FUNDACIN UNIVERSITARIA AGRARIA DE COLOMBIA

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BSICAS

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Resumen MORFOLOGIA MICROSCOPICAComo Y TECNICAS DE TINCION

colonias bacterianas apreciables a simple vista despus
La prctica de laboratorio se desarroll con Mena, el objetivo de de desarrollarse
Sindy. Segura, Santiago en la superficie de medios de cultivo slidos.
identificar y reconocer los diferentes microorganismos por Una colonia es
{MENA.CINDY, SEGURA, SANTIAGO}@uniagraria.edu.co una agrupacin de bacterias formada a partir de
medio de las diversas tcnicas de tincin como Acua, la reproduccin de una Unidad Formadora de Colonia las
lo son:Yudtanduly
Tincin de frotis, tincin simple, tincin diferencial, tincin cuales tienen una medida, forma, textura y en algunos casos
de esporas, con la ayuda de la observacin por medio del color caractersticos, que aunque puede variar de acuerdo al
microscopio, clasificando los microorgranismos por su medio en que se encuentren, es constante bajo condiciones
morfologa y pigmentacin en Gram positivas o Gram controladas y depende de la especie bacteriana que la forme.
negativas. Poder reconocer la morfologa macroscpica de La morfologa colonial es comparable a una estadstica ya que
las colonias presentes en los diferentes medios de cultivos. se deriva de una clula individual pero es la caracterstica de la
masa celular. Debido a que las caractersticas de las colonias
Palabras Clave ocurren en varios grados y combinaciones dependiendo de las
bacterias y son a menudo muy uniformes, sirven para
Medios de cultivo, microorganismos, tincin, microscopio, identificar bacterias en cultivos mezclados. Sin embargo,
morfologa. adems de stas caractersticas se requiere tambin estudiar la
Abstract fisiologa y propiedades inmunolgicas de las bacterias para
The laboratory practice was developed with the objective of poder realizar una identificacin completa. [1]
identifying and recognizing the different microorganisms by means MORFOLOGIA MICROSCOPICA
of the various staining techniques such as: smear staining, simple
staining, differential staining, spore staining, with the aid of La morfologa bacteriana debe considerarse desde el punto de
observation of the microscope, classifying the microorganisms by vista de clulas individuales observables slo al microscopio.
their morphology and pigmentation in Gram positive or Gram
Las diferencias en el tamao, forma y ciertos detalles
negative. To be able to recognize the macroscopic morphology of
the colonies present in the different culture media. estructurales son caractersticos de los principales grupos de
bacterias, y proporcionan las bases fundamentales para su
Keywords estudio sistemtico e identificacin. De la misma forma, las
Culture media, microorganisms, staining, microscope, morphology. colonias bacterianas, compuestas por masas de clulas
individuales, tienen caractersticas de tamao, consistencia,
I. INTRODUCCIN textura y color que poseen un valor sistemtico, pero no tienen
la importancia fundamental de la morfologa celular. [2]
La tincin de Gram es de gran importancia en Microbiologia
porque permiete diferenciar dos grandes grupos de bacterias
(Gram+ y Gram-), segn se comporten ante esta tincin. El COCOS: Los cocos suelen ser esfricos, pero pueden ser
fundamento de la tincin radica en la diferente estructura de la ovalados, alargados o con un lado aplanado. Cuando los cocos
pared celular de ambos grupos: las bacterias Gram+ tienen una se dividen para reproducirse pueden permanecer unidos uno a
gruesa capa de peptidoglicano en la pared celular, por otro otro. Los cocos que permanecen en parejas tras dividirse se
lado las bacterias Gram-tienen una capa de peptidoglicano llaman Diplococos, Aquellos que se dividen en dos planos y
menos gruesa, tras la tincioon con el prmier colorante forman grupos de cuatro se conocen como Ttradas,
(colorante violeta) se efectua un lavado con etanol que Los que se dividen por tres planos regulares y quedan
arrastrara al colorante solo en las Gram(-) mientras que en las divididos en grupos cbicos de ocho se llaman Sarcinas,
gram(+) el colorante queda retenido y las clulas Aquellos que se dividen siguiendo planos al azar y forman
permanecern de color violeta intenso. clulas en paquetes irregulares son los: Estafilococos y si se
presentan en cadenas se denomina Estreptococos. [3]

