LABORATORIO DE

MICROBIOLOGIA

INTRODUCCION

La bioseguridad es un conjunto de medidas probadamente eficaces

para evitar la adquisicin accidental de infecciones con patgenos
contenidos en las muestras, as como los riesgos relacionados con la
exposicin a agentes qumicos, fsicos o mecnicos a los que est
expuesto el personal en los laboratorios.
El presente documento tcnico ha sido actualizado con el objetivo de
establecer normas de bioseguridad a nivel institucional, aplicables a
las diferentes actividades analticas, de investigacin y produccin
que se realizan en los diferentes laboratorios del INS, as como a los
diversos niveles que conforman la Red Nacional de Laboratorios.
De este modo se presentan definiciones, requisitos generales y
requisitos especficos que deben ser considerados al momento de
implementar y mantener la bioseguridad en los laboratorios, entre los
cuales se incluyen los tipos de microorganismos y niveles de
bioseguridad que se requiere para su manipulacin, normas para la
proteccin del personal, condiciones para el manejo, transporte,
conservacin y desecho de sustancias potencialmente dainas al
personal y a la comunidad.
As mismo se incluyen condiciones para el manejo de sustancias
qumicas, fsicas y ergonmicas dentro de los laboratorios. En los
anexos se encuentra informacin relacionada con la clasificacin de
microorganismos por grupo de riesgo, sealizacin internacional,
clasificacin de sustancias qumicas de alto riesgo y almacenamiento
as como un formulario para informar accidentes de laboratorio, etc.
Slo si las personas que trabajan en los laboratorios conocen las
normas de bioseguridad y las aplican, pueden determinar su propia
seguridad, la de sus compaeros y la de la colectividad. El personal
de laboratorio debe cumplir con las normas de bioseguridad y los
directivos de la institucin deben cumplir con brindar las facilidades
para que estas normas sean aplicadas.

