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GUIA de BiologiaCelMol
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EL MTODO CIENTIFICO
I. OBJETIVOS:
Dar a conocer los lineamientos bsicos del mtodo cientfico y su aplicacin
Adiestrar al estudiante en el uso del mtodo cientfico para usarlos en el campo de la medicina.
II. MATERIALES:
Lecturas seleccionadas a partir de artculos cientficos
III PROCEDIMIENTO.
Hacer una descripcin de las diferentes etapas que comprende en mtodo cientfico en base al artculo seleccionado , los
alumnos por grupo revisarn y analizaran el mencionado artculo en base a lo siguiente:
- Observacin
- Reconocimiento del problema planteado
- Formulacin de la hiptesis
- Formulacin de objetivos y mtodos
- Prueba de hiptesis mediante la experimentacin
- Anlisis de resultados y conclusiones.
IV.RESULTADO
- Describir mediante un informe la importancia del artculo evaluado y el correcto uso del mtodo cientfico.
III. OBJETIVOS:
Dar a conocer los lineamientos bsicos de organizacin, instrumental y seguridad en el laboratorio sea de anlisis
clnico o de investigacin.
IV. MATERIALES Y EQUIPOS DE LABORATORIO:
Tubos de ensayo
Placas de Petri
Pipetas
Bagetas
Matraces(Erlenmeyer, Fiolas)
Probetas
Beaker (vasos de precipitacin)
Pipetas (graduadas y volumtricas
Mecheros de Bunsen y de alcohol
Asas de Kolle
Balanza analtica
Estufa o incubadora
Hornos
Autoclave
Espectrofotmetros o colormetros
PH metros
V. PROCEDIMIENTO:
1.
ORGANIZACIN:
Generalmente los laboratorios funcionan de acuerdo a las actividades que ha de realizar se debe considerar
reas, estructura y diseo interior, considerando lo siguiente:
Mesas de trabajo y repisa sobre la mesa
Mesa para instrumentales (balanza, microscopio, pH metro, etc.)
Armarios para reactivos y material de vidrio
Extractor de gases.
2.
SECCIONES:
Cada laboratorio puede presentar una o varias secciones dependiendo de la naturaleza de la actividad. En
forma general el laboratorio debe contar reas fsicas o secciones:
Toma de muestra
Separacin y clasificacin de muestras
Lavado y esterilizacin
Almacn
Sala de trabajo
3.
SEGURIDAD:
La seguridad en el laboratorio es de alta responsabilidad. Cualquier actividad en un laboratorio tiene riesgos
potenciales. Las reglas generales son:
1. El laboratorio NO es un lugar para correr, empujar y bromear.
2. Aprende donde esta y como se usa el equipo de seguridad.
3. Lee todas las instrucciones para la actividad ANTES de empezar a trabajar. Pon atencin a las notas que
indican PRECAUCION.
4. Cualquier accidente, informar inmediatamente al responsable del laboratorio.
5. No comer ni beber en el laboratorio. No probar ninguna sustancia que se use en el laboratorio. Lavarse
las manos antes y despus de cualquier actividad.
6. Llevar a cabo solamente aquellas actividades que se nos asigna. Nunca trabajes solo en el laboratorio
7. Mantener el rea de trabajo limpia: sin libros, ni papeles, ni equipo alguno innecesario.
8. Asegurarse de apagar las salida de gas, mecheros, hornillas y de cerrar todas las llaves de agua al
terminar la clase.
9. Sigue las instrucciones del profesor acerca de la forma adecuada de limpiar y recoger los materiales.
10. Usar MANDIL para cubrir la ropa cuando se esta trabajando en el laboratorio.
11. Al calentar materiales, inclinar el tubo de ensayo en direccin fuera de uno y de los dems.
5.
SMBOLOS DE SEGURIDAD:
VI. CUESTIONARIO:
Qu es la centrfuga y el pH metro y cules son sus usos en un laboratorio?
