Actividades de las enzimas y velocidad

de reaccin
Los enzimas son biocatalizadores producidos en las clulas, que catalizan, es
decir facilitan y aceleran las reacciones qumicas que tienen lugar en los seres
vivos, ya que disminuyen la energa de activacin que se necesita para que
tengan lugar dichas reacciones, permitiendo que se produzcan a velocidades y
temperaturas adecuadas.

Mecanismo de accin enzimtica

Una enzima, por s misma, no
puede llevar a cabo una reaccin,
su funcin es modificar la velocidad
de la reaccin, entendindose como
tal la cantidad de producto formado
por unidad de tiempo. Tal variacin
se debe a la disminucin de la
energa de activacin Ea; en una
reaccin qumica, la Ea es la
energa necesaria para convertir los
reactivos en formas moleculares
inestables denominadas especies
en estado de transicin, que poseen
mayor energa libre que los reactivos y los productos.

En el diagrama estn representados los niveles de energa, durante el curso de

la reaccin, de molculas intervinientes en una reaccin tipo: A + B ---> C. La
curva azul muestra el curso de la reaccin en ausencia de una enzima que
facilite la reaccin, mientras que la curva roja la muestra en presencia de la
enzima especfica de la reaccin. La diferencia en el nivel de energa entre el
estado inicial y la necesaria para iniciar la reaccin (picos de las curvas) es la
energa de activacin. Tal como se observa la presencia de enzima baja la
energa de activacin.

El complejo Enzima- sustrato posee menor energa de activacin que las

especies en estado de transicin que la correspondiente reaccin no catalizada.

Factores que influyen en la actividad enzimtica

La eficacia de un enzima se mide por la velocidad de transformacin del

sustrato en producto. La actividad de las enzimas se ve afectada por diversos
factores entre los que destacan los siguientes:

Concentracin del sustrato

En toda reaccin catalizada por un enzima, si se mantiene constante la
concentracin del E, la velocidad de la reaccin aumenta exponencialmente al
incrementarse la concentracin del sustrato, ya que al existir ms molculas de
sustrato es ms probable el encuentro con el enzima y la formacin del
complejo E-S.

Este aumento de velocidad es rpido para concentraciones bajas de sustrato y,

a medida que este aumenta, se va haciendo ms lento hasta que la
concentracin del sustrato alcanza un cierto valor, a partir del cual, aunque
aumente la concentracin del mismo, no aumenta la velocidad de la reaccin.
Esto es debido a que el enzima esta saturada por el sustrato; es decir, todas
las molculas del enzima estn unidas al sustrato formando el complejo E-S.
Cuando ocurre esto, se dice que la reaccin ha alcanzado la velocidad mxima.

En 1913 Leonor Michaelis y a Maud Menten estudiaron la variacin de la

velocidad de una reaccin enzimtica en funcin de la concentracin del
sustrato y propusieron la siguiente ecuacin, que es vlida para
concentraciones de sustrato no saturante.

Dnde:

V es la velocidad de la reaccin para una determinada concentracin de

sustrato.

Vmax es la velocidad mxima de la reaccin.

[S] es la concentracin del sustrato.

Km es una constante denominada constante de Michaelis-Menten, es

caracterstica de cada enzima.

Si en la ecuacin (1) hacemos V = Vmax y despejamos Km obtenemos que

Km = [S]

Km. Se puede definir como la concentracin de sustrato necesario para que la

velocidad de la reaccin sea la mitad de la velocidad mxima. Se mide en
unidades de concentracin. La Km nos indica la afinidad de un enzima por su
sustrato:

Si Km es alta indica que el enzima tiene poca afinidad por el sustrato ya que
se necesita una concentracin de sustrato elevada para alcanzar la mitad de la
velocidad mxima.

Si Km es baja indica que el enzima tiene mucha afinidad por el sustrato ya que
se necesita una concentracin de sustrato baja para alcanzar la mitad de la
velocidad mxima.

