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Nombre: Carla Solange Hidalgo Segovia

Laboratorio de Qumica Ambiental

Prctica 5

Anlisis de Nitritos y Curva de calibracin

Objetivos

Determinar la concentracin de nitritos desde una solucin por medio

de kit test de nitritos.

Determinar la curva de calibracin de nitritos y la importancia de la

misma.

Introduccin

El nitrgeno de nitritos raras veces aparece en concentraciones mayores

de 1 mg/L, aun en fuentes de plantas de tratamiento de aguas residuales. En

aguas superficiales y subterneas su concentracin por lo general es menor

de 0.1 mg/L. Su presencia indica, por lo regular, procesos activos biolgicos

en el agua, ya que es fcil y rpidamente convertido en nitrato.

Los nitritos en concentraciones elevadas reaccionan dentro del organismo

con aminas y amidas secundarias y terciarias formando nitrosominas de alto

poder cancergeno.

El nitrito (NO-) se determina mediante la formacin de un colorante azo

de color prpura rojizo por reaccin de diazotacin-copulacin de

sulfanlamida con diclorhidrato de N-(1-naftil)-etilendiamina (NED

diclorhidrato) a pH entre 2,0 y 2,5. (Instituto de Hidrologa, Meteorologa y

Estudios Ambientales, 2009)

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Segn el Standard Methods este mtodoo es adecuado para determinar

nitrito en concentraciones de 10 a 1000 g NO--N/L. El sistema de color

obedece la ley de Beer en concentraciones hasta de 180 g NO--N/L a 543

nm si se emplea celda de 1 cm de longitud; se pueden hacer mediciones en

el intervalo de 5 a 50 g NO--N/L con una celda de 5 cm de paso de luz y un

filtro de color verde. Se pueden determinar concentraciones ms altas por

dilucin de la muestra. (CLESCERI)

Curva de calibracin: Es la representacin grfica de una seal que se

mide en funcin de la concentracin de un analito. La calibracin incluye la

seleccin de un modelo para estimar los parmetros que permitan

determinar la linealidad de esa curva. y, en consecuencia, la capacidad de

un mtodo analtico para obtener resultados que sean directamente

proporcionales a la concentracin de un compuesto en una muestra, dentro

de un determinado intervalo de trabajo. En el procedimiento se compara una

propiedad del analito con la de estndares de concentracin conocida del

mismo analito (o de algn otro con propiedades muy similares a ste). Para

realizar la comparacin se requiere utilizar mtodos y equipos apropiados

para la resolucin del problema de acuerdo al analito que se desee

determinar.

La etapa de calibracin analtica se realiza mediante un modelo de lnea

recta que consiste en encontrar la recta de calibrado que mejor ajuste a una

serie de n puntos experimentales, donde cada punto se encuentra definido

por una variable x (variable independiente, generalmente concentracin

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del analito de inters) y una variable y (variable dependiente,

generalmente respuesta instrumental). La recta de calibrado se encuentra

definida por una ordenada al origen (b) y una pendiente (m), mediante la

ecuacin y = mx + b.

En la prctica para construir la curva de calibracin se utilizan

disoluciones que contienen concentraciones conocidas de analito, llamadas

disoluciones patrn o estndar. Los estndares o disoluciones patrn para

construir la recta de calibrado deben ser preparadas en forma

independiente, a partir de una o varias soluciones madre; el nmero de

puntos a escoger depender del uso que se d a la recta de calibrado.

Si bien con dos puntos se puede construir una curva, estadsticamente se

requieren por los menos tres para que la curva sea confiable; este nmero se

suele aplicar a mtodos de rutina perfectamente establecidos y validados.

(Dosal & Villanueva, 2008)

El espectrofotmetro arroja resultados en mg N - NO2-/L de acuerdo al

factor de dilucin digitado en el momento de la lectura, aplicando la

siguiente frmula:

mg N - NO2-/L = Pendiente x Absorbancia x FD

Pendiente = Obtenida a partir de la curva de calibracin.

Absorbancia = Lectura realizada por el espectrofotmetro.
mg NO2-/L = Concentracin de nitritos calculada y registrada por el

espectrofotmetro
FD = Factor de dilucin
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Kit de Nitritos MERCK 114776: Fotomtrico 0.002 - 1.00 mg/l NO-N

0.007 - 3.28 mg/l NO Espectro quntico

Mtodo: Ion nitrito en solucin cida con el cido sulfanlico forman una

sal de diazonio, el con N-(1-Naphthyl)-ethylendiamindihydrochlorid a un

compuesto azo violeta rojo responde. Esto se determina fotomtricamente.

mbito de aplicacin: Material de muestra:

Aguas subterrneas, agua potable y agua superficial

Agua de mar
Aguas residuales
Alimentos despus de la apropiada preparacin de muestras
Plantas despus de la apropiada preparacin de muestras (MERCK)

Materiales, Equipos y Reactivos

Agua destilada
Kit test de nitritos
Matraces volumtricos de 250, 100 y 25ml
Espectrofotmetro
Tubos de ensayo con tapa
Tiras indicadoras de pH
Shaker
Micropipeta de 5ml

 Procedimientos

Preparacin de estndares

1. A partir de solucin madre 1000ppm de NO2- prepare solucin de

50ppm de NO2- y a partir de esta solucin, preparar soluciones de 2,

1.5, 1 y 0,5 ppm de NO2-.

