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Enzimas
Enzimas
ENZIMAS
Aceleran procesos biolgicos (biocatalizadores). Son molculas proteicas. Son muy pocas las
reacciones que no son catalizadas por enzimas.
Como funciona: si se pasa de A a B. Al principio solo hay A. A se transforma en B y B en A, hasta
que se llega al equilibrio de la reaccin. En el equilibrio la disminucin de A se termina y el
incremento de B se termina. Si a esta reaccin se le agrega una enzima A se transforma en B, solo
que el equilibrio de la reaccin va a llegar en un tiempo tremendamente menor. (Ejemplo de botar
un borrador)
La reaccin debe ser termodinmicamente posible, la energa que tiene A es tal que permite
transformarse en B (que queda con menos energa). La condicin energtica se llama energa libre.
Se requiere una energa libre de activacin. La enzima hace disminuir la energa de activacin del
reaccionante. Si la energa de activacin se reduce a la mitad, no implica que el tiempo tambin se
disminuye a la mitad.
Progreso de la reaccin
Esteban Arriagada
BIOQUMICA Enzimas 9
Se puede regular por su actividad: las enzimas estn, pero condiciones pueden inhibir la activdad
de la enzima.
Existen 2 tipos de reacciones enzimticas:
Reaccin Monosustrato:
A+E AE P+E
Reaccin multisustrato:
En este ltimo caso las 2 molculas interactan con la enzima; ambos productos no pueden entrar ni
salir al mismo tiempo, por lo que se dan los siguientes casos:
1) Secuencial Ordenada: entra el primer sustrato y luego el segundo; sale el primer producto y
luego el otro.
A B catlisis P Q
E EA EAB EPQ EQ E
2) Secuencial al azar: cualquiera de los 2 sustratos puede entrar primero y cualquiera de los 2
productos puede salir primero.
A B P Q
EA EQ
E EAB EPQ E
EB EP
B A Q
P
3) Mecanismo ping-pong: la enzima reacciona con el primer sustrato entrega el primer producto,
toma el segundo sustrato y entrega el segundo producto.
A P B Q
EA EP E EB EQ
E E
Esteban Arriagada
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Las enzimas estn presentes en todas partes de un organismo biolgico, en cualquier tejido, en
cualquier lquido. Las enzimas son especficas, por lo que hay miles de enzimas.
Para estudiar, por ejemplo, una enzima de la saliva se toma un poco de saliva. All habrn muchas
enzimas (tambin hay de bacterias), para diferenciarla hay que aprovecharse de que son especficas
y se coloca el sustrato de esa enzima y se estudia el aparecimiento de producto o desaparecimiento
de sustrato. Si se dan las condiciones de temperatura y pH adecuado, aparece producto en un tiempo
determinado. Si se le da ms tiempo debera aparecer ms producto. Pero este incremento del
producto no es eterno, llega un momento en que no se incrementa ms; en este lapso de tiempo
donde se encuentra el mismo producto, se detuvo el incremento y la reaccin llega a su equilibrio.
V=P
t t
Una de las formas clsicas de
averiguar la presencia de una enzima,
cuanta hay, si est activa, etc., es a
travs de su actividad, para lo cual lo
esencial es agregarle el sustrato. Si en Tiempo
las mismas condiciones se toma la 1 Fase 2 Fase
muestra de otra persona y se encuentra
una curva con menor ngulo con respecto a la horizontal, la enzima est presente pero en menor
cantidad.
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Complejas: tienen otra parte, llamado cofactor, denominandose apo enzima a la parte proteica; el
conjunto se llama holo Enzima
Hay varios cofactores, como las sustancias derivadas de vitaminas, caso en que se llaman
coenzimas, como el fosfato de piridoxal. Algunas estn unidas fuertemente a la enzima, otras no.
Las enzimas se recuperan y pueden volver a hacer lo mismo. Tampoco las coenzimas se necesitan en
grandes cantidades, por lo que no es necesario tomar tantas vitaminas.
