FACULTAD DE INGENIERA QUMICA Y AGROINDUSTRIA

DEPARTAMENTO DE CIENCIA DE ALIMENTOS Y BIOTECNOLOGA

LABORATORIO DE MICROBIOLOGA
PRACTICA N6
PRODUCCIN DE BIOMASA - PREINFORME
Grupo: 4
Integrantes: Gmez Ana, Ramos Mara Elisa, Sols Cristhian
Fecha de entrega: 14 de diciembre de 2015
GRUPO CONTROL
1. En qu consiste el mtodo de contaje directo al microscopio?
En este mtodo se coloca un volumen conocido de cultivo y el recuento se hace por
microscopa y se puede calcular la cantidad de microorganismos por mililitro.
Recuento microscpico: Es una tcnica comn muy utilizada por ser rpida y barata,
utiliza un equipamiento fcilmente disponible en un laboratorio de microbiologa. Para
estos recuentos se utilizan generalmente cmaras de recuentos, aunque tambin pueden
realizarse a partir de muestras filtradas en membranas y transparentizadas o teidas con
colorantes fluorescentes. (Microbiologa, 2015)
Las cmaras ms utilizadas son las de Hawksley y la de Petroff-Hausser. La primera tiene
la ventaja que puede ser utilizada con objetivos de inmersin, aunque la mayora de los
recuentos se realizan con objetivos secos. Una de las mayores ventajas del recuento
microscpico es brindar informacin adicional sobre el tamao y la morfologa de los
objetos contados.

Cmara de recuento de Petroff-Hausser

Tipo de rea
cuadro
[cm2]
Cuadrad 1.00
o total
10-2
Cuadrad 4.00
o grande 10-4
Cuadrad
2.50
o
10-5
pequeo

Volumen Factor
[ml]
[1/Volumen]
x 2.00 x 10
5.00 x 104
5
x 8.00 x 107

x 5.00 x 108

1.25 x 106
2.00 x 107

1/Dilucin: Inversa de la dilucin utilizada para llenar la cmara de recuento.

Nmero de cuadrados contados: Cantidad de cuadrados de la cmara que se

utilizaron para contar un el nmero de bacterias.

Volumen del cuadrado: Volumen de cada cuadrado de la cmara. Depende del tipo
de cuadrado en donde se realiz el recuento. Por ejemplo, cada cuadrado pequeo
tiene un volumen de 5 x 10-8 ml (50 m x 50 m x 20 m = 5 x 104 m 3 = 5 x 10-8
ml).

Cules son sus limitaciones?

La mayor dificultad del recuento en cmara es obtener reproductibilidad en el llenado de la
cmara con lquido. Otra dificultad es la adsorcin de las clulas en las superficies del
vidrio, incluyendo pipetas. Esta adsorcin es crtica en el proceso de dilucin de la muestra
y se minimiza al realizar las diluciones en medios de alta fuerza inica (solucin fisiolgica
o medios mnimos sin fuente de carbono) (Microbiologa, 2015).

2. Cmo se obtiene la velocidad especfica de crecimiento, tiempo medio de

generacin y nmero de generaciones (valores cinticos) en la produccin de
biomasa?
VELOCIDAD ESPECFICA DE CRECIMIENTO
Segn J, W. Marison (1987) la relacin entre la rapidez especfica de crecimiento y la
concentracin de substrato, S es una hiprbola, una curva de saturacin similar a la que
describe la cintica enzimtica tipo Michaelis-Menten. Monod propuso una expresin, la
Ecuacin de Monod, para describir esta curva.

