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Bio-231 Practica 2 2-12-13 PDF
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TINCION DE GRAM
OBJETIVOS DE APRENDIZAJE:
PRINCIPIO:
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Figure 1 Microfotografa de una pared celular Gram Figure 3 Microfotografa de pared celular de
Positiva bacteria Gram-negativa
Figure 2 Estructura de la Pared Celular Gram- Figure 4 Estructura de la Pared Celular Gram-
positiva negativa
Tincin Primaria: Se utiliza Cristal Violeta, que tie todas las clulas moradas.
Mordiente: Yodo o lugol. El yodo, aparte de matar bacterias, incrementa la afinidad del
colorante primario con la clula, formando complejos insolubles con este. El complejo cristal
violeta-yodo sirve para intensificar el color del tenido.
Agente decolorante: Se utiliza alcohol etlico al 95%. El etanol tiene doble funcin:
deshidratante de protenas y solvente de lpidos. El alcohol disuelve los lpidos de la parte
externa de la pared celular Gram-negativa, haciendo la pared ms porosa. De esta manera, el
complejo Cristal violeta-yodo es removido de la capa de mureina ms fina de las bacterias Gram-
negativas, mientras que la pared ms gruesa de las Gram-positivas retiene el tinte en su interior.
Tincin de Contraste: Safranina. Este tinte se utiliza para teir de rojo las clulas previamente
decoloradas, o sea, las Gram-negativas.
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EN LA MESA DE TRABAJO
MATERIALES:
Cultivos: cultivos de 24 horas en agar nutritivo en tubo inclinado de Escherichia coli, Micrococcus
luteus, Bacillus megaterium y Rhodospirillum rubrum.
EQUIPOS Y MATERIALES:
Mechero de alcohol, asa de siembra, cubeta de tincin, portaobjetos, papel de absorcin, papel
de lentes, y microscopio.
PROCEDIMIENTO:
1. Obtenga 5 portaobjetos limpios.
3
precaucin de no calentar demasiado el portaobjetos pues las clulas pueden
deformarse o romperse.
3. Permita que los frotis se sequen al aire y luego fjelos con calor.
4. Tia con cristal violeta agregando suficiente colorante y deje que acte durante 1 minuto.
6. Inunde suavemente con el mordiente, yodo de Gram, y deje actuar durante 1 minuto.
8. Decolore con alcohol etlico al 95%. Nota: no sobredecolore, agregue el alcohol gota a
gota hasta que este salga casi claro, solo ligeramente azul.
4
Tina suavemente con cristal Aplique yodo o lugol
Lave suavemente con agua
violeta por 1 min suavemente por 1 min
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PRACTICA 2
OBSERVACIONES Y RESULTADOS
Dibujo de
campo
microscpico
representativo
Morfologa
celular:
-Forma:
-Arreglo
Color
Reaccin de
Gram