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INMUNOFLUORESCENCIA.................................................................................3
CLASIFICACIN...............................................................................................3
Electroforesis de protenas...................................................................................5
Clasificacin....................................................................................................5
INMUNOELECTROFORESIS..............................................................................8
Clasificacin......................................................................................................9
electroforesis de globulina..................................................................................12
Analisis cuantitativo:........................................................................................12
Alfa-1 globulina alta.....................................................................................13
Alfa-2 globulinas baja..................................................................................13
Alfa-2 globulinas alta...................................................................................13
Beta-globulina baja......................................................................................13
Beta-globulina alta.......................................................................................13
Gammaglobulina baja..................................................................................13
Gammaglobulina alta...................................................................................13
TCNICAS BASADAS EN FLUORESCENCIA..................................................16
INMUNOANLISIS DE FLUORESCENCIA POLARIZADA............................16
BIBLIOGRAFIA...................................................................................................19
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Inmunofluorescencia
Qu es la fluorescencia?
Es la propiedad de una sustancia de emitir luz cuando es expuesta a
radiaciones de baja longitud de onda y alta energa (UV Rx). Las radiaciones
absorbidas (invisibles al ojo), son transformadas en luz visible, o sea de una
longitud de onda mayor a la incidente.

Como se produce la fluorescencia?

La absorcin de luz por parte de la molcula de fluorocromo la eleva a un
estado de exitacin en el cual contiene mayor energa. La molcula permanece
en el estado de exitacin por un perodo de tiempo muy corto. El retorno a un
nivel de energa menor es acompaado por emisin de luz (fluorescencia)

Qu es la inmunofluorescencia?
Las pruebas de inmunofluorescencia (IF) se basan en que, cualquier antgeno,
puede ser marcado especficamente con un fluorocromo coloreado, a travs de
un anticuerpo (Ac) especfico. Cuando se irradia este elemento con luz
ultravioleta o azul se hace fluorescente.

CLASIFICACIN

Inmunofluorescencia directa
Mtodo:
El procedimiento se realiza en un paso b sico de reacci n. La muestra cl nica
que presuntamente contiene ant genos del microorganismo bajo estudio es
puesta en contacto con un anticuerpo monoclonal dirigido contra dicho
microorganismo conjugado con fluoresce na. Si el ant geno esperado est
presente se formar un complejo ant geno -anticuerpo. La reacci n positiva
en forma de fluorescencia verde manzana puede verse con la ayuda de un
microscopio de fluorescencia.
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Inmunofluorescencia Indirecta
Mtodo:
Es una tcnica de doble capa en donde se aplica el anticuerpo sin marcar
directamente sobre el sustrato de tejido y se visualiza por tratamiento con un
suero anti -inmunoglobulina conjugado con fluorocromo El proceso consta de
dos etapas:

Primera etapa: se fijan sobre un portaobjetos los antgenos que constituyen el

substrato conocido espec fico (c lulas que contiene virus, T. gondii, T.
pallidum, etc.) sobre l se coloca el suero de quien se sospecha la presencia
de anticuerpos especficos, si la reaccin es positiva se dar formacin de
complejo antgeno -anticuerpo no visible ya que el anticuerpo no estaba
marcado

Segunda etapa: se agrega una anti -inmunoglobulina humana marcada, que

reaccionar con el anticuerpo del complejo producido en la primera etapa.

Utilidad
Se puede utilizar para:

Tcnicas analticas (cuali-y cuantitativas) en Qumica y Bioqumica.

Mtodos inmunolgicos de diagnstico mdico.

Procedimientos microscpicos en Microbiologa, Gentica, Histologa,

Histoqumica, Biologa Celular, Biologa Molecular, Biologa del
Desarrollo, Patologa (sondas vitales, ensayos de viabilidad, indicadores,
inmunofluorescencia, FISH).

Anlisis poblacional de clulas (citofluorimetra de flujo).

Pruebas
Del Treponema Pallidum agente etiolgico de la Sfilis. Determinacin
por inmunofluorescencia donde se observa la forma de espiroqueta.