Temperatura
La T influye en la actividad enzimtica. En general por cada 10C que
aumente la temperatura la velocidad de la reaccin aumenta de 2 a 4 veces.
Esta regla se cumple hasta que la temperatura alcanza un valor mximo (T
ptima) donde la actividad es mxima. Esto se debe a que al aumentar la T
aumenta el movimiento de las molculas y, por tanto aumenta la probabilidad
de encuentro entre el S y el E.

Si la T aumenta por encima de la T ptima, disminuye e incluso cesa la

actividad enzimtica debido a que la enzima se desnaturaliza.

Cada enzima posee una T ptima, en las enzimas humanas suele estar
alrededor de 37C. Los animales poiquilotermos debido a que carecen de
mecanismos para regular la T corporal, se ven obligados a hibernar en la
estacin fra pues la actividad de sus enzimas debido a las bajas temperaturas
es muy baja.

pH
El pH es otro factor que influye en la actividad enzimtica, debido a que el pH
influye en la ionizacin de los grupos funcionales de los aminocidos que
forman la protena enzimtica. Cada enzima realiza su accin dentro de un
determinado intervalo de pH, dentro de este intervalo habr un pH ptimo
donde la actividad enzimtica ser mxima. Por debajo del pH mnimo o por
encima del pH mximo el enzima se inactiva ya que se desnaturaliza. En la
mayora de las enzimas el pH ptimo est prximo a la neutralidad, aunque
hay excepciones.

Inhibidores
Son compuestos qumicos que se unen al enzima, en distintos puntos del
mismo y disminuyen o incluso impiden su actividad. Estos compuestos pueden
ser de distintos tipos: iones, molculas orgnicas y a veces el producto final de
la reaccin. A la accin que realizan se la denomina inhibicin. La inhibicin
puede ser:

Inhibicin irreversible: Cuando el inhibidor impide permanentemente la

actividad enzimtica, bien porque se une de forma permanente con grupos
funcionales importantes del centro activo o bien porque altera su estructura. A
estos inhibidores se les denomina venenos y a la inhibicin que realizan se la
denomina envenenamiento del enzima. Ej. La penicilina que inhibe las enzimas
que sintetizan la pared bacteriana. El in cianuro acta sobre la citocromo
oxidasa (enzima respiratorio).

Inhibicin reversible: El inhibidor se une al enzima de forma temporal

mediante enlaces dbiles e impide el normal funcionamiento del mismo, pero
no la inutiliza permanentemente.
Puede ser de dos tipos:

Competitiva: El inhibidor es similar al sustrato y se puede unir al centro

activo del enzima impidiendo que lo haga el sustrato. Es decir ambos, inhibidor
y sustrato compiten por unirse al centro activo del enzima. La accin suele
anularse aumentando la concentracin del sustrato

No competitiva: El inhibidor no compite con el sustrato, puede actuar de

2 formas:

-Sobre el enzima, unindose a l en un lugar diferente al centro activo y

modificando su estructura lo que dificulta que el enzima se pueda unir con el
sustrato.

-Sobre el complejo E-S unindose a l y dificultando su desintegracin y por lo

tanto la formacin de los productos.

Objetivos:

Conocer el efecto de la temperatura en la actividad enzimtica de la

catalasa.
Identificar las temperaturas que producen una menor o mayor actividad
enzimtica.
Observar como influye el estado fsico del hgado (entero y molido) en
la actividad enzimtica.

Experimento:

Materiales:


Procedimiento
- Se tritura un poco del hgado de pollo con el mortero (se
agrega agua destilada).
- Luego filtrarlo mediante un colador y gasa fina que impedir que el
paso de los trozos de hgado que no hayan podido ser triturados.
- Se deja un trozo de hgado sin triturar.

- Se coloca en 10 tubos 1 ml. De solucin

de enzima. En el tubo restante se
coloca un trocito de hgado.

- Se separa 4 tubos: 2 se colocan en

agua caliente y 2 en hielo (se utilizaran
despus).
- Tambin se aparte un tubo para que
sea entibiado con el calor de la mano
de alguna compaera del grupo.

