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UNIVERSIDAD NACIONAL DANIEL A.

CARRION
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA DE FORMACION PROFESIONAL DE
ENFERMERIA

CARPETA DE TRABAJO:
CULTIVO DE BACTERIAS Y ANTIBIOGRAMAS

DOCENTE:
HUARINGA REVILLA, Rodolfo
ALUMNO:
CAMPOS MEZA, Yover Brayan
CERRO DE PASCO
2016

INDICE

INTRODUCCION..03
FUNDAMENTO.04
TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO...05
MATERIALES....06
METODO06
REALIZACION DE SIEMBRA..07
CARACTERISTICAS DE LA COLONIAS08
ANTIBIOGRAMA..09
MEDICAMENTOS.11
RESULTADOS...11
TRATAMIENTOS..12
OBJETIVOS13
CONCLUSIONES...14
BIBLIOGRAFIAS...15

INTRODUCCION

Las bacterias se pueden cultivar en el laboratorio gracias a los

denominados cultivos de bacterias. Un cultivo de bacterias es una
tcnica que aprovecha la capacidad de divisin celular que tienen las
bacterias para obtener gran cantidad de bacterias a partir de unas
pocas. Para realizar un cultivo de bacterias es necesario preparar un
medio de cultivo. Un medio de cultivo es una mezcla de nutrientes,
por ejemplo, de azcares, protenas, sales, vitaminas, agua, etc.
Los microorganismos colonizan todos los ambientes sobre la tierra.
>80% de la historia de la vida fue bacteriana Cada ser humano pose
ms clulas bacterianas que clulas humanas Los microorganismos
juegan un papel clave en la bisfera Los microorganismos patgenos
globalmente son la causa ms importante de enfermedad y muerte
en el ser humano.
Cuando existen buenas condiciones de crecimiento, una bacteria
crece ligeramente en tamao o en longitud. Una nueva pared celular
se forma por el centro formando dos clulas hijas, conteniendo cada
una, el mismo material gentico que la clula madre. Si el ambiente
es ptimo, las dos clulas hijas pueden dividirse en cuatro en 20
minutos.
Fase LAG: El crecimiento es lento al principio, mientras las bacterias
se adaptan a los nutrientes que estn en su nuevo ambiente.
Fase LOG: Una vez la maquinaria metablica se ha disparado, las
bacterias se multiplican exponencialmente, doblando su nmero cada
pocos minutos.
Fase ESTACIONARIA: Al haber ms y ms m.o. compitiendo por el
alimento y los nutrientes, el crecimiento acelerado se detiene y el
nmero de bacterias se estabiliza.
Fase de MUERTE: Se forman productos txicos de desecho, la
comida se agota y las bacterias comienzan a morir.

FUNDAMENTO
Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de
crecimiento y otros componentes que crean las condiciones
necesarias para el desarrollo de los microorganismos. Puesto que la
diversidad metablica de los microorganismos es enorme, la variedad
de medios de cultivo es tambin muy grande. La mayora de los
medios de cultivo se comercializan en forma de liofilizados que es
preciso rehidratar. La preparacin de un medio de cultivo se reduce
en general a pesar la cantidad de medio y re disolverla en agua
destilada (libre de inhibidores del crecimiento) siguiendo las
instrucciones del fabricante. Las sustancias termolbiles se esterilizan
por filtracin y se aaden al resto de los componentes previamente
esterilizados en la autoclave. Los constituyentes habituales de los
medios de cultivo son:
1. Agar. Se utiliza como agente solidificante. Es un polisacrido que se
obtiene de ciertas algas marinas. Las bacterias no son capaces de
degradarlo.
2. Azcares. Son una fuente de carbono para los microorganismos.
Los ms empleados son la glucosa, la lactosa y la sacarosa.
3. Extractos. Son preparados de ciertos rganos o tejidos animales o
vegetales obtenidos con agua y calor. Ej.: extracto de carne, de
levadura, de malta, etc.
4. Peptonas. Son protenas hidrolizadas, se obtienen por digestin
qumica o enzimtica de protenas animales o vegetales.
5. Fluidos corporales. Sangre completa, sangre desfibrinada, plasma o
suero sanguneo son aadidos a los medios empleados para el cultivo
de algunos microorganismos patgenos.
6. Sistemas amortiguadores. Son sales que se aaden al medio para
mantener el pH dentro del rango ptimo del crecimiento bacteriano.
Ej.: fosfatos bisdicos o bipotsicos.
7. Indicadores de pH. Son indicadores cido-base que se aaden para
detectar cambios de pH en el medio.
8. Agentes reductores. Sustancias que se aaden al medio para crear
las condiciones que permitan el desarrollo de los grmenes
microaerfilos o anaerobios. Ej.: cistena y tioglicolato.
9. Agentes selectivos. Sustancias como el cristal violeta, las sales
biliares etc. que a determinadas concentraciones en el medio actan
como agentes selectivos frente a determinados microorganismos.

TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO

Por su CONSISTENCIA:
a) Slidos. Son aquellos que contienen un agente solidificante entre
sus componentes, normalmente agar. Se preparan en placas de Petri
o en tubos en slant (tubos con la superficie del medio inclinada).
b) Lquidos. Se denominan caldos y se preparan en tubos o
Erlenmeyer.
Por su COMPOSICIN:
a) Medios generales. Permiten el desarrollo de una gran variedad
de microorganismos.
b) Medios de enriquecimiento. Favorecen el crecimiento de un
determinado grupo de microorganismos, sin llegar a inhibir
totalmente el crecimiento del resto.
c) Medios selectivos. Permiten el crecimiento de un tipo de
microorganismos determinado, inhibiendo el desarrollo de los dems.
d) Medios diferenciales. Son aquellos en los que se pone de relieve
alguna propiedad que un determinado tipo de microorganismos
posee.
SIEMBRA DE MICROORGANISMOS
En trminos microbiolgicos se entiende por SIEMBRA el proceso
mediante el cual se lleva una porcin de una poblacin de
microorganismos (inculo) de un cultivo bacteriano a un medio
nutritivo para su crecimiento.
PARA UNA CORRECTA REALIZACIN DE LA SIEMBRA SON
NECESARIAS CIERTAS CONDICIONES:
1) Que se lleve a cabo con instrumentos estriles sobre medios de
cultivo estriles. Para estudiar una bacteria determinada, es necesario
destruir todos aquellos microorganismos que pudieran encontrarse en
el medio y en los instrumentos de trabajo. Esto se consigue con la
ESTERILIZACION, proceso que consiste en conseguir que todos los
microorganismos presentes mueran desde el punto de vista
microbiolgico.
La esterilizacin

Se utilizan dos tipos principales de esterilizacin: Por MTODOS

FSICOS (calor, filtracin, radiaciones). Por MTODOS QUMICOS
(empleo de soluciones qumicas).
Los medios de cultivo se esterilizan en el AUTOCLAVE, el cual hace
uso del calor hmedo.
La autoclave es un aparato que permite elevar la presin y la
temperatura con lo que se consigue un aumento en la temperatura de
ebullicin del agua. Normalmente, se lleva la presin a 1 atmsfera
(por encima de la ambiental) lo que corresponde a una temperatura
interior de 126C, mantenindolo en estas condiciones durante 20
minutos.
Todo el material de vidrio (pipetas, tubos, varillas. etc.) se esteriliza
con calor seco, siendo el "horno Pasteur" el aparato ms empleado
(se somete a temperaturas de 140-180 C durante 2h-3h). En el caso
de objetos metlicos, como el asa de siembra, que se esterilizan en el
momento de su utilizacin, se mantienen en la llama hasta que se
pongan al rojo, teniendo la precaucin de enfriarlos antes de su uso.
2) Que el inculo no se contamine, modifique o destruya:
Normalmente se emplea el calor directo, flameando las bocas de los
tubos de ensayo, matraces, pipeta, etc. antes y despus de su
utilizacin, a pesar de estar esterilizados previamente.
3) Que las condiciones ambientales durante el proceso sean lo ms
prximas a la esterilidad para evitar contaminaciones durante el
manejo del instrumental y de los medios de cultivo.
Esto se resuelve con el uso de cabinas estriles (con flujo de aire y luz
ultravioleta). Cuando no se dispone de ellas, se utiliza un mechero
Bunsen que, debido a que fuerza la circulacin del aire en sentido
vertical y hacia arriba, es capaz de crear un ambiente semi estril en
la zona inmediata alrededor y debajo de la llama, de forma que los
riesgos de contaminacin disminuyen considerablemente.