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MARCO TEORICO

Identificacin de los grupos de riesgo

El Centers for Disease Control and Prevention (CDC) de Estados
Unidos, public en 1974 el texto titulado Classification of etiologic
agents on the basis of hazard, en el cual se propona la clasificacin
de los agentes patgenos en cuatro grupos de riesgo.
Posteriormente, tanto los National Institutes of Health (NIH) de los
Estados Unidos como la Organizacin Mundial de la Salud (OMS)
actualizaron el sistema, sentando as las bases para la clasificacin de
los laboratorios en funcin del grupo de riesgo al que pertenecen los
patgenos que manejan.
Los factores utilizados para agrupar a los microorganismos son (i)
patogenicidad, (ii) dosis infectiva, (iii) modo de transmisin, (iv) rango
de hospedero, (v) disponibilidad de medidas de prevencin efectivas
y, (vi) disponibilidad de tratamiento efectivo. Actualmente, la
clasificacin es la siguiente:
Grupo de riesgo 1 (GR1): Agentes no asociados con
enfermedades en humanos adultos saludables ni en animales (nulo o
bajo riesgo al individuo o la comunidad). Ejemplo: Bacillus subtilis,
Bacillus licheniformis, ciertas cepas de Escherichia coli.
Grupo de riesgo 2 (GR2): Agentes asociados con enfermedades
humanas raramente serias para las cuales siempre hay medidas
preventivas y/o teraputicas disponibles. El riesgo de diseminacin de
la infeccin es limitado (riesgo individual moderado, bajo riesgo a la
comunidad). Ejemplo: Campylobacter jejuni, Helicobacter pylori,
Neisseria
gonorrhoeae,
Blastomyces
dermatitidis,
Coccidia,
Toxoplasma gondii, Adenovirus, Papovavirus.
Grupo de riesgo 3 (GR3): Agentes asociados con enfermedades
humanas serias o letales para las cuales podran estar disponibles
medidas preventivas y/o teraputicas. El contagio entre individuos
infectados es poco comn (alto riesgo individual, bajo riesgo a la
comunidad). Ejemplo: Coxiella burnetii, Mycobacterium tuberculosis,
VIH, virus de la fiebre amarilla, virus del oeste del Nilo, bacterias
multirresistentes como Staphylococcus aureus resistente a meticilina
(MRSA) y Streptococcus pyogenes resistente a eritromicina (SPRE).
Grupo de riesgo 4 (GR4): Agentes causantes de enfermedades
humanas serias o letales para las cuales no hay medidas preventivas
y/o teraputicas disponibles. El contagio entre individuos infectados
se da f- cilmente (alto riesgo individual, alto riesgo a la comunidad).
Ejemplo: virus del bola, Marburg, Lassa.
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Niveles de Bioseguridad
A partir de la definicin de los grupos de riesgo se gener la
clasificacin de los laboratorios en cuatro niveles de bioseguridad en
funcin de (i) la infectividad del patgeno, (ii) la severidad de la
enfermedad causada, (iii) el grado de transmisibilidad, (iv) el origen
del agente (extico o no) y, (v) la naturaleza del trabajo llevado a
cabo en el inmueble.2 Cada nivel de bioseguridad refleja el tipo de
prcticas microbiolgicas, el tipo de equipo y las medidas de
seguridad tomadas en ese laboratorio en particular.18 En general, se
procura lograr un ambiente de trabajo seguro para el personal y para
las personas ajenas al laboratorio, incluyendo las que se encuentran
fuera de las instalaciones. De acuerdo al CDC, los cuatro niveles de
bioseguridad son los siguientes
Nivel de Bioseguridad 1 (BSL-1)
Tambin conocido como nivel bsico 1.
Las prcticas, los equipos de seguridad, el diseo y la construccin de
la instalacin del Nivel de Bioseguridad 1 son adecuados para la
educacin o capacitacin secundaria o universitaria, y para aquellas
instalaciones en las que se trabaja con cepas definidas y
caracterizadas de microorganismos viables que no se conocen como
generadores de enfermedad sistmica en humanos adultos sanos.
El BSL-1 representa un nivel bsico que se fundamenta en prcticas
microbiolgicas estndar sin ninguna barrera primaria o secundaria
especialmente recomendada, salvo una pileta para lavado de manos.
Nivel de Bioseguridad 2 (BSL-2)
Tambin conocido como nivel bsico 2.
Las prcticas, los equipos, el diseo y la construccin de instalaciones
del Nivel de Bioseguridad 2 son aplicables a laboratorios educativos,
de diagnstico, clnicos u otros laboratorios donde se trabaja con un
amplio espectro de agentes de riesgo moderado que se encuentran
presentes en la comunidad y que estn asociados con enfermedad
humana de variada gravedad.
Con buenas tcnicas microbiolgicas, estos agentes se pueden utilizar
en forma segura en actividades realizadas en una mesa de trabajo,
siempre que no se produzcan salpicaduras o aerosoles en cuyo caso
se utilizar CSB.

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Nivel de Bioseguridad 3 (BSL-3)

Tambin conocido como nivel de contencin.
Las prcticas, equipos de seguridad y el diseo y la construccin de
las instalaciones del Nivel de Bioseguridad 3 pueden aplicarse a
instalaciones clnicas, de produccin, investigacin, educacin o
diagnstico, donde se trabaja con agentes exticos o indgenas con
potencial de transmisin respiratoria, y que pueden provocar una
infeccin grave y potencialmente letal.
Al manipular agentes del Nivel de Bioseguridad 3 se pone mayor
nfasis en las barreras primarias y secundarias para proteger al
personal en reas contiguas, a la comunidad y al medio ambiente de
la
exposicin
a
aerosoles
potencialmente
infecciosos.
Por ejemplo, todas las manipulaciones de laboratorio se deben llevar
a cabo en CSB u otros equipos cerrados. Las barreras secundarias
para este nivel incluyen el acceso controlado al laboratorio y
requisitos de ventilacin que minimizan la liberacin de aerosoles
infecciosos desde el laboratorio, como lo es un gradiente de presin
negativa que crea un flujo de aire dirigido al interior de la instalacin.

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Nivel de Bioseguridad 4 (BSL-4)

Tambin conocido como nivel de contencin mxima.
Las prcticas, equipos de seguridad, y el diseo y la construccin de
instalaciones del Nivel de Bioseguridad 4 son aplicables al trabajo con
agentes peligrosos o txicos que representan un alto riesgo individual
de enfermedades que ponen en peligro la vida, que pueden
transmitirse a travs de aerosoles y para las cuales no existen
vacunas o terapias disponibles.
Los agentes con una relacin antignica cercana o idntica a los
agentes de los Niveles de Bioseguridad 4 deben manejarse conforme
a las recomendaciones de este nivel. Cuando se han obtenido datos
suficientes, el trabajo con estos agentes puede continuarse a este
nivