Potencial fitotxico de Miers Drimys brasiliensis para su uso en el control de malezas

Potencial fitotxico de Drimys brasiliensis Miers para o controle de Plantas daninhas

Simoni Anese 1 * , Sonia Cristina Juliano Gualtieri 1 , Patrcia Umeda Grisi 1 , Luciana de Jess Jatob 1 ,
Marcos Arduin 1
1

Departamento de Botnica de la Universidad Federal de So Carlos, Rod. Washington Luiz, Km 235, Cx.
Postal 676, 13565-905, Sao Carlos, Sao Paulo, Brasil.
ABSTRACTO
Este estudio tiene como objetivo evaluar el potencial de fitotoxicidad de hojas y races extractos de Drimys
brasiliensis en la germinacin y crecimiento de plntulas de Panicum maximum y Euphorbia heterophylla y
su influencia en el tamao celular metaxilema en las races de las plntulas de esta ltima especie. Los
extractos de hojas y races se fraccionaron mediante cromatografa de particin, y se evaluaron las
fracciones de hexano y acetato de etilo obtenidos de cada rgano a diferentes concentraciones para la
actividad fitotxica en varios bioensayos. En la planta de semillero ensayos de crecimiento, se compararon
los efectos de estas fracciones con el oxifluorfen herbicida. La fraccin de hexano de los extractos de raz
mostr un potencial inhibidor mayor sobre la germinacin y el crecimiento de malas hierbas y redujo el
tamao medio de las clulas de E. metaxilema races heterophylla en ms de un 50% Los efectos inhibidores
de la fraccin de hexano raz en crecimiento de las plntulas fue similar al herbicida, lo que indica que D.
brasiliensis es una posible forma alternativa de control para las especies de malas hierbas examinados.
Palabras clave: alelopata; inhibicin; germinacin; crecimiento temprano
RESUMO
O estudo do objetivo m foi Avaliar o Efeito fitotxico de fraes hacer extrato de folhas e razes de Drimys
brasiliensis sobre a germinao eo Crescimento de plntulas de Panicum maximum e Euphorbia
heterophylla, e sua Influencia Sobre Clulas como hacen metaxilema da ltima especie. Os Extratos de
folhas e Razes foram fracionados por Cromatografa de partio correo como correo fraes hexnica
acetato de etila obtidas de Cada rgo foram avaliadas nos bioensaios, em Diferentes concentraes. No se
teste de Crescimento, comparou-se o Efeito das solues das fraes com o herbicida oxifluorfeno. Un
frao hexnica das Razes apresentou maior potencial para inibir un germinao e Crescimento das espcies
infestantes e ocasionou Reduo em mais de 50% no das Tamao de Clulas hacen metaxilema de E.
heterophylla. Como inibies sin inicial Crescimento, decorrentes da aplicao da frao hexnica das
razes, foram SIMILARES ao Efeito Produzido pelo herbicida comercial, indicando una Eficincia de D.
brasiliensis para o controle das espcies infestantes estudadas.
Keywords: alelopatia; inibio; germinao; inicial Crescimento
Introduccin
Las plantas son capaces de producir metabolitos secundarios que afectan a la germinacin y el crecimiento
de otras plantas; esta interaccin ha sido definida como la alelopata ( Inderjit et al., 2011 ; . Weir et al, 2004 ). relaciones
alelopticos pueden producirse de una manera positiva o negativa mediante la produccin de compuestos
qumicos conocidos como aleloqumicos. Aleloqumicos se liberan en el medio ambiente por diferentes
mecanismos, tales como la volatilizacin, la lixiviacin de la hoja o la exudacin de la raz ( WEIR et al., 2004 ).
Las hojas y las races constituyen la principal fuente de aleloqumicos ( Wu et al., 2009 ); sin embargo, debido a la
produccin especfica de metabolitos que son exudados directamente en el medio ambiente, muchos
compuestos con actividades biolgicas relevantes se han aislado casi exclusivamente de las races de estas
plantas ( OLIVEROS-BASTIDAS et al., 2009 ).

Las malas hierbas son adaptables a diferentes hbitats y, a menudo compiten con los cultivos mediante el
aprovechamiento de las condiciones favorables que se producen en los sistemas agrcolas. La aplicacin
indiscriminada de herbicidas sintticos ha contribuido a un aumento de la resistencia a los herbicidas en las
malezas, ha dado lugar a una degradacin gradual de la calidad del suelo y el medio ambiente circundante y
presenta un peligro para la salud humana ( VERDEGUER et al., 2011 ). metabolitos secundarios derivados de las
plantas pueden servir como una herramienta prometedora para el medio ambiente de manejo de malezas.
Aleloqumicos tienen baja o ninguna toxicidad para los animales e insectos beneficiosos y poseen una serie
de actividades con diferentes y diversos sitios de accin. Adems, las tasas de degradacin y aleloqumicos
de exposiciones ms rpidas contienen un menor nmero de sustituyentes halgeno que los herbicidas
sintticos ( FAROOQ et al., 2011 ).
Muchos metabolitos secundarios derivados de plantas, tales como drimanes sesquiterpenos, estn presentes
en especies de los Drimys gnero y exhiben una amplia variedad de actividades biolgicas, incluyendo
leishmanicida ( CORRA et al., 2011 ), herbicida y actividades insecticidas ( ZAPATA et al., 2011 ; 2009 ). Adems, los
metabolitos secundarios pueden inducir la citotoxicidad y afectar a las actividades reguladoras del
crecimiento vegetal ( JANSEN; Groot, 2004 ). De este modo, las especies de Drimys son prometedores en la
bsqueda de fitoqumicos capaces de actuar como herbicidas naturales. Drimys brasiliensis Miers,
comnmente llamado "casca d'anta", pertenece a la familia Winteraceae y se encuentra en el Bosque
Atlntico y bosques de galera que se extiendan dentro el dominio Cerrado ( EHRENDORFER et al., 1979 ). Estudios
anteriores han demostrado que contiene fungicida ( Malheiros et al., 2005 ) y las propiedades anti-inflamatorias ( LAGO
et al., 2010
). Sin embargo, pocos estudios han examinado su potencial de fitotoxicidad, en particular con
respecto a su actividad contra las malas hierbas agrcolas.
Panicum maximum Jacq. (Hierba de Guinea) es una hierba aliengena conocida como una de las malezas
ms importantes en las reas de caa de azcar y plantaciones forestales de Brasil. Su interferencia con la
productividad agrcola es principalmente debido a sus patrones de crecimiento altamente agresivos, su
intensa capacidad de produccin y la longevidad de sus semillas ( Costa et al., 2002 ). Del mismo modo, Euphorbia
heterophylla L. (Flor de pascua salvaje) es una maleza que afecta negativamente a la productividad de los
sistemas agrcolas, en particular los cultivos de soja. Adems, se considera difcil de controlar y muestra la
resistencia a varios mecanismos de accin herbicida ( Trezzi et al., 2009 ).
En este contexto, el objetivo de este estudio es evaluar los efectos fitotxicos de los extractos crudos
fraccionadas de D. brasiliensis races y hojas sobre la germinacin y crecimiento inicial de E. heterophylla y
P. mximo, as como su influencia en el tamao de celda metaxilema de E. heterophylla races.
Material y mtodo
Preparacin de las fracciones qumicas
Las hojas y las races de D. brasiliensis fueron recogidos en septiembre de 2011 de la zona de la sabana en
el campus de la Universidad de So Carlos Federal (UFSCar) de So Carlos-SP (22 2 'S y 47 52' W),
Brasil. Despus de la recogida, las hojas y las races se secaron a 40 C durante 72 horas y se muele en un
polvo con un molino industrial.
Para D. brasiliensis extraccin fitoqumico y los estudios iniciales de cromatografa, 50 g de la hoja y el
polvo de la raz, por separado, se extrajeron con diclorometano (DCM) / metanol (MeOH) (1: 1) (5 x 200
ml). Los extractos resultantes se filtraron, se reunieron y se concentraron en un evaporador rotatorio a
presin reducida vaco. Cada extracto crudo concentrado se suspendi en MeOH% 95 (200 ml) y se reparti
con n-hexano (3 x 200 ml), lo que resulta tanto en metanol y hexano (2,38 g) fracciones. La fraccin de
metanol se concentr, se resuspendi en agua destilada (200 ml) y se reparti con acetato de etilo (3 x 200
ml), obtenindose dos fracciones: una mezcla de acetato de etilo (AcOEt) (2,88 g) fraccin y una solucin
acuosa (6,32 g) la fraccin ( RANGEL et al., 2001 ). Al final, las fracciones acuosas de ambos rganos se desecharon,
y se evaporaron, se pesaron y se sometieron a bioensayos de fitotoxicidad de las fracciones de hexano y
acetato de etilo.

En cada bioensayo, se solubilizaron 40 mg de cada extracto de hoja o raz (hexano y AcOEt fracciones) en
40 ml de solucin tampn (10 mM 2- [N-morfolino] etanosulfnico (MES) y NaOH 1 M, pH 6) y DMSO
(sulfxido de dimetilo, 5 l ml -1), resultando en una concentracin inicial de 1 mg de extracto ml -1. De esta
solucin, se prepararon diluciones de 0,5, 0,25 y 0,125 mg ml -1. Para cada bioensayo, se evalu tambin un
control negativo con solucin tampn solamente y DMSO (5 ml l -1) ( MACAS et al., 2010 ).
bioensayo de germinacin
Los hexano y AcOEt fracciones de D. hoja brasiliensis y extracto de raz se aplicaron a E. heterophylla y P.
semillas mximos. Los bioensayos se realizaron en placas de Petri (9 cm de dimetro) que contiene dos hojas
de papel de filtro humedecido con 5 ml de cualquiera de las fracciones de muestra o la solucin de control
negativo.
El diseo experimental fue completamente al azar y contena cuatro rplicas de 25 semillas por bioensayo.
El experimento se realiz en una cmara de germinacin a 25 C, con un fotoperodo de 12 horas para E.
heterophylla ( Inoue et al., 2010 ) y la alternancia de temperaturas de 20-30C y un fotoperiodo de 8-16h para P.
mximo ( TOMAZ et al., 2010 ). El criterio de la germinacin se bas en la protrusin de embriones, que se evalu
cada 24 horas hasta que se estabiliz la germinacin. La aptitud para la germinacin, el tiempo medio de
germinacin y la sincrona se calcularon como se describe por Ranal y Santana (2006 ).
bioensayo de crecimiento temprano
Para el anlisis de crecimiento temprano de E. heterophylla y P. plntulas mximos, las semillas fueron
germinadas previamente en agua destilada en las mismas condiciones mencionadas para el bioensayo de
germinacin. Slo se seleccionaron plntulas con races de 2 mm de longitud y se transfirieron a cajas de
plstico transparente (13 x 8 x 3 cm) que contienen papel de filtro humedecido con 5 ml de las fracciones de
la solucin de control, la hoja o raz negativa, o herbicida. Para esta prueba, un bioensayo se realiz con el
herbicida comercial oxifluorfeno (240 gia L -1) en las mismas concentraciones que los extractos fraccionados.
Las cajas se mantuvieron en una cmara de germinacin en las mismas condiciones de luz y temperatura
adoptadas para la prueba de germinacin. El diseo experimental fue completamente al azar y contena
cuatro rplicas de 10 plntulas. Despus de siete das, las longitudes de tallo y la raz primaria de las plantas
de semillero se midieron con un calibrador. Se observ la presencia o ausencia de cualquier anomala, y las
plntulas se clasificaron como normales o anormales, de acuerdo con el Brasil (2009 ).
El examen de las clulas metaxilema
Plntulas E. heterophylla fueron cultivadas en control o D. brasiliensis hoja o extracto de raz de las
fracciones en las mismas condiciones aprobadas para el bioensayo de crecimiento. Despus de cinco das,
los segmentos de raz primarias de las plantas de semillero se retiraron y se sumergieron en 70% de alcohol (
GATTI et al., 2010
). Segmentos de raz primaria se sometieron a un mtodo de tincin Fuchs modificado ( KRAUS;
ARDUIN, 1997
). En pocas palabras, las races se sumergieron en alcohol 70% durante cinco das y se colocan en
una solucin de NaOH 25% a 60 C durante 48 horas para aclarar el material.
Los segmentos de raz se sumergieron posteriormente en safranina (C 20 H 19 N 4 C 1) y sosa custica (10%
NaOH) durante 24 horas a 60 C. Despus de la tincin, los segmentos se montaron en portaobjetos de
vidrio con jarabe de apata ( KRAUS; ARDUIN, 1997 ) y se observaron con un microscopio ptico (Olympus BX41-)
acoplado a una cmara (Sony CCD-IRIS) de 20 aumentos. Cuatro races primarias de E. Se evaluaron
plantas de semillero heterophylla cultivadas en diferentes concentraciones de las fracciones y las soluciones
de control. La mitad de la longitud de cada raz de la regin central hacia arriba fue fotografiado. De cada
fotografa, se midieron 10 clulas centrales de la metaxilema con la ayuda de Image Pro Plus software 5.0 (
GATTI et al., 2010
).
Anlisis estadstico

Los datos fueron pruebas de normalidad (Shapiro-Wilk) y homogeneidad (Levene). Una vez alcanzados
estos dos supuestos, un anlisis de la varianza (ANOVA) se realiz seguido por pruebas de Dunnett Tukey o
en un nivel de significacin de 0,05. A falta de normalidad o la homogeneidad (o ambos) requiere el uso de
una prueba no paramtrica de Kruskal-Wallis para obtener comparaciones por pares a un nivel de
significacin de 0,01. Para los bioensayos de germinacin y crecimiento, los modelos de regresin lineal o
cuadrtica se ajustaron cuando el estadstico ANOVA F fue significativo. La bondad de ajuste de los
modelos se puso a prueba a un nivel de significacin de 0,05 y evaluado por su coeficiente de determinacin
(R2).
Para las variables que mostraron diferencias significativas entre los tratamientos, los resultados se
presentan en las tablas.
Los datos iniciales de crecimiento fueron sometidos a anlisis conjunto debido a que la relacin entre el
cuadrado medio residual de mayor y menor tamao era inferior a 7 ( PIMENTEL-GOMES, 1990 ).
Resultados y discusin
Bioensayos de germinacin y crecimiento
Las fracciones de hexano y AcOEt profundas de la D. brasiliensis inhibi fuertemente el proceso de
germinacin y crecimiento inicial de P. mximo. La fraccin AcOEt promovi una disminucin lineal en la
germinacin y la sincrona (17% y 0,157 para cada uno 0,01 mg adicionales ml -1 de solucin aplicada,
respectivamente), y el tiempo medio de germinacin aument de forma lineal (1,57 das para cada 0,01 mg
adicionales mL - 1 de solucin aplicada). En presencia de la fraccin de hexano, un aumento lineal en tiempo
de germinacin media de 2,56 das para cada 0,01 mg adicionales ml se observ -1 de solucin, y la aptitud
para la germinacin mnima (13,79%) y la sincrona (0,06) Los valores se calcularon en concentraciones de
0,75 y 0,69 mg ml -1, respectivamente ( Figura 1 AC).
Las fracciones de extracto de raz inhiben eficazmente el crecimiento y cambian la morfologa de P.
plntulas mximos. El porcentaje de plntulas normales disminuy linealmente a una velocidad de 80,5%
por cada 0,01 mg ml -1 de solucin fraccin AcOEt aadi. La fraccin de hexano redujo el porcentaje de
plntulas normales a cero en una concentracin estimada de 0,81 mg ml -1 ( Figura 1 D).
El crecimiento de las races de las plntulas en presencia de las fracciones de AcOEt y hexano se redujo a
nulo en concentraciones estimadas de 0,65 y 0,71 mg ml -1, respectivamente. Se observ una disminucin
lineal en el crecimiento de brotes de 4,80 mm para cada 0,01 mg adicionales ml -1 de la fraccin de AcOEt
aplica. Se observ que la longitud de brotes mnimo (3,40 mm) en el grupo tratado fraccin hexano a una
concentracin de 0,71 mg ml -1 ( Figura 1 EF).
El tratamiento con hexano y AcOEt fracciones de D. hoja brasiliensis extracto bruto revel una inhibicin
significativa de algunos de los P. mximos parmetros de germinacin y crecimiento evaluados. El tiempo
medio y la sincrona de la germinacin de semillas despus del tratamiento fraccin hexano muestran un
aumento lineal de 1,60 das y una disminucin lineal de 0,2017 para cada 0,01 mg adicionales ml -1 de
solucin aplicada, respectivamente ( Figura 2 AB). Todas las dems variables analizadas no mostraron
diferencias significativas entre las concentraciones cuando se tratan con ya sea la fraccin ( Tabla 1 ).

Figura 1. La germinacin y el crecimiento temprano de P. maximum tratados con diferentes concentraciones

de la AcOEt (; --- Y) y hexano (; ___ 'y) las fracciones obtenidas a partir de D. brasiliensis races. Las
ecuaciones se obtuvieron por anlisis de regresin: (A) y = 86,17 - 17x, R2 = 0,90; 'y = 85.09 - 0.188x +
0.0001x2, R2 = 0,99; (B) y = 3,80 + 1.575x, R2 = 0,94; 'y = 4.26 + 2.56x, R2 = 0,82; (C) y = 0,325 - 0.157x,
R2 = 0,87; 'y = 0,3336 - 0.7966x + 0.574x2, R2 = 0,91; (D) y = 110.599 - 80.5x, R2 = 0,91; 'y = 105.35 257.85x - 157.14x2, R2 = 0,97; (E) y = 34,81 - 102.26x + 71.20x2, R2 = 0,85; 'y = 32,79 - 120.17x +
91.37x2, R2 = 0,78; (F) y = 10,74 - 4.805x, R2 = 0,94; 'y = 10,52 - 20.04x + 14.10x2, R2 = 0.94.

Figura 2. La germinacin y el crecimiento inicial de P. mximo tratado con diferentes concentraciones de la

AcOEt (; --- y) y hexano (; ____ 'y) fracciones obtenidas de D. deja brasiliensis. Las ecuaciones se
obtuvieron mediante anlisis de regresin: (A) 'y = 3.788 - 1.604 x, R2 = 0,92; (B) 'y = 0.3394 - 0.2017 x, R2 =
0,96; (C) y = 42.351 - 12,57 x, R 2 = 0,95; 'Y = 36.34 - 83.45 x 57.11 x + 2, R2 = 0,88; (D) y = 11.544 - 2.636
x, R2 = 0,95; 'Y = 10,685 a 7,8851 x + 5.146 x 2, R2 = 0.79.
Tabla 1. Las semillas de germinacin y plntulas morfologa de P. maximum tratado con diferentes
concentraciones de hexano o fracciones de AcOEt de D. extracto de hoja de brasiliensis.

Las medias seguidas por la misma letra en la lnea no difieren por el test de Tukey a un nivel de
significacin de 0,05; G: aptitud para la germinacin; MGT: tiempo de germinacin significa; Z: sincrona;
NS: plntulas normales; F: estadstico de prueba F - Los valores indicados no hay diferencias significativas
entre las concentraciones (ANOVA, p> 0,05); H: estadstica de la prueba de Kruskal-Wallis - Los valores
indicados no hay diferencias significativas entre las concentraciones (p> 0,05); p: probabilidad
El crecimiento de P. mxima fue sensible a las fracciones del extracto de la hoja. Tras el tratamiento con la
fraccin de AcOEt, se observaron disminuciones lineales de 12,57 y 2,63 mm en la raz y disparar el
crecimiento, respectivamente, por cada 0,01 mg adicionales ml -1 de solucin aplicada. Tras el tratamiento
con la fraccin de hexano, se observ la longitud de la raz mnimo (5,86 mm) a una concentracin de 0,73
mg ml -1, mientras que se observ la longitud de brotes mnimo (7,65 mm) a una concentracin estimada de
0,76 mg ml -1 ( Figura 2 DC). El porcentaje de plntulas normales no se vio afectada significativamente por
las fracciones del extracto de la hoja ( Tabla 1 ).
Fracciones del extracto de la raz de D. brasiliensis no afect significativamente la mayor parte de las
variables de germinacin de E. heterophylla ( Tabla 2 ); sin embargo, un valor mnimo de germinacin

(32,6%) tras el tratamiento con la fraccin de hexano se vio afectada de manera significativa a una
concentracin estimada de 0,64 mg ml -1 ( Figura 3 A).
A pesar de los resultados observados en el bioensayo de germinacin, las fracciones de extracto de raz de
ejercieron fuertes efectos fitotxicos sobre la morfologa y el crecimiento de E. heterophylla plntulas. Se
observ que los valores de la longitud mnima de raz (0 y 2,01 mm) a concentraciones estimadas de 0,66 y
0,79 mg ml -1 de hexano y AcOEt fracciones, respectivamente. La longitud mnima de rodaje plntulas
tratadas con hexano (7,83 mm) o AcOEt se observaron (23,39 mm) de las fracciones en concentraciones
estimadas de 0,73 y 0,75 mg ml -1, respectivamente. Porcentajes de plntulas normales variaron de 95%
(control) a 0% a concentraciones estimadas de 0,68 y 0,89 mg ml -1 para hexano y AcOEt fracciones,
respectivamente ( Figura 3 BD).
Tabla 2. La germinacin de semillas y la morfologa de las plntulas de E. heterophylla tras el tratamiento
con diferentes concentraciones de D. raz brasiliensis y extracto de hoja de fracciones.

Las medias seguidas por la misma letra en la lnea no difieren por el test de Tukey a un nivel de
significacin de 0,05; G: aptitud para la germinacin; MGT: tiempo de germinacin significa; Z: sincrona;
NS: plntulas normales; F: estadstico de prueba F - Los valores en negrita indican diferencias significativas
entre las concentraciones (ANOVA, p <0,05); H: estadstica de la prueba de Kruskal-Wallis; P: probabilidad

Figura 3. La germinacin y el crecimiento temprano de E. heterophylla tratados con diferentes

concentraciones de AcOEt (; --- y) y hexano (; ___ 'y) fracciones obtenidas de D. extractos de raz
brasiliensis. Las ecuaciones se obtuvieron mediante anlisis de regresin: (A) 'y del 55,4 - 72.74 x 56.77 x +
2, R2
= 0,90; (B) y = 48,55 a 116,95 x + 73.488 x 2, R2 = 0,75; 'Y = 49,002 a 177,97 x + 133.08 x 2, R2 = 0,81 (C)
y = 64.195 - 76.874 112.75 x + x2, R2 = 0,90; 'Y = 61,35 a 141,39 x + 93.378 x 2, R2 = 0,80; (D) y = 91,35 a
0,207 x + 0,0001 x 2, R 2 = 0,96; 'Y = 79,65 a 0,2823 x + 0,0002 x 2, R2 = 0.85.
Las variables de germinacin examinados para E. semillas heterophylla tratados con el D. hoja brasiliensis
fracciones del extracto no fueron significativamente diferentes entre todas las concentraciones ( Tabla 2 );
por lo tanto, el extracto de hoja ejerce efectos fitotxicos sobre la germinacin de esta especie. Por el
contrario, las fracciones de extracto de hoja de inhibieron el crecimiento de E. heterophylla plntulas. Se
observ que la longitud de brotes mnimo (32,8 mm) a una concentracin de 0,87 mg ml -1 despus de la
aplicacin de la fraccin de hexano. Adems, se observ una reduccin lineal en la longitud de la raz (48,26
mm) para cada 0,01 mg adicionales ml -1 de solucin aplicada. Las plantas tratadas con la fraccin AcOEt
muestran rodaje inferior (35,7 mm) y raz (25.15 mm) de largo en concentraciones estimadas de 0,73 y 0,71
mg ml -1, respectivamente. La morfologa de las plntulas se altera despus del tratamiento con la fraccin de
hexano, mostrando una reduccin lineal del 59,9% por cada 0,01 mg adicionales ml -1 de solucin se aadi
( Figura 4 AC).
El D. fracciones de la raz brasiliensis y el extracto de hoja de ejercieron efectos fitotxicos en P. mximo y
E. heterophylla, medido por varias caractersticas: la inhibicin se asoci positivamente con el aumento de
las concentraciones de fracciones del extracto. El efecto aleloptico dependa de la concentracin del
extracto, las especies objetivo y el tejido de la planta de la que se extrajeron los aleloqumicos ( GNIAZDOWSKA;
BOGATEK de 2005 HAO et al., 2007
;
). Las concentraciones efectivas de extractos de plantas en el control de malezas se
inform anteriormente en un rango de 0,1 a 100 mg ml -1 ( GRISI et al, 2012. ; . TEERARAK et al, 2012 ; ZAPATA et al., 2011 ). Para
las caractersticas evaluadas en ambas especies de malezas por tratamiento con D. extracto de brasiliensis
fractionsthe mayores efectos inhibitorios se produjeron a concentraciones estimadas en 1 mg ml -1. Por lo
tanto, las concentraciones eficaces evaluados en este estudio podra considerarse baja, lo que indica el
potencial de D. brasiliensis para actuar como una especie de donantes para la produccin de compuestos con
alto potencial fitotxico.

Figura 4. El crecimiento inicial de E. heterophylla tratados con diferentes concentraciones de AcOEt (; --y) y hexano (; ____ 'y) fracciones de D. extracto de hoja de brasiliensis. Las ecuaciones se obtuvieron por

anlisis de regresin: (A) y = 57,46 a 90,68 x 63,63 x + 2, R 2 = 0,92; 'Y = 54.467 - 42.826 x, R2 = 0,93; (B) y =
64,157 - 53,165 77.79 x + x 2, R2 = 0,81; 'Y = 66,937 -77,826 + x 44,59 x 2, R2 = 0.96 (C)' y = 92.363 - 59,9 x,
R 2 = 0,91.
La actividad fitotxica de D. raz brasiliensis y fracciones del extracto de la hoja fue ms fuerte durante el
crecimiento temprano que durante las fases de germinacin en ambas especies de malas hierbas. En general,
las especies con semillas pequeas son ms sensibles a los aleloqumicos que las especies con semillas
grandes ( BURGOS; Talbert, 2000 ). Las malas hierbas con semillas grandes tienden a ser menos sensible a
aleloqumicos como sorgoleone porque estas plantas pueden minimizar los efectos fitotxicos por la
disminucin de su absorcin de la aleloqumicos, por translocacin o aumentando la tasa de degradacin
metablica de las fitotoxinas ( Dayan, 2006 ). En este estudio, la germinacin de E. heterophylla fue menos
sensible al tratamiento con el D. Las fracciones que P. brasiliensis mximo. Las semillas de la E.
heterophylla son ms grandes que la P. mximo; Por lo tanto, se deduce que las semillas de esta especie son
ms tolerantes a aleloqumicos. Sin embargo, el tamao de la semilla no explica completamente la tolerancia
de algunas especies a estos compuestos. Al igual que con herbicidas comerciales, la capacidad de una
especie para desintoxicar compuestos txicos puede contribuir a la tolerancia ( BURGOS et al., 2004 ).
El D. fracciones brasiliensis inhibieron el crecimiento de las plntulas de dos especies de malas hierbas. En
general, la raz es el rgano ms sensible, como se inform anteriormente en otros estudios ( GATTI et al., 2010 ;
GRISI et al, 2012. Inoue et al., 2010 SOUZA Filho et al., 2010 TEERARAK y col ., 2012
;
;
;
). Souza Filho y Duarte (2007 ) han sugerido que la inhibicin
de desarrollo de las races es uno de los principales factores que indican la sensibilidad a aleloqumicos de
una manera que es independiente de la especie del receptor o la concentracin. Esta inhibicin es
particularmente importante durante el desarrollo temprano de las plntulas, que se caracteriza por alto
metabolismo y la sensibilidad al estrs ambiental ( CRUZ-ORTEGA et al., 1998 ). Los cambios en el crecimiento y
desarrollo de races de las plntulas en respuesta a aleloqumicos se pueden explicar por una reduccin en el
nmero de clulas mitticas, la inhibicin de la proliferacin celular meristemtico, la inhibicin del ciclo
celular, la desintegracin de la tapa de la raz, el aumento de dimetro del cilindro vascular y lignificacin
anterior del metaxilema ( Santos et al., 2008 ; SOLTYS et al., 2011 ).
El examen de las clulas metaxilema en E. plntulas heterophylla
El estudio anatmico de E. races heterophylla permitieron visualizar mejor los efectos fitotxicos de los
extractos a nivel celular. Las races cultivadas en la presencia de D. fracciones extracto de raz de
brasiliensis muestran una reduccin ms significativa en el tamao medio de las clulas metaxilema en
comparacin con las cultivadas en la presencia de la hoja de fracciones del extracto y de la solucin de
control ( figuras 5 y 6 ).

Figura 5. El tamao promedio de E. clulas metaxilema raz heterophylla en presencia de diferentes

concentraciones de AcOEt y fracciones de hexano obtenida de D. hoja brasiliensis y extractos de las races
en comparacin con el control. (*) Promedio difiere significativamente del control por la prueba de Dunnett,
en un nivel de significacin de 0,05.

Figura 6. Las microfotografas de clulas metaxilema raz de E. heterophylla crecido en el control (A), la
fraccin de AcOEt de extracto de hoja (B), la fraccin de hexano del extracto de hoja (C), la fraccin de
AcOEt de extracto de raz de (D) y hexano fraccin de extracto de raz de (E) de D. brasiliensis, a una
concentracin de 0,25 mg ml -1. Escala = 50 m.
El tamao medio de las clulas metaxilema de control de plntulas fue 445,64 m. Las plntulas cultivadas en
presencia de extractos de raz tenan un tamao de celda promedio metaxilema estadsticamente ms
pequeo que las plntulas en el grupo de control (ms de 50%). Se observ que el tamao medio de celda
ms pequeo (100,20 m) en plntulas tratadas con la fraccin de hexano del extracto de raz a una
concentracin de 0,25 mg ml -1. Los valores para el extracto de raz de fraccin hexano plntulas tratadas no
pudieron obtenerse para la 0,5 mg ml -1 concentracin, debido a una ausencia de crecimiento de las races y
la prevencin de la formacin de metaxilema ( Figura 5 ).
La fraccin de hexano de D. extracto de raz de brasiliensis inhibi crecimiento de las races de las plntulas
de E. heterophylla en un nivel superior, lo que sugiere que este efecto inhibidor puede estar asociada con una
disminucin en la elongacin celular metaxilema. Este resultado est de acuerdo con los resultados
presentados por Gatti et al., (2010 ). Los autores sugieren que aleloqumicos interfieren con el crecimiento celular y
que esta reduccin en el tamao celular puede estar asociado con cambios en la concentracin de las
hormonas, tales como las auxinas. La auxina es el principal fitohormonas control de la divisin celular, el
crecimiento y la diferenciacin ( Perrot-RECHENMANN de 2010 ) y tiene una profunda influencia en la morfologa de la
raz y el crecimiento. La auxina Tambin se cree que el control de la diferenciacin y el crecimiento de los
tejidos de la raz vasculares primarios, la protoxilema y la metaxilema ( ALONI et al., 2006 ). Por lo tanto,
aleloqumicos pueden interferir con la accin de las auxinas, lo que resulta en cambios en el crecimiento
celular.
anlisis conjunto para el bioensayo de crecimiento
El anlisis conjunto permite la comparacin de la D. fracciones brasiliensis datos con los resultados
obtenidos usando el herbicida comercial. Las fracciones de extracto de raz de AcOEt y hexano igualmente
inhibidas E. heterophylla crecimiento de las races y se muestra una mayor actividad inhibitoria de las
fracciones de herbicidas o extracto de hoja de comerciales. Adems, las dos fracciones de la raz muestran
efectos inhibitorios similares sobre el crecimiento de las races de P. mximo. Sin embargo, la fraccin de
hexano no fue significativamente diferente de el herbicida comercial, lo que demuestra su capacidad para
controlar el crecimiento de esta mala hierba ( Figura 7 A).
El herbicida comercial ejercida mayores efectos fitotxicos en el crecimiento de los brotes de especies de
malas hierbas en comparacin con las fracciones qumicas; Sin embargo, la fraccin de hexano a partir de
extractos de raz exhibi el potencial inhibidor ms alta para ambas especies ( Figura 7 B). Por lo tanto, D.
crudo brasiliensis fracciones del extracto de la raz, en particular la fraccin de hexano, mostraron una
mayor fitotoxicidad hacia el crecimiento de las especies objetivo que los extractos obtenidos de las hojas.
Los informes anteriores han sugerido que los niveles de toxicidad varan dependiendo del rgano de la

planta utilizada durante la extraccin. Las races son la principal fuente de fitotoxinas en Bauhinia
guianensis y las especies pendula Parkia ( MOURO-JUNIOR; SOUZA FILHO, 2010 ). Sin embargo, Eragrostis plana (
FAVARETTO et al., 2011
) y Eucalyptus sp. ( Zhang et al., 2010 ) exhibi una mayor actividad fitotxica de extractos de hojas.
El espectro de efectos fitotxicos observados despus del tratamiento con extractos de hojas y races se
puede atribuir a las diferencias en las concentraciones de aleloqumicos difusibles, variada composicin
qumica, o la alcalinidad diferenciada ( Dorning; CIPOLLINI de 2006 ). Muchos compuestos se sintetizan en las races y
son exudados directamente en el ambiente sin ser detectado en las partes areas de la planta. Debido a esta
especificidad de la localizacin de la sntesis de aleloqumicos, muchos compuestos con actividades
biolgicas prometedores se han aislado casi exclusivamente en las races ( OLIVEROS-BASTIDAS et al., 2009 ).

Figura 7. Root (A) y disparar longitudes (B) de E. heterophylla y P. plntulas mximos tratados con
fracciones de hexano y AcOEt obtenidos a partir de D. raz brasiliensis y extractos de hojas o un herbicida
comercial. Las medias seguidas por las mismas letras maysculas dentro de cada especie no se diferencian
por el test de Tukey a un nivel de significacin de 0,05.
El anlisis conjunto y los resultados revelaron variaciones anatmicas en la actividad fitotxica entre D.
fracciones brasiliensis relacionadas con la polaridad de los disolventes utilizados en la extraccin. Para
ambos rganos, las fracciones obtenidas con el disolvente n-hexano tenan niveles ms altos de actividad
inhibitoria, lo que sugiere que las sustancias con potencial aleloptico presente en D. brasiliensis son no
polares. Las clases de compuestos de baja polaridad que se originaron a partir de la extraccin con hexano
incluyen los monoterpenos, monoterpenos oxigenados y sesquiterpenos, que se dice que contiene una alta
actividad biolgica ( DURAIPANDIYAN et al, 2012. ; NISHIDA et al., 2005 ; . ZAPATA et al, 2009 ). Entre los compuestos de baja
polaridad que son ms abundantes en el gnero Drimys, los sesquiterpenos drimanes son los ms
interesantes ( Malheiros et al., 2005 ; . Rodrguez et al, 2005 , ZAPATA et al., 2009 ). Esta clase de compuestos tiene un amplio espectro
de actividades biolgicas y parece desempear un papel importante en los mecanismos de defensa de plantas
( JANSEN; GROOT, 2004 ). El alto potencial herbicida de D. brasiliensis observada en el presente estudio puede estar
asociada con los compuestos sesquiterpenos. Sin embargo, la presencia de sesquiterpenos, en particular en
D. races brasiliensis, deben ser confirmadas. Por lo tanto, esta investigacin sirve como punto de partida
para la purificacin y caracterizacin de los compuestos responsables de los efectos fitotxicos ejercidas por
la fraccin de hexano de D. extracto de raz de brasiliensis. La identificacin de estos fitotoxinas puede
contribuir a una mejor comprensin de la potencial aleloptico de D. brasiliensis y proporcionar
oportunidades interesantes para la gestin de las malas hierbas a base de productos naturales.

Conclusin
D. brasiliensis est representada fuerte fitotoxicidad hacia el E. heterophylla y P. mximo. La fraccin de
hexano de las races mostr un gran potencial para inhibir los parmetros medidos, en particular las malas
hierbas crecimiento de las races. Los efectos inhibidores tambin se pudieron observar en el nivel celular de
E. heterophylla races, con una disminucin de ms del 50% en el tamao celular metaxilema. Los primeros
efectos de inhibicin del crecimiento de la fraccin de hexano de extracto de raz fueron similares a los
efectos producidos por el herbicida comercial, lo que confirma el uso potencial de D. brasiliensis en el
control de malezas.