Dengue: Las clulas fluorescentes representan clulas infectadas con el

virus dengue. Infeccin evidenciada con anticuerpos monoclonales para
cada serotipo
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Biopsias renales: Anticuerpos contra Membrana basal glomerular de tipo

IgG

Virus Respiratorios: Virus Influenza B (IFD detecci n de antgeno )

Toxoplasma gondii: Anticuerpos anti Toxoplasma gondii, agente

etiolgico de la toxoplasmosis. El sustrato antignico utilizado es una
suspensin de Toxoplasma gondii. Detecta antgenos de membrana.

Electroforesis de protenas
La electroforesis de protenas es una prueba de laboratorio basada en la
separacin de protenas aplicando un campo elctrico. Para realizar esta
prueba, los laboratorios pueden usar un medio slido (como el gel de agarosa)
o tubos de slice muy finos, llamados capilares, llenos de un lquido.

Cuando una muestra con una mezcla de protenas diferentes es aplicada en un

gel o dentro de un capilar, las diferentes protenas de la mezcla se separarn
en funcin de su carga elctrica.

Clasificacin
Segn el tipo de separacin empleado:
Electroforesis de zona: las protenas son molculas anfteras: su carga
neta depende del pH del medio. Normalmente, la separacin electrofortica de
protenas se hace a pH alcalino, en el que la mayora de las protenas
presentan una carga global negativa. Tambin, se puede trabajar a pH cidos,
pero no demasiado bajos, ya que las protenas precipitan en medio cido
(bsicamente se usa en la deteccin de variantes de la hemoglobina).

Como medio de soporte se puede usar (de ms antiguo a ms reciente): papel,

acetato de celulosa, agarosa, poliacrilamida y electroforesis capilar. La muestra
cuyas protenas se quieren separar se inserta en un medio de soporte y se
aplica una diferencia de potencial durante un tiempo determinado para separar
las protenas. Cada protena migrar ms o menos en funcin de su carga (que
tambin determina hacia qu polo se dirigir la protena, nodo (+) o ctodo (-)
y su tamao. A mayor carga y menor tamao, ms velocidad de migracin.
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Isoelectroenfoque: en lugar de separar las protenas en funcin de su

carga a un pH dado, se separan en funcin de su punto isoelctrico (pI): el pI
es el pH en el que la carga neta de la protena es nula, y depende de la
composicin aminoacdica de la protena. Se crea un gradiente de pH mediante
anfolitos (estabilizan el pH a lo largo del gel). Cada protena migrar hasta
alcanzar su pI, punto en el cual precipitar al acumularse (de ah el nombre,
isoelectroenfoque).

Tambin se suelen utilizar acoplados a zimogramas si deseamos determinar el

pH de una enzima o en electroforesis bidimensional como primera dimensin.

Separacin por tamao: permite separar protenas y cidos nucleicos. En

el caso de las protenas, deben ser tratadas con SDS (sodio dodecil sulfato)
para que su carga sea negativa y todas migren hacia el nodo (no es necesario
hacer eso con los cidos nucleicos, ya que tienen carga negativa); la
separacin se hace en medios de soporte en el que se ha creado un tamiz
molecular (matriz), que hace que las protenas ms pequeas corran ms que
las ms grandes.

Mtodos de visualizacin
Una vez separadas las protenas, deben fijarse y teirse para poder ser
visualizadas. Hay diferentes protocolos en funcin de lo que se quiere estudiar:
fijacin por calor o qumica y tincin en caso de estudios no especficos
(proteinograma y electroforesis Hb, por ejemplo) o fijacin mediante
anticuerpos previa a la tincin en caso de estudiar protenas especficas
(inmunofijacin).

Por lo general para la tincin de geles de poliacrilamida se utiliza tincin con

plata, tincin de Coomassie o tincin fluorescente. Dependiendo del fin de
nuestro anlisis. La tincin con plata no es utilizada si se desean hacer anlisis
por espectrometra de masas (MS) pero es ms sensible que la tincin con Azul
de Coomassie, por otro lado, la tincin fluorescente es muy sensible y
compatible con MS pero los costos de tincin son elevados.

