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Croma Del Cafe PDF
Croma Del Cafe PDF
Memoria
Determinacin analtica
de la cafena en
diferentes productos
comerciales
PFC presentado para optar al ttulo de Ingeniera
Tcnica Industrial especialidad Qumica
por Silvia Calle Aznar
NDICE DE MEMORIA
ndice de memoria..................................................................................... 1
OBJETIVO ............................................................................................. 5
RESUM .................................................................................................. 7
RESUMEN.............................................................................................. 9
AGRADECIMIENTOS ............................................................................ 11
Captulo 1: INTRODUCCIN ................................................................ 13
Captulo 2: EL CAF ............................................................................ 15
2.1.
EL CAF ................................................................................... 15
-1-
-2-
8.1.
8.2.
8.3.
8.4.
8.5.
-3-
OBJETIVO
-5-
RESUM
Aquest projecte consta duna part terica on sexplica tant els diferents tipus de
caf, composici I caracterstiques, aix com el paper que desenvolupa la cafena
del caf i com influeix sobre el cos hum.
Tamb es fa una recopilaci dun resum teric sobre els dos mtodes analtics
utilitzats en els experiments per la determinaci quantitativa de la cafena del
caf. La cromatografia de lquids dalta resoluci (HPLC) i lespectroscopia UVVIS.
A la part experimental, es van realitzar diferents assajos fins a obtenir les
condicions ptimes en cadascuna de les tcniques per a la determinaci tant
qualitativa con quantitativa de la cafena, ajudant-nos de la interpolaci en una
recta de calibratge confeccionada amb les solucions patr de cafena de
concentraci coneguda. Tamb es van assajar diferents mtodes dextracci de
la cafena dels diferents cafs. Desprs de posar a punt tant el mtode de
separaci de la cafena del caf com els mtodes analtics utilitzats: HPLC i
espectrofotomtric, es va procedir a la determinaci quantitativa de la cafena en
diferents cafs comercials de divers origen i caracterstiques.
Un cop efectuades totes les determinacions de cafena en els diferents cafs,
treballant sempre amb varies repeticions per poder realitzar un petit estudi
estadstic dels valors obtinguts i assegurar la fiabilitat dells, es va intentar treure
conclusions analitzant els valors de cafena obtinguts i una delles s la
demostraci, tal i com previem, de que la quantitat de cafena depn tant del
tipus de caf, com del seu pas dorigen i del seu processat.
En aquest projecte shan tingut en compte les normes de bones prctiques al
laboratori (GLP) i criteris de sostenibilitat i el respecte pel medi ambient
realitzant una bona gesti del residus generats.
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RESUMEN
Este proyecto consta de una parte terica en donde se explica tanto los
diferentes tipos de caf, composicin y caractersticas, as como el papel que
tiene la cafena del caf y cmo influye sobre el organismo humano.
Tambin se recopila un resumen terico sobre los dos mtodos analticos
utilizados en los experimentos para la determinacin cuantitativa de la cafena
del caf. La cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC) y la espectroscopa
UV-VIS.
En la parte experimental, se realizaron diferentes ensayos hasta obtener las
condiciones ptimas en cada una de las tcnicas para la determinacin tanto
cualitativa como cuantitativa de la cafena, ayudndonos de la interpolacin en
una recta de calibrado confeccionada con soluciones patrn de cafena de
concentracin conocida. Tambin se ensayaron distintos mtodos de extraccin
de la cafena de los diferentes cafs. Despus de poner a punto tanto el mtodo
de separacin de la cafena del caf como los dos mtodos analticos utilizados:
HPLC y espectrofotomtrico, se procedi a la determinacin cuantitativa de la
cafena en distintos cafs comerciales de distinto origen y caractersticas.
Una vez efectuadas todas las determinaciones de cafena en los distintos cafs,
trabajando siempre con varias repeticiones para poder realizar un pequeo
estudio estadstico de los valores obtenidos y asegurar la fiabilidad de ellos, se
intenta sacar conclusiones analizando los valores de cafena obtenidos y una de
ellas es la demostracin, tal y como preveamos, de que la cantidad de cafena
depende tanto del tipo de caf, como del pas de origen y de su procesado.
En este proyecto se han tenido en cuenta las normas de buenas prcticas en el
laboratorio (GLP) y criterios de sostenibilidad y respeto por el medio ambiente
realizando una correcta gestin de los residuos generados.
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AGRADECIMIENTOS
En primer lugar quiero dar las gracias a Eva Carral, por su ayuda y consejos que
han hecho posible el desarrollo de este proyecto. Gracias por tu amabilidad y
paciencia con nosotras incluso en los momentos difciles.
En segundo lugar quiero agradecer a Nuria Borrs por su ayuda en el laboratorio
y al Dr. Ramn Oliver por sus nimos diarios. A Margarita Sanchez y Enric Boada
por prestarnos su colaboracin en el laboratorio.
Agradecer a mi compaera de proyecto Anabel por todo el trabajo realizado.
Gracias por su apoyo, comprensin y ayuda. Las horas en las que hemos podido
compartir experiencias y trabajar en equipo nos han hecho aprender de nuestros
errores.
Por ltimo, quiero dar las gracias a Andrea y Marga por su colaboracin y
compaerismo y por hacer que las muchas horas en el laboratorio se hicieran
ms cortas.
Por ltimo, dar las gracias a mis padres, mi familia y mis amigos por estar
siempre a mi lado y en especial a Ana, Eva y Marcos por su apoyo durante todo
este tiempo.
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CAPTULO 1:
INTRODUCCIN
- 13 -
CAPTULO 2: EL CAF
2.1. EL CAF
El caf es una bebida que se obtiene de las semillas tostadas de las plantas del
caf o cafetos (Coffea spp). Los cafetos son arbustos de hoja perenne de la
familia de las Rubiceas.
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Estos producen flores de color blanco que producen frutos de color rojizo. La
parte interior del fruto contienen dos semillas o granos de caf. Hay algunas
especies de cafetos que solo producen una nica semilla por fruto, se conocen
como caf perlado.
Los granos de caf o semillas son la parte del fruto que contiene ms cafena.
2.1.1. Composicin
Los granos de caf poseen ms de 2.000 sustancias diferentes (cafena,
minerales, lpidos, trigonelinas, aminocidos protenas, cidos alifticos,
glicsidos y carbohidratos) de tal manera que el caf no es solo cafena (1, 3,
7-trimetilxantina), sin embargo es el ingrediente farmacolgicamente ms activo.
Las dimetilxantinas derivadas (teofilina y teobramina) tambin se encuentran en
una variedad de especies de plantas.
El caf tiene mltiples componentes. Los granos de caf crudos tienen una
composicin diferente entre la variedad Arbica y la Robusta.
- 16 -
Variedad
Arbica
Variedad
Robusta
1,3
2,4
Cafena
2.1.2.
Tipos de caf
2.1.3.
En este apartado, se intenta describir cuales son las caractersticas del caf y lo
que se percibe con los sentidos.
Los granos de caf, segn su procedencia, tienen generalmente caractersticas
distintivas como:
Aroma: los criterios sobre los olores incluyen trminos como suave,
delicado, nico, exclusivo, intenso
stos dependen del ambiente local donde crecen las plantas de caf, su mtodo
de proceso, y la subespecie gentica o varietal. As, los cafs presentan un gran
abanico de sabores, y las variedades ms valoradas y ms raras alcanzan precios
muy elevados.
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2.1.4.
Los pases que consumen una mayor cantidad de caf en kilogramos por persona
y ao son: Finlandia (12 Kilogramos/persona/ao), Noruega (9,9), Islandia (9),
Dinamarca (8,7), Pases bajos (8,4), Suecia (8,2), Suiza (7,9), Alemania (6,9),
Aruba (6,8), Luxemburgo (6,8), Canad (6,5), Austria (6,1), Bosnia-Herzegovina
(6,1), Italia (5,9), Eslovenia (5,8), Brasil (5,6), Grecia (5,5) y Croacia (5,1).
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2.1.5.
Arbica: Sus plantas, sin embargo, son delicadas de cultivar pero, a pesar
de ello, su cultivo asciende a ms de un 60% en el comercio mundial.
Aunque es originario de Etiopa y se cultiva principalmente en Brasil,
Colombia y Centroamrica, tambin se produce en pases como Brasil,
Camern, Colombia, Costa Rica, Cuba, Ecuador, Guatemala, Nicaragua,
Hait, Jamaica, Java, Kenia, Mxico, Per, Bolivia, Puerto Rico, Repblica
Dominicana, El Salvador, Tanzania, Honduras y Venezuela.
2.1.6.
Cafs americanos:
Caf de Tanzania
Caf de Kenia
Caf de Etiopia
Cafs de Asia:
Caf moka
Cafs africanos:
de Colombia
del Brasil
de Costa Rica
de Guatemala
de Jamaica
de Nicaragua
del Per
de Mxico
Cafs rabes:
Caf
Caf
Caf
Caf
Caf
Caf
Caf
Caf
Caf
Caf
Caf
Caf
de
de
de
de
la India
Java
Sumatra
Clebes
Caf de Hawai.
- 20 -
2.1.7.
- 21 -
Cosecha
Cuando los frutos llegan a la madurez, de 6 a 8 meses despus de la floracin
para el arbiga y de 9 a 11 meses para el robusta, puede comenzar la cosecha
del caf. Se emplean dos mtodos: la recoleccin o el despalillado.
Procesamiento
Inicialmente los granos de caf recin cogidos se procesan, ya sea mediante el
mtodo seco, o el hmedo.