Figura N1: Efecto de la concentracin del substrato sobre la tasa especifica de crecimiento
= m
=
m=
k s=

s
k s +s

Es la rapidez especfica de crecimiento

(h1 )

Es la rapidez especfica de crecimiento mxima

Constante de Monod es la concentracin para la cual la tasa de

crecimiento tiene la mitad de su valor mximo.

s= Es la concentracin de substrato ( g l1)
Durante la fase de crecimiento exponencial, S>ks y, en consecuencia

= m

es el cultivo intermitente la poblacin crece a la mxima rapidez posible.

ks

es decir

Representa

la afinidad del organismo por el substrato. En general, los valores de

ks

son

extremadamente bajos y, en consecuencia, son difciles de determinar usando las tcnicas

de cultivo por lote. Para las fuente de carbono y energa, los valores de

ks

, son

aproximadamente de 10

2+ , 10 M
+ y Mg , para el O2 , a 106 M y
, para el fosfato,
K
8

para vitaminas y elementos traza, 10

a 10

M.

La ecuacin de Monod se puede linealizar tomando los recprocos para obtener la

expresin:
1 ks 1 1
= +
m s m
Una grfica de 1/ versus 1/S, produce una lnea recta con pendiente ks/m, abscisa al
origen -1/ks y ordenada al origen m.
TIEMPO MEDIO DE GENERACIN
El crecimiento microbiano unicelular es autocataltico, de modo que la velocidad de
crecimiento es proporcional a la concentracin de clulas ya presente. Durante el
crecimiento exponencial, el peso celular seco (o nmero) aumenta como sigue:
X 0 2 X 0 4 X 0 8 X 0 n X 0
Donde X es el peso seco celular

(g l1)

y el intervalo es constante y se denomina

tiempo de generacin (td).

En consecuencia, el nmero de duplicaciones, n, despus del tiempo t, est dado por
t
n=
td
Se deduce la densidad celular (
presente originalmente (
n

x t=x 12 =x 12

x0

x1

) despus del tiempo, t, se relacionara con la densidad

) de acuerdo a:

t
td

dx
=ux
dt
x

dxx = udt
0
0
4

ln xln xo=ut

ln

x
=ut
x0

x=xoe ut

ln

x
=ut
x0

ln

2 x0
=utd
x0

ln 2=utd
0,693=utd

0,693
=td
u
Ecuacin del crecimiento, donde

es la rapidez especifica de crecimiento definida

1
como la rapidez de la concentracin celular por unidad de tiempo (h )

1
dx
x
0,693
=
=u Ecuacin del crecimiento
dt
td
Una grfica de ln x contra tiempo produce una lnea recta con pendiente de 0,693/td
NMERO DE GENERACIONES (VALORES CINTICOS)
Parmetros de crecimiento: constante de la velocidad de crecimiento, k
k (h^-1 ) = ln 2/X =( 0.693)/ x
k es un ndice de la velocidad de crecimiento

Mientras que g es una medida del tiempo que tarda una poblacin en duplicarse, k es una
medida del nmero de generaciones que ocurren por unidad de tiempo en un cultivo
exponencial. (Leveau y Bouix, 2000)
PRODUCCIN DE BIOMASA
La productividad de biomasa producida por litro de medio y por hora, es con frecuencia y
criterios para la evaluacin de un procedimiento de fermentacin.
En todo caso es ella la que servir para determinar las dimensiones de una instalacin para
fermentacin. En el caso de los procesos discontinuos se debe tener en cuenta al fin de
evaluar la productividad del tiempo necesario para hacer la limpieza del fermentador tv
ensayo procedente tiempos tiene su tiempo de lavado Tn, su tiempo de llenado para el
ensayo que se vaya situar la esterilizacin tS y adems el tiempo estrictamente necesario
para el crecimiento microbiano tM y aquel en el que el ensayo se detiene se puede tambin
Definir la productividad mxima uniendo el origen con el punto tm, xm (Leveau y Bouix,
2000)

Productividad mxima

Productividad total

Pm=

PT=

Xm
tm

X1
tM

(Leveau y Bouix, 2000)