Preparacin de estndares

1. Encienda el espectrofotmetro 45 minutos antes de iniciar las lecturas.

2. Tomar una alcuota de 5ml de muestra de 2 ppm de NO 2- en tubo de

ensayo.
3. Agregar microcucharada de polvo de diazonio (kit de test de nitrito).
4. Tapar el tubo de ensayo y agitar con ayuda del shaker para disolver el

polvo en la alcuota.
5. Medir el pH, debe ser entre 1 y 2.
6. Dejar reposar la alcuota aproximadamente 10 minutos para la

reaccin.

Lectura de calibracin

7. Para iniciar la lectura, iniciar con el blanco (agua destilada) llenando la

celda de vidrio del espectrofotmetro, siguiendo las instrucciones del

equipo.
8. Luego de la lectura del blanco, llenar otra celda de vidrio seca y limpia

con alcuota correspondiente, seguir las instrucciones para medir la

concentracin de nitritos.

Datos
 Tabla 1
Resultados de espectrofotmetro para estndares
Solucin p m A
(ppm de H g bs
-
NO2 ) / or
L ba
nc
N ia
O
2
-

2 2 2 1.
. 68
0 4
5
4
1.5 2 1 1.
. 24
5 0
1
3
1.5 2 1 1.
. 28
5 4
6
7
1 1 1 0.
. 85
0 2
3
9
1 2 1 0.
. 85
0 1
3
8
0.5 2 0 0.
. 41
5 9
1
 1
0.5 2 0 0.
. 42
5 7
2
1

Clculos

1.513+ 1.567
= =1.54 0
2

Promedio de solucin 1.5 ppm NO 2

1.039+1.038
= =1.0385
2

Promedio de solucin 1 ppm NO 2

0.511+ 0.521
= =0.516
2

Promedio de solucin 0.5 ppm NO2

1.240+1.284
= =1.262
2

Promedio de absorbancia solucin 1.5 ppm NO 2

0.852+0.851
= =0.8515
2

Promedio de absorbancia solucin 1 ppm NO 2

0.419+0.427
= =0.423
2

Promedio de absorbancia solucin 0.5 ppm NO 2

Resultados

Tabla 2
Resultados promedio de estndares
 Solucin m Ab
(ppm de g so
NO2-) / rb
L an
N ci
O a
-
2

2 2 1.
. 68
0 4
5
4
1.5 1 1.
. 26
5 2
4
0
1 1 0.
. 85
0 15
3
8
5
0.5 0 0.
. 42
5 3
1
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 1.800
1.600 f(x) = 0.84x + 0.01
R = 1
1.400
1.200
1.000
Absorbamcia
0.800
0.600
0.400
0.200
0.000
0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4 1.6 1.8 2 2.2

Concentracin de NO2- (ppm)

Grfica 1. Curva de calibracin de nitritos

Anlisis de Resultados

Se realizaron dos pruebas por cada concentracin estndar establecida

para obtener un resultado promedio y ms exacto, obteniendo la curva de

calibracin como se observa en la grfica 1, gracias a estos resultados se

puede determinar la linealidad de la curva y a partir de sta, se asegura que

la recta se ajuste correctamente al modelo matemtico de la ecuacin, es

por ello que se determin la pendiente y el coeficiente de determinacin R 2,

donde el resultado de R2 es de 0.999, por tanto, la calibracin es muy buena,

siendo los valores dados del espectrofotmetro y los valores de

concentracin iniciales de nitritos de los estndares muy prximos. As

mismo se puede notar que la absorbancia que va minorando a medida que

baja la concentracin de nitritos, estos resultados tambin son dados por el

espectrofotmetro, que de acuerdo a la frmula escrita en la introduccin, se

puede calcular el factor de dilucin.

Conclusiones

Se determin la concentracin de nitritos a diferentes soluciones en

muestras de agua desde una solucin madre por medio de test de

nitritos con coloracin prpura.

Se determin la curva de calibracin de nitritos con alta exactitud ya

que el R2 es de 0.999, siendo esta curva una representacin grfica de

una seal que se mide en funcin de la concentracin de un analito.

La curva de calibracin tiene gran importancia ya que permite estimar

la capacidad de un mtodo analtico para obtener resultados que sean

directamente proporcionales a la concentracin de un compuesto en

una muestra, dentro de un determinado intervalo de trabajo.

Recomendaciones

Utilizar pipetas volumtricas para obtener alcuotas de mejor precisin.

Coloque las alcuotas en matraces de vidrio mbar.
Utilizar celdas de vidrio limpias y secas.
Tomar diferentes celdas por cada toma de nitritos en el

espectrofotmetro.

 Bibliografa

CLESCERI, L. (s.f.). En Standard Methods for the Examination of Water

and Wastewater, American Public Health Association,American Water
Works Association, Water Pollution Control Federation, 21 Ed. (pgs. 4-
83 a 4-84). United Estates of America. Obtenido de Standard Methods
for the Examination of Water and Wastewater.

Dosal, M. A., & Villanueva, M. (25 de Marzo de 2008). Obtenido de

CURVAS DE CALIBRACIN EN LOS MTODOS ANALTICOS.

Instituto de Hidrologa, Meteorologa y Estudios Ambientales. (07 de

Julio de 2009). Obtenido de Nitrito en agua por Espectrofotomtra:
http://www.ideam.gov.co/documents/14691/38155/Nitrito+en+agua+p
or+Espectrofotometr%C3%ADa.pdf/4775634c-c6ba-4c95-8e98-
0696ace02c03

MERCK. (s.f.). Obtenido de Nitrite Test:

https://www.merckmillipore.com/INTL/en/product/Nitrite-
Test,MDA_CHEM-114776?ReferrerURL=https%3A%2F
%2Fwww.google.com.ec%2F&bd=1#documentation