Mtodo mojado
Se emplea el proceso seco para el caf Robusta y gran parte del caf Arbigo
de Per, Brasil y Etiopa. Se secan los granos al sol y luego se muelen para
eliminar la capa exterior, el muclago seco, la vitela y la cscara plateada. El
proceso de molienda se realiza en las instalaciones grandes. Los desperdicios
pueden servir como combustible, o tambin, como alimento para los
animales.
El secado se practica sobre superficies de secado, donde se rastrillan las
cerezas de caf y se extienden regularmente. Despus de algunos das, la
parte carnosa ya deshidratada se separa.
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Mtodo hmedo
Por otra parte, el proceso hmedo, que se emplea para obtener el caf
Arbigo de ms alta calidad, puede provocar seria contaminacin. Los
granos maduros se lavan primero para eliminar los ms livianos y la
basura, luego se reducen a pulpa para quitar la capa exterior y parte del
muclago que se encuentra debajo de sta. En seguida, es necesario
fermentar los granos, recin reducidos a pulpa, en los tanques respectivos.
Este proceso enzimtico descompone las otras capas de muclago,
formando un afluente que puede causar serios problemas de
contaminacin, al descargarlo directamente a los arroyos o ros. Luego de
un lavado final, el caf ahora llamado vitela, se seca al sol o
artificialmente. Luego, el caf se descascara para quitar la capa plateada y
la de vitela, produciendo el caf en grano limpio o verde que se
comercializa internacionalmente.
La mayor parte del caf verde del mundo pasa por algn tipo de proceso
de lavado, entre ellos la mayora del caf de calidad superior.
El lavado se aplica a frutos bien maduros. Despus de ser recogido, el caf
verde es clasificado por inmersin en agua. Los frutos malos o inmaduros
flotarn y los frutos buenos y maduros se hundirn. La piel de la cereza y
parte de la pulpa es eliminada presionando el grano mediante una
mquina sumergida a travs de una rejilla. El grano todava tendr una
cantidad significativa de pulpa adherida que necesita ser quitada. As se
obtienen cafs lavados, descritos como propios y brillantes,
generalmente menos cidos y de mejor sabor. La tcnica, a menudo
mecanizada, necesita disponer de cubas y de un suministro de agua
suficiente.
El proceso hmedo requiere una gran cantidad de agua y puede provocar
serios problemas de contaminacin. Se puede reciclar la mayora de caudal
para economizar agua, y, al hacer esto, se concentra el contenido de
enzimas en el agua, para el proceso de produccin de pulpa, y esto facilita
la fermentacin. El agua utilizada para el lavado final puede verterse
directamente a los ros, pero el otro afluente debe pasar por los pozos de
filtracin.
Despus del secado o el lavado, el grano de caf se encuentra an
encerrado en el ncleo del fruto (el endocarpio): es el caf coque (despus
de secado) o el caf parche o vitela (despus de lavado). Es necesario
clasificarlo, con el fin de eliminar cualquier haba descompuesta,
descolorada o daada. La seleccin puede mecanizarse, en las
instalaciones industriales, con ayuda de cmaras con CCD, pero esta
operacin se hace a menudo manualmente, en los pases en desarrollo.
El caf puede conservarse protegido por su propia cscara durante un
cierto tiempo. Algunas cosechas incluso se envejecen para mejorar el
sabor del caf.
La ltima operacin de preparacin, que permite obtener el caf verde,
consiste en descascarillar mecnicamente los granos. Luego, el caf se
descascara para quitar la fina capa plateada (el tegumento) y la de vitela,
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Semi-hmedo
Clasificacin
Una vez que el caf se ha secado y pasa a ser caf verde, se clasifica a mano
o mquina para quitar las impurezas y los granos malos o deformes. Adems,
el caf tambin es clasificado por tamao.
Pulido
Algunos granos de caf se pulen para quitar la piel de plata. Esto se hace
para mejorar el aspecto de los granos de caf verde y para eliminar los
desperdicios que se hayan producido en el tueste.
Almacenamiento
Envejecimiento
Todo el caf, cuando fue introducido en Europa, vena del puerto de Moca, en
lo que se conoce actualmente como Yemen. Para importar los granos a
Europa, el caf iba en barcos en un trayecto muy largo rodeando el
continente africano. Estos largos viajes y la exposicin al aire del mar
cambiaba el sabor del caf. Una vez que el Canal de Suez fue abierto, el
tiempo del trayecto hacia Europa se redujo enormemente y comenz a llegar
caf cuyo sabor no haba sido alterado. En cierta medida, este caf ms
fresco fue rechazado porque los europeos se haban acostumbrado al sabor
anterior.
Para intentar lograr un sabor parecido al anterior, parte del caf se envejeca
en grandes almacenes al aire libre en los puertos durante seis o ms meses
en un intento de simular los efectos de los largos viajes en mar.
Aunque todava se debate ampliamente, se cree que ciertos tipos de caf
verde mejoran con los aos; especialmente aquellos valorados por su baja
acidez, como los cafs de Indonesia o India. Varios de los productores de
estos cafs venden granos de caf que han sido envejecidos unos 3 aos, y
algunos llegan incluso a 8 aos. Sin embargo, la mayor parte de los expertos
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Descafeinamiento
Tueste y torrefaccin
- 25 -
La molienda
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Caf instantneo.
El caf instantneo y soluble es caf seco en polvo o granulado, que se puede
disolver rpidamente en agua caliente para ser consumido.
En 1881, un qumico estadounidense llamado Satori Kato present el primer caf
instantneo durante la Feria del Mundo Panamericano. Sin embargo se debe a
Federico Lehnhoff (inventor) y George Washington el primer esfuerzo que llev a
la fabricacin comercial. Hay sugerencias de que se inspir viendo polvo seco en
el borde de una taza de caf de plata.[11] Federico Lehnhoff Wyld, un
guatemalteco-alemn, tambin cre un proceso de caf instantneo en aquella
poca,[12] el cual vendi ms tarde en Europa; ya que Lehnhoff era el mdico de
cabecera de Washington, se ha sugerido que el descubrimiento no fue
independiente.
Para obtener el caf soluble se utilizan dos procesos distintos: el secado por
aspersin y la liofilizacin. En los dos casos, el tueste del caf se hace a menor
temperatura (entre 190 y 210 C) y a continuacin es molido y solubilizado en
agua caliente. El lquido obtenido se centrifuga y luego se seca. El secado por
aspersin se realiza por aire caliente, mientras que en la liofilizacin se realiza
por congelacin brusca a bajas temperaturas.
El caf obtenido equivale aproximadamente a una tercera parte del peso del caf
verde.
Gracias a Nestl, que desarroll su caf soluble Nescaf en 1938, los soldados
estadounidenses pudieron tomar caf en sus puestos de combate durante la II
Guerra Mundial.
- 27 -
2.2.2.
Volumen/peso
Rango de
cafena (mg)
Promedio de
cafena (mg)
Tostado
100 ml
41-83
60
Instantneo
100 ml
27-72
50
Tostado descafeinado
100 ml
0,4-7
2,4
Instantneo descafeinado
100 ml
5-1
Caf
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CAPTULO 3: LA
CAFENA EN EL CAF
- 30 -
3.1.2.
3.1.3.
- 31 -
CAPTULO 4: MTODOS
ANALTICOS PARA LA
DETERMINACIN Y
CARACTERIZACIN DE
LA CAFENA
La cafena es un alcaloide del grupo de las xantinas, que acta como droga
estimulante y psicoactiva. Se encuentra en muchas especies de plantas. La
fuente habitual de cafena es el caf, pero tambin se encuentra en el t (tena),
guaran (guaranina), mate (matena), cacao y refrescos de cola, entre otros. El
contenido de cafena vara enormemente de unas plantas a otras. Dentro de una
misma especie tambin existe gran variabilidad. As, el contenido en cafena del
caf vara dependiendo de la variedad, del tipo de grano y del mtodo de
preparacin. Las plantas producen cafena como pesticida natural, a modo de
proteccin mecnica a travs de la cual logran paralizar y matar ciertos insectos
que se alimentan de la planta.
La determinacin de cafena ha adquirido mucha importancia, debido a su uso en
la industria farmacutica y en la industria de alimentos; ya sea como ingrediente
en la elaboracin de refrescos y bebidas energticas o por su presencia en
productos como el t, el mate, el cacao y el caf. En todos estos casos, el control
de calidad del parmetro cafena es necesario en los productos que la contienen.
Por esta razn, se han desarrollado nuevos mtodos instrumentales para su
determinacin en diversas matrices, especialmente en alimentos.
- 33 -
- 34 -
Introduccin a la cromatografa
4.1.2.
Tipos de cromatografa
en columna
en papel
en capa fina
- 36 -
- 37 -
Fase mvil
Fase
estacionaria
Reparto o
particin
Lquido
Lquido
Absorcin
Lquido
Slido
Papel
Lquido
Lquido
Capa fina
Lquido
Lquido o
slido
Gel o de
exclusin por
tamao
Lquido
Lquido
Cambio inico
Lquido
Resina
Las nicas sustancias que no pueden ser tratadas por cromatografa son las
insolubles y aquellas que se descomponen con el solvente o con la fase
estacionaria.
Dentro de las tcnicas cromatogrficas no se incluyen los mtodos que utilizan
campos elctricos para separar molculas cargadas, mtodos que se denominan
electroseparaciones, electromigraciones o electroforesis.
Continuidad de flujo.
- 38 -
- 39 -
4.1.4.
- 41 -
Eso se debe a que el analito tiene diferentes afinidades para las dos diferentes
fases, o sea tiene diferentes preferencias por estar en una u otra fase, de esta
forma, la separacin del analito de la mezcla se logra por migracin diferencial
de este, y dada la afinidad que tiene el analito por el disolvente de la columna, el
reparto en esta ser mayor que en la fase mvil. Esta tcnica se usa para separa
sustancias en la misma fase, o lquidos inmiscibles.
En HPLC se puede llevar a cabo una cromatografa lquida en fase normal
cuando la fase estacionaria es relativamente polar y la fase mvil es
relativamente apolar. Pero, se efecta una cromatografa en fase inversa (o
reversa) cuando la fase estacionaria es relativamente apolar y la fase mvil es
relativamente polar.
4.1.5.
- 42 -
4.1.6. Instrumentacin
resolucin
para
cromatografa
de
lquidos
de
alta
Figura 17.
- 43 -
Figura 18.
Cada uno de los componentes se trata en los prrafos que siguen a continuacin:
RECIPIENTES PARA LA FASE MVIL Y SISTEMAS PARA EL TRATAMIENTO
DE LOS DISOLVENTES
Un aparato de HPLC se equipa con uno o ms recipientes de vidrio o de acero
inoxidable, cada uno de los cuales contiene unos 500 mL de un disolvente. Los
recipientes a menudo se equipan con un sistema para eliminar los gases
disueltos (en general oxgeno y nitrgeno) que interfieren formando burbujas en
los sistemas de deteccin. Un desgasificador puede consistir en un sistema de
bombeo por vaco, un sistema de destilacin, dispositivos para calentar y agitar
los disolventes o sistemas de difusin que permiten arrastrar los gases disueltos
fuera de la solucin mediante finas burbujas de un gas inerte de baja solubilidad.
Estos sistemas tambin contienen un dispositivo para la filtracin del polvo y de
las partculas slidas en suspensin de los disolventes. Si el equipo no consta de
desgasificadores y los filtros, una forma de tratar los disolventes antes de
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Las altas presiones que generan las bombas de HPLC no constituyen un riesgo de
explosin, debido a que los lquidos no son muy compresibles. De este modo, la
rotura de un componente del sistema slo supone una prdida de disolvente. Es
evidente que esta prdida puede suponer un riesgo de incendio.
Entre los sistemas de bombeo se utilizan tres tipos de bombas:
Las Bombas recprocas o de vaivn, son las ms utilizadas. Estn formadas por
una pequea cmara cilndrica que se llena y luego se vaca por oscilacin de un
pistn de zafiro. El bombeo produce un flujo pulsado que despus debe
amortiguarse. Sus principales ventajas son que se consiguen presiones elevadas
y se suministra un caudal constante, pudindose adaptar a la tcnica de elucin
con gradiente, debido a su pequeo volumen interno.
Las Bombas neumticas o de presin constante, hacen uso de la presin de un
gas aplicado al recipiente conteniendo la fase mvil. Son sencillas, no provocan
pulsaciones pero estn limitadas a presiones relativamente bajas.
Las Bombas de desplazamiento o tipo jeringa, consisten en una cmara equipada
con un mecanismo de tornillo. Suministran un flujo libre de pulsaciones pero con
una capacidad limitada a unos 250 ml.
Amortiguadores de pulsos
Muchos de los detectores utilizados en HPLC son sensibles a variaciones de flujo.
Un mtodo sencillo de amortiguacin contiene un fuelle flexible o un gas
compresible en la porcin superior cerrada de un tubo en T para absorber parte
de la energa de pulsacin. Cuando la bomba se rellena esta energa se libera
para ayudar a suavizar la pulsacin de presin. Los amortiguadores electrnicos
de pulsos proporcionan una carrera hacia delante corta y rpida del pistn, y
enseguida la carrera rpida de recarga de la bomba. El pequeo impulso hacia
delante amortigua el pulso de flujo llevando disolvente a la presin del sistema.
Control del caudal y sistemas de programacin
Como una parte de sus sistemas de bombeo, muchos instrumentos comerciales
se equipan con dispositivos controlados por ordenador que permiten medir el
caudal mediante la determinacin de la cada de presin a travs de un restrictor
colocado en la salida de la bomba. Cualquier diferencia entre la seal y un valor
preestablecido se utiliza para aumentar o disminuir la velocidad del motor de la
bomba.
La bomba enva el disolvente hacia la vlvula inyectora que es una vlvula de
varias vas que permite introducir al disolvente, la muestra contenida en el loop
de volumen calibrado.
SISTEMAS DE INYECCIN DE MUESTRA
A menudo, el factor limitante en la precisin de las medidas en cromatografa de
lquidos es la reproducibilidad con que se puede introducir la muestra en la
columna. El problema se agrava por el ensanchamiento de banda que acompaa
a la sobrecarga de las columnas. Por ello, los volmenes que se emplean han de
ser muy pequeos, de unas pocas dcimas de microlitro a tal vez 500 L.
Adems, se ha de poder introducir la muestra sin despresurizar el sistema.
El mtodo ms simple es la utilizacin de una jeringa de alta presin con un
diafragma (septum) a la entrada de la columna. Est limitado a una presin
mxima de operacin de 1500 psi.
Las vlvulas de inyeccin con bucles de volumen conocido, es el mtodo ms
utilizado, como el que se muestra en la figura 19. Estos dispositivos estn
- 46 -
COLUMNAS
En las columnas cromatogrficas es donde se produce la velocidad diferencial de
los solutos que permite su separacin.
Las columnas pueden ser empaquetadas o de tubo abierto. Una columna
empaquetada se llena con partculas que contienen la fase estacionaria y los
materiales ms usados para los tubos de las columnas son de acero inoxidable y
de vidrio, siendo el primero preferido por la manipulacin ms fcil. Para el caso
de la columna de tubo abierto, se trata de un capilar hueco estrecho con la fase
estacionaria cubriendo las paredes interiores. Cientos de columnas
empaquetadas que difieren en tamao y relleno se comercializan por distintos
fabricantes.
Columnas analticas
La mayora de las columnas para cromatografa de lquidos tienen una longitud
entre 5 y 30 cm. Por lo comn, las columnas son rectas y se pueden alargar, si
es necesario, acoplando dos o ms columnas. El dimetro interno de las
columnas es a menudo de 4 a 10 mm y los tamaos de las partculas de los
rellenos ms comunes son 3, 5 y 10 m.
La eficacia de las columnas aumenta al disminuir el tamao de las partculas de
la fase estacionaria. Las columnas son caras y se degradan con facilidad, por
eso, se protege la entrada de la columna con otra ms corta, la precolumna,
para eliminar contaminantes y partculas de polvo. Como cierre de las columnas
se utilizan placas filtrantes de acero que no dejan escapar las micropartculas de
la columna.
- 47 -
- 48 -
Introduccin de la muestra
Una vez que la columna se encuentra correctamente empaquetada, se procede a
la aplicacin de la disolucin de la muestra. Cuando se introduce en la columna
cierta cantidad de muestra, sta se queda en una zona de cierta altura en la
columna. Si entonces se introduce el disolvente, comienza el desplazamiento de
la zona a lo largo de la columna. La parte superior de la zona se disuelve poco a
poco y, empujado por la disolucin que se forma, el frente de la zona avanza
hacia la base de la columna.
Procedimientos de elucin
La diferente capacidad de los distintos disolventes para eluir un determinado
soluto es prcticamente independiente de la naturaleza del soluto. Se puede
describir la elucin como el desplazamiento de un soluto de la fase estacionaria
por un disolvente.
La cromatografa de fase normal se caracteriza por usar una fase estacionaria
polar y un eluyente menos polar. Un disolvente ms polar tiene fuerza eluyente
mayor. La cromatografa de fase inversa, que es la ms utilizada, se caracteriza
porque la fase estacionaria es no polar o dbilmente polar y el disolvente es ms
polar. Un disolvente menos polar tiene mayor fuerza eluyente. La cromatografa
de fase inversa elimina las colas de los picos porque la fase estacionaria tiene
pocos puntos que adsorban con fuerza a ningn soluto originando colas. La
cromatografa de fase inversa tambin es menos sensible a impurezas polares
(como el agua), que pueda haber en el eluyente.
Elucin isocrtica y gradiente
Cuando se usa el mismo disolvente durante toda la separacin, se denomina
elucin isocrtica. La elucin isocrtica se lleva a cabo con un nico disolvente (o
una mezcla de disolventes fija). Si un disolvente no permite una elucin
suficientemente rpida de todos los componentes, se puede usar una elucin
gradiente. En este caso, se van aadiendo cantidades crecientes del disolvente B
al disolvente A, produciendo un gradiente contino.
- 49 -
Figura 21.
DETECTORES
El papel del detector es indicar los momentos de aparicin de los componentes, y
proporcionar indicacin cuantitativa y cualitativa de los mismos. El detector
utilizado depende de la naturaleza de la muestra y deber reunir una serie de
caractersticas como son, tener una sensibilidad elevada, buena estabilidad y
reproducibilidad. Amplio margen de respuesta lineal, insensible a cambios en la
presin y la temperatura.
Los tipos de detectores en cromatografa de lquidos se clasifican en:
Figura 22.
REGISTRADOR INTEGRADOR
Despus de que se haya producido la separacin en la columna y los
componentes de la mezcla hayan pasado al detector, ste da una seal elctrica
proporcional a la cantidad de materia; esta seal es enviada al registrador que a
su vez da un cromatograma de intensidad en funcin del tiempo (figura 23); en
el cual, lo ideal es obtener picos gaussianos los cuales corresponden cada uno a
un componente diferente de la muestra.