Cul es la clasificacin de las seales de seguridad
El vidrio es un material de amplio uso en el laboratorio que propiedades debe tener este material?
PRACTICA N 3
I.
OBJETIVO
Reconocer las unidades monomricas y macromoleculares como componentes fundamentales de todos los seres
vivos.
II.
III. PROCEDIMIENTO
Preparacin:
1.
2.
3.
4.
Colocar 1 ml. De cada solucin del glcido al 1% (Glucosa, Fructuosa, Sacarosa y Almidn) en un tubo de
13x100 y roturarlo.
Adicionar a cada tubo con glcido una (1) gota del Reactivo de Molish.
Agregar lentamente por la pared del tubo sin agitar 1 ml. de cido sulfrico concentrado.
Observar si hay cambio de color.
Preparacin:
1.
2.
3.
4.
Colocar 2 ml. de cada solucin de glcido al 1% (Glucosa, Fructuosa, Sacarosa, Maltosa y Almidn) en un
tubo de 16x150 mm y roturarlo.
Adicionar 1 ml. de Reactivo de Benedict a cada tubo.
Someter los tubos a ebullicin en agua hirviendo con ayuda de una pinza por cinco (5) minutos.
Observar la formacin de color (rojo ladrillo si es positivo)
Preparacin:
1.
2.
3.
IV. PROTOCOLO
A.
Determinacin de Glcidos.
V. CUESTIONARIO
I. OBJETIVO
Reconocer que compuestos orgnicos como los lpidos y protenas son constituyentes importantes en todos los seres
vivos.
III.
PROCEDIMIENTO
DETERMINACION DE LIPIDOS
Preparacin:
1.
2.
3.
4.
DETERMINACION DE PROTEINAS
A.
REACCION DE BIURET
Los compuestos que contienen dos o ms enlaces peptdicos forman un complejo con las sales de cobre en
un medio fuertemente alcalino, dando un color prpura o violeta.
Preparacin:
1.
2.
3.
4.
5.
Resultado
La formacin de una coloracin violeta o prpura indica que la prueba es positiva.
B.
REACCIN XANTOPROTECA
Las protenas que presentan aminocidos con anillos bencnicos, cuando se someten a la accin del cido
ntrico, dan derivados nitrogenados que se colorean de amarillo.
Preparacin:
1.
2.
3.
4.
Resultado
La formacin de una coloracin amarillo - claro evidencia la presencia de protenas.
EXTRACCIN DE ADN
CUESTIONARIO: ADN
1.
2.
3.
4.
I.
OBJETIVO
1. Conocer e identificar correctamente las partes pticas y mecnicas del microscopio compuesto.
2. Familiarizar al alumno con el uso correcto, cuidado y conservacin del microscopio.
II.
MATERIALES
4 Microscopios
4 Lminas portaobjetos
4 Laminillas cubreobjetos
Lminas coloreadas
Suero fisiolgico
Pipeta Pasteur
1 Plumn indeleble
Papel lente
Tela de felpa(25 cms)
Fibra de pelo y lana
PARTE MECANICA
Tubo portalentes y cremallera
Tornillos macro y micromtrico
Revolver
Platina
Condensador
Brazo y Pie
Charnela
PARTE OPTICA
Ocular
Objetivos
Espejo
Lentes de condensador
Diafragma
10
OBJETIVO
VI.
11
AUMENTO
MUESTRA N 1
MUESTRA N 2
MUESTRA N 3
MUESTRA N 4
CUESTIONARIO
1.
2.
3.
4.
I.
OBJETIVO
PROCEDIMIENTO
Colocar una gota de solucin fisiolgica sobre una lmina. Con
el mondadientes obtener una muestra de sarro dental y esparcir
en espiral en la gota de solucin fisiolgica.
