Factores fsicos

Temperatura
Desecacin
Radiaciones
Ondas sonoras
Presin hidrosttica
Presin osmtica
pH
 Agentes qumicos

Desinfectantes y antispticos
Quimioterpicos de sntesis
Antibiticos
Metales pesados
Halogenuros
 Temperatura

Afecta a la velocidad de crecimiento y, por lo tanto al tiempo de

generacin, g.

Cada bacteria muestra una curva de crecimiento en funcin de la

temperatura
EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LOS
MICROORGANISMOS
 Temperatura ptima de crecimiento
Escherichia coli 5 28 37 55 0.1 ml a agar nutritivo

Incubar por 24 h.

Crecimiento

5 28 37 55
MICROORGANISMOS PSICRFILOS

Crecen entre -5 a 5C.

A)Las psicrfilas obligadas tienen temperatura ptima entre
15-18C: Flavobacterium.

Psicrfilo extremo: tiene su ptimo de crecimiento en 4C,

y es incapaz de crecer a 14C (se muere de calor!):
Polaromonas vacuolata, recientemente aislada en aguas
heladas de la Antrtida

B) Las psicrfilas facultativas o psicrotolerantes (tambin

llamadas psicrotrofas) soportan temperaturas de
refrigeracin, presentan temperatura ptima en torno a los
20-30C y mximas a los 35C.
Adaptaciones bioqumicas
en medios fros
Enzimas ms resistentes al fro
Sistemas de transporte adaptados a bajas temperaturas;
Los fosfolpidos de la membrana celular aumentan la proporcin
de cidos grasos insaturados, ello supone que la membrana sigue
en su estado semifluido, evitndose su congelacin.
MICROORGANISMOS MESFILOS

Su temperatura ptima de crecimiento es entre 25-40C y

mximas entre 35 y 47C.

La mayor parte de las Eubacterias pertenecen a esta
categora.
MICROORGANISMOS TERMFILOS

Tienen temperatura ptima de crecimiento entre 50-75C y

mxima entre 80 y 113C.
Las Hipertermfilas o termfilas extremas presentan
ptimos cercanos a los 100C, y pertenecen al dominio
Archaea.
 Los hbitats naturales
Fuentes termales volcnicas terrestres
Fuentes termales submarinas: fumarolas
hidrotermales asociados a las grandes dorsales
ocenicas
Los materiales en fermentacin como composta
y ensilados pueden alcanzar 65C.
Thermus aquaticus
Brock descubri la eubacteria termfila, en el Parque
Nacional de Yellowstone, en EE UU, a ms de 100oC.

De ella se extrae la ADN polimerasa termorresistente (Taq)

empleada en la reaccin en cadena de la polimerasa (PCR)
automatizada.

Pyrococcus furiosus, es una arqueobacteria hipertermfila,

que crece muy bien a 100C.
 Los hipertermfilos

Con temperatura ptima de crecimiento por encima de los 80C son

incapaces de crecer a menos de 37oC: Thermoproteus,
Pyrococcus, Pyrodictium

La arquea Pyrolobus fumarii, habita en las fumarolas hidrotermales

submarinas crece a 105C y soporta hasta 113C, y detiene su
metabolismo (por fro) a la agradable temperatura de 90C
(!!!!!!).
 Adaptaciones bioqumicas a altas
temperaturas
Enzimas termorresistentes
Ribosomas termorresistentes
Membranas ricas en cidos grasos saturados, que
permiten enlaces hidrofbicos ms fuertes.
En Arqueobacterias hipertermfilas los lpidos no
tienen steres de cidos grasos con el glicerol, son
teres de hidrocarburos unidos al glicerol
Algunas bacterias, en vez de la tpica bicapa lpdica,
exhiben una monocapa de C40-bifitanil-tetrateres
que condicionan una extrema resistencia a agentes
ambientales.
Tiempo trmico mortal (TTM)
Transferir 5 ml del medio previamente inoculado (0.5%) a cada tubo, someter a
70C en los tiempos indicados, posteriormente transferir 0.1 ml a una caja de
petri con agar nutritivo y observar el crecimiento.

Escherichia coli 5 10 15 20 25 30 T

Es el tiempo mnimo requerido para que mueran todas las

bacterias de una determinada suspensin a 70C.
Tiempo de reduccin decimal
(Valor D)
Punto trmico mortal

Punto trmico mortal Especies

(PTM)
55oC Escherichia coli
60oC Mycobacterium tuberculosis
120oC Endosporas de especies muy
resistentes de Bacillus.

Es la temperatura mnima que mata a todas

las bacterias en 10 min.
 Punto trmico mortal
0.1 ml a agar nutritivo
Escherichia coli 37 50 60 70 80 92 T

Incubar por 24 h.

Transferir 5 ml del caldo previamente inoculado (0.5%) con el

microorganismo de prueba, a cada tubo, someter a la temperatura
indicada por 10 min, posteriormente transferir 0.1 ml a una caja de
petri con agar nutritivo y observar el crecimiento.
 La inactivacin por calor
Microorganismo condiciones
o
Clulas vegetativas, de bacterias, levaduras y 80 C , 5-10 min
mohos
Mycobacterium tuberculosis 58oC , 30 min
Mycobacterium tuberculosis 59oC , 20 min
Mycobacterium tuberculosis 65oC , 2 min
Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis 60oC , 60 min
La mayora de esporas de bacterias patgenas 100oC , pocos min
esporas del patgeno Clostridium botulinum 100oC , 5,5 horas
esporas de Clostridium y Bacillus 100oC , muchas horas
esporas de Clostridium y Bacillus 120oC , 15 minutos

Hay desnaturalizacin de protenas y a la fusin de lpidos de

membrana, se rompen muchos enlaces dbiles, sobre todo los
puentes de hidrgeno entre grupos -C=O y H2-N-.
Estos enlaces se rompen ms fcilmente en atmsfera saturada de
vapor de agua, debido a que las molculas de agua pueden
desplazar a los puentes de hidrgeno
 Tindalizacin
Nombre en honor de John Tyndall

Es un mtodo que consiste en someter el material a

varios ciclos (normalmente 3 4) de dos fases
sucesivas cada uno:

1) En la primera fase el material se calienta a una

temperatura entre 50 y 100C, durante 1 2 horas
2) En la segunda fase el material se incuba en una
estufa, a 30-37C durante 24 horas.
 Pasteurizacin
En honor a Louis Pasteur, que la introdujo en los aos
1860.

Es un mtodo que consiste en tratar los fluidos a 63oC

durante 30 min, con un enfriamiento a 5C y envasado
rpido
 Pasteurizacin instantnea
Conocida por sus siglas en ingls HTST, de high
temperature-short time se logra calentando a
72C durante slo 15 segundos, enfriamiento a
5C y envasado inmediato.

El nmero de bacterias viables desciende un 97-

99%.

Los potenciales patgenos que pueda llevar la

leche (Brucella, Salmonella, Mycobacterium
tuberculosis, Streptococcus) son eliminados
fcilmente.
 organismos termodricos

Son los organismos que resisten las condiciones

de pasteurizacin

Y los organismos termorresistentes

cuales son?
 PASTEURIZACIN DE LECHE BRONCA
Leche bronca (Lb)

someter a 65 x 30 someter a 4 x 5 leche pasteurizada

(80C X 5)

Recuento de bacterias coliformes

Recuento de bacterias mesoflicas
aerobias
Recuento de organismos termodricos
RECUENTO DE ORGANISMOS COLIFORMES

Colonias de 1-2 mm de dimetro, de color rosa

mexicano por fermentacin de lactosa y un
precipitado del mismo color alrededor de la
colonia
 RECUENTO DE MESOFLICOS
AEROBIOS

Leche bronca (Lb) Leche pasteurizada (Lp) Leche alpura

10-2 y 10-4 sin diluir y 10-1 sin diluir y 10-1

Transferir 1 ml por duplicado y agregar 15 ml de agar cuenta estndar

Incubar a 37C x 24-48 h

Conservacin de microorganismos
utilizando la temperatura

Tarea:
Congelacin
Liofilizacin
EFECTO DEL PH
Neutrfilas, si crecen de modo
ptimo en torno a la
neutralidad (entre pH 6 y 8).
Acidfilas, si crecen
normalmente entre pH 0 y 6.
Alcalfilas, si crecen entre pH
8 y pH 14.

Escherichia coli puede crecer bien

entre pH 6 y pH 8, pero su pH
interno es siempre 7.6 o muy cercano
a ese valor
Bacterias oxidantes del azufre
 a b

aislada de una planta de tratamiento de aguas

residuales, en su interior se observan abundantes grnulos de
azufre
b) Bacterias oxidantes del azufre en un arroyito, abundante
presencia de azufre elemental en las precipitaciones blancas
BACTERIAS DEL CIDO ACTICO
Son bacterias que pertenecen a las Proteobacterias del
grupo Alfa y a los gneros:
Gluconobacter
Acetobacter
Realizan la oxidacin incompleta del etanol y de azcares
produciendo:
Acido actico
Resisten valores de pH menor a 5
Hbitat de las Crenarqueota
Crenarqueota Hipertermfilo
alcalfilas obligadas
Tienen ptimos de pH en torno a 10-11.

Bacillus alcalophilus , cuyo pH interno es de 9. Su hbitat

tpico son suelos carbonatados y lagunas alcalinas
Natronobacterim gregoryi,

Estos organismos tienen gran inters industrial, de ellos se

obtienen enzimas hidrolticas como proteasas y lipasas que
se usan como aditivos en detergentes
Efecto de la presin osmtica

1 3 30 %
ACTIVIDAD DE AGUA
 Efecto de la presin osmtica
A) En medios hipotnicos (con una aw>aw del citoplasma)
es la pared celular la que ejerce todo el papel: su rigidez se opone
a la entrada de agua, y por lo tanto, evita que la membrana
citoplsmica tienda a sufrir una presin de turgencia excesiva.

B) En medios hipertnicos (cuando la aw del exterior es menor

que la del citoplasma).
Las bacterias poseen mecanismos compensatorios por los que
tienden a aumentar la osmolaridad interior por encima de la del
medio (para garantizar la entrada de agua del ambiente y
mantener su metabolismo), aumentando la concentracin de un
soluto compatible, lo cual se puede lograr por varios posibles
mecanismos:

MECANISMOS
Bomba de iones al interior:potasio (K+), por un sistema de
antiporte K+/H+.

Molcula orgnica osmticamente activa: el glutamato, la

glutamina y la trehalosa

Sustancias osmoprotectoras:
Prolina: Salmonella typhimurium y Staphylococcus aureus
Betana (glicnbetana), un derivado trimetilado de la
glicocola: Cianobacterias y en algunas Gram-positivas.
Colina :Escherichia coli
Ectona: Enterobacterias.
Los Osmfilos
son microorganismos especializados que viven en
medios hipertnicos.
Entre los osmfilos existen dos grupos: los
sacarfilos y los halfilos.

Uno de los mejores ejemplos de microorganismos

sacarfilos no es una bacteria, sino las levaduras,
que viven en jugos vegetales, nctares, zumos,
etc. Utilizan como solutos compatibles polioles
como el sorbitol, el ribitol.
Los Halfilos
Halfilos moderados: suelen ser bacterias marinas (ej.: Vibrio
fischeri) que viven en 3.5% de NaCl, y que ven inhibido su
crecimiento a concentraciones mayores o menores de sales con
una aw equivalente a la de agua de mar, as como
concentraciones determinadas de iones Na+.

Halfilos extremos (hiperhalfilos), representados

paradigmticamente por las arqueas del gnero
Halobacterium, que viven en concentraciones saturantes de
sales (salitrales, lagunas salinas). Usan como soluto compatible
el K+, concentrndolo a partir del medio donde viven, hasta
que el citoplasma queda prcticamente saturado con l (4 a 7
M).

