PRACTICA 1 : EXTRACCION DE DNA

OBJETIVOS :

-El objetivo fundamental de esta prctica es utilizar unas sencillas

tcnicas para poder extraer el ADN de un tejido animal y por el
aspecto que presenta, confirmar su estructura fibrilar.
-A partir de la longitud enorme de las fibras tambin se confirma que
en el ncleo el ADN se encuentra replegado.
INTRODUCCION

El ADN es un polmero de desoxiribonucletidos, que en eucariotes es

el componente de la cromatina o material gentico. En la cromatina el
ADN

se

encuentra

asociado

protenas

conocidas

como

nucleoprotenas de tipo histonas, protaminas y en menor proporcin

con protenas de tipo cidas. Para extraer el ADN sin arrastrar sus
protenas asociadas se podra

emplear soluciones cidas. Sin

embargo, stas soluciones podran daar la estructura de la hebra, de

modo que se prefiere emplear solventes orgnicos como cloroformo,
el cual extrae protenas dejando insoluble al ADN.
La extraccin de ADN de una muestra celular se basa en el hecho de
que los iones
salinos son atrados hacia las cargas negativas del ADN, permitiendo
su disolucin y posterior extraccin de la clula. Se empieza por lisar
(romper)

las

clulas

mediante

un

detergente,

vacindose

su

contenido molecular en una disolucin tampn en la que se disuelve

el ADN. En ese momento, el tampn contiene ADN y todo un surtido
de

restos

moleculares:

ARN,

carbohidratos,

protenas

otras

sustancias en menor proporcin.

Las protenas asociadas al ADN, de gran longitud, se habrn
fraccionado en cadenas ms pequeas y separadas de l por accin
del detergente. Slo queda, por tanto, extraer el ADN de esa mezcla
de tampn y detergente.
La secuencia general de extraccin es la siguiente:

1. Liberacin del ADN en forma soluble por medio de la destruccin

de los sistemas membranosos de los tejidos (membrana celular y
nuclear).
2. Separacin de los complejos de nucleoprotena por denaturacin
de la parte proteica.
3. Separacin del ADN de las otras macromolculas por solubilidad
diferencial.
4. Precipitacin del ADN por insolubilidad en alcohol y bajas
temperaturas.

MATERIALES :

Reactivos

Materiales

Equipo

Material

Otros

biolgico
-Hgado

-Gasa

-Alcohol

-Tubos de

-Bao mara

etilico de 960

prueba de 20

-Mortero con

estril

-Lauril

ml

piln

-Tela para

Sulfato de

-Vaso de

Sodio (SDS o

precipitacin

-Hielo SLS)

de 500ml.

50 g

-Baguetas de

-Cloruro de

vidrio

Sodio 2 N

-Embudo

-Citrato de

-Pipetas de

filtrar

Sodio 4.110

10ml

-Portaobjetos

-EDTA 0.292

cubreobjetos

-Colorante
de ADN
(Reactivo de
Feulgen)
-Proteinasa K

PROCEDIMIENTO:
- Triturar 10 g de hgado de pollo en 50 ml de agua. Con ello, se consigue
homogeneizar la muestra: las clulas se rompen y los ncleos quedan
sueltos.
-Filtrar varias veces sobre una tela para separar los restos de tejidos que
hayan quedado sin romper.
- Aadir al filtrado un volumen igual de NaCl . Este medio es hipertnico y
se produce el estallido de los ncleos quedando libres las fibras de
cromatina.
- Aadir 1 ml de SDS u otro detergente. La accin del detergente es formar
un complejo con las protenas y separarlas del ADN.
- Aadir 50 ml de alcohol de 96. hay que hacerlo de forma que el alcohol
resbale por las paredes del vaso y se formen dos capas. En la interfase
precipita el ADN.
- Introducir una varilla de vidrio e ir removiendo en la misma direccin.
Sobre la varilla se irn adhiriendo unas

fibras blancas, visibles a simple

vista, que son el resultado de la agrupacin de muchas fibras de ADN.

- Observarlas a simple vista, con lupa y con microscopio.
RESULTADOS

FIGURA 01. Muestra del hgado de pollo (FIBRAS DE ADN )

En la figura se aprecia una muestra se pequeos esqueletos de ADN
obtenidos de un hgado de pollo observados mediante el microscopio.
DISCUSION
La extraccin de ADN del hgado de polo tuvo 3 tubos de prueba con el fin
de disminuir el porcentaje de error en la prctica. La experimentacin tuvo
faces en las cuales se pudo apreciar los cambios que sufran las muestras al
momento de utilizarlas. Todo estos procesos tuvieron un fin que es de
poder apreciar las fibras de ADN por parte de la muestra (hgado de pollo) .
CONCLUSIONES
Este procedimiento fue fcil y sencillo, el cual nos ayud a observar las
fibras de ADN. La calidad de la observacin de las fibras depende del tipo de
materiales que se utilice y el mtodo que se emplee.

PREGUNTAS :

1. Para qu se realiza el macerado de la muestra biolgica?

Para poder homogenizar la muestra las clulas se rompen y los
ncleos quedan sueltos

2. Cul es la funcin del cido tricloroactico?

Es el agente de eleccin para hacer peeling de profundidad
media. Puede penetrar la capa basal de la epidermis, alcanzar
la dermis papilar y extenderse a la dermis reticular superior. La
concentracin determinar la profundidad del peeling.
Concentraciones al 10% o 20% funcionan como peeling
superficiales, fundamentalmente como exfoliantes y solo
afectan a la capa exterior de la epidermis .
3. Cul es la funcin de las sales?
Se usan salen como NaCl para aumentar la solubilidad del DNA en la fase acuosa .

4. Cul es la funcin del alcohol fro en la muestra caliente?

Se usa el alcohol frio para hacer precipitar el
material( muestra ) . Esto se realiza al final del proceso donde
uno quiere concentrar el material que venimos limpiando con
otras sustancias.
5. Cul es el modelo actual de la molcula de ADN ?
En 1953, Watson y Crick propusieron el modelo que establece las bases de la molcula
responsable de contener la informacin gentica de todo ser vivo, una estructura
tridimensional denominada cido desoxirribonucleico (ADN) .
6. Qu funcin cumple el DNA?
las funciones biolgicas del ADN incluyen el almacenamiento de informacin (genes y
genoma), la codificacin de protenas (transcripcin y traduccin) y su autoduplicacin
(replicacin del ADN) para asegurar la transmisin de la informacin a las clulas hijas
durante la divisin celular.

7. Que otras fuentes conoces para extraccin del DNA?

Extraccin en vegetales como en la cebolla , ajo , tomate , etc .

8. Que son los cromosomas politnicos?

A los cromosomas Gigantes se los conoce tambin con el
nombre de Cromosomas POLITNICOS, que tienen 1.000
molculas de ADN. En ciertos tejidos de las larvas de dpteros
como glndulas salivales, intestino y tubos de Malpighi, hay
grandes clulas que tienen Cromosomas gigantes. Fueron
observados por 1ra vez por Balbiani en 1881 hasta que en 1930
se descubri su importancia citogentica.

BIBLIOGRAFA
Guevara Paredes Misael. citogentica general UNMSM.2000
Peguero, J. cromosoma X Pontifica Universidad Catlica Madre y
Maestra (http://www.pucmmsti.edu.do/cienciasfisiologicas. Febrero de
2009)
Rodrguez, A. R., et al. Manual de prcticas de gentica y cuaderno de
trabajo. UNAM. 2005

RESPUESTAS