1. Accin de la catalasa
- En el primer tubo con 1 ml. de solucin de enzima
agregamos 1 ml. de agua oxigenada (H2O2).
- Tenemos que el agua oxigenada se ha descompuesto
ya que la catalasa est actuando de manera de lo
divide:

2 H2O2 2 H 2O + O

CATALAS
- Se produce una reaccin instantnea.

2. Efecto de la concentracin de
enzimas
- En el segundo tubo con 1 trocito de hgado
agregamos 1 ml. de agua oxigenada (H2O2).
- En el tercer tubo con 1 ml. de solucin de enzima
agregamos 1 ml. de agua oxigenada (H2O2).
- Tenemos que en el segundo hay una mayor
concentracin por lo que la reaccin enzimtica es
mejor por el contrario, en el tercer tubo la
concentracin enzimtica es menor y se da una
menor reaccin enzimtica.
- Las reacciones serian para el segundo tubo
moderado y para el tercero rpida.

3. Efecto de temperatura
- En el cuarto tubo con 1 ml. de solucin de enzima
(hielo) agregamos 1 ml. de agua oxigenada (H 2O2).
- En el quinto tubo con 1 ml. de solucin de enzima
(T corporal) agregamos 1ml. de agua oxigenada
(H2O2).
- En el sexto tubo con 1 ml. de solucin de enzima
(100 C) agregamos 1 ml. de agua oxigenada (H 2O2).
- Para toda reaccin enzimtica debemos tener una
temperatura ptica por lo que observamos que en el
cuarto tubo con solucin enzimtica en hielo la
reaccin fue moderada, en agua
caliente fue nula (se desnaturaliza) y en la de calor
corporal fue reaccin instantnea.
4. Efecto de pH
- En el sptimo tubo con 1 ml. de solucin de enzima
agregamos cido clorhdrico (HCl) mas 1 ml. de agua
oxigenada (H2O2).
- En el octavo tubo con 1 ml. de solucin de enzima
agregamos agua destilada ms 1 ml. de agua
oxigenada (H2O2).
- En el noveno tubo con 1 ml. de solucin de enzima
agregamos hidrxido de sodio (NaOH) mas 1 ml. de
agua oxigenada (H2O2).
- Observamos que la reaccin fue nula para el sptimo
tubo con cido clorhdrico ya que este por ser un
cido fuerte desnaturaliza a la solucin de enzima,
una reaccin moderada para el octavo tubo ya que el
pH del agua es neutro y en el noveno tubo la reaccin fue lenta ya
que est en un pH alcalino.

5. Efecto de la concentracin del

sustrato
- En el dcimo tubo con 1 ml. de solucin de enzima
agregamos agua destilada ms 1 ml. de agua
oxigenada (H2O2).
- En el onceavo tubo con 1 ml. de solucin de enzima
agregamos 1 ml. de agua oxigenada (H 2O2).
- Pudimos observar en el dcimo tubo una reaccin
moderada ya que el agua destilada baja la
concentracin en cambio, en el onceavo fue
instantnea por lo que no haba presencia de agua la
reaccin tuvo una mayor concentracin.
Conclusiones:
En la accin de la catalasa acta descomponiendo los elementos de
hidrogeno y oxigeno del agua oxigenada y a su vez provocando una reaccin
instantnea con el exceso de burbujas que se puede observar en el primer
tubo. En el efecto de concentracin de enzimas decimos que a una mayor
concentracin hay una mejor reaccin enzimtica en este caso rpida por la
cantidad de burbujas que salieron del hgado triturado ms el agua oxigenada
en cambio, una menor concentracin conlleva a una baja reaccin enzima
como paso con el hgado sin triturar por lo que tuvo una moderada cantidad
de burbujas. En efecto de la temperatura sabemos que de be de haber una
temperatura ptima para que se realice la reaccin enzimtica pero en estos
casos el tubo que estuvo expuesto al hielo por tener una baja temperatura se
desnaturalizo al igual que el tubo que estuvo a altas temperaturas en el agua
caliente, en estos dos casos se produce la desnaturalizacin ya que no se
encuentran a una temperatura optima, reaccionando con el hielo con una
reaccin moderada de burbujas y agua caliente con una reaccin nula; por
otra parte la temperatura corporal produce una reaccin instantnea. En el
efecto del pH el rango de pH ptimo tambin es muy variable entre las
diferentes enzimas. Si el pH del medio se aleja del ptimo de la enzima, esta
ver modificada su carga elctrica al aceptar o donar protones, lo que
modificar la estructura de los aminocidos y por tanto la actividad
enzimtica. El cido clorhdrico por tener un pH acido se desnaturaliza por lo
que tiene una reaccin nula, el agua tiene un pH neutro y produce una
reaccin moderada de burbujas y por ltimo el hidrxido de sodio tiene un pH
alcalino reaccionando de manera ms lenta. En la concentracin del sustrato
la proporcin tiene que ser proporcional y lo vemos en el onceavo tuvo con
una reaccin rpida y de menor manera en decimo tubo con una reaccin
moderada de burbujas.
 Cuestionario
1. Por qu se desnaturaliza la protena antes de la
digestin?
Dado que las sustancias que intervienen en estas reacciones son,
generalmente, muy estables, se requerira una gran cantidad de energa
para que reaccionaran entre s, ya que, si no, la velocidad de reaccin
sera nula o demasiado lenta. Para acelerar la reaccin en un laboratorio
bastara con aumentar la temperatura o bien con aadir un catalizador,
es decir, una sustancia que aumente la velocidad de la reaccin.