3. Tecnologa de produccin de levadura de panificacin
Preparacin de la melaza y materias primas

La produccin de levadura lleva aproximadamente cinco das y se inicia utilizando

una fuente de energa para el crecimiento de la levadura. Comnmente se emplea la melaza
de caa de azcar porque sus azcares son fcilmente fermentables. Adems, para crecer la
levadura necesita minerales, vitaminas y sales que usualmente se agregan a las melazas
antes de la esterilizacin flash que producir el pur usado para alimentar la levadura
cuando crece. (Lezcano, 2012)
Preparacin del cultivo o levadura madre
La produccin de levadura comienza con un tubo de cultivo puro o un vial congelado de la
cepa apropiada de levadura. Esta levadura sirve como inculo para el tanque de cultivo pre
puro donde la siembra crece bajo condiciones estriles antes de ser transferida a un
fermentador de cultivo puro ms grande. Desde el tanque de cultivo puro, las clulas
producidas

son

trasladadas

fermentadores

de

siembra

y semi siembra

progresivamente ms grandes. Estos ltimos tramos son conducidos como fermentaciones

de alimentacin Batch donde la levadura es alimentada con melaza, cido fosfrico,
amonaco y minerales. (Idem)

Fermentacin y cultivo
Al final de la fermentacin semi-siembra, las melazas agotadas se remueven y la levadura
es lavada con agua fra y mantenida en un tanque de almacenamiento a 1C antes de que se
inocule en los tanques de fermentacin comerciales. Estos fermentadores comerciales
tienen hasta 200 mil litros de capacidad y son el paso final en el proceso de fermentacin.
Tras la adicin de la levadura de siembra se inician la aireacin, enfriamiento y agregados
de nutrientes para comenzar una fermentacin de 15-20 horas. Al principio de la
fermentacin, la levadura lquida de siembra y el agua adicional pueden ocupar entre un
tercio y la mitad del volumen del fermentador solamente. Los agregados constantes de
nutrientes durante el curso de la fermentacin llevan el fermentador hasta su volumen final.
La tasa de adicin de nutrientes se incrementa a lo largo de la fermentacin y hacia el final
7

del proceso el nmero de clulas de levadura se habr incrementado entre 5 y 8 veces.

Durante la fermentacin la temperatura se mantiene a aproximadamente 30C y el pH en el
rango de 4,5- 5,5. (Idem)
Filtracin y envasado
Al final de la fermentacin, el caldo resultante es separado, lavado con agua y recentrifugado para obtener una crema de levadura, que es entonces enfriada a aproximadamente 7C. La crema de levadura puede cargarse directamente en tanques para entrega
directa a los clientes o ser bombeada hacia una prensa filtro y escurrida hasta que toma una
consistencia similar a la de una torta, que se corta en pedazos y se refrigera. Los envases de
levadura pueden despus ser distribuidos a los clientes en camiones refrigerados. (Idem)
GRUPOS DE CAMBIO DE VARIABLE
1. Importancia de cada variable (temperatura, aireacin, agitacin, pH, composicin
del sustrato) en la produccin de biomasa de levadura de panificacin.
Las levaduras pueden ser definidas como hongos unicelulares que se reproducen por
gemacin o fisin. Las levaduras estn implicadas en fenmenos de competicin por
nutrientes, de antagonismo o de simbiosis en los suelos, las aguas, los animales y los
vegetales. Su presencia depende en primer lugar de la disponibilidad de carbono orgnico,
temperatura, pH y de la presencia de agua (Leveau, Bouix. 2000)
Temperatura
La temperatura de las levaduras, oscila entre 25 y 30C que permite un efectivo
crecimiento. La temperatura de crecimiento influye en la composicin en cidos grasos
de las membranas plasmticas.
Aireacin
Todas las levaduras son capaces de desarrollarse en presencia de oxgeno, no hay
levaduras anaerbicas estrictas. El oxgeno interviene en la sntesis de esteroles y del
cido nicotnico.
Requerimientos nutricionales
Algunos elementos son bsicamente necesarios como por ejemplo carbono, hidrogeno,
oxigeno, nitrgeno y fsforo. El carbono sirve como fuente de energa y como material
constitutivo de la masa celular. El nitrgeno se encuentra en la clula formando parte
8

esencial de las protenas, aminocidos y cidos nucleicos; el fsforo se encuentra en los