El integrador calcula el rea de cada pico, la cual se puede relacionar con la
concentracin del componente si se tiene una curva patrn; si no se cuenta con
ella, slo sera cualitativa.
Debido a que los detectores que se usan en estos equipos no son destructivos, es
posible recuperar los productos que salen de l, y de esta manera realizar otro
tipo de separaciones (por ejemplo) analticas (tambin depende del tamao del
loop, de la columna y del tipo de bomba).
4.1.7.
Parmetros cromatogrficos
KA =
K A VS
VM
(1)
KB
KA
(2)
N=
L
H
(3)
Resolucin cromatogrfica
Es una medida cuantitativa de su capacidad para separar dos analitos A y B. la
resolucin de cada columna queda definida como:
RS =
2Z
2((trA ) (trB ))
=
WA + WB
WA + WB
(4)
Asimetra (AF)
El factor de asimetra del pico (AF, de asymetry factor) se define como la razn
de las mitades del ancho del pico a una altura dada. Conforme se mida ms
abajo la asimetra del pico AF es mayor, debido al ruido del detector, un
compromiso aceptable es medir AF en 10% de la altura del pico.
- 54 -
Mtodos espectroscpicos
espectroscopa de infrarrojo
espectroscopa de ultravioleta
espectrometra de masas
4.2.2.
Radiacin electromagntica
hc
Intensidad (I) que se define como el nmero de fotones que por unidad
de tiempo atraviesa la unidad de rea, perpendicular a su direccin de
propagacin. Esta magnitud est relacionada con el mdulo del vector
campo elctrico.
Longitud de
onda (nm)
Transicin
molecular
Tcnica
espectroscpica
Radio
1012
Espn nuclear
RMN
Microondas
108
Espn elctrico
EPR
Infrarrojo
106
Vibracional
IR
UV-Visible
2x102-7,5x102
Electrnica
UV-Visible
Rayos X
10-103
Electrnica (capas
internas)
Espectroscopa de
rayos X (no difraccin)
- 56 -
4.2.3.
- 57 -
(7)
4.2.4.
Espectroscopa UV
- 59 -
cl
(8)
aplicando logaritmos:
log I = log I0 - cl
(9)
reordenando trminos:
log I0 - log I =
cl
(10)
pudindose escribir:
log (I/I0) =
- 60 -
cl
(11)
(12)
- 61 -
- 62 -
4.2.5.
Espectrofotmetros
Un espectrofotmetro consta de las siguientes unidades bsicas:
a) La
lmpara
que
emite
la
radiacin
electromagntica.
Los
espectrofotmetros de absorcin UV-Visible suelen estar equipados con
dos tipos de lmparas: las halgenas que emiten luz visible en la zona del
espectro visible (700-350 nm) y las de deuterio que emiten radiacin
ultravioleta y cubren el espectro UV-prximo (350-250 nm).
b) Las lentes pticas que concentran el haz de luz luminoso y lo enfocan
sobre el monocromador.
c) El monocromador, unidad que permite obtener luz monocromtica o
radiacin formada por una sola longitud de onda.
d) El sistema de cubetas o clulas, donde situamos la solucin de muestra a
analizar y se caracteriza por su longitud de paso.
e) El detector: la luz no absorbida (trasmitida) por la muestra contina su
camino hacia el fotomultiplicador y por mediacin del sistema de
fotodiodos esta seal ptica es transformada en elctrica, para finalmente,
ser ampliada y registrada o digitalizada.
- 63 -
Figura 34.
- 64 -
CAPTULO 5: PARTE
EXPERIMENTAL
5.1.
Cuentagotas
Desecador
Embudo decantacin
- 65 -
Equipo de reflujo (Soporte, Aro de acero con espiga, Nuez doble o Pinza
triples, Pinzas para buretas y refrigerantes (sin nuez), Refrigerante de
bolas, gomas, bridas)
Esptulas
Jeringa Hamilton
Matraz aforado
Mortero de porcelana
Papel absorbente
Papel indicador de pH
Parafilm
Pera de goma
Pesafiltros
Probeta graduada
Tubos Eppendorf
Varillas de vidrio
5.1.1.
Instrumentacin
Equipos:
Purelab
5.2.2.
5.3.
10
11
12
Caf molido de tueste natural 100% Arbiga. Saimaza Colombia. Desarrollo Sosten.
13
Caf molido de tueste natural 100% Arbiga. Saimaza Brasil. Desarrollo Sostenible
14
15
16
17
18
Caf molido de tueste natural 100% Arbiga. Cafe Mexique Chiapas Destination
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
Tueste natural
Mezcla
Descafeinado natural
Descafeinado mezcla
Soluble natural
5.3.1.
Instrumentacin
Equipos:
Purelab
5.3.2.
- 69 -
5.4.1.
Instrumentacin
Equipos:
Purelab
Reactivos:
5.4.2.
Instrumentacin
Equipos:
Purelab
- 71 -
5.4.3.
Instrumentacin
Equipos:
Purelab
- 73 -
Cuando los taninos se extraen con agua caliente, algunos de esos compuestos
son parcialmente hidrolizados para formar cido glico. Los taninos son
compuestos cidos, lo cual se debe a la naturaleza de los grupos fenlicos y del
grupo carboxilo. El tratamiento qumico de los frutos vegetales (t, caf, nuez de
cola, etc.) con una base, como por ejemplo carbonato de sodio, convierte a los
taninos cidos en sus respectivas sales de sodio, las cuales son muy solubles en
agua por su naturaleza inica.
Aunque la cafena es soluble en agua, es mucho ms soluble en cloroformo y por
eso puede ser extrada con este disolvente orgnico, mientras las sales de sodio
del cido glico y los taninos permanecen en la fase acuosa. As, la extraccin
con cloroformo de la solucin bsica separa la cafena casi pura.
El sulfato de sodio anhidro acta eliminando toda el agua y las sales solubles en
agua que se mantienen en el disolvente orgnico (capa orgnica) o
accidentalmente transferido en la decantacin.
El disolvente orgnico puede ser eliminado fcilmente por evaporacin o por
destilacin, teniendo en cuenta su punto de ebullicin, o mediante vaco usando
un equipo de evaporacin rotatoria, para conseguir la cafena.
- 74 -
Extraccin
La extraccin es un proceso mediante el cual una sustancia que se encuentra en
una mezcla slida o disuelta en un determinado disolvente es transferida a otro
disolvente. Las razones ms frecuentes por las que se usa una extraccin en
Qumica Analtica son aislar, concentrar o separar un analito de una especie que
interfera en su anlisis. La sustancia a separar puede tratarse tanto de un slido
como de un lquido, y en funcin de tener una muestra slida o lquida, el
mtodo de trabajo ser diferente. Por lo tanto, la extraccin puede clasificarse
dependiendo del estado fsico de los materiales: slido-lquido o lquido-lquido.
Extraccin slido-lquido
- 75 -
Extraccin lquido-lquido
(13)
- 76 -
Peb (C)
Pf (C)
Constante
dielctrica
Miscibilidad
en agua
61,3
-63,5
4,7
Emulsiones
- 77 -
Filtracin
La filtracin es la operacin unitaria en la que el componente slido insoluble de
una suspensin slido-lquido se separa del componente lquido hacindolo pasar
a travs de una membrana porosa que retiene a las partculas slidas en su
superficie.
Se le denomina prefiltrado a la suspensin slido-lquido alimentada, filtrado al
componente lquido que pasa a travs de la membrana, a la membrana se le
conoce como el medio filtrante y a los slidos separados se les llama torta del
filtro.
Todo equipo de filtracin, independientemente de su diseo, debe tener un
soporte para el medio filtrante, un espacio para la acumulacin de slidos,
canales para alimentar el prefiltrado y para retirarlo, y un medio para inducir el
flujo del filtrado a travs del filtro. En algunas ocasiones es el lquido (el filtrado)
el que constituye al producto deseado, y en otras ocasiones la torta del filtro.
La filtracin puede efectuarse en caliente o fro, y realizarse por gravedad o por
vaco. Se escogi la filtracin en caliente y por gravedad.
La disolucin de la mezcla slida en el disolvente caliente, permite eliminar
mediante filtracin las impurezas insolubles, mientras la muestra permanece
disuelta en el disolvente caliente. La filtracin en caliente presenta algunas
ventajas como: es ms rpida; y se mantiene a la temperatura del disolvente
evitando la formacin de cristales en el papel de filtro y su contaminacin como
resultado del enfriamiento de la solucin.
Las filtraciones que se realizan en la separacin de la cafena se hacen con la
solucin caliente para evitar la formacin de cristales y obtener un rendimiento
ptimo. Esta operacin debe efectuarse con mucho cuidado y rpidamente, con
un mnimo de evaporacin en el embudo y provisto de un filtro de pliegues para
aumentar la velocidad de filtracin.
- 78 -
Evaporacin
El objetivo de esta operacin es concentrar una solucin que consta de un soluto
no voltil y un disolvente voltil. Se lleva a cabo vaporizando una parte del
disolvente con el fin de obtener una solucin concentrada.
Existen operaciones de extraccin en las que se le aaden grandes cantidades de
disolventes orgnicos, que es necesario eliminar para obtener los extractos o los
productos naturales en forma pura.
El equipo que se utiliz para este tipo de operacin es una manta calefactora ya
que permite realizar la evaporacin del disolvente en el matraz donde se
introduce la disolucin, mediante calentamiento y eliminando los disolventes
utilizados en la purificacin y aislamiento de compuestos orgnicos.
Esto permite la formacin de una pelcula de lquido muy fina y una gran
transferencia de calor entre la manta y el matraz, consiguindose una
evaporacin muy rpida.
