristian Sanchez
706413

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Contenido
1 Objetivos................................................................................................................. 3
1.1 Objetivo general...............................................................................................3
1.2 Objetivo especifico...........................................................................................3
2 Materiales y mtodos..............................................................................................3
2.1 Materiales y mtodos del muestreo en la zona de Papallacta.........................3
2.2 Materiales y mtodos para la siembra de microorganismos............................4
2.2.1 Materiales.................................................................................................4
2.2.2 Reactivos..................................................................................................4
2.2.3 Equipos....................................................................................................4
2.3 Materiales y mtodos para la tincin Gram......................................................7
2.3.1 Materiales.................................................................................................7
2.3.2 Reactivos..................................................................................................7
2.3.3 Equipos....................................................................................................7
3 Resultados.............................................................................................................. 9
4 Cuestionario.......................................................................................................... 11
4.1 Clasificacin morfolgica de los microorganismos.........................................11
4.2 Descripcin del genero psudomona...............................................................11
4.3 Rol de los microorganismos en los ciclos biogeoqumicos............................12
5 Conclusiones........................................................................................................12
6 Bibliografia:........................................................................................................... 13

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1 Objetivos
1.1 Objetivo general
Identificar la diversidad de los microrganismos Andinos.

1.2 Objetivo especifico

Sembrar las muestras de suelo en medios de cultivos para su desarrollo.

Utilizar la tincin de Gram para poder identificar las bacterias de la muestra.
Identificar los microorganismos que se encuentran mediante el uso del
microscopio.

2 Materiales y mtodos

2.1 Materiales y mtodos del muestreo en la zona de Papallacta

Palas
Fundas Ziplock
Cooler
Papel estao
Marcadores
Guantes de seguridad
Equipo: Gps

Mtodo:

Se delimit el rea de muestreo y se georeferenci los puntos mediante el uso

de un GPS.
Se procedi a la medicin de la longitud del permetro del rea a muestrear
para tener una referencia del tamao de la parcela de muestreo. Ya definida la
parcela con sus respectivas longitudes, se procedi a seleccionar puntos de
muestreo.
Con los puntos de muestreo seleccionados, se procedi a la toma de muestra
del suelo del rea delimitada. Esta se la hizo mediante la remocin de una
porcin de suelo de dimensiones de 20 x 20 cm con 15 a 20 cm de
profundidad.
Todas las muestras fueron puestas en fundas ziplock, catalogadas y
refrigeradas en un color con gel refrigerante.

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 Imagen 1. Coordenadas del lugar del muestreo.

2.2 Materiales y mtodos para la siembra de microorganismos

2.2.1 Materiales

Asa de siembra, cajas petri, cofia, embudo, esptulas, frascos boeco, guantes,
gradilla, lmpara de alcohol, marcador, papel empaque, parafilm, perilla, piceta,
pinza para tubo de ensayo, pipetas de 1ml, probetas 10ml, tijera, tubos de
ensayo, vidrio portaobjetos.

2.2.2 Reactivos.

Agua destilada, agar nutritivo, alcohol, hipoclorito (solucin al 10%).

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2.2.3 Equipos.

Cmara de flujo laminar, microscopio ptico, incubadora, lente para conteo,

autoclave, Balanza.

Mtodo:

Se pesaron 10 gramos del suelo contaminado, los que se disuelven en 500

mL de agua destilada, se la agit y se la dej reposar, a la muestra, durante
unos minutos.
Con una pipeta estril se tom 1 mL de la muestra, luego se pus ese 1 mL
de muestra en un tubo de ensayo con 9 mL de agua destilada.
Se repiti esta accin durante dos veces ms, hasta tener 3 tubos de
ensayo, a pesar de que se recomendaba hasta llegar al sexto tubo, este no
hizo falta porque la muestra estaba clara, por lo que se dedujo que las
muestras que ya tenamos no estaban sobrecargadas de microorganismos.
Se rotularon las muestras con 10-1, 10-2, y 10-3.
Para la siembra de microorganismos se necesita un Agar que sirva de
nutrientes para estos. Se dispone a quemar el Asa de siembra y moverlo en
estriado sobre todo el Agar nutritivo.
Para empezar con la siembra, se introdujo el asa de siembra en la llama del
mechero para esterilizarla, hasta que se torne rojo.
Se procedi a enfriar el asa en el medio de cultivo, para luego introducirla
en el tubo de ensayo que contena la dilucin y as tomar una muestra.
Se realiz la siembra en forma de estras, empezando por un lado de la caja
Petri, hasta que se repita el proceso tres veces, hay que tomar en cuenta
que es muy importante el realizar el proceso lo ms cerca posible del fuego
para evitar cualquier efeco negativo en la persona que realiza el cultivo.
Una vez terminada la siembra, se esteriliz nuevamente el asa, y se coloc
el parafilm en las uniones de la caja Petri para as sellarla lo mejor posible.
Se rotul cada una de las cajas Petri, como ltimo paso.

El cultivo sembrado se lo mantuvo 24 horas en una temperatura de 37C-

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 Imagen 2. Protocolo de siembra de las muestra de Papallacta para
aislamiento.

Ilustracin 1. Proceso de dilucin para la siembra de microorganismos

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2.3 Materiales y mtodos para la tincin Gram.

2.3.1 Materiales

Asa de siembra, cajas Petri, portaobjetos, cubreobjetos, mecheros de alcohol,

parafilm, piceta, goteros y mascarilla.

2.3.2 Reactivos.

Agua destilada, reactivos de Gram (cristal violeta, safranina, yodo Gram,

mezcla etanol acetona),

2.3.3 Equipos.

Microscopio ptico.

Mtodo:
Se procedi a nombrar el portaobjetos, y se dispuso una gota de agua.
Se esteriliz el asa de siembra con fuego del mechero, despus de hacer
que se enfre en el medio de cultivo se procedi a tomar una muestra y
esparcirla, con ayuda de la gota en el portaobjetos.
Una vez esparcido, se fijo la muestra al portaobjetos mediante cortas
aproximaciones al mecgero.
Se agreg cristal violeta, cubriendo la parte del portaobjetos con muestra,
luego se le agreg alcohol cetona, se esperaron 30 segundos, se lo lav, se
agreg la zafranina, se esperaron otros 30 segundos, se lo lav,
nuevamente, se agreg lugol, se esperaron 30 segundos, se lo lav, se lo
sec al aire y se observaron los resultados con la ayuda del microscopio.

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Imagen 3. Protocolo de tincin Gram para la identificacin de microorganismo.

Ilustracin 2. Diferencian de las bacterias Gram positivas y negativas por la

fijacin del color,

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3 Resultados.
Se evidencia cocos, diplococos, bacilos y bacilos esporulados

Imagen 4. Microorganismo con vista de 100x

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Imagen 5. Microorganismo con vista de 100x

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4 Cuestionario
4.1 Clasificacin morfolgica de los microorganismos
La forma de las bacterias al microscopio est determinada por la rigidez de su
pared celular. Bsicamente, se diferencian segn su forma en cocos que son
esfricas u ovaladas, bacilos con forma cilndrica o de bastones; rectos o
curvos y espirilos en en forma espiral (Tortora, Funke, & Case, 2007).

Ilustracin 3. Diferentes formas y agrupamientos de los microorganismos.

4.2 Descripcin del genero psudomona.

Las bacterias del gnero Pseudomonas son gram negativas ; usualmente tiene
forma de bacilo y bastn ligeramente curvado, los que, por lo general, son
mviles mediante uno o ms flagelos situados en uno de sus extremos.
(Contreras, 2014)

Algunas Pseudomonas (p.ej. Ps. aeruginosa) son capaces de llevar a cabo

procesos de desnitrificacin (NO 3- --> NO2- --> N2) con lo que se empobrecen
los suelos de nitrgeno utilizable desde el punto de vista agrcola. Este proceso
de reduccin del nitrgeno (que acta como aceptor de electrones en un
proceso de respiracin anaerobia) se denomina reduccin disimilatoria del
nitrgeno (Montie, 2000).