Una tincin sensible y barata es la denominada "Blue Silver" o Coomassie

G250.1 Adems, esta tincin es compatible con MS. Est compuesta por azul
de coomassie diluido en una solucin coloidal y se utiliza agua destilada para
destiir el gel de poliacrilamida
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Utilidad
Pueden analizarse las protenas contenidas en diferentes lquidos biolgicos:
sangre, plasma.

La produccin de una protena monoclonal (protena-M) nica es un rasgo

caracterstico del mieloma mltiple.

Esta protena-M es fabricada (sintetizada) por clulas plasmticas malignas (o

clulas del mieloma). refleja el estado del mieloma presente en el cuerpo en un
momento dado. Esta protena, que aparece en el suero o la orina, es un
marcador tumoral srico o urinario.

Tambin sirve para:

1. Evaluacin basal de la cantidad y el tipo de mieloma.

2. Monitorizacin serial para documentar la velocidad y el nivel de la respuesta

Este tipo de anlisis electrofortico tiene aplicaciones en investigacin y en

clnica, tanto humana como animal. Adems es una tcnica muy empleada
para el anlisis de protenas alimentarias y ltimamente se empleando para
realizar genotipado y deteccin de OMG (organismos modificados
genticamente).

3. Evaluacin de la posible progresin de la enfermedad o de una recada.

Prueba
Tras extraerle sangre, se separa el suero con el que se impregna un papel
especial que se somete a una corriente elctrica. Las protenas en el suero se
mueven en el papel para formar bandas que muestran la proporcin de cada
fraccin de protena.

Esta prueba se la recomienda cuando hay:

Amiloidosis
Gammopathy monoclnico de significado incierto
Macroglobulinemia de Waldenstrom
Mieloma mltiple
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INMUNOELECTROFORESIS
Qu es la electroforesis?
Mtodo de laboratorio en el que se utiliza una corriente elctrica controlada con
la finalidad de separar biomoleculas segn su tamao y carga elctrica a travs
de una matriz gelatinosa. (DEPARTAMENTO DE inmunologia, 2010)

Qu es la inmunoelectroforesis?
Es una serie de mtodos bioqumicos para la separacin y caracterizacin de
protenas basado en la electroforesis y la reaccin con los anticuerpos.

Descrita por Grabar y Williams en 1953. La inmunoelectroforesis es un mtodo

que tiene lugar en dos etapas o fases:

1. Consiste en una separacin electrofortica sobre gelosa. (se separa la

mezcla de Ags por electroforesis)

2. Se da una reaccin de precipitacin sobre fracciones separadas con

anticuerpos especficos denominada Inmunodifusin doble o mtodo de
Ouchterlony (el antgeno que se desea detectar, reacciona con un anticuerpo
especfico colocado en un pocillo lateral, precipitan dichos antgenos con sus
respectivos anticuerpos, creando bandas en forma de arco. En Inmunologa
clnica es una tcnica usada en la identificacin de las protenas de mieloma)

Las protenas se separan mediante electroforesis zonal:

1. Migracin electrofortica 2. Reaccin inmunolgica

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Clasificacin
Inmunoelectroforesis simple.

En "a", la muestra (m) se separa electroforticamente en un gel de agarosa.

Los componentes separados se representan por las reas punteadas. Una vez
finalizada la corrida, en "b", se abre un canal a lo largo de la placa para colocar
el antisuero deseado. En "c", despus de 24 hr de difusin, se evidencian los
distintos sistemas antgeno-anticuerpo que precipitaron, formando arcos. Abajo:
separacin de suero bovino (SB) y posterior difusin frente a anticuerpos contra
la albmina (suero -BSA).

Inmunoelectroforesis de un suero humano.

Despus de separar electroforticamente una muestra de suero humano (hoyo

superior) en agarosa a pH 8,2 se dej difundir contra un suero antihumano total
de origen equino (canal inferior). De los mltiples arcos de precipitacin
obtenidos puede identificarse con claridad el de la albmina (Alb), con su
clsica forma en "bote" a la izquierda, y el arco extendido de las IgG, el cual es
el ms catdico, a la derecha.

inmunoelectroforesis en cohete

Permite la cuantificacin de antgenos, al incorporar sus anticuerpos

correspondientes (monoespecficos) en el gel para obtener un precipitado
alargado, cuya altura es proporcional a la cantidad de antgeno en la muestra.