Figura 41.
Desecantes
Cuando se lleva a cabo una extraccin la fase orgnica arrastra cierta cantidad
de agua por lo que, antes de realizar una posterior purificacin de los productos,
hay que secarla. Para ello se usan sustancias qumicas que reaccionan de alguna
forma con el agua o absorben sta, eliminndola, y que se denominan agentes
desecantes.
Se utiliz el sulfato sdico (Na2SO4) ya que es inerte e insoluble en los lquidos
orgnicos por lo que se puede utilizar para secar cualquier tipo de compuestos.
Es barato y presenta una gran capacidad, sin embargo, es lento pero eficaz.
Adecuado para desecar compuestos fcilmente descomponibles, como cidos
grasos, aldehdos, cetonas, halogenuros de alquilo.
Dependiendo del producto comercial (yerba mate, caf, bebida de cola, guaran,
chocolate, t o bebida energtica) que se utilice se opera con diferentes tcnicas
para la separacin y purificacin de la cafena. Cada uno de los ensayos
utilizados se describe paso a paso en los procedimientos normalizados de trabajo
(PNTs) que se pueden observar en el anexo 4 del PFC1 que se adjuntan en este
trabajo.
- 79 -
5.5. PUESTA
A
PUNTO
CROMATOGRFICO (HPLC)
DEL
MTODO
5.5.1.
Instrumentacin
Equipos:
Reactivos:
Cafena anhidra
Acetonitrilo HPLC
Agua HPLC
5.5.2.
- 80 -
- 81 -
FASE MVIL
COMPOSICIN
TIEMPO DE
RETENCIN
(min)
Agua-Acetonitrilo
70:30
1,27
Agua-Acetonitrilo
70:30
1,28
Agua-Acetonitrilo
70:30
1,31
Agua-Acetonitrilo
70:30
1,31
Agua-Acetonitrilo
70:30
1,31
Figura 42.
- 82 -
FASE MVIL
COMPOSICIN
TIEMPO DE
RETENCIN
(min)
Agua-Acetonitrilo
80:20
1,29
Solucin patrn
15,96 ppm
Agua-Acetonitrilo
80:20
1,32
de
cafena
de
- 83 -
FASE MVIL
COMPOSICIN
TIEMPO DE
RETENCIN
(min)
de
Agua-Acetonitrilo
85:15
2,15
Agua-Acetonitrilo
85:15
2,19
Agua-Acetonitrilo
85:15
1,88
Agua-Acetonitrilo
85:15
2,07
Agua-Acetonitrilo
85:15
1,97
Solucin patrn
15,96 ppm
de
cafena
de
cafena
de
Figura 44.
- 84 -
Solucin patrn
31,92 ppm
de
cafena
de
FASE MVIL
COMPOSICIN
TIEMPO DE
RETENCIN
(min)
Agua-Acetonitrilo
90:10
2,04
Figura 45.
- 85 -
FASE MVIL
COMPOSICIN
TIEMPO DE
RETENCIN
(min)
Agua-Acetonitrilo
30:70
1,19
30:70
1,00
30:70
0,81
30:70
0,80
(velocidad de 1
ml/min)
Agua-Acetonitrilo
(velocidad de 1,2
ml/min)
Agua-Acetonitrilo
(velocidad de 1,5
ml/min)
Agua-Acetonitrilo
(velocidad de 1,5
ml/min)
Para una fase mvil de 30% de agua y 70% de acetonitrilo a una velocidad de 1
ml /min:
Figura 46.
FASE MVIL
COMPOSICIN
TIEMPO DE
RETENCIN
(min)
Solucin patrn
31,92 ppm
de
cafena
de
Agua-Acetonitrilo
35:65
1,22
Solucin patrn
31,92 ppm
de
cafena
de
Agua-Acetonitrilo
40:60
1,21
Figura 47.
- 87 -
Figura 48.
FASE MVIL
COMPOSICIN
TIEMPO DE
RETENCIN
(min)
Solucin patrn
31,92 ppm
de
cafena
de
Agua-Acetonitrilo
25:75
1,25
Solucin patrn
31,92 ppm
de
cafena
de
Agua-Acetonitrilo
20:80
1,27
- 88 -
Figura 49.
Figura 50.
Una vez realizadas todas las pruebas necesarias y de acuerdo con los resultados
obtenidos, la fase mvil ptima que permita una mejor interaccin con la fase
estacionaria y la mejor separacin era la compuesta por la fase mvil aguaacetonitrilo en proporcin 20:80.
Al trabajar en una cromatografa de lquidos de alta resolucin (HPLC) en fase
reversa, la fase estacionaria de la columna es apolar y la fase mvil es polar.
Esto hace que primero eluya el ms polar que es el agua y despus eluya el
menos polar que es el acetonitrilo. Por lo que a la proporcin de 20% de agua
eluye primero (pasa de largo sin interaccionar con la cafena) y el 80% de
acetonitrilo retiene durante ms tiempo la cafena haciendo que su aparicin sea
alrededor de entre los 1,28 y 1,30 minutos de tiempo.
Al aumentar la polaridad de la fase mvil se aumenta el tiempo de retencin. Por
ello, en los primeros ensayos al ir aumentando ms la cantidad de agua (polar)
que de acetonitrilo (menos polar) se obtena un tiempo de retencin superior de
alrededor de los 2 minutos pero con un pico con una forma definida aunque con
una base ancha.
Por eso se decidi ir probando diferentes proporciones de fase mvil con una
mayor cantidad de acetonitrilo que de agua hasta encontrar la composicin
ptima de fase mvil agua-acetonitrilo en proporcin 20:80 que nos permita
obtener un tiempo de retencin superior al minuto (se gasta menos cantidad de
producto que si hubieran sido 2 minutos) y una forma de pico muy bien definida.
- 90 -
5.6. PUESTA
A
PUNTO
ESPECTROFOTOMTRICO UV
DEL
MTODO
5.6.1.
Instrumentacin
Equipos:
Reactivos:
Cafena anhidra
Agua Milli-Q (Millipore).
cido clorhdrico 0,01 M
5.6.2.
- 91 -
Prueba
2
Prueba
Prueba
21,2220
21,0910
21,0880
19,7090
0,2563
0,2985
0,3133
0,1868
0,5298
0,6208
0,6519
0,4170
0,9994
0,9992
0,9991
0,9996
Coeficiente k1 (mg/L)
Coeficiente de correlacin (R )
- 92 -
Este valor, garantiza la bondad del ajuste de los puntos experimentales a la recta
de calibrado.
3) Peso de caf: 400 mg de caf
Siguiendo los pasos descritos en el mtodo de extraccin (captulo 5), se decide
extraer la cafena de un caf comercial (caf natural Carrefour), iniciando la
extraccin con 400 mg de caf.
Absorbancia (AU)
271
1,5544
271
1,5595
271
1,5586
- 93 -
Absorbancia (AU)
266
1,1881
266
1,1901
266
1,1898
271
0,8433
271
0,8468
271
0,8492
- 94 -
CAPTULO 6:
RESULTADOS Y
DISCUSIN
- 95 -
6.1.
Figura 53.
REA
TIEMPO DE RETENCIN
1.195.488,17
1,26
2.344.794,17
1,27
16
4.664.782,50
1,28
24
6.921.478,17
1,29
32
9.499.379,17
1,30
Area (uVs)
8.000.000,00
6.000.000,00
4.000.000,00
2.000.000,00
0,00
0
10
15
20
25
Figura 58.
- 98 -
30
35
Area (uV s)
8.000.000,00
6.000.000,00
4.000.000,00
2.000.000,00
0,00
0
10
15
20
25
30
35
(14)
R2= 0,99940061
As que teniendo en cuenta que la ecuacin obtenida en la curva de calibrado es:
Y=mx+b
Donde:
(15)
Y: rea
m: Pendiente de la curva de calibrado
x: Concentracin de cafena de las muestras inyectadas (ppm)
b: Ordenada en el origen de la curva de calibrado
- 99 -
Caf de tostadero
En la siguiente tabla se representan las reas de los picos de los cromatogramas
obtenidos de las muestras de cafena del caf natural de Brasil de tostadero Bon
Mercat y el tiempo de retencin de las diferentes inyectadas realizadas.
Tabla 4. Muestras de cafena de caf, tiempo de retencin y reas
Caf Brasil natural. Tostadero Bon Mercat
HPLC
Nombre
Brasil 1
Brasil 2
Brasil 3
Valoracin
Tiempo
retencin
(min)
rea
1,31
3.107.982,5000
1,31
3.190.141,0000
1,33
3.007.938,0000
1,31
2.950.290,0000
1,32
3.365.353,0000
1,32
3.312.392,0000
rea media
3.149.061,7500
2.979.114,0000
3.338.872,5000
La concentracin del caf natural Brasil del tostadero Bon Mercat se desarrolla
con los resultados obtenidos de todas las extracciones, ya que los resultados son
muy similares.
(16)
Figura 60.
(17)
Caf natural
En la siguiente tabla se representan las reas de los picos de los cromatogramas
obtenidos de las muestras de cafena del caf natural 100% arabiga Saimaza
Brasil y el tiempo de retencin de las diferentes inyectadas realizadas.
Tabla 5. Muestras de cafena de caf, tiempo de retencin y reas
Caf molido de tueste natural 100% Arbiga. Saimaza Brasil.