No todas las enzimas son tan regulables. En esto hay que tener en cuenta un efecto de economa
importante. La mayora de los efectos biolgicos dependen de reacciones mltiples, cascadas o
secuencias de reacciones; cada una de estas etapas es catalizada por una enzima (se habla de una
batera de enzimas). No hay necesidad de regular negativamente todas las enzimas de una cadena de
reacciones, basta con que se regule una (economa) y todo el proceso se afectar.
Los reguladores: son de muy variada naturaleza y pueden ser reguladores externos o internos.
Externo: por ejemplo, la propia glucosa puede ser un regulador para que se activen ciertos
mecanismos que tienen que ver con el metabolismo de la glucosa.
Internos: Se puede dar que la formacin de exceso de ATP regule negativamente alguna de las
enzimas de la glicolisis, as se inhibe todo el fenmeno. Si el organismo fabrica harto ATP y este
se gasta, se forma mucho ADP, el que se transforma en un regulador positivo de una de las
enzimas y se activa nuevamente la degradacin de la glucosa. As una enzima tendra un sitio
que le permite estimular su actividad y otra que lo inhibe.
Si se quiere verificar si una enzima est hay que colocarle harto sustrato (no suficiente), para as
medir la concentracin de enzimas. Harto significa garantizar que por un tiempo determinado todas
las molculas de enzimas tengan sustrato. Esto se llama saturacin de las enzimas por el sustrato y
permite construir una curva de progreso donde la lnea recta indica que todas las enzimas estaban
saturadas.
En el organismo las enzimas trabajan a una concentracin saturizante; si no hay glucosa las enzimas
estn insaturadas.
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Ecuacin Michaelis-Menten
Representa los efectos de la concentracin de sustrato sobre los ndices de numerosas reacciones
enzimticas.
La concentracin del sustrato que produce la mitad de la velocidad mxima Vi = V max [S]
(constante de Michaeli o Km) se puede determinar graficando v i como Km + [S]
funcin de [S].
Ecuacin Lineweaver-Burk
1 = Km 1_ + 1__
La ecuacin de Michaelis-Menten se reordena en forma de una lnea
V Vmax [S] Vmax
recta para determinar Km y V max. (Puesto que numerosas enzimas
dan curvas de saturacin que no permiten fcilmente la valoracin de
V max).*
i_ Pendiente= Km
Vi Vmax
La Km puede ser calculada a partir de la grfica de
Lineweaver-Burk o del doble recproco, donde la
interseccin en y es 1/Vmax y la pendiente es Km/Vmax. _ 1
La interseccin negativa en x es 1/Km. Km 1__
Vmax
1
[S]
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INHIBIDORES DE ENZIMAS
Un inhibidor muy usado en el mundo (no reversible) es la aspirina. Su destino es interferir una
reaccin enzimtica que lleva a la produccin de prostaglandinas (precursor: cido araquidnico); la
oxigenasa tiene en su sitio activo un aminocido llamado serina con un radical con un grupo OH;
sobre esta enzima acta el cido acetilsalicilico; as la serina y la enzima no funcionan, lo que
produce una inhibicin irreversible. Cuando algn signo molesto ocurre en el organismo (fiebre,
dolor, coagulaciones intravasculares, etc), la disminucin de la sntesis de prostaglandinas hace que
estos signos se abatan.
Esteban Arriagada
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Existen 2 mecanismos:
Sintetizar ms o menos enzimas de acuerdo a las necesidades.
Regulacin por va de la actividad. Hay muchos mecanismos reguladores de la actividad
enzimtica.
MECANISMOS REGULATORIOS
INDUCCIN Y REPRESIN
Si una persona tiene tendencia a presin baja, tender a producir ms sustancias que aumenten la
presin. Esto est afectado por factores externos, por ejemplo, si una persona come mucha azcar,
las enzimas degradadoras de glucosa estarn aumentadas y viceversa.
MODIFICACION COVALENTE
Agregado a las enzimas una sustancia que se une covalentemente a ellas se puede hacer ms activa o
menos activa. La regulacin esta en la enzima que une o separa una sustancia a la enzima. El caso
ms frecuente son las reacciones de fosforilacin, donde X es un grupo fosfato. Una enzima puede
fosforilarse o defosforilarse. Hay enzimas que al fosforilarse se activan y otras que al desfosforilarse
se activan; en cualquier caso se requiere de un sistema que fosforile y otro que defosforile.
PROTEOLISIS DE PROENZIMA
Hidrlisis: degradacin de enlaces peptdicos. Cuando* a una enzima (proenzima o cimgeno), se le
corta un trozo, se activa. Esto lo hace otra enzima, llamada proteoltica. Este mecanismo se da en un
solo sentido, no se vuelve atrs, no se le puede volver a unir el pptido a la enzima.
MECANISMOS ALOSTRICOS
Enzimas que aparte de su sitio activo tiene un sitio alostrico que cuando se une un efector
alostrico puede favorecer o desfavorecer (positivo o negativo) la actividad de la enzima, en
cualquier caso, regula.
COOPERATIVIDAD POSITIVA
La unin de un sustrato hace ms fcil la llegada de un Sustrato solo
segundo sustrato. Cuando llega un sustrato al primer sitio
activo, se favorece la entrada de sustrato a los otros sitios
activos. Normalmente se da en enzimas de estructura V
cuaternaria. Cooperatividad
positiva
[S]
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Las enzimas estn generalmente en el interior de las clulas; existe un recambio celular constante y
cuando la clula se muere, el contenido de enzimas pasa a la sangre. Por lo que se espera encontrar
una cantidad basal en la sangre; pero si la cantidad de enzimas aumenta, esto es signo del deterioro
de un determinado rgano, lo que ayuda al diagnstico.
Las enzimas aparecen, adems, con una determinada secuencia:
Nivel Plasma
CF
5x
4x GOT
3x OH But DH
2x
x
1 3 5 7 9
Das post dolor torxico
x = valor normal
VITAMINAS
A veces las enzimas necesitan trabajar con una sustancia no proteica que se llama Coenzima (CoE).
En la estructura de estas coenzimas participan las vitaminas. Las vitaminas no son coenzimas y solo
algunas enzimas necesitan trabajar con coenzimas.
Las vitaminas estn en todos los alimentos. Si una persona hace una dieta normal, jams necesitar
vitaminas.
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COFACTORES ENZIMTICOS
Uno de ellos se refiere a las coenzimas. En general las coenzimas son sustancias que estn al
lado de las enzimas contribuyendo a la eficiencia de la reaccin enzimtica.
Las coenzimas son siempre cofactores positivos. En general estn hechos de vitaminas ms
algn agregado.
VITAMINAS
Deben venir de afuera porque el organismo humano no las sintetiza. Provienen de la dieta,
por lo que las vitaminas se llaman complementos de la dieta o factores accesorios de la
alimentacin. Estn en los vegetales y otros animales.
Las vitaminas, generalmente una vez que ingresan al organismo se catabolizan, por lo que
hay que irlas reemplazando diariamente.
Otra fuente importante de vitaminas es la flora bacteriana intestinal. Los antibiticos
esterilizan la zona bacteriana, por lo que se puede caer en un dficit de vitaminas.
Cuando ocurre una falla nutricional o un tratamiento de antiobiticos o una dificultad de
absorcin de las vitaminas, aparecen signos tpicos que en su conjunto corresponden a los cuadros
carenciales.
ALGUNAS VITAMINAS
La vitamina D contribuye a favorecer el proceso de mineralizacin de los tejidos duros; cuando
hay un cuadro carencial de vitamina D, se produce una hipocalcificacin de los tejidos duros, lo
que puede ocurrir en cualquier momento de la vida. Cuando esto ocurre en la infancia, la
desmineralizacin se llama raquitismo; cuando ocurre en los adultos se llama osteomalacia.
La vitamina K tiene un rol en la formacin de un grupo de enzimas que coagulan la sangre;
cuando hay dficit de vitamina K (por antibiticos, ya que un aporte importante lo entrega la
flora bacteriana) hay tendencia a sangramiento anormal largo.
La vitamina C tiene rol en la formacin de colgeno, estructura que le da firmeza a todos los
tejidos; cuando falta, se daan los tejidos de vasos sanguneos, por lo que se produce
sangramiento por ruptura de los vasos.
La gran mayora de las vitaminas deben su nombre a la funcin recin mencionada. As, la vitamina
D se denomina antirraqutica, la K, antihemorrgica, la C, antiescorbuto.
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Una parte del sustrato liberado por una enzima no queda libre, sino unido a la coenzima. La
coenzima acepta un grupo qumico del sustrato. Este complejo EC 0Eh se una a otro sustrato
formando un segundo complejo, al que se unir el elemento libre.
Hay una transferencia de un grupo qumico de un elemento a otro, donde el elemento que
transfiere es la coenzima, es un aceptor transitorio del grupo qumico del sustrato.
La gran mayora de las reacciones qumicas consiste justamente en esto, en degradar un
sustrato y componer otro. Los grupos qumicos transferibles son muchos: metilar, carboxilar,
acetilar, hidrogenar, etc.
Por ejemplo, en las reacciones de oxido reduccin de la cadena respiratoria de las
mitocondrias o fosforilacin oxidativa se forma ATP, aqu lo que se hace es trasladar un grupo H al
oxgeno para formar agua; aqu hay coenzimas que sirven a la unin transitoria de hidrgeno.
(Cuando pierde hidrgeno se oxida, cuando gana H, se reduce.). De esto deriva el nombre de la
enzima y coenzima, ej: enzima oxireductasa y coenzima de co-oxidoreductasa.
Hay dos etapas diferentes. La coenzima le va a quitar H al sustrato; puede ocurrir que una
segunda enzima que va a entregar H a un segundo sustrato necesita una coenzima reducida; aqu se
ocuparon 2 enzimas. En otras oportunidades la misma enzima toma de un sustrato y se lo entrega a
otro sustrato.
NUCLETIDOS
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ESTRUCTURA
Estn formados por:
Base nitrogenada, que puede ser adenina, guanina, citosita, uracilo, timina
Azucar: ribosa o desoxirribosa.
Grupo fosfato que puede estar 1,2 o 3 veces (mono, di o trifosforado)
Cuando la base nitrogenada est unida al azcar se habla de nuclesido; cuando se agrega el
fosfato se transforma en nucletido.
ATP: adenosina (adenina ms ribosa) tri-fosfato; es un nuclesido trifosforado, (no
nucletido trifosforado). Cuando se habla de nucletidos se indica que el azcar es ribosa; cuando se
habla de d-cletidos, el azcar es desoxirribosa. (El carbono 2 de la ribosa lleva un grupo OH,
cuando desaparece, se transforma en desoxirribosa).
BASES NITROGENADAS
Se clasifican de 2 maneras
Prica: Estructura cclica carbonada y nitrogenada; puede ser adenina y guanina.
Pirimdica: puede ser citosina, timina y uracilo.
Para sintetizar nucletidos de timina hay que transformar el nucletido uracilo, sacarle el OH
(sistema enzimtico: reductasa) e insertarle un CH3 (como el nucletido de timina se llama cido
timirlico, la enzima se llama timidilato sintetasa).
Del uracilo se fabrica citosina y timina. Se necesita cido timirlico para construir timina para
la mitosis, se necesitan varios miles de millones.
Es daino que esta molcula se sintetice cuando el tejido se transforma en tumoral. Un
mecanismo que frena esta sntesis consiste en inhibir la timidilato sintetasa, que constituye una de
las terapias anticancergenas (frmacos fluoracilo y fluordesoxiuridilato), por medio de un inhibidor
competitivo.
Esteban Arriagada