Instituto Politcnico Nacional

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLOGICAS

Laboratorio de Bioqumica y Biologa Molecular
Osorio Quiroz Noem Karina, Prez Domnguez Citlali Yamile. GRUPO 3IM2. SECCIN 4.

EFECTO DE LA CONCENTRACION DE ENZIMA

SOBRE LA VELOCIDAD DE REACCIN
Introduccin
Las enzimas son catalizadores muy eficientes, capaces
de aumentar las velocidades de reaccin en un factor de
entre 105 y 1017 . Las reacciones catalizadas por enzimas
se caracterizan por la formacin de un complejo entre el
sustrato y el enzima. La funcin de los enzimas y de
otros catalizadores consiste en disminuir la energa de
activacin, G+ de una reaccin con el fin de incrementar
su velocidad. El equilibrio de una reaccin no es
afectado por el enzima.
La cintica enzimtica estudia la velocidad de las
reacciones catalizadas por enzimas. Estos estudios
proporcionan informacin directa acerca del mecanismo
de la reaccin cataltica y de la especifidad del enzima.
La velocidad de una reaccin catalizada por un enzima
puede medirse con relativa facilidad, ya que en muchos
casos no es necesario purificar o aislar el enzima. La
medida se realiza siempre en las condiciones ptimas
de pH, temperatura, presencia de cofactores, etc, y se
utilizan concentraciones saturantes de sustrato. En
estas condiciones, la velocidad de reaccin observada
es la velocidad mxima (Vmax). La velocidad puede
determinarse bien midiendo la aparicin de los
productos o la desaparicin de los reactivos.
Bajo condiciones dadas, dos molculas de enzima
actan
independientemente
en
solucin
para
transformar el doble de sustrato que una sola molcula
de enzima en un tiempo t; la velocidad es, por lo tanto,
directamente proporcional a la concentracin de enzima.

Objetivo

Obtener una curva de calibracin, mediante cual

se puedan transformar las lecturas de
absorbencia obtenidas a lo largo de las
experiencias en cintica enzimtica; para poder
obtener as la actividad de la enzima invertasa.

Demostrar que la velocidad de la reaccin

enzimtica es directamente proporcional a la
concentracin de enzima.

Resultados
Sacarosa 0.2
M
Regulador
de acetatos
de 0.05 M,
pH 4.7
Agua (mL)
Preincubaci
n
Enzima
100g/mL
Inactivacin

Desarrollo
de color
Dilucin

T
0.5

1
0.5

2
0.5

3
0.5

4
0.5

5
0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5
0.9 0.8 0.7
0.6
5 min a temperatura ambiente
0.0

0.
0.4 0.6
0.8
1.0
2
0.5 mL de 3,5-DNS a cada tubo

0.5 mL
de 35DNS+
0.5 Ml
enzima
5 minutos a 92 C (en bao mara)

Enfriar en bao de hielo y diluir con 2 mL de agua

en cada tubo
Leer en un espectrofotmetro a 540 nm
Absorbenci
a (A)

0.09
9

0.30
5

Azcar
reductor
(moles)
Velocidad
(unidades
internacion
ales)
Concentraci
n
de
enzima
(g)

1.4
9

0.14
9

0.40
1

0.63
9

0.9

20

40

60

80

100

4.01

0.49
9

6.39

0.001

0.711
(diluid
o 2:1)

TABLA 1. EFECTO DE LA CONCENTRCION DE ENZIMA SOBRE LA

VELOCIDAD DE REACCION

Clculos de concentracin de enzima

TUBO1:
100 g------1mL
x--------------0.2mL

x=20 g

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TUBO 2:
100 g------1mL
x--------------0.4mL
TUBO 3:
100 g------1mL
x--------------0.6mL

Efe cto de conce ntracin de enzim a s obre la velocidad de re accin

x=40 g

1
Efecto de
concentracin
de enzima
sobre la
velocidad de
reaccin

0.8

x=60 g

TUBO 4:
100 g------1mL
x--------------0.8mL
x=80 g
TUBO 5:
100 g------1mL
x--------------1mL
x=100 g

0.6
0.4
0.2
0
0

20

40

60

100

Clculos de Velocidad :

V o=

moles sacarosa hidrolizados

min

tubo 1 :V o=

1.49 moles
10 min

Vo = 0.149 moles/min

tubo2 :V o=

4.01 moles
10 min

Vo = 0.401 moles/min

tubo 3 :V o =

6.39 moles
10 min

Vo = 0.639 moles/min

tubo5 :V o =

9 moles
10 min

Vo = 0.9 moles/min
NOTA: Las concentraciones del azcar reductor se tomaron
de la grfica de curvas tipo azcares reductores tomando en
cuenta la lectura de absorbancia (esta interpolacin es el
anexoI)

Discusin de resultados
Como ya se ha mencionado uno de los factores clave
que afectan la velocidad de una reaccin catalizada por
un enzima es la concentracin del sustrato presente, [S].
Sin embargo, el estudio de los efectos de la
concentracin de sustrato es complicado debido al
hecho que [S] cambia durante el transcurso de una
reaccin a medida que el sustrato se convierte en
producto. Por lo tanto lo que se har con [S] es calcular
la velocidad mxima, pero en lo que consiste en el
experimento es en medir la velocidad inicial, esto se da
cuando l [S] es mucho mayor que la concentracin de
enzima [E]
Cada enzima acta sobre una sustancia especfica
(sustrato) y lo convierte en un producto especfico. Esto
implica dos eventos: primero, que el sustrato debe
adherirse a la enzima y segundo, que la enzima altera al
sustrato para convertirlo en producto. El lugar en la
enzima donde el sustrato es alterado se conoce como el
sitio activo.
Y por lo que observamos en nuestra grfica es que la
velocidad de la reaccin en funcin de la concentracin
de la enzima tiene un carcter lineal, o sea, que esas
dos magnitudes son directamente proporcionales .
Entonces a medida de que aumentamos la
concentracin de enzima aumentamos la velocidad de
reaccin, por lo tanto aumentamos la actividad
enzimtica.

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Conclusiones
Se logra alcanzar el objetivo, ya que s demostr que la
velocidad de la reaccin enzimtica es directamente
proporcional a la concentracin de enzima.
Se logr interpretar
la grfica de efecto de
concentracin gracias a la curva tipo azcar reductor.

Bibliografa
Nelson D.L,Cox M.M. Lehninger, Principios de
Bioqumica (3ra Ed) Ed. Omega. Pgs. 244-245. (2000)
L.G Wade,Jr. Qumica Orgnica, Vol2 (7ma Ed)
Ed.Pearson. Pgs 1113-1114 (2011)