HPLC
Nombre
Saimaza Brasil 1
Saimaza Brasil 2
Valoracin
Tiempo
retencin
(min)
rea
1,33
3.018.386,0000
1,33
2.964.731,5000
1,32
2.943.600,0000
1,32
3.292.049,8300
1,33
3.154.807,0000
1,32
3.087.855,0000
rea media
2.975.572,50
3.178.237,28
La concentracin del caf natural Saimaza Brasil se desarrolla con los resultados
obtenidos de todas las extracciones, ya que los resultados son muy similares.
(18)
Figura 61.
- 101 -
(19)
Caf mezcla
En la siguiente tabla se representan las reas de los picos de los cromatogramas
obtenidos de las muestras de cafena del caf mezcla (50% natural y 50%
torrefacto) Bonka y el tiempo de retencin de las diferentes inyectadas
realizadas.
Tabla 6. Muestras de cafena de caf, tiempo de retencin y reas
Caf molido mezcla (50 % natural y 50 % torrefacto). Bonka
HPLC
Nombre
Bonka mezcla
50/50 1
Bonka mezcla
50/50 2
Valoracin
Tiempo
retencin
(min)
rea
1,32
4.352.926,5000
1,32
4.488.246,0000
1,32
4.126.301,0000
1,31
4.224.099,0000
1,32
4.222.980,0000
1,32
4.377.748,0000
rea media
4.322.491,17
4.274.942,33
(20)
(21)
Marcilla
descafeinado
natural 1
Marcilla
descafeinado
natural 2
Valoracin
Tiempo
retencin
(min)
rea
1,27
1.046.912,1400
1,27
1.085.960,0000
1,27
1.072.296,0000
1,27
920.685,5100
1,27
972.508,0000
1,27
972.180,0000
rea media
1.068.389,38
955.124,5033
(22)
(23)
En este caso se tuvo que extrapolar ya que el rango de las soluciones patrn
abarcan de los 4 a los 32ppm. Los 3,51 ppm estn por debajo de ese rango.
Figura 63.
Da mezcla 50/50
descafeinado 1
Da mezcla 50/50
descafeinado 2
Valoracin
Tiempo
retencin
(min)
rea
1,26
602.392,0000
1,26
673.412,5000
1,26
618.109,2200
1,28
346.080,0000
1,27
380.568,9300
1,29
439.161,5000
rea media
631.304,5733
388.603,4767
(24)
(25)
En este caso se tuvo que extrapolar ya que el rango de las soluciones patrn
abarcan de los 4 a los 32ppm. Los 1,80 ppm estn por debajo de ese rango.
Caf soluble
En la siguiente tabla se representan las reas de los picos de los cromatogramas
obtenidos de las muestras de cafena del caf soluble natural Nescaf y el tiempo
de retencin de las diferentes inyectadas realizadas.
Tabla 9. Muestras de cafena de caf, tiempo de retencin y reas
Caf soluble de tueste 100% natural. NESCAF Classic Natural
HPLC
Nombre
Nescaf soluble
natural 1
Nescaf soluble
natural 2
Valoracin
Tiempo
retencin
(min)
rea
1,33
8.615.776,5000
1,33
8.796.931,5000
1,31
8.531.189,5000
1,33
8.972.830,0000
1,33
8.875.422,0000
1,33
8.974.824,0000
rea media
8.647.965,83
8.941.025,33
La concentracin del caf soluble natural Nescaf se desarrolla con los resultados
obtenidos de todas las extracciones.
(26)
(27)
Valoracin
Tiempo
retencin
(min)
rea
Carrefour soluble
descafeinado natural
1
1,30
845.436,0000
1,32
810.408,0000
1,31
924.346,0000
1,30
896.527,7500
Carrefour soluble
descafeinado natural
2
rea media
827.922,0000
910.436,8750
(28)
(29)
En este caso se tuvo que extrapolar ya que el rango de las soluciones patrn
abarcan de los 4 a los 32ppm. Los 3,03 ppm estn por debajo de ese rango.
- 106 -
100 ml sol A
- 107 -
Discusin de resultados
Se representa en tanto por ciento la concentracin de cafena de los diferentes
cafs y se observa la variacin entre cada uno de ellos.
En los siguientes diagramas, se muestran las diferencias de concentraciones de
las 32 muestras analizadas, en funcin de los cafs de diferente origen
adquiridos en el tostadero Bon Mercat (muestras de la 1 a la 7) y segn los
diferentes tipos de caf de marcas comerciales: naturales (muestras de la 8 la
18), mezcla (muestras de la 19 a la 24), naturales descafeinados (muestras 25 y
la 26), mezclas descafeinados (muestras 27 y 28), solubles naturales (muestras
29 y 30) y solubles descafeinados (muestras 31 y 32) .
3,00
0,25
0,24
0,50
0,29
0,17
0,15
0,46
0,55
1,04
0,98
1,30
1,22
1,41
1,13
1,31
1,05
1,48
0,89
1,29
1,58
0,89
0,81
1,01
0,82
0,88
1,00
0,95
1,50
0,95
0,90
% Cafena
2,00
1,71
1,27
1,48
2,50
0,00
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32
Muestra
- 108 -
1,71
1,58
1,60
1,48
% Cafena
1,40
1,27
1,20
0,95
1,00
0,95
0,90
0,80
0,60
0,40
0,20
0,00
Kenya
Costa Rica
Nicaragua
Guatemala
Brasil
Colombia
Sumatra
Muestra
- 109 -
1,60
1,40
1,31
1,29
% Cafena
1,20
1,00
0,89
1,05
1,01
0,81
0,82
0,88
0,89
0,80
0,55
0,60
0,40
0,20
ar
re
fo
ur
na
ar
tu
re
ra
fo
l
ur
C
ol
om
C
ar
bi
a
re
fo
ur
Et
C
io
ar
p
re
a
fo
ur
Ar
b
Sa
ig
im
a
az
a
C
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om
Sa
bi
a
im
az
a
Br
as
Se
il
ns
eo
K
en
ya
Se
ns
eo
H
B
ac
ra
en
sil
da
do
na
tu
Bo
ra
nk
l
a
C
ol
om
M
ex
bi
iq
a
ue
C
hi
ap
as
0,00
Muestra
En segundo lugar, se exponen los valores de tanto por ciento de cafena presente
en los cafs mezcla de diversas marcas comerciales existentes en el mercado.
Los cafs con mezcla natural y torrefacto se consumen habitualmente, puesto
que la utilizacin exclusiva de caf natural produce una infusin poco densa y
con un color claro, y al mezclarlo con caf torrefacto se obtiene ms cuerpo y
color.
Entre ellos tenemos muestras de Soley mezcla (50 % natural y 50 % torrefacto),
Bonka mezcla Especial (30 % natural y 70 % torrefacto), Bonka mezcla (70 %
natural y 30 % torrefacto), Bonka mezca (50 % natural y 50 % torrefacto), Dia
Express mezcla (70 % natural y 30 % torrefacto) y Dia mezcla (50 % natural y
50 % torrefacto).
1,60
1,40
% Cafena
1,20
1,30
1,22
1,13
1,04
1,00
0,98
0,80
0,60
0,40
0,20
0,00
Soley mezcla
Bonka mezcla
30/70
Bonka mezcla
70/30
Bonka mezcla
50/50
Dia Express
mezcla 70/30
Dia mezcla
50/50
Muestra
0,29
% Cafena
0,25
0,20
0,17
0,15
0,10
0,05
0,00
Marcilla descafeinado natural
Muestra
- 112 -
0,46
0,45
0,40
% Cafena
0,35
0,30
0,25
0,20
0,15
0,15
0,10
0,05
0,00
Dia mezcla 50/50 descafeinado
Muestra
- 113 -
% Cafena
2,60
2,55
2,50
2,49
2,45
2,40
Nescaf soluble natural
Muestra
% Cafena
0,25
0,25
0,24
0,24
0,24
0,23
Carrefour soluble descafeinado natural
Muestra
- 115 -
% Cafena
2,00
1,50
1,26
1,18
1,00
1,00
0,50
0,23
0,30
0,24
0,00
Natural de
to stadero
Natural
co mercial
M ezcla
co mercial
Descafeinado
natural
co mercial
Descafeinado
mezcla
co mercial
Muestra
Mediante esta representacin grfica puede observarse como los cafs solubles
naturales contienen una proporcin de cafena superior a los dems tipos de
caf, ya que como se ha comentado anteriormente, son elaborados con los
granos de caf de variedad robusta.
En ltimo lugar, tenemos los cafs descafeinados naturales y solubles naturales,
con una proporcin de cafena de 0,23 y 0,24% respectivamente.
- 116 -
1,71
1,80
1,31
1,40
% Cafena
1,58
1,48
1,60
1,27
1,20
0,95
1,00
0,81
1,05
0,90
0,80
0,88
0,89
0,89
0,95
0,82
0,55
0,60
0,40
0,20
Br
Se
as
ns
il
eo
B
Sa
ra
im
sil
az
a
Br
as
il
C
C
ar
o
lo
re
m
fo
bi
ur
a
C
ol
Bo
om
nk
bi
a
a
C
Sa
ol
im
om
az
bi
a
a
C
M
ol
ex
om
iq
bi
ue
a
C
hi
ap
as
Su
m
at
ra
Se
n
se
o
Ke
ny
a
C
K
ar
en
re
ya
fo
ur
Et
io
p
C
C
a
ar
o
ac
st
a
ol
R
il lo
ic
a
N
ic
ar
ag
ua
G
ua
te
m
al
a
0,00
Muestra
Los cafs estn representados por colores dependiendo del pas y continente del
que proceden los cafs ms conocidos. En colores anaranjados se encuentran los
del continente africano, en gama de colores verdosos los pases del continente
suramericano y en color lila los del continente asitico.