BACILOS: Inmoviles ya que no tienen ni flagelos ni ninguna

II. ASPECTOS TERICOS otra estructura para ayudar a su movimiento. Tiene
polimorfismo (distintas formas): rectos, curvados, con
ramificaciones. Son anaerobios facultativos: casi todas las
MORFOLOGIA MACROSCOPICA bacterias de nuestro organismo son anaerobias facultativas,

a
Estudiantes de ingeniera ________.
b
Docente de Fsica, Departamento Ciencias Bsicas.
crecen en medios de cultivo agar-sangre y se facilita su
crecimiento con CO2. [4]
BACTERIAS ESPIRALES: Las bacterias espirales pueden
tener una o ms vueltas; nunca aparecen rectas. Los bacilos
curvados en forma de coma se denominan vibrios. Otros,
llamados Espirilos, poseen una morfologa helicoidal
caracterstica, que recuerda un sacacorchos, con un cuerpo
celular bastante rgido. Hay an otro grupo de bacterias
espirales llamadas Espiroquetas. [3]
TINCION
Es el proceso por el cual las molculas de un colorante se
adsorben a una superficie. El uso de colorantes permite
cambiar el color de las clulas de los microorganismos y poder
realizar la observacin en microscopio ptico. Dado que las
bacterias son casi incoloras, no presentan contraste con el
medio en el cual se encuentran suspendidas y no pueden
observarse claramente sin algn tratamiento previo. De
acuerdo a la reaccin que ocurre, existen diferentes tipos de
tincin: [5]
TINCION DE FROTIS: Se denomina frotis a la extensin que
se realiza sobre un portaobjetos de una muestra o cultivo con
objeto de separar lo ms posible los microorganismos, ya que
si aparecen agrupados en la preparacin es muy difcil obtener
una imagen clara y ntida. Este frotis debe ser posteriormente
fijado al vidrio del portaobjetos para poder aplicar los mtodos
habituales de tincin que permiten la observacin al
microscopio de las bacterias sin que la muestra sea arrastrada
en los sucesivos lavados. La fijacin de una extensin
bacteriana hace que las bacterias queden inactivadas y
adheridas al vidrio alterando lo menos posible la morfologa y
bacteriana y las posibles agrupaciones de clulas que pudiera
haber. [6]
TINCION SIMPLE: La tincin simple se basa en la afinidad
del colorante por los componentes celulares. La tincin puede
ser uniforme o presentar algunos grnulos en su interior.
Utiliza un solo colorante (violeta de genciana, azul de
metileno, fucsina diluida. La tincin simple se utiliza para
destacar el microorganismo completo para que se vean las
formas y las estructuras celulares bsicas.
TINCION DIFERENCIAL: Las tinciones diferenciales son
aquellas tinciones que se usan para diferenciar de manera ms
explcita los microorganismos. Estas tinciones utilizan los
colorantes diferenciales, que se componen de ms de una
sustancia tintrea. En algunas tcnicas de coloracin, las
tinciones diferenciales ms importantes que se emplean en
bacteriologa son las de Gram y la tincin cido-resistente.
Ambas tinciones se utilizan para obtener informacin acerca
de la composicin de las capas de la pared celular de las
clulas bacterianas.
TINCION DE ESPORAS: Las esporas poseen unas cubiertas
exclusivas que las hacen resistentes a los factores ambientales
adversos. Adems, estas cubiertas hacen que las esporas
aparezcan en el microscopio ptico como estructuras
refringentes y de difcil tincin. La tincin especfica de
esporas requiere dos colorantes: 1.- Verde malaquita: capaz de
teir las esporas en caliente. 2.- Safranina: colorante de
contraste que tie las formas vegetativas. Las esporas, tras la
primera tincin, no perdern el colorante en el lavado con
agua, y s lo harn las formas vegetativas, que quedarn
teidas con el segundo colorante.
TINCION DE GRAM: Sobre la base de su reaccin a la
tincin de Gram, las bacterias pueden dividirse en dos grupos,
Gram positivas y gramnegativos (en este caso, los trminos
positivo y negativo no tiene nada que ver con carga elctrico,
sino simplemente designan dos grupos morfolgicos distintos
de bacterias). Las bacterias Gram-positivas y Gram-negativas
tien de forma distinta debido a las diferencias constitutivas en
la estructura de sus paredes celulares. La pared de la clula
bacteriana sirve para dar su tamao y forma al organismo as
como para prevenir la lisis osmtica. [5]
CULTIVO PURO
Se denomina cultivo puro (axnico) al que contiene slo un
tipo de microorganismos. Los cultivos puros se inician a partir
de colonias aisladas, de manera que todos los individuos del
mismo tengan la misma composicin gentica. Los cultivos
puros son esenciales para poder estudiar las caractersticas de
los microorganismos y para poder identificarlos con seguridad.
CULTIVO MIXTO
Cuando dos o ms especies se desarrollan simultneamente en
el medio de cultivo Un microorganismo necesita para crecer
nutrientes que le aporten energa y elementos qumicos para la
sntesis de sus constituyentes celulares. Dependiendo de la
fuente de carbono que utilizan, los microorganismos se pueden
clasificar en auttrofos si es el CO2 atmosfrico
(microorganismos que foto sintetizan) y hetertrofos si utilizan
carbono orgnico. [7]
III. ASPECTOS EXPERIMENTALES
 Figura 4. Descripcion cultivo B