MATERIALES
Material de la Prctica:

Mechero bunsen o similar

Asa de siembra Tubos con cultivos bacterianos crecidos:
Escherichia coli, Salmonella enteritidis, Staphylococcus aureus.

Material a preparar por el alumno:

1 Tubo con medio lquido estril (caldo comn): Luria Bertani
(LB)
2 Tubos con medio slido estril (agar inclinado): TSI Placas:
4 placas LB agar;

1 placa agar McConkey;

1 placa agar Sabouraud.

METODO
Preparacin de medio slido en tubo (slant).
1. Pesar el medio que contenga agar y rehidratar con agua
destilada en un matraz.
2. Fundir el medio en un horno microondas o en una placa
caliente. El medio debe hervir hasta que se vuelva
transparente.
3. Distribuir rpidamente el medio en los tubos antes de que
comience a solidificar. Para ello se emplear una pipeta y los
tubos no se llenarn ms de un tercio de su volumen.
4. Auto clavar.
5. Sacar de la autoclave e inclinar los tubos sobre la poyata para
obtener tubos con medio en slant.

REALIZACIN DE LA SIEMBRA
1.- Marcar el material con el nombre de la pareja y grupo.
2.- Realizar la siembra, como sigue:

a) Siembra en medio lquido:

Se introduce el asa de siembra en el tubo con cultivo crecido y se
toma un inculo que se lleva al tubo estril con medio lquido
(agitndola en el seno del medio), tomando las precauciones
mencionadas anteriormente.
b) Siembra en placa:

Dividida la placa en tres partes, sembrar en cada tercio el inculo

tomado de los cultivos crecidos. Se introduce el asa de siembra en
el tubo con cultivo crecido y se toma una gota de inculo que se
extiende sobre el agar de la placa deslizando el asa suavemente
por su superficie en zigzag.
c) Siembra en agar inclinado:
Se introduce el asa de siembra en el tubo con cultivo crecido y se
toma un inculo que se extiende sobre el agar inclinado deslizando
el asa suavemente por su superficie en zigzag. En el caso del
medio TSI, la siembra se deber realizar tanto en superficie
(aerobiosis) como en la profundidad del agar (anaerobiosis).

INCUBACIN
De los medios sembrados a 37 C hasta que haya habido
crecimiento bacteriano.
OBSERVACIN DE LOS RESULTADOS:
En primer lugar, observar a simple vista diversas caractersticas
como el color y el borde de las colonias crecidas en el agar as
como el olor y la turbidez del medio ya que en algunos casos
suelen ser tpicos de un determinado tipo de microorganismo y
pueden servir de ayuda a la hora de su identificacin. El siguiente
paso sera la observacin al microscopio, que ser objeto de otra
prctica.
CARACTERISTICAS DE COLONIAS DE BACTERIAS EN PLACAS
DE AGAR
1 TAMAO: Son pequeas como la punta de alfiler; 5mm a 6mm
2 BORDE O MARGEN: Borde circular y liso; irregular, filamentosas,
risoidal.
3 ELEVACION: Planos. Convexa, convexa planos.
4 COLOR O PIGMENTACION: Plido, pardo, cremoso, rosado, etc.
5 OLOR: Ptrido, aromtico, dulceinos, impermisible.