En primer lugar, se encuentra el caf de Kenya del tostadero Bon Mercat y el
caf Kenya de la marca Senseo. Como se puede ver en el diagrama, con un
crculo de color naranja, ambos presentan resultados variables, aun tratndose
del mismo pas de procedencia.
A continuacin, se observan los diferentes tipos de caf analizados en el
laboratorio segn el pas de origen de Brasil. Estos valores estn indicados
grficamente por un eclipse de color verde oscuro. Estas muestras son: el caf
Brasil de tostadero Bon Mercat, el caf Brasil de la marca Senseo y el caf Brasil
de la marca Saimaza. El tanto por ciento de cafena presente en estos cafs
presentan similitud, ya que los valores hallados son de 0,90%, 1,05% y 0,88%.
Finalmente, hay otros 4 tipos de cafs diferentes que coinciden en el pas de
procedencia. Se trata del caf de Colombia que est indicado en la
representacin grfica rodeado por un smbolo elptico de color verde. Entre ellos
tenemos muestras de caf de Colombia del tostadero Bon mercat, Carrefour
Colombia, Bonka Colombia y Saimaza Colombia. Como puede verse, los valores
son bastante equivalentes, a exepcin del caf del tostadero que se diferencia
mucho de los otros tres tipos. Los cafs de marca comercial, se encuentran entre
un rango de valores comprendico entre 0,82% y 1,58%.
- 117 -
6.2. RESULTADOS
OBTENIDOS
ESPECTROFOTMETRO UV-VIS
POR
6.2.1.
ERROR (%)
4,00
0,2179
0,3004
8,00
0,4267
0,3003
16,00
0,8298
0,3000
24,00
1,2315
0,3004
32,00
1,6018
0,3002
Figura 78.
Figura 79.
- 119 -
y = 0, 0496 x + 0,029
(30)
R2= 0,9996
As que teniendo en cuenta que la ecuacin obtenida en la curva de calibrado es:
Y=mx+b
(31)
Donde:
Y: Absorbancia
m: Pendiente de la curva de calibrado
x: Concentracin de cafena de las muestras (ppm)
b: Ordenada en el origen de la curva de calibrado
As que teniendo en cuenta que la ecuacin obtenida en la curva de calibrado es:
A partir de las absorbancias de los espectros obtenidos y con la ecuacin de la
curva de calibrado se obtiene la cantidad de cafena contenida en las muestras
de caf. Para la preparacin de todas las muestras de cafena de caf obtenidas
mediante extraccin (ver Captulo 5).
Clculos
En los clculos para cuantificar la cantidad de cafena en cada caf, se utilizaron
todos los valores de absorbancias resultantes de las diversas muestras de cafena
de caf, a excepcin de los valores de absorbancias que despreciamos, ya que
pensamos que pudieron haberse producido prdidas en el proceso de extraccin.
En el Anexo 1, se pueden ver los resultados obtenidos en cada una de las
extracciones de los diferentes cafs, as como los resultados tabulados.
Las muestras extradas de caf se analizan en el espectro y se determina la
absorbancia de cada una de ellas.
- 120 -
- 121 -
- 122 -
Figura 84. Espectro del caf de Guatemala de todas las extracciones con
ajuste espectral de 190 a 340 nm
Figura 85. Espectro del caf de Guatemala de todas las extracciones con
ajuste espectral reducido de 245 a 340 nm
- 123 -
Guatemala 1
Guatemala 2
Guatemala 3
Valoracin
Pico
(nm)
Abs(AU)
273,0
0,5840
273,0
0,5876
273,0
0,5862
271,0
0,6189
271,0
0,6224
271,0
0,6216
272,0
0,6059
272,0
0,6094
272,0
0,6082
Abs media
(AU)
0,5860
0,6210
0,6078
Y = 0, 0496 x + 0,029
(32)
x = (0,6049 -0,029)/0,0496
(33)
- 124 -
Figura 86. Espectro del caf de Costa Rica de todas las extracciones con
ajuste espectral de 190 a 340 nm
Figura 87. Espectro del caf de Costa Rica de la tercera extraccin por
triplicado con ajuste espectral reducido de 245 a 340 nm
- 125 -
100 ml sol A
- 126 -
Discusin de resultados
Se representa en tanto por ciento la concentracin de cafena de los diferentes
cafs y se observa la variacin entre cada uno de ellos.
En los siguientes diagramas, se muestran las diferencias de concentraciones de
las 32 muestras analizadas, en funcin de los cafs de diferente origen
adquiridos en el tostadero Bon Mercat (muestras de la 1 a la 7) y segn los
diferentes tipos de caf de marcas comerciales: naturales (muestras de la 8 la
18), mezcla (muestras de la 19 a la 24), naturales descafeinados (muestras 25 y
la 26), mezclas descafeinados (muestras 27 y 28), solubles naturales (muestras
29 y 30) y solubles descafeinados (muestras 31 y 32) .
- 127 -
2,50
2,13
2,09
% Cafena
2,00
1,36
1,50
1,00
0,97
1,00
Guatemala
Brasil
1,10
0,62
0,50
0,00
Kenya
Costa Rica
Caracolillo
Colombia
Sumatra
Muestra
Figura 89. Representacin de la concentracin de cafena segn pas de
origen
- 128 -
1,60
1,40
1,34
1,14
0,97
0,85
0,92
0,96
0,94
0,97
0,88
fo
ur
C
na
ar
tu
re
ra
fo
l
ur
C
ol
om
C
ar
bi
re
a
fo
ur
Et
C
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ar
p
re
a
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Ar
Sa
b
im
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az
a
C
ol
om
Sa
bi
a
im
az
a
Br
as
Se
il
ns
eo
K
en
ya
Se
ns
eo
H
B
ac
ra
en
sil
da
do
na
tu
Bo
ra
nk
l
a
C
ol
M
om
ex
bi
iq
a
ue
C
hi
ap
as
1,80
1,60
1,40
1,20
1,00
0,80
0,60
0,40
0,20
0,00
ar
re
% Cafena
Muestra
- 129 -
En segundo lugar, se exponen los valores de tanto por ciento de cafena presente
en los cafs mezcla de diversas marcas comerciales existentes en el mercado.
Los cafs con mezcla natural y torrefacto se consumen habitualmente, puesto
que la utilizacin exclusiva de caf natural produce una infusin poco densa y
con un color claro, y al mezclarlo con caf torrefacto se obtiene ms cuerpo y
color.
Entre ellos tenemos muestras de Soley mezcla (50 % natural y 50 % torrefacto),
Bonka mezcla Especial (30 % natural y 70 % torrefacto), Bonka mezcla (70 %
natural y 30 % torrefacto), Bonka mezca (50 % natural y 50 % torrefacto), Dia
Express mezcla (70 % natural y 30 % torrefacto) y Dia mezcla (50 % natural y
50 % torrefacto).
1,60
1,55
1,49
% Cafena
1,50
1,45
1,40
1,44
1,38
1,37
1,36
1,35
1,30
1,25
Soley mezcla Bonka mezcla Bonka mezcla Bonka mezcla Dia Express
30/70
70/30
50/50
mezcla 70/30
Dia mezcla
50/50
Muestra
Figura 91. Representacin de la concentracin de cafena de los cafs
mezcla de marcas comerciales.
- 130 -
0,45
0,40
0,35
% Cafena
0,30
0,25
0,21
0,20
0,15
0,10
0,05
0,00
Marcilla descafeinado natural
Muestra
Figura 92. Representacin de la concentracin de cafena de los cafs
mezcla de marcas comerciales.
- 131 -
0,80
0,70
% Cafena
0,60
0,50
0,40
0,30
0,20
0,18
0,10
0,00
Dia mezcla 50/50 descafeinado
Muestra
2,58
2,56
% Cafena
2,54
2,52
2,50
2,49
2,48
2,46
2,44
Nescaf soluble natural
Muestra
- 133 -
0,32
0,31
% Cafena
0,30
0,29
0,28
0,28
0,27
0,26
Carrefour soluble descafeinado natural
Muestra
Figura 95. Representacin de la concentracin de cafena de los cafs
solubles descafeinados naturales de marcas comerciales.
- 134 -
2,53
2,50
% Cafena
2,00
1,50
1,28
1,43
1,09
1,00
0,30
0,50
0,45
0,30
0,00
Natural de
to stadero
Natural
co mercial
M ezcla
co mercial
Descafeinado Descafeinado
mezcla
natural
co mercial
co mercial
Muestra
So luble
natural
co mercial
So luble
natural
descafeinado
co mercial
Mediante esta representacin grfica puede observarse como los cafs solubles
naturales contienen una proporcin de cafena superior a los dems tipos de
caf, ya que como se ha comentado anteriormente, son elaborados con los
granos de caf de variedad robusta.
En ltimo lugar, tenemos los cafs descafeinados naturales y solubles naturales,
con una proporcin de cafena de 0,30 %.
- 135 -
Los cafs estn representados por colores dependiendo del pas y continente del
que proceden los cafs ms conocidos. En colores anaranjados se encuentran los
del continente africano, en gama de colores verdosos los pases del continente
suramericano y en color lila los del continente asitico.
En primer lugar, se encuentra el caf de Kenya del tostadero Bon Mercat y el
caf Kenya de la marca Senseo. Como se puede ver en el diagrama, con un
crculo de color verde, ambos presentan resultados variables, aun tratndose del
mismo pas de procedencia.