La placa con gel de agarosa contiene anticuerpos contra el antgeno a

determinar. Las muestras se colocan en los pocillos circulares y se somenten a
un campo elctrico para que se formen los precipitados alargados ("cohetes"),
cuya altura depende de la concentracin del antgeno. Utilizando estndares de
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concentracin conocida, se traza una curva de referencia graficando la altura

del precipitado (mm) contra la concentracin del antgeno.

Los hoyos 1-4 se llenaron con muestras de 5 l de albmina humana, con las
siguientes concentraciones: (1) 15 g/ml, (2) 30 g/ml, (3) 60 g/ml y (4) 120
g/ml. El gel de agarosa al 1% contiene anticuerpos anti-albmina (7 l/cm2), y
se corri a pH 8,6 por 3 hr a 10 V/cm, con el nodo arriba

Inmunoelectroforesis bidimensional

Permite an mayor resolucin que la "simple", al separar una mezcla de

antgenos en una dimensin de electroforesis y luego correr
perpendicularmente una segunda dimensin electrofortica en un gel con
anticuerpos

Una muestra proteica es separada en un gel de agarosa (primera dimensin,

izquierda). Posteriormente se corta la porcin superior del gel (derecha, lnea
horizontal) y se agrega otro gel de agarosa que contiene anticuerpos contra los
antgenos de inters. En este punto se aplica otra electroforesis (segunda
dimensin) en un ngulo de 90 con respecto a la primera, para que se formen
distintos arcos de precipitacin antgeno-anticuerpo

En la primera dimensin (horizontal) se corri 3 l de suero humano, desde el

origen (o) hacia el nodo. En la segunda dimensin (vertical) se corri las
protenas en un gel con suero anti-humano total (9 l/cm2), a pH 8,6. Ntese el
gran nmero de componentes que precipitan (tincin con Coomassie G-250).
Se puede identificar la pre-albmina (p) y la albmina (a), entre algunos otros
arcos conocidos. (Bruno Lomonte Vigliotti, MQC, PhD, 2007)
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Rocket Inmunoelectroforesis: El rocket inmunoelectroforesis es la

combinacin de la electroforesis y la inmunodifusion radial que han
proporcionado un mtodo rpido para medir concentracin de antgenos. El Ag
migra por electroforesis (aplicado en un pequeo pozo) en un agar que
contiene antisuero (anticuerpos en exceso). El tiempo requerido para la
precipitacin es de a proximadamente 2 horas. La altura de la zona de
precipitacin que tiene la forma de un rocket es proporcional a la
concentracin de antgeno. El antgeno debe migrar hacia el polo positivo en la
electroforesis, por tanto, es conveniente para albmina, transferrina y
ceruloplasmina, pero para inmunoglobulina es ms conveniente la
inmunodifusin radial

Inmunoelectroforesis cruzada o bidimensional de Laurell: La

inmunoelectroforesis cruzada requiere inicialmente la separacin electrofortica
de una mezcla de antgeno en una direccin perpendicular al fenmeno final de
precipitacin o de etapa rocket. Esta es capaz de resolver mezcla de
antgenos altamente complejas y cuantificar cada uno de ellos. Por ejemplo, se
ha utilizado para estimar el grado de conversin de tercer componente del
complementario (C3) a la forma inactivada C3c. (Castillo-Valenzuela, 2002)
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ELECTROFORESIS DE GLOBULINA
Globulinas tienen origen en el plasma se encuentran en una concentracin de
< 40 mg/L.

Analisis cuantitativo:

Se hace utilizando los valores de cada uno de los grupos de proteinas

indentificados como bandas en las placas de acetato de celulosa o como
fracciones en los reportes leidos con la ayuda de un densitometro.