Secar a temperatura ambiente y una vez seco cubrir con colorante
Mercuro de cromo por 5 minutos. Enjuagar y aplicar
12
PROTOCOLO
Aumento
Muestra con Sarro dental (coloreada con la coloracin de Vag)
Lamina con muestra bacteriana (coloracin Gram y/o Ziehl Neesel
Lamina con muestra Fungal (Hongo)
Lamina con muestra de parsitos
4 X
10 X
40 X
13
100 X
ASPERGILLUS (HONGO)
PENICILLUM (HONGO )
CUESTIONARIO
14
1.
2.
3.
4.
PRACTICA N 7
I.
OBJETIVO
Poder diferenciar al microscopio las caractersticas que presentan la membrana celular de la clula animal y la
pared celular de la clula vegetal.
III. PROCEDIMIENTO
A) OBSERVACION DE CELULA ANIMAL (RASPADO DE MUCOSA BUCAL)
1. Colocar una gota de solucin fisiolgica sobre la lmina portaobjetos.
2. Con una lmina limpia hacer un raspado de la mucosa bucal.
3. Colocar la muestra obtenida sobre la gota de solucin fisiolgica.
4. Aplicar una gota del colorante azul de metileno sobre la muestra.
5. Cubrir la preparacin con una laminilla cubreobjeto.
6. Observar con objetivo de 10X y 40X aumentos.
15
1- Membrana plasmtica,
3- Retculo endoplsmico rugoso,
5- Nucleolo,
7- Citosol (=hialoplasma),
9- Retculo endoplsmico liso,
2- Mitocondria,
4- Ribosomas,
6- Cromatina,
8- Diplosoma (=centriolos),
10- Aparato de Golgi
16
En una lmina preparada observar un cultivo de hongo coloreada con Azul de Lactofenol.
Observar con objetivos de menor y mayor aumento.
AUMENTO
AUMENTO
CELULA FUNGICA (HONGO)
10 X
40 X
17
con Lugol
V. CUESTIONARIO
1.Qu caractersticas presenta la membrana celular de la mucosa epitelial y la pared celular de la clulas vegetales.
2.Cual es la importancia de los colorantes en las pruebas biolgicas
3.Que tipo decolorante es el azul de metileno y cual es su estructura.
4.Que es el lugol y que importancia tiene en la preparacin de laminas.
18
MEDIO
Sol.NaCl0.4% + sangre
Isotnica
Hipertnica
Hipotnica
Isotnica
Sol.NaCl 2 + vegetal
Hipertnica
VI. CUESTIONARIO
1.
2.
3.
4.
20
FENOMENO
I. OBJETIVOS
1.
2.
3.
II. MATERIALES
A.
MATERIAL DE LABORATORIO
Microscopios
Placas Petri
Lminas portaobjetos
Laminillas cubreobjetos
Gotero o Pipeta de 1 ml.
Colorantes: -Lugol al 4%
-Verde de metilo
B. MATERIAL BIOLOGICO
Cultivo de Protozoarios.
III. PROCEDIMIENTO
Cultivo de Protozoarios:
En un frasco mediano de boca ancha, con agua estancada, preparar: arroz, zanahoria, lechuga
picada y levadura
Mantener abierto al aire libre durante 6 das, en un lugar donde no haya luz directa.
21
IV.
OBSERVACION
A) Movimiento ameboideo por seudpodos: Amoeba proteus (Clase Sarcodina)
1.
2.
3.
Sobre una lmina portaobjetos, con un gotero coloque una gota del cultivo de protozoarios que contenga
Amoeba, cubrirlo luego con una laminilla cubreobjetos.
Aadir despus de haber observado una gota de Verde de metilo o Lugol.
Dibujar las observaciones realizadas a 10x, 20x y 40x.
22
Sobre una lmina portaobjetos, colocar una gota de cultivo que contenga Euglena y cubrir con una
laminilla cubreobjetos.
Aadir despus de haber observado una gota de verde de metilo o Lugol.
Dibujar las observaciones realizadas.
V.
23
Sobre una lmina portaobjetos, colocar una gota de cultivo que contenga Paramecium, y cubrirlo con una
laminilla cubreobjeto.
Aadir despus de haber observado la muestra anterior, una gota de verde de metilo o Lugol.
Dibujar las observaciones realizadas.
AUMENTO
Amoeba proteus
(Sarcodina)
Euglena viridis
(Mastigophora)
Paramecium caudatum
(Ciliophora)
10 X
20 X
40 X
VI.
24
CUESTIONARIO
1.
2.
Explique las diferencias entre los diferentes tipos de movimientos: por seudpodos, flagelos, cilios.
3.
4.
I.
OBJETIVO:
Mediante el empleo de la tcnica de coloracin vital se observarn las mitocondrias presentes slo en el
citoplasma de las clulas Eucariotas, que vienen a constituir las centrales de energa porque producen y
almacenan energa bajo la forma de ATP.
Con el uso de suero fisiolgico observar plastidos en las clulas vegetales eucariticas, los que contienen
pigmentos y pueden sintetizar y acumular diversas sustancias, como los Leucoplastos que son plastidos
incoloros, los Amiloplastos que acumulan almidn, los Proteinoplastos que acumulan protenas, los
Elaioplastos que acumulan grasas y aceites esenciales. Los Cromoplastos son plastidos coloreados como
el Caroteno que presenta un pigmento de color naranja, el Licopeno de color rojo, la Xantofila de color
amarillo y los Cloroplastos que presentan un pigmento de color verde y cuya funcin principal es realizar
la fotosntesis.
II.
III.
PROCEDIMIENTO:
25
Seleccionar una hoja joven de Elodea, colocarla sobre una gota de agua en una lamina portaobjeto.
Cubrir la muestra con una laminilla.
Observar al microscopio con objetivo de menor y mayor aumento.
CROMOPLASTOS: Son organelas coloreados y presentan formas variadas (redondas, elpticas, o aciculares).
1.
2.
3.
4.
Realizar cortes finos de zanahoria, aj amarillo, betarraga sobre una lmina portaobjetos
Colocar una gota de agua sobre el corte.
Cubrir con una laminilla.
Observar al microscopio con objetivos de menor y mayor aumento.
AMILOPLASTO: Son organelas que contienen almidn como sustancia de reserva.
1.
2.
3.
4.
IV.
PROTOCOLO:
MUESTRAS
OBSERVACIN DE MITOCONDRIA,
CLOROPLASTOS Y
PLASTIDIOS
20 X
40 X
TIPO
PLASTIDIO
DE
EPITELIO BUCAL
HOJA DE ELODEA
AJI AMARILLO
ZANAHORIA
BETARRAGA
PAPA
HARINA DE ARROZ
V. CUESTIONARIO
1.
2.
3.
4.
26
I. OBJETIVO:
Conocer el mecanismo de accin de las enzimas durante una reaccin qumica
Conocer como acta un catalizador
II. MATERIALES:
Gradilla
Mortero con piln
Tubos de prueba de 16 x150
Agua oxigenada
Dixido de Manganeso
Papa rayada
Hgado de pollo
Palito de Ignicin
Fsforos
Placas Petri
III. FUNDAMENTACION:
Las Enzimas tienen como funcin acelerar la velocidad de una reaccin qumica. El mecanismo de accin se
realiza de la siguiente manera:
Unin de un Sustrato a la Enzima para formar un Complejo Enzima- Sustrato y desdoblamiento del complejo
formado para liberar los Productos.
E+S E-SE+P
IV. PROCEDIMIENTO:
1) Numerar los tubos del 1 al 3
2) Colocar en cada tubo 2 ml. de Perxido de hidrgeno (Agua oxigenada)
3) Agregar al:
Tubo 1: cucharita de Papa
Tubo 2: cucharita de Hgado de pollo
Tubo 3: 2 g. Dixido de Manganeso
4) Colocar a cada tubo el palito de Ignicin encendido en la boca del tubo
5) Si el palito de Ignicin aumenta la intensidad del fuego, la reaccin es positiva.
V. RESULTADOS:
MnO2 + 2 H2O2 ------ 2 H2O + O2 + MnO2
Catalasa + 2 H2O2 ------ 2 H2O + O2 + Catalasa
VI. PROTOCOLO
Anotar los resultados observados
VII. CUESTIONARIO:
1)
2)
3)
4)
27
PRACTICA N 12
I.
OBJETIVO:
Se estudiar la mitosis y el ciclo de divisin celular en las clulas meristemticas de la raz de Allium cepa (cebolla).
En este sistema la poblacin celular esta en equilibrio dinmico y los cromosomas son relativamente grandes, con un
nmero diploide ( 2n =16 ).
II.
MATERIALES:
Bulbos de cebolla
Placas Petri
Estiletes y pinzas
Papel de Filtro
Portaobjetos
Cubreobjetos
Aceite de inmersin
Mechero de Alcohol
Orcena actica- clorhdrica
Aceite de inmersin
Papel lente
Microscopios
III.
PROCEDIMIENTO:
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
IV.
28
Cultivar los bulbos de cebolla en vasos pequeos conteniendo agua corriente, la que deber cambiarse cada 24
horas, mantener los bulbos en oscuridad a 25C y sometidos a aireacin constante.
Despus de 48 a 72 horas, arrancar con ayuda de una pinza 2 a 3 races del bulbo, cortar 2 cm. de la parte apical y
colocarla sobre una placa Petri que contenga Orcena.
Calentar la placa en la llama de un mechero de alcohol hasta aproximadamente 60C y se observe la emisin de
vapores blancos, evitar la ebullicin del colorante.
Dejar enfriar y repetir esta operacin cuatro veces.
Enfriar y dejar reposar durante 15 minutos.
Colocar la raicilla en la lmina portaobjeto, cortar 2 mm de la punta, aadir una agota de Orcena fra, cubrir la
preparacin con laminilla.
Con la punta de un lpiz golpear suavemente la preparacin describiendo crculos concntricos para permitir la
extensin del tejido meristemtico.
Eliminar el exceso de colorante usando una tira de papel filtro.
Observar la preparacin a mayor aumento y lente de inmersin.
PROTOCOLO:
V.
CUESTIONARIO:
1.
Que es mitosis.
2.
3.
4.
REALIZAR ESQUEMAS:
FASE DE LA MITOSIS
29
ESQUEMAS
30
PRACTICA N 13
I.
OBJETIVOS
Determinar la presencia de elementos figurados presentes en una muestra de sangre perifrica humana,
mediante el uso de una coloracin diferencial.
Observar la presencia de ncleos en su interior.
II.
MATERIALES
Microscopios
Colorante Wright o Giemsa
Alcohol yodado
Agua destilada
Lminas portaobjetos limpias y desengrasadas
Lancetas hematolgicas
Algodn estril
Varillas de coloracin
III. PROCEDIMIENTO
A.
B.
Desinfectar el dedo anular con alcohol yodado y algodn y con una lanceta estril punzar el dedo y dejar
caer una gota de sangre sobre un extremo de la lmina portaobjetos.
Con ayuda de otra lmina portaobjeto formar un ngulo de 45 y realizar un frotis, tratando de esparcir
homogneamente la gota de sangre sobre la superficie de la lmina.
Dejar secar la preparacin y proceder luego a la coloracin con Wright o Giemsa.
Coloracin
1.
Cubrir el frotis con colorante Wright o Leishman por 1 minuto.
2.Sin eliminar el colorante agregar agua destilada y dejar actuar por 10 minutos.
3.Eliminar luego el colorante y lavar suavemente con agua de cao.
4.Dejar secar la lmina coloreada.
5.Una vez que la lmina coloreada a secado, observar al microscopio con el objetivo de 100 X y aceite de
inmersin.
IV. PROTOCOLO
(Esquematice los siguientes elementos que abajo se indican y que sern observados con ayuda del microscopio).
1.
31
LEUCOCITOS GRANULARES:
a)
Neutrfilos segmentados: presenta un ncleo con varios lbulos (2-5) unidas por bandas de
cromatinas.
2.
LEUCOCITOS AGRANULARES:
a)
Linfocitos: De forma redonda o irregular, su ncleo es morado, voluminoso y ocupa la mayor parte de
la clula, el citoplasma es azul y sin granulaciones. Su nmero aumenta con las infecciones.
b) Monocitos: De forma redonda u ovalada, ncleo variable generalmente en forma de rin, citoplasma sin
grnulos. Presenta una gran actividad fagocitaria.
3.
PLAQUETAS:
Las ms pequeas de las clulas de la sangre, de forma redonda y no contienen hemoglobina. Son esenciales
en la coagulacin de la sangre.
4.
HEMATIES O ERITROCITOS:
De forma generalmente redonda, sin ncleo, de color rosa intenso, contiene hemoglobina. La protena que se
encarga del transporte de oxgeno y anhdrido carbnico.
Neutrofilos
32
Eosinfilos
Basfilo
Monocitos
Linfocitos
V.
CUESTIONARIO
1. Cul es la diferencia entre plasma y suero.
2. Escriba cules son los valores leucocitarios en el adulto sano.
3. Diga cul son las funciones de los diferentes leucocitos.
4. Que es la anemia, y cual es su origen
33
PRACTICA N 14
GRUPO SANGUINEO Y FACTOR Rh
I.
OBJETIVO:
Al finalizar la prctica el alumno debe saber qu es el grupo sanguneo, sus aplicaciones en el campo de la medicina
y el grupo sanguneo al que pertenece.
II.
GENERALIDADES:
El serlogo Karl Landsteiner, en 1900-1901 fue el primero en demostrar la existencia de grupos sanguneos y en
1938 el Comit de Higiene de la Liga de la ONU, el Congreso de Microbiologa de 1930 en Londres y la
Internacional de Transfusin Sangunea de Pars, se adopt definitivamente la clasificacin de los grupos sanguneos
humanos heredables, designados como A, B, AB, O.
GRUPO SANGUINEO
III.
ANTIGENO EN GLOBULOS
ROJOS
(AGLUTINOGENOS)
ANTICUERPOS EN PLASMA O
SUERO SANGUINEO
(AGLUTININAS)
Anti-B
Anti-A
AB
AB
Ninguno
(Receptor universal)
Ninguno
Anti-A + Anti-B
(Dador universal)
MATERIAL Y METODOS:
Lminas portaobjetos
Lancetas hematolgicas
Sueros Anti-A, Anti-B, Anti-D o Rh.
Algodn
Alcohol yodado
RECONOCIMIENTO DE GRUPOS SANGUINEOS:
La tcnica de reconocimiento de grupos sanguneos se basa en la aglutinacin o no de los hemates cuando se
mezclan con la aglutinina Anti-A o Anti-B.
34
PROCEDIMIENTO :
1.
Limpie con algodn embebido en alcohol la yema del dedo anular.
2.Realizar la puncin utilizando una lanceta hematologa estril.
3.Coloque dos gotas de sangre por separado sobre la lmina portaobjetos, de la persona a la cual se va a realizar la
prueba y en otra lmina otra gota de sangre.
4.Agregar a cada gota de sangre una gota de suero Anti-A y Anti-B y Anti-D o Anti-Rh por separado.
5.Observar la reaccin e identificar a que grupo pertenece y que factor Eh, si es positivo o negativo
GRUPO A
Anti-A Anti-B
GRUPO B
Anti-A Anti-B
GRUPO AB GRUPO O
Anti- D o Rh (-)
IV: CUESTIONARIO :
1.
2.
3.
4.
35
36