A continuacin, se observan los diferentes tipos de caf analizados en el
laboratorio con pas de origen Brasil. Estos valores estn indicados grficamente
por un eclipse de color rojo. Estas muestras son: el caf Brasil de tostadero Bon
Mercat, el caf Brasil de la marca Senseo y el caf Brasil de la marca Saimaza. El
tanto por ciento de cafena presente en estos cafs presentan similitud, ya que
los valores hallados son de 1,00%, 0,94% y 0,96%.
Finalmente, hay otros 4 tipos de cafs diferentes que coinciden en el pas de
procedencia. Se trata del caf de Colombia que est indicado en la
representacin grfica rodeado por un smbolo circular de color azul. Entre ellos
tenemos muestras de caf de Colombia del tostadero Bon mercat, Carrefour
Colombia, Bonka Colombia y Saimaza Colombia. Como puede verse, los valores
son bastante equivalentes, a exepcin del caf del tostadero que se diferencia
mucho de los otros tres tipos. Los cafs de marca comercial, se encuentran entre
un rango de valores comprendico entre 0,97%-0,92%.
- 136 -
- 137 -
CAPTULO 7:
CONCLUSIONES
- 139 -
CAPTULO 8:
EVALUACIN
ECONMICA
Amortizaciones
Costes personales
Coste total
- 141 -
8.1.
Costes energticos
Para calcular este gasto se ha estimado una potencia de 4,4 kW, teniendo en
cuenta que el proyecto dura 4 meses y que se ha trabajado con una dedicacin
de 8 horas por da, se obtiene el coste total de electricidad del proyecto. Para
calcular el coste total de electricidad se tiene que aplicar un 18% de IVA.
Concepto
Clculos
Importe
()
18 %
IVA
Total ()
Potencia
2,7841
0,5011
3,2853
Consumo
1 kW x 8 h/sesin x 55 sesiones x
0,16 /kWh
Impuesto sobre
electricidad
1,7271
0,3109
2,0379
Conservacin del
aparato
1,0800
0,1944
1,2744
23,4667 4,2240
Total
27,6907
34,2883
- 142 -
Para calcular los gastos en agua se ha decidido fijar el consumo en 0,01 L/h de
agua de la red, ya que se utiliza para realizar experimentos y para limpiar el
material antes y despus de su uso. Se obtiene una estimacin del coste total del
agua del proyecto durante estos 4 meses (440h) aplicando un 8% de IVA al
consumo de agua.
Tabla 14. Gastos de agua
Servicios de
agua
Volumen
(L)
Sesiones
(das)
Volumen proyecto
(L)
Precio unitario
(/L)
Importe
()
Consumo
35
55
1925
0,00400
7,7000
Canon
35
55
1925
0,00039
0,7508
Alcantarillado
35
55
1925
0,00014
0,2695
Total servicios
8,7203
9,42
Coste de agua
34,29
Coste total
energtico
43,71
8.2.
- 143 -
Material
Precio
Precio
unitario ()
material ()
70,23
70,23
Caractersticas Cantidad
Cubeta espectrofotmetro
Cuentagotas
5 mL
0,13
0,26
Desecador vidrio
grande
83,73
83,73
Embudo alemn
mediano
1,66
Embudo Bchner
mediano
8,46
16,92
Embudo decantacin
250 mL
18,82
37,64
10,71
21,42
150,00
150,00
Equipo de reflujo
11,57
11,57
Esptulas
1,45
2,90
0,50
2,00
Jeringa plstico
0,12
0,12
34,22
34,22
Matraz aforado
25 mL
2,07
4,14
Matraz aforado
50 mL
2,09
4,18
Matraz aforado
100 mL
2,37
4,74
Matraz erlenmeyer
100 mL
8,27
16,54
Matraz kitasato
1000 mL
12,73
12,73
250 mL
2,10
4,20
2,10
4,20
Papel de filtro
40
0,07
2,80
Pera de goma
4,29
8,58
Pipetas aforadas
2 mL
1,54
1,54
Pipetas aforadas
5 mL
1,54
1,54
Pipetas aforadas
10 mL
1,76
1,76
Pipetas aforadas
20 mL
2,17
2,17
Pipetas graduadas
1 mL
1,43
1,43
8,35
16,70
3,85
3,85
Tubos de ensayo
32
0,03
0,96
Tubos eppendorf
150
0,01
1,50
Soportes
Probeta graduada
100 mL
Vaso de precipitados
50 mL
0,81
1,62
Vaso de precipitados
100 mL
0,85
0,85
Vaso de precipitados
500 mL
1,37
1,37
Total
530,45
- 144 -
Hay que sealar que estos gastos son amortizables a unos 4 aos as que el
gasto real queda reducido a:
530,45
4 meses = 44,20
4 aos 12 meses
(34)
Cantidad
Precio unitario
()
Precio productos
()
Agua Mili-Q
5000 mL
0,13
67,00
Acetato de plomo
25 mL
1,35
1,35
Acetona
250 mL
3,00
3,00
2,5L x 2
32,50
65,00
Producto
Acetonitrilo
HPLC
grado
cido clorhdrico
10 mL
1,60
1,60
cido ntrico
20 mL
1,92
1,92
cido sulfrico
25 mL
1,50
1,50
Cafena anhidra
100 g
22,24
22,24
32 Cafs
30 g
55,00
55,00
Carbonato de sodio
150 g
3,68
3,68
Cloroformo
1500 mL
59,55
59,55
0,69
0,69
12,15
12,15
3,83
3,83
5,22
5,22
Vaselina
1,56
1,56
Total
305,28
Cloruro
0,25M
de
amonio
25 g
Isopropanol
500 mL
Sulfato de sodio
150 g
44,20
Coste de reactivos
305,28
Coste total
349,48
- 145 -
8.3.
Amortizaciones
Cuota anual =
Valor amortizable ( )
Tiempo de vida til (ao )
(35)
Cuota cuatrimestral =
Valor adquisicin ( )
2 Tiempo de vida til (ao ) N proyectos
(36)
Precio
Amortizacin
amortizacin
anual ()
cuatrimestral ()
30.000,00
24
1.250,00
312,00
900,00
10
90,00
22,00
11.600,00
10
1.160,00
290,00
Balanza analtica
950,00
20
47,00
11,00
Ultrasonidos
385,71
10
38,00
9,00
890,00
10
89,00
22,00
Vitrina extractora
1.800,00
20
90,00
22,00
Manta calefactora
314,00
10
31,00
7,00
Total
695,00
Material
Cromatgrafo HPLC
Columna
Espectrofotmetro
- 146 -
8.4.
Costes de personal
En este proyecto se han dedicado unas 300 horas de laboratorio y unas 140 de
oficina para la teora y la redaccin del proyecto
Los costes de personal han sido calculados a partir de la siguiente frmula:
)
ao persona
horas trabajadas
ao
SBA + SS (
Costes personales() = RH
(37)
Donde:
RH: recursos humanos asignados al proyecto (hora persona)
SBA: salario bruto anual
SS: cuota de empresa de la seguridad social, es un 32% sobre el SBA
12000 + 3840
= 5.280
1320
(38)
Personal de laboratorio
12.000
3.840
15.840
Horas/ao
RH (h)
SBA + SS()
Coste total ()
1.320
440
15.840
5.280
- 147 -
8.5.
Coste Total
44
349
Amortizaciones
695
Coste de personal
5.280
Subtotal
6.368
10% Imprevistos
Total
637
7.005
- 148 -
CAPTULO 9:
SEGURIDAD Y MEDIO
AMBIENTE
Hay que llevar cuidado con el agua ya que en contacto con aparatos
elctricos puede inutilizarlos en caso de vertido o puede provocar
cortocircuitos.
Hay que tener el lugar de trabajo limpio y ordenado para evitar riesgos de
vertidos y llevar cuidado con el material de vidrio y no influir en su rotura.
- 149 -
Medio ambiente
En el laboratorio se generan residuos lquidos y slidos que se deben separar y
clasificar segn sus componentes para despus poder gestionarlos segn su
peligrosidad y no contaminar el medio ambiente.
La cafena no se degrada as que puede contaminar ros y el mar si llega a travs
de los desages.
- 150 -
Los residuos procedentes de la salida del detector del HPLC (acetonitrilo, agua,
metanol) se habilitaron en un bidn etiquetado como mezclas de disolventes no
halogenados de HPLC.
Los dems productos con los que se ha trabajado deben ser depositados en los
bidones del laboratorio para despus ser procesados segn la normativa vigente
de gestin de residuos (ver anexo X Gestin de residuos).
- 151 -
CAPTULO 10:
BIBLIOGRAFA
- 153 -
- 154 -
of
substance
abuse:
R.E. Dodd. Qumica inrganica experimental: una gua de trabajo de laboratorio. Barcelona,
Editorial Reverte, 1965.
Rogelio Ocampo, Luz A. Ros, Luz A. Betancur, Diana M. Ocampo. Curso prctico de qumica
orgnica. Enfocado a biologa y alimentos. Editorial Universidad de Caldas, 2008.
Sharon M. Lewis. Enfermeria medico quirrgica. Madrid, Editorial Elsevier Espaa, 6 Edicin, 2004.
Shawn M. Talbott, Kerry Hughes. The Health Professionals Guide to Dietary Supplements.
Philadelphia, Editorial Lippincott Williams & Wilkins, 2007.
Stavros Kromidas. HPLC made to measure: a practical handbook for optimization. Weinheim, WileyVCH, 2006.
T.A. Geissman. Principios de qumica orgnica. Barcelona, Editorial Reverte, 2 Edicin, 1973.
Vctor Manuel Rodrguez Rivera, Edurne Simn Magro. Bases de la alimentacin humana. Espaa,
Editorial Gesbiblo, S.L., 2008.
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