AGAR McCONKEY
1 HECES
2 ORINA
3 ESPUTO

4 AGUA

HECES

ORINA

ESPUTO

AGUA

TAMAO

5mm

3mm

3mm

BORDE

Irregula
r
Convex
o
Rosado
ptrido

Irregula
r
c.
plano
Guindo
ptrido

Circular
Plano

Milimetra
do
Circular
regular
Plana

S.
FARINGEA
Punto de
alfiler
Circular
regular
Plano

Pardo
impermisi
ble

Gris
impermisi
ble

Pardo
impermisi
ble

ELEVACI
ON
COLOR
OLOR

ANTIBIOGRAMA
El objetivo de esta prctica es estudiar qu son los antibiticos y cmo se
realiza la valoracin de la actividad antimicrobiana de un compuesto
qumico (antibitico) mediante la tcnica de Kirby-Bauer.

ACCIN ANTIMICROBIANA
Concentracin Mnima Antimicrobiana (CMA):
La concentracin ms baja de un antimicrobiano capaz de producir
alteraciones estructurales
Concentracin Mnima Inhibitoria (CMI):
La concentracin ms baja de un antimicrobiano capaz de detener el
crecimiento
Concentracin Mnima Bactericida (CMB):
La concentracin ms baja de un antimicrobiano capaz de destruir
CATEGORAS CLNICAS

Sensible (S)

Intermedio (I)

Resistente (R)

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CMI----Concentracin de antimicrobiano alcanzable en el foco

infeccioso

ANTIBIOGRAMA: TIPOS

Cualitativo: difusin con discos (S, I, R)

Cuantitativo (CMI en mg/L)

-

Dilucin en agar

Dilucin en caldo

psilon-test

ANTIBIOGRAMA: DIFUSIN CON DISCOS

ANTIBIOGRAMA: DIFUSIN CON DISCOS

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ASOCIACIONES
ANTIMICROBIANOS:
INDICACIONES

DE

En tratamiento emprico de
infecciones graves

En
algunas
infecciones
mixtas. En las que una droga
sola no es efectiva frente a
todos los grmenes

Para prevenir la aparicin de

resistencias

Para obtener un efecto sinrgico. Aumentar la eficacia

Para poder reducir dosis de antimicrobiano txico

ASOCIACIONES DE ANTIMICROBIANOS: DESVENTAJAS

Falsa sensacin de seguridad

Mayor probabilidad de efectos secundarios

Aparicin de R mltiples

Mayor riesgo de sobreinfecciones hospitalarias

FACTORES A TENER EN CUENTA ANTES DE ELEGIR EL TT

ANTIMICROBIANO

Clnica sugestiva de infeccin bacteriana

Localizacin de la infeccin

Posible etiologa

Sensibilidad ms probable del patgeno

Experiencia clnica en el tratamiento

Factores subyacentes del paciente

Riesgos potenciales del tratamiento

Dosis y vas de administracin/Coste

MEDICAMENTOS DEL ANTIOBIOGRAMA

Cefazolina (CZ 30)

Nitrofurantoina (F 300)
Ceftacidima (CAS 30)
Amicaina (AN 30)

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Gentamizina (GM 10)

Sulfametaxazol (SXT)
cido Noladisico (NA 30)
Ciprofoxacina (CTP 5)
cido clavulnico (AMC)

RESULTADOS PARA EL ANTIBIOGRAMA

Cefazolina (CZ 30)

Nitrofurantoina (F 300)
Ceftacidima (CAS 30)
Amicaina (AN 30)
Gentamizina (GM 10)
Sulfametaxazol (SXT)
cido Noladisico (NA 30)
Ciprofoxacina (CTP 5)
cido clavulnico (AMC)

13 milmetros ------ R
18 milmetros ------ S
25 milmetros ------ R
18 milmetros ------ R
12 milmetros ------R
23 milmetros-------R
26 milmetros ------R
02 milmetros -------R
0 milmetros --------R

TRATAMIENTO PARA EL ANTIBIOGRAMA

Nitrofurantoina (F 300): Cada seis horas por 5 das.
DOSIS Y VA DE ADMINISTRACIN:
Oral.

