Electroforesis

Regina Lpez Alvdrez

Jos Luis Sucar Pedraza
Electroforesis

Es un mtodo analtico en el que se separan biomolculas, en dependencia entre

otros factores de su carga y bajo la accin de un campo elctrico, se requiere de
una matriz porosa que las separa por tamao molecular y carga elctrica fue
empleado por primera vez por Tiselius en el ao 1937.

La electroforesis es la migracin de solutos inicos bajo la influencia de un campo

elctrico; estas partculas migran hacia el ctodo o nodo (electrodos - y +), en
dependencia de una combinacin de su carga, peso molecular y estructura
tridimensional.
Ventajas

Los mtodos electroforticos son de alta sensibilidad, poder de resolucin y

versatilidad, y sirven como mtodo de separacin de mezclas complejas de
cidos nucleicos, protenas y otras biomolculas, donde aportan un potente
criterio de pureza.

Es til adems para determinar otros parmetros como peso molecular, punto
isoelctrico (valor de pH donde la molcula no tiene carga neta) y nmero de
cadenas polipeptdicas de las protenas.
Velocidad de Migracin

La velocidad de migracin (v) de la partcula es directamente proporcional al

producto de su carga efectiva (q) y el gradiente de potencial elctrico (E) e
inversamente proporcional al coeficiente de friccin (f) relativo a la talla y forma de
la molcula, o sea, a la resistencia que le ofrece el medio.

V=qE/f
La velocidad de migracin electrofortica depende de la densidad de carga de la
molcula (relacin carga / peso), del voltaje aplicado y de la porosidad del gel de
electroforesis.
pH y Punto Isoelctrico

La carga neta de la partcula est dada por el pH del medio y puede ser
modificada por la interaccin con pequeas molculas de iones u otras
macromolculas.

De lo anterior se deduce que el pH influye sobre la velocidad de migracin de las

molculas. En el punto isoelctrico de la biomolcula, pH al cual su carga neta es
0, esta no migra.

Por debajo del punto isoelctrico tiene carga neta positiva y migra hacia el ctodo,
y por encima del punto isoelctrico tienen carga neta negativa y migra hacia el
nodo.
Poliacrilamida

Los geles de poliacrilamida se forman por la polimerizacin vinlica del monmero

acrilamida CH2 =CH-CO-NH2 y del monmero entrecruzador N,
N-metilen-bis-acrilamida CH2 = CH- CO - NH - CH2 - NH - CO - CH = CH2 . La
polimerizacin se inicia con la formacin de radicales libres del monmero, que se
producen por radicales libres de oxgeno, por causa de la accin de iones
persulfato.1 Las aminas terciarias como el N, N, N, N-tetrametilen-diamina
(TEMED) se emplean como catalizadores de esta reaccin, porque causan la
formacin de radicales libres del persulfato.
Poliacrilamida

La electroforesis en geles de poliacrilamida, aunque tiene una mayor limitacin en

cuanto al tamao de los fragmentos que podemos separar (5-600 pb), posee un
poder de resolucin mucho mayor, permitiendo la separacin de molculas que
difieren en un slo par de bases.

Los geles de poliacrilamida se corren de forma vertical y tienen la desventaja de

ser ms complicados en su elaboracin y manipulacin.
Agarosa
La electroforesis en geles de agarosa es el mtodo estndar para separar y
purificar fragmentos de ADN cuando no requerimos un alto poder de resolucin.

Los geles de agarosa tienen un poder de resolucin mucho menor que los de
poliacrilamida, porque no permiten separar molculas de ADN que difieren en
tamao menos de unas 50 pb. Sin embargo, el rango de tamaos que pueden
separarse es mucho mayor en un gel de agarosa (molculas desde 50 pb hasta
unas 40 kb) dependiendo de la concentracin del mismo; cuanto ms baja es la
concentracin de agarosa mayor es el tamao de las molculas que pueden
separarse, y viceversa.

Ideales para analizar el producto de digestiones con enzimas de restriccin.

Tcnica

Una corriente elctrica se aplica a travs del gel, de esta manera un extremo del
gel tiene una carga positiva y el otro extremo tiene una carga negativa.

Las molculas migran hacia la carga opuesta.

Los fragmentos ms pequeos migrarn ms rpido que los de mayor tamao,

por lo que las molculas sern separadas por tamaos.

Se utiliza SDS que acta rompiendo enlaces no covalentes en las protenas,

desnaturalizndolas, provocando que estas molculas proteicas pierdan su
conformacin nativa. Esto ocurre porque el SDS se une a las zonas apolares del
polipptido
El movimiento electrofortico se enfoca en el potencial elctrico, en la superficie
de la macromolcula, y la relacin de ese potencial con la velocidad del objeto en
el campo elctrico.

El potencial de la superficie es causado por la relacin de la superficie de la

biomolcula con el medio que la rodea.
La separacin de carga entre la capa de la biomolcula y la del medio alrededor
de sta, resulta en una interfase entre las dos superficies. Esta separacin resulta
en una densidad de carga en cada capa y en un potencial elctrico entre las
capas.

El campo elctrico acta sobre la densidad de carga, de esta manera las

molculas se movern en direcciones opuestas por las cargas diferentes.
Lectura de Gel

El uso de colorantes, fluorescentes o etiquetas radiactivas permite que el DNA

pueda ser visto en el gel, despus de haberse separado, se ven como bandas en
el gel.

Un marcador de DNA con fragmentos de longitudes conocidas se corre a travs

del gel.
Gel de Electroforesis
Referencias

Fierro, F. F. (s.f.). Electroforesis de ADN. Recuperado el 2 de ocutbre de 2016, de

INECC: http://www2.inecc.gob.mx/publicaciones/libros/710/electroforesis.pdf
Garca Prez, D. M. (s.f.). Electroforesis en geles de poliacrilamida: fundamentos,
actualidad e importancia. Recuperado el 1 de octubre de 2016, de Laboratorios
Beter: http://bvs.sld.cu/revistas/uni/vol1_2_00/uni07200.pdf
UNR Facultad de Ciencias Bioqumicas y Farmacuticas. (s.f.).
Bioqumica-Electroforesis. Recuperado el 30 de septiembre de 2016, de UNR
Facultad de Ciencias Bioqumicas y Farmacuticas:
http://www2.inecc.gob.mx/publicaciones/libros/710/electroforesis.pdf