Halotolerantes (como por ejemplo, Staphylococcus aureus),

pero la inmensa mayora de los procariotas viven a valores de
actividad de agua de 0.98
 EFECTO DE LAS RADIACIONES
ELECTROMAGNTICAS

Radiacin electromagntica (longitudes de onda, en nm)

radiacin infrarroja (IR) 800-106
radiacin visible 380-800
ultravioleta (UV) 13,6-380
rayos X 0.14-13.6
rayos 0.001-0.14
rayos csmicos < 0.001
 La Radioactividad es una reaccin nuclear de
descomposicin espontnea, es decir un nclido
inestable se descompone en otro ms estable
emitiendo una radiacin

(2 P
y 2 N)

(e-)
RADIACIONES ELECTROMAGNTICAS

Neutrones

Papel Cuerpo Acero Plomo Cemento

Humano
 FOTOPRODUCTOS DEL ADN
OCASIONADOS POR LA LUZ UV

Los fotoproductos generados por la luz UV en el ADN derivan

principalmente de alteraciones en las bases pirimdIcas
(citosina, timina):

a) Dmeros de pirimidina: anillo ciclobutano

b) Fotoproducto de la endospora: 5-timinil-5,6-dihidrotimina

c) Hidratos de pirimidina
 EFECTOS DE LAS ONDAS SONORAS

Las ondas sonoras audibles para los humanos

poseen un rango de frecuencias entre los 9
kilociclos y los 20 kilociclos/segundo.
las ondas supersnicas (hasta los 200 Kc/seg)
las ultrasnicas (desde 200 hasta 2000
Kc/seg).

Efecto sobre las clulas : Desintegracin

Mecanismo de accin
El paso del sonido a travs de un lquido produce cambios de
presin alternantes, por los sucesivos frentes de ondas, que
a grandes frecuencias originan cavidades (burbujas de gases
disueltos) de unos 10 m de dimetro (fenmeno de
cavitacin).
Dichas cavidades van aumentando de tamao y terminan
colapsando violentamente, dando lugar a enormes
presiones locales (de hasta 1000 atmsferas o 10 Tm/cm2).

Efecto en la clula
Desintegracin
Se forman perxidos
Hay despolimerizacin de macromolculas
Fraccionamiento del ADN.

 USOS
Son ms sensibles las Gram-negativas y ms
resistentes las Gram-positivas.
Uso en el laboratorio de de los supra- y
ultrasonidos:
sonicacin o disrupcin ultrasnica de clulas
para obtener extractos celulares en un aparato
llamado generador de ultrasonidos que opera
en un rango de frecuencias desde 9 hasta 100
Kc/seg.
EFECTO DE LA PRESION HIDROSTATICA

La mayor parte de las especies bacterianas de

hbitats continentales no pueden crecer cuando
son sometidas a altas presiones de 600 Kg/cm2

Accin sobre las clulas

disminucin de la capacidad de las enzimas de
unirse a sus respectivos sustratos
interferencia en la divisin celular: las
bacterias se alargan, se filamentan, pero sin
produccin de tabique transversal.
 BACTERIAS QUE SOPORTAN ALTAS PRESIONES

Bacterias barotolerantes
Crecen a la presin atmosfrica, pero aguantan hasta unas 500
atmsferas.
Su hbitat son las aguas ocenicas, entre los 2000 y los 4000 metros
de profundidad.

Bacterias barfilas
Crecen ptimamente a ms de 400 atmsferas.
Y se subdividen en barfilas moderadas (facultativas) y barfilas
extremas (obligadas):
Las barfilas moderadas pueden crecer a presin
atmosfrica, aunque su ptimo est a unas 400 atmsferas.
Habitan profundidades entre los 5000 y 7000 metros.
Las barfilas extremas
Presentan ptimos de crecimiento a muy
altas presiones (por encima de 600-700
atmsferas), y son incapaces de crecer a
presin atmosfrica.
Se han aislado a ms de 10000 metros de
profundidad a 2-3oC.
Gneros:
usos
Aplicacin prctica de las altas presiones a
bacterias barosensibles:
La llamada prensa de French es un aparato de
laboratorio que permite aplicar grandes presiones
y brusca descompresiones, lo que logra la rotura
mecnica de las bacterias, con objeto (al igual
que la sonicacin) de obtener extractos libres de
clulas.
ANTISPTICOS
Desinfectantes y esterilizantes
APLICACIONES INDUSTRIALES DE LOS
DESINFECTANTES