Tabal 1 relaciona los valores de referencias esperados para cada una de las
fracciones electroforeticas de una electroforesis de proteinas.
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Alfa-1 globulina alta

El aumento es sintomtico de enfermedades inflamatorias agudas o crnicas

as como de un sndrome nefrtico, neoplasias, infartos y necrosis.

Alfa-2 globulinas baja

El nivel disminuye en el hipertiroidismo y las enfermedades hepticas.

Alfa-2 globulinas alta

Aumenta en los sndromes nefrticos y las enfermedades inflamatorias.

Beta-globulina baja

Disminuye en caso de insuficiencia heptica y en caso de desnutricin.

Beta-globulina alta

A la inversa, el dficit de hierro y la cirrosis son los responsables de un

aumento del nivel de beta-globulinas.

Gammaglobulina baja

El nivel disminuye en los casos de desrdenes inmunitarios variados y de los

dficits inmunitarios secundarios.

Gammaglobulina alta

El nivel aumenta en los casos de enfermedades inflamatorias crnicas como

la poliartritis reumatoide, el lupus eritematoso diseminado. Tambin se
observan concentraciones elevadas en dficits inmunitarios primitivos,
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tratamientos inmunosupresores, sndromes mielo proliferativos

(ciertas leucemias, algunos mielomas).

El anlisis cualitativo es el complemento del estudio cuantitativo, previamente

analizado, y en todos los casos debe hacer parte integral de la electroforesis de
protenas, incluyendo en el informe su respectiva grfica. Se compara el patrn
de la electroforesis del paciente, despus de ser <<ledo >> con un
densitmetro, con el esperado, con el esperado, de acuerdo al conocimiento
previo de patrones de la <<electroforesis normal>> y de algunas formas o
patrones anormales, segn pruebas de laboratorio:

Patrn de inflamacin aguda

El patrn electrofortico de la inflamacin aguda se caracteriza por la

disminucin de la albumina y elevacin de las -1- globulinas y las -2-
globulinas, entre las cuales se encuentran la mayora de los reactantes de
forma aguda, en estos caso tambin se eleva el fibrgeno, situado en las -
globulinas, pero no aparece cuando la electroforesis se hace en suero, debido
a que este se retira con el coagulo sanguneo. Este proceso se presenta en los
procesos inflamatorios agudos, especialmente en las infecciones a partir de las
primeras horas, en algunos casos de infarto del miocardio, en enfermedades
con necrosis tisular, quemados, cirugas extensas y situaciones de alto estrs,
y en algunos casos de reumatoide. En el patrn de inflamacin aguda,
usualmente no hay tiempo para que se presente un aumento importante de las
-globulinas, y en los casos en que se presenta es mnimo.
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(GERMAN CAMPUZANO MAYA, 2006)

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Tcnicas basadas en fluorescencia

INMUNOANLISIS DE FLUORESCENCIA POLARIZADA.

Es un Inmunoanlisis homogneo y competitivo que usa un antgeno marcado

con un fluorforo y polarizado, y su sistema de deteccin est basado en la
fluorometra. Es fcilmente automatizado y se utiliza para medir pequeas
molculas como drogas y hormonas.

Mtodo

Al igual que todos los inmuno ensayos se basa en la propiedad que tienen los
anticuerpos de unirse con alta afinidad y especificidad a un determinado
antgeno esta propiedad es utilizada para reconocer especficamente al analito
de inters, y por medio de diferentes mecanismos, generar una seal que
puede ser medida. En el caso de FPIA la seal que se mide es luz fluorescente
polarizada.

Ensayos

Se trata de un ensayo de tipo competitivo en fase homognea; como en todos

los inmunoensayos competitivos, un anticuerpo especfico para reconocer a la
molcula de inters es puesto en contacto con la muestra biolgica que
contiene el analito y con una cantidad conocida de la misma molcula de
inters unida qumicamente a otra molcula que sirve de "marca" o "etiqueta"
capaz de generar una seal mensurable, la molcula natural presente en la
muestra biolgica compite por los sitios de unin en los anticuerpos con la
molcula marcada y al final de un cierto tiempo necesario para que el sistema
se estabilice, la proporcin de molculas marcadas unidas a los anticuerpos
resulta inversamente proporcional a la cantidad de molcula natural presente
en la muestra.