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La versatilidad metablica del grupo se debe a la presencia de un gran nmero
de plsmidos que contienen operones inducibles para la sntesis de enzimas
especficas que permiten catabolizar los compuestos presentes en el medio.

Esto confiere una importancia grande a las bacterias del gnero Pseudomonas
como digestores aerobios de materiales animales y vegetales, lo que
contribuye al reciclaje biolgico de materia orgnica. Algunas bacterias de este
grupo producen pigmentos fluorescentes de colores amarillo-verdosos
fcilmente solubles en agua. Estos pigmentos actan como siderforos:
molculas cuya funcin es capturar el hierro del medio necesario para el
metabolismo del microorganismo (Montie, 2000)

4.3 Rol de los microorganismos en los ciclos biogeoqumicos

Primero se debe entender que es un ciclo biogeoqumico. Esto es un reciclaje

de masa y energa que tiene el planeta Tierra para que el curso de la vida del
mismo siga existiendo.
Las bacterias y los hongos son los microorganismos que, junto a los
productores, permiten la existencia del ciclo de la materia en la biosfera. Su
funcin es descomponer la materia orgnica procedente de restos vegetales,
cadveres y excrementos, convirtindola en materia inorgnica que vuelve a
ser utilizada por los productores. (Montie, 2000)

De igual manera los microorganismos son los principales responsables de la

mineralizacin de la materia orgnica. Los distintos productos orgnicos tienen
diferentes tasas de mineralizacin por los microorganismos. As mismo, en la
velocidad de mineralizacin microbiana tiene una gran influencia el pH,
temperatura, humedad y grado de aireacin del suelo; factores que influyen
tambin en los tipos de poblaciones microbianas que van a desarrollar los
respectivos procesos. (Rendn, 2014)

5 Conclusiones
La prctica se complet en un 95%, un erro sucedi al momento de la tincin que se
confundi la placa con sita hacia arriba y al momento de secarla con el papel se retir
la mitad de los microrganismo, pero se pudo apreciar e identificar con la otra mitad sin
mayores inconvenientes.

El aislamiento sirve para la obtencin de un cultivo puro para su posterior

aplicacin debido a las propiedades especiales que nos presenta el
microrganismo de inters

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 Tanto las bacterias Gram positivas como las Bacterias Gram negativas se
presentan morfolgicamente como cocos o bacilos, sin embargo al ejecutar
tincin de Gram en estas para identificar su grupo taxonmico, las Gram
positivas se tien de color violeta mientras que las Gram negativas se tien de
color rosado.
Mediante la tincin de Gram se identifican bacterias Gram positivas y Gram
negativas gracias al color que tornan despus de ser teidas; en el caso de las
bacterias Gram positivas se tien de violeta, esto se debe a que gracias a que
contienen una pared gruesa de peptidoglicano y gran cantidad de cidos
teicicos que permiten fijar y retener rpidamente el colorante inicial el cual es,
el cristal violeta de Hucker, y adems son resistentes a la decoloracin. Lo
contrario ocurre con el caso de las Gram negativas, las cuales poseen una
pared delgada con menos cantidad de peptidoglicano y lpidos, la cual requiere
de un colorante de contratincion como la safranina o la fucsina en este caso, ya
que el colorante inicial es fcilmente retirado en la decoloracin con alcohol,
debido a que por su delgada pared celular no lo retienen.
Se identific un bacilo esporulado debido que la espora de este no se tinte con
la tcnica gram, por eso al observar no se pigmenta de un color.
Se identific bacterias del tipo Coco. Debido a su forma circular o semejante a
sta

6 Bibliografia:
Tortora, G., Funke, B., & Case, C. (2007). Microbiologa. En G. Tortora,
Introduccin a la Microbiologia. Madrid, Espaa: Panamericana.

Contreras, R. (2014). El gnero Pseudomonas, las bacterias para todo.

Recuperado el 10 de mayo de 2016, de
http://biologia.laguia2000.com/microbiologia/el-genero-pseudomonas-las-
bacterias-para-todo

Montie, T. (2000). Biotechnology. En T. Montie, Pseudomonas. New York and

London: Plenum.

Rendn, A. (2014). Ciclos biogequimicos, Universidad de Navarra, Espaa

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