Microscopa

Tcnicas histolgicas
MICROSCOPIO PTICO (MO) DE CAMPO CLARO
 LMITE DE RESOLUCIN
AN = apertura numrica = medida de la capacidad del
microscopio de agrupar las refracciones de la luz producidas por los
detalles del objeto.

AN = h x sen

= ndice de refraccin del

medio que separa el cubre-
objetos de la lente objetivo.

= ngulo de semiapertura =
mitad del ngulo limitado por
los rayos ms perifricos que
entran en el objetivo.
MICROSCOPIO PTICO (MO) DE CAMPO CLARO

480 X
 MICROSCOPIO DE CAMPO OSCURO

MO DE CAMPO CLARO MO DE CAMPO OSCURO

MICROSCOPIO DE CAMPO OSCURO
MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASE

anillos pticos en objetivo

y condensador

utiliza las diferencias en

el ndice de refraccin
producidas por la luz que
atraviesa el objeto

= l = resolucin

Utilidad = observacin de
clulas y tejidos vivos
 MICROSCOPIO DE INTERFERENCIA

Utiliza diferencias de fase producidas por la luz que

atraviesa el objeto.
Se pueden obtener datos cuantitativos.
 MICROSCOPIO DE LUZ UV

Absorcin de luz
UV por las molculas
de la muestra

Se registra en
placa fotogrfica

< l > resolucin

Utilidad = cidos
nucleicos y algunos
aminocidos
MICROSCOPIO DE LUZ UV
 MICROSCOPIO DE LUZ POLARIZADA

Filtro polarizador
entre luz y
muestra

Filtro analizador
entre objetivo y
observador

Sustancias que
rotan el plano de
luz polarizada
producen
birrefringencia
MICROSCOPIO DE LUZ POLARIZADA
MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA

UV

LUZ MONO-
CROMTICA
MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA

1400 X

Molculas de actina + Ac anti-actina con fluorescena

MICROSCOPIO CONFOCAL

Orificio puntiforme que est en

conjuncin con el punto focal de
la lente
 MICROSCOPIO MICROSCOPIO
DE CONFOCAL
FLUORESCENCIA

Enfoca el objetivo Un rayo laser barre

en un solo plano de todos los puntos del
corte a la vez. plano focal
MICROSCOPIO ELECTRNICO DE TRANSMISIN (MET)

Haz de electrones
l = 0.005 nm

Bobinas
electromagnticas

Placa fotogrfica
MICROSCOPIO ELECTRNICO DE TRANSMISIN (MET)
MICROSCOPIO ELECTRNICO DE TRANSMISIN (MET)

Mitocondria 200000 X

Clulas absortivas del epitelio

cilndrico simple del intestino
delgado
MICROSCOPIO ELECTRNICO DE BARRIDO (MEB)

Los electrones no atraviesan el objeto.

El lmite de resolucin es 2,5 nm.
La imagen es tridimensional.
 MICROSCOPIO ELECTRNICO DE BARRIDO (MEB)

Bacteria

Clulas absortivas del epitelio

cilndrico simple del intestino delgado
 MICROSCOPIO DE FUERZA ATMICA (MFA)

No ptico.
Sonda puntiaguda con el
extremo del tamao de tomo.
Puede estudiar tejidos vivos.
Lmite de resolucin = 50 pm
MICROSCOPIO DE FUERZA ATMICA (MFA)

ATP sintetasas ADN

CORTE POR MICRTOMO
MTODOS HISTOQUMICOS

Acidofilia
colorantes cidos o aninicos
forman enlaces electrostticos
con grupos tisulares de carga
positiva

Basofilia
colorantes bsicos o catinicos
forman enlaces electrostticos
con grupos tisulares de carga
negativa
 MTODOS HISTOQUMICOS

Metacromasia colorantes bsicos: forma monomrica

azul y forma polimrica roja.
 MTODOS BASADOS EN LA REACCIN DE
SCHIFF PARA ALDEHIDOS

Reactivo de Schiff leucofucsina incolora que forma un producto

estable rojo con aldehidos

cido peridico-Schiff (PAS) Feulgen

macromolculas ricas en H de C ADN
MTODO HISTOQUMICO PARA LPIDOS

Fijacin con formalina

Corte por congelacin
Coloracin con Sudn en alcohol diludo
Inclusin en medio acuoso
 MTODO HISTOQUMICO PARA ENZIMAS

Especificidad de
sustrato

Corte por congelacin

de tejido no fijado

Producto de reaccin
visible que seala la
localizacin de la
enzima
 MTODOS INMUNOHISTOQUMICOS

Directo

Indirecto
INMUNOFLUORESCENCIA DIRECTA E
INDIRECTA

Ac 1 Ac 2
fluoresc.

Ag
 HIBRIDACIN IN SITU

Se utiliza una sonda formada por un cido nucleico monocatenario con una
secuencia de bases conocida complementaria de la secuencia que se quiere
demostrar

Permite identificar secuencias de ADN correspondientes a determinados

genes y la expresin de genes por demostracin de secuencias de ARNm.
 RADIOAUTOGRAFA

Se inyecta una molcula marcada

con un istopo radioactivo

Las molculas marcadas se

integran a macromolculas

Despus del montaje de los

cortes se agrega una emulsin
fotogrfica

Permite saber donde se sintetiza

un producto celular y sus
desplazamientos dentro de la
clula y al salir de la misma
PROCESAMIENTO DE MUESTRAS PARA ME