Esta proporcin de molcula marcada unida al anticuerpo es la que genera la

seal que se mide. En los ensayos competitivos por lo tanto la seal producida
es inversamente proporcional al analito presente en la muestra (A menor
cantidad de analito, mayor es la seal y viceversa); esta propiedad permite
cuantificar con facilidad muy pequeas cantidades y variaciones en la
concentracin de un analito.

En lo que se distingue FPIA de otros inmunoensayos competitivos es en la

forma en que se genera y detecta la seal. En FPIA la molcula marcadora es
fluorescente, y lo que se detecta es la luz polarizada en un plano especfico
generada por la fluorescencia de la marca.
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Sustancias usualmente cuantificadas

Debido a la naturaleza de la tcnica se encuentra limitada para la cuantificacin

de molculas de pequeo tamao y relativamente bajo peso molecular en
solucin tales como el cido valproico, fenitona, ciclosporina A, canabinoides
tales como el THC, benzodiacepinas, antidepresivos tricclicos, cocana,
metotrexato, anfetaminas, vancomicina, salicilatos, everolimus, algunas
hormonas tales como la tiroxina y el cortisol, vitaminas tales como el cido
flico y aminocidos de importancia clnica tales como la metionina y la
homocistena entre otros.

INMUNOANLISIS DE FLUORESCENCIA UNIDA A ENZIMA.

Es un inmunoanlisis heterogneo y puede ser de tipo competitivo o no

competitivo, en que el inmunorreactante marcado con enzima est en
combinacin con un sustrato fluorognico que permite la deteccin por
fluorometra. El ELFIA est automatizado y es uno de los mtodos ms
sensibles hoy en da en el laboratorio clnico. Utiliza preferentemente como
enzima marcadora fosfatasa alcalina y como sustrato fluorognico el 4 metil
umbeliferona (4MUP).

La forma para realizar y preparacin de esta tcnica es muy similar al de RIA,

la diferencia est en que se utilizar un diferente tipo de ligando, la cual
detectar y se unir covalentemente a una enzima y este anticuerpo se unir al
antgeno, posteriormente se lavar la muestra para eliminar el material que no
conformo el complejo deseado. El ligado formado se observada una vez se
aada cromgeno el cual interactuar con la enzima del ligando para poder
formar una sustancia con color y cuantificable por espectrofotometra. Las
enzimas ms usadas son la fosfatasa alcalina, la perxidasa y la beta-
galactosidasa.

Clasificacin

a) Inmunoensayo competitivo: Este tipo de inmunoensayo se basa en el

equilibrio competitivo entre una inmunoespecie (Ag o Ac) conjugada con una
determinada enzima y de esta forma se cuantificar la actividad de la enzima
en la superficie del transductor al formarse el complejo, habr una competencia
por formar el complejo con la enzima entre los antgenos que no fueron
marcados (Ag) y los antgenos marcados (Ag*) cuanto ms Ag haya en la
muestra menos Ag* se unir a la enzima limitando la cuantificacin y los
resultados deseados.
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b) Inmunoensayo no competitivo o tipo sndwich: En este tipo de

inmunoensayo el analito se une con el transductor, inmediatamente despus se
agrega un segundo anticuerpo marcado por una enzima (Ac*) que se dirige con
especificidad a el eptope del analito, este eptope debe ser diferente al que
permite la formacin del complejo inmunolgico. Posteriormente se agregar
substrato en exceso y se cuantificar la actividad de la enzima en la superficie
del transductor. En otras palabras, se agregar Ac* en exceso a la muestra, el
Ag reaccionar con dos Ac diferentes que se fijarn a l en distintas partes
(doble reconocimiento). El principal inconveniente de este tipo de
inmunoensayo es el efecto Hook en elevadas concentraciones de analito ya
que provocar la cada de la radioactividad deseada

Ensayos

Se tapiza la placa con el anticuerpo especfico frente al antgeno a determinar.

b) Se aade la muestra con el antgeno.

c) Se adiciona el anticuerpo secundario marcado con la enzima que en

presencia de su sustrato da un producto coloreado soluble, este producto es
cuantificado mediante el lector de ELISA.