cidos nucleicos en la lecitina y en diversos compuestos fosforilados que participan
activamente en los procesos de degradacin oxidativa y de intercambio energtico (ATP,
ADP, AMP, NADP). Para que las fuentes de nitrgeno, fsforo y carbono presentes en el
sustrato sean aprovechados por la levadura se requiere que se encuentren en forma
asimilable (Fajardo y Sarmiento, 2007)
PH
Un pH aproximado de 4.0 a 5.0 y no se desarrollan bien en medio alcalino a menos que se
hayan adaptado al mismo. A pesar de la tolerancia bastante amplia de esta para las
variaciones de pH a partir de los sustratos habitualmente usados en los medios de cultivo
forman productos en especial cidos que influyen en el crecimiento celular, produccin
enzimtica y utilizacin de glucosa. As por ejemplo, algunas investigaciones han
observado que con un pH inicial del medio a valores entre 4.0 y 4.5 se obtiene mejor
crecimiento (dem).
2. Cambiar una condicin de los parmetros definidos en la fermentacin control,
con el objeto de mejorar el rendimiento de la produccin de biomasa. En el caso de
cambiar la composicin de sustrato, solamente se puede aadir un componente o
cambiar la concentracin de alguno de los definidos como parmetros en la
fermentacin control. Este cambio en una variable debe estar sustentado y
defendido por bibliografa.
Aireacin: Se incrementar el ingreso de aire al medio, de 1 vol. aire / vol. medio min a 2
vol. aire / vol. medio min. Ya que un mayor flujo del mismo provocara que el rea
superficial de las burbujas al pasar por el medio aumenten conforme se reduce su tamao;
favoreciendo el consumo de oxgeno del microorganismo y su crecimiento (Valdivieso M.,
2009).
Melaza: Los principales azcares en la melaza son la sacarosa (60% - 63% en peso), la
glucosa o dextrosa (6% - 9% en peso), y la fructosa o levulosa (5% - 10% en peso); estas
dos ltimas constituyen la mayor porcin de los azcares reductores encontrados en los
anlisis. La fructosa puede sufrir transformaciones al igual que la glucosa, debido a
reacciones dependientes de la temperatura. (Esperanza, 2007)
Bibliografa:
Esperanza E. 2007. Evaluacin de melaza de caa como sustrato para la Produccin de
Saccharomyces

cerevisiae.

Recuperado

de:

http://www.javeriana.edu.co/biblos/tesis/ciencias/tesis26.pdf (Diciembre, 2015)

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Fajardo C., Erika E., Sarmiento F., Sandra C. (2007). Evaluacin de melaza de caa como
sustrato para la produccin de Saccahromyce cereviseae. Pontificia Universidad Javeriana
de Colombia. Facultad de ciencias Bsicas. Microbiologa Industrial. Bogot. (Diciembre,
2015)
J,W.Marison. (1987). Cintica de crecimiento. p: 192-196 (Diciembre, 2015)
Leveau Y.J., Bouix M. (2000). Microbiologa Industrial, los microorganismos de inters
industrial. Editorial ACRIBIA, S.A. p: 3-88, 529-559. (Diciembre, 2015)
Lezcano
E.
2012.
Cadena
de
levadura.
Recuperado
de:
http://www.alimentosargentinos.gov.ar/contenido/sectores/farinaceos/Productos/Levadura_
2012_03Mar.pdf (Diciembre, 2015)
Microbiologa.
2015.
Fisiologa
bacteriana.
Recuperado
de:
http://www.microbiologia.com.ar/bacteriologia/fisiologia.php?Mostrar=medida (Diciembre,
2015)
Universidad Tcnica Federico Santa Mara Departamento de Ingeniera Qumica y
Ambiental. Laboratorio de Introduccin a la Microbiologa. CRECIMIENTO
BACTERIANO.
Valdivieso M., Universidad de Granada, Espaa; (2009). Obtencin y caracterizacin de cepas de
Saccharomyces
cerevisiae
supe
productoras
de
glutatin.
Recuperado
de:
http://hera.ugr.es/tesisugr/1608004x.pdf (Diciembre, 2015)

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