2. Cmo se prueba que hay hidrolisis pptida?

Boca: lipasa bucal estmago: lipasa gstrica Intestino delgado: lipasa
pancretica-colipasa, esterasa del colesterol, lipasa pancretica
dependiente de sales biliares. Estas ltimas son la que producen la
mayor hidrolisis, las provenientes del pncreas y las sales biliares

3. Cmo acta cada enzima de la mezcla enzimtica?

En estas reacciones, las enzimas actan sobre unas molculas
denominadas Como todos los catalizadores, las enzimas funcionan
disminuyendo la energa de Cada secuencia de aminocidos es nica y
por tanto da lugar a una y se mide la concentracin de la mezcla en un
breve espacio de tiempo.

4. Cules fueron los fundamentos de cada reaccin

efectuada?
- Descomposicin del agua oxigenada en sus elementos bsicos por
accin de la catalasa.
- Comprobacin de la concentracin enzimtica a una mayor o menor
velocidad de reaccin.
- Tener una temperatura ptima para evitar la desnaturalizacin de la
catalasa por temperaturas fras o muy calientes.
- Se comprueba la accin de la catalasa frente a los cambios d pH.
- Una mayor concentracin del sustrato cuando se es proporcional.

5. Escriba la reaccin de la catalasa

La reaccin de la catalasa sobre el H2O2, es la siguiente:
La catalasa es una enzima que se encuentra en las clulas de los tejidos
animales y vegetales. La funcin de esta enzima en los tejidos es
necesaria porque durante el metabolismo celular, se forma una molcula
txica que es el perxido de hidrgeno, H2O2 (agua oxigenada.) Esta
 enzima, la catalasa, lo descompone en agua y oxgeno, por lo que se
soluciona el problema.

6. Defina los
siguientes
trminos:
- Actividad enzimtica: Una unidad de actividad enzimtica (smbolo U)
es la cantidad de enzima que catalizarla conversin
de1moldesustratoporminuto.Se utiliza tambin en combinacin con
otras unidades (para sealar, respectivamente, la actividad
enzimtica especfica o la concentracin de actividad enzimtica.
- Vmax: Esa es la velocidad mxima (Vmax) de la enzima. En ese caso,
los sitios activos de la enzima estn saturados con sustrato.
- Inhibicin enzimtica: La inhibicin no competitiva (o alostrica) es
un tipo de inhibicin que reduce la tasa mxima de una reaccin
qumica (Vmax) sin cambiar la afinidad aparente de unin del
catalizador por el sustrato inhibidor competitivo es muy similar al
sustrato normal de la enzima. Dada esa similitud estructural, este
tipo de inhibidor se une reversiblemente al foco activo de la enzima.