Como enzimas se suelen utilizar la peroxidasa, la galactosidasa o la glucosa

oxidasa. Esta tcnica se utiliza para la medida de hormonas, antgenos de la
hepatitis y otras muchas sustancias que se encuentran a muy bajas
concentraciones. Una variante de esta tcnica de gran utilidad se conoce como
ensayo en fase slida y est orientada a la determinacin de anticuerpos frente
a un determinado antgeno. Para ello el antgeno se encuentra fijo a un soporte
(por ejemplo tubo de plstico). Al aadir la muestra con el posible anticuerpo se
unir y podr ser detectado aadiendo anti-inmunoglobulinas marcadas con el
enzima.

Otra variante de las aplicaciones inmunoenzimticas es cuando el antgeno se

encuentra fijo en clulas o tejidos. Al igual que hemos visto en el apartado de
inmuno fluorescencia indirecta, en este caso tambin se emplean dos
anticuerpos.

CITOMETRA DE FLUJO.

La tcnica de inmuno fluorescencia se suele utilizar en el estudio de

poblaciones de clulas de sangre perifrica. Actualmente el anlisis de una
suspensin de clulas vivas marcadas con un fluoro cromo se realiza mediante
un citmetro de flujo.
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Ensayo

La suspensin celular se hace circular en forma de gotas microscpicas. Las

clulas pasan por un campo de deteccin atravesado por un potente rayo lser
que produce la dispersin de la luz y la activacin de la fluorescencia.

Mediante sensores especficos se analizan y cuantifican las poblaciones en

estudio en funcin de sus propiedades fisicoqumicas y del marcaje efectuado.
Para la separacin celular este aparato lleva acoplado un sistema que carga
elctricamente las clulas y con placas deflectoras se realiza su separacin

Adems de basarse en la deteccin de la fluorescencia emitida por las clulas

marcadas, tambin lo hace en otras propiedades diferenciales de las clulas en
estudio como tamao (FSC), complejidad (SSC), etc.

La seal producida como consecuencia de la excitacin del fluorocromo,

permite conocer el porcentaje de clulas reconocido por el anticuerpo
monoclonal empleado. (Cuernavaca, Junio 2007)
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BIBLIOGRAFIA
Burtis CA, Ashwood ER, Burns DE, Sawyer BG.(2008). Tietz Fundamentals of
Clinical Chemistry Saunders (Elsevier) 6 ed. ISBN 978-0-7216-3865-2.

International Myeloma Foundation (2011). Entendiendo la Electroforesis de

Protenas. Obtenido de: http://myeloma.org/pdfs/U-PEP-Span-
2011_e1web.pdf

ADAM (2016). de protenas sricas. Obtenido de:

Electroforesis
https://ssl.adam.com/content.aspx?
productId=52&pid=52&gid=250019&site=welldynerx.adam.com&login=
well1815

Bruno Lomonte Vigliotti, MQC, PhD. (Julio de 2007). Mtodos Inmunolgicos.

Obtenido de
http://kerwa.ucr.ac.cr/bitstream/handle/10669/9244/2007_Manual_Metod
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Castillo-Valenzuela. (2002). MTODOS INMUNOQUMICOS. Obtenido de

inmunoelectroforesis prot Ig: file:///C:/Users/User/Downloads/Metodos
%20(1).pdf

Cuernavaca, M. (Junio 2007). INMUNOQUIMICA. Obtenido de

file:///E:/inmunoquimica.pdf

DEPARTAMENTO DE inmunologia. (22 de Agosto de 2010). Electroforesis e

inmunoelectroforesis. Obtenido de
https://docs.google.com/file/d/0B6rMmh8fG6JaQ0ZLeEdwN0tOZFk/edit

GERMAN CAMPUZANO MAYA. (2006). ELECTROFORESIS DE PROTEINAS

-IG. Obtenido de MODULO 5 DE INMUNOLOGIA:
file:///C:/Users/doc/uu/jyrt/Electroforesis%20de%20proteinas.pdf