Figura 1. Diagrama del procedimiento en general para las Figura 5.Descripcion cultivo c
tinciones.
IV. ANLISIS

MORFOLOGIA MACROSCOPICA

MORFOLOGIA MICROSCOPICA

Figura 2. Imagen de las cepas de los cultivos A-B-C

Figura 6. Cultivos Bacterianos de hongos

Penicillium chrysogenum
Agar papa dextrosa (PDA)
Cultivos Impuros
Tincin simple
Colorantes: Cristal violeta y safranina
Macroscpica: Su crecimiento es rpido, ondulado,
Figura 3.Descripcion del cultivo A lanosas, circular, plana, colora blanca-verde azulada y
gris verdosa.
 Microscpica: Objetivo 100x, morfologa coco y
decolora morado Gram Positiva (+).
Figura 7. Cultivos Bacterianos de levaduras
Agar papa dextrosa (PDA)
Cultivos mixtos
Tincin simple
Colorantes: Cristal violeta y safranina
Macroscpica: Colonias de color blanco, espiculado,
convexa y fusiforme.
Microscpica: Objetivo 100x, morfologa coco y
decolora morado Gram Positiva (+).
Figura 8. Cultivo bacteria salmonella
Salmonella
Agar plate count (PC)
Cultivo Puro
Tincin Diferencial
Colorantes: Cristal violeta, lugol, safranina
Macroscpica: Siembra por agotamiento, rizoide,
convexa, fusiforme y color amarillo.
Microscpica: Objetivo 100x, morfologa coco y
decolora rojo Gram Negativa (-).
ACTIVIDAD COMPLEMENTARIA
1) Explicar en terminos fisicos y
quimicos el principio de las tinciones.
Una tincin o coloracin es una tcnica auxiliar utilizada en
microscopia y microbiologa para mejorar el constraste en la
imagen vista al microscopio. Los colorantes y tinturas son
sustancias que usualmente se utilizan para resaltar estructuras
en tejidos, o la identificacin de microorganismos.
2) Definir los siguientes trminos:
*Colorantes cidos: Estn formados por sales alcalinas de
cidos colorantes o por un acido colorante. Las sustancias
reductoras lo decoloran y generalmente no recobran su
primitivo color por oxidacin.
*Colorantes bsicos: Son sales amnicas o complejos
formados por cloruro de zinc o aminas. Algunos colorantes
bsicos de elevado peso molecular, son absorbidos por el
algodn y el rayn.
*Tincion directa: Cuando el colorante interacciona
directamente con el sustrato, sin otro tratamiento previo.
*Tincion indirecta: Son las tinciones que hacen uso de
un mordiente. Un mordiente habitual es el acido tnico.
3) Explicar la relacin entre estructura de la pared celular
bacteriana y la tincin de Gram.
. El fundamento de la tincin radica en la diferente estructura
de la pared celular de ambos grupos: las bacterias Gram+
tienen una gruesa capa de peptidoglicano en la pared celular,
por otro lado las bacterias Gram-tienen una capa de
peptidoglicano menos gruesa, tras la tincioon con el prmier
colorante (colorante violeta) se efectua un lavado con etanol
que arrastrara al colorante solo en las Gram(-) mientras que en
las gram(+) el colorante queda retenido y las clulas
permanecern de color violeta intenso
V. CONCLUSIONES
1. Los diferentes procesos de tincin permiten una
mejor visibilidad de microorganismos presentes en
las colonias de los cultivos, por lo cual es
fundamental realizar de manera correcta las tinciones,
cumpliendo con los colorantes, tiempos y dems
condiciones requeridos para este tipo de observacin
microbiana, puesto que si al momento de fijar la
muestra se deja en contacto directo con el fuego los
microrganismos se queman as que no sera eficaz la
tincin, al igual con los colorantes aplicarlos en los
tiempos requeridos para que estos permiten la
visibilidad morfolgica y reconocer las caractersticas
de un microorganismo con otro.
VI. REFERENCIAS
[1] Morfologa de las colonias bacterianas, 2009, microdonto.
[En lnea]. Available:
https://microdonto.files.wordpress.com/2009/03/morfologia-
de-las-colonias-bacterianas.pdf
[2] Fundamentos y tcnicas de anlisis microbiolgicos, 2010,
Morfologa y estructura bacteriana, Laboratorio de
Diagnstico Clnico. [En lnea]. Available:
https://microbitos.files.wordpress.com/2010/06/morfologia-y-
estructura-bacteriana.pdf
[3] Morfologa microscpica de las bacterias, 2011. [En lnea].
Available: http://formamorfologica.blogspot.com.co/
[4] Roz Sanches Manuel, microbiologa, 2011. [En lnea].
Available:
https://microral.wikispaces.com/14.+Bacilos+Gram+positivos
[5] Santambrosio E, Ortega M, Garibald P, 2009, Tincin y
observacin de microorganismos, Universidad tecnologica
nacional. [En lnea]. Available:
https://www.frro.utn.edu.ar/repositorio/catedras/quimica/5_ani
o/biotecnologia/practico4.pdf
[6] J. Mateo, microbiologa, Preparacin de un frotis
bacteriano.
Para la elaboracin de esta gua, se tuvo en cuenta:
1. Normas IEEE y formatos descargados de
http://www.ieee.org/conferences_events/conferences/publishing/templates.html
2.
3.
Artculo como Informe de Investigacin modelo IEEE descargados de
http://www.usc.edu.co/ingenieria/files/MODELO_PAPER_IEEE_INGENIUM_1.pdf
http://www.itsa.edu.co/ciit2010/Formato_Articulos_IEEE.pdf
http://www.docentes.unal.edu.co/mfromerol/docs/Laboratorio_Circuitos/FormatoIEEE.do
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