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NITROFURANTONA se debe administrar junto con los alimentos para

mejorar su absorcin, y en ciertos pacientes, incrementar su
tolerancia.
Adultos: 50 a 100 mg cuatro veces al da, la dosis mnima se
recomienda en aquellos pacientes con infecciones de vas urinarias no
complicadas.
Nios: 5 a 7 mg/kg de peso por 24 horas, dividiendo la dosis total en
4 tomas (el frmaco est contraindicado en nios recin nacidos).
El tratamiento debe administrarse durante un lapso de una semana y,
de ser posible, hasta 3 das despus de que se haya obtenido una
muestra de orina estril.

OBJETIVOS

Determinar la sensibilidad a diversos antibiticos de un

determinado microorganismo
Comprender el concepto de antibitico y su especificidad de
accin sobre determinadas bacterias.
Conocer el concepto de cepa sensible y resistente.
Entender el concepto de halo de inhibicin.
Ser consciente de la importancia de la higiene y el cuidado en la
manipulacin de materiales biolgicos.
Comprender la importancia de la eliminacin de los residuos
orgnicos
Conocer el instrumental de laboratorio necesario en
microbiologa y los procedimientos para su utilizacin

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CONCLUSIONES
Un antibitico ha sido definido como una sustancia qumica producida
por un microorganismo capaz de inhibir el desarrollo de otros
microorganismos. Los antibiticos modificados por manipulaciones
qumicas an se consideran como tales. Un agente antimicrobiano es
activo contra los microorganismos y puede ser producido en forma
natural por microorganismos o sintticamente en el laboratorio. El
trmino agente quimioterpico ha sido empleado para referirse a
agentes antimicrobianos sintticos o no y tambin se refiere a
agentes
que
actan
contra
clulas
humanas
como
inmunomoduladores y drogas antitumorales. Los trminos agente
antiviral y agente antimictico son trminos ms especficos,
incluidos dentro de la categora ms general de agentes
antimicrobianos.
El aislamiento de un agente infeccioso a partir de un paciente no es
con frecuencia suficiente para establecer la terapia adecuada.
Muchas bacterias y algunos hongos presentan resistencia a los
agentes antimicrobianos y algunos virus han desarrollado resistencia
a los agentes antivirales ms actuales. Los patrones de resistencia

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cambian en forma constante y no importa lo rpidamente que se

introduzcan los nuevos agentes teraputicos porque los microbios
parecen siempre dispuestos a superarlos. Incluso entre los
neumococos, que por dcadas han permanecido invariablemente
susceptibles a niveles de penicilina G menores de 0.04 U/ml, han
aparecido cepas que han desarrollado resistencia a esta droga.
Ya que no se puede predecir la susceptibilidad de las bacterias,
hongos y virus a los agentes antimicrobianos, con frecuencia es
necesario estudiar la sensibilidad individual de cada patgeno a estas
drogas, pudindose elegir entonces el agente apropiado (el ms
activo contra el patgeno, el menos txico para el husped, con las
caractersticas farmacolgicas apropiadas y el ms econmico), que
proporciona mayores posibilidades de una evolucin favorable.
Por supuesto, el resultado teraputico final depende de muchas otras
variables. La enfermedad subyacente y condicin clnica del husped,
las propiedades farmacolgicas del agente antimicrobiano, la
administracin de otros agentes teraputicos adicionales y otros
factores ejercern una fuerte influencia sobre el desenlace final. Los
microbilogos slo pueden recomendar agentes teraputicos sobre la
base de sus actividades in vitro. El clnico debe tomar la decisin final,
teniendo en cuenta su conocimiento sobre todos los factores
pertinentes.

BIBLIOGRAFIAS
http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioAntibioticos.h
tm
http://www.unavarra.es/genmic/microgral/Tema%2002.%20Cultivo%20de%20microorganismos.pdf
http://www.apcontinuada.com/es/el-antibioigramainterpretacion-del-antibiograma/articulo/80000504/
http://www.medicinajoven.com/2010/05/como-cultivarbacterias-de-forma-casera.html
http://salud.ccm.net/faq/5924-antibiograma

16

https://prezi.com/dloqy3ax82gq/siembra-y-cultivo-de-bacteriascon-separacion-de-colonias/
http://es.slideshare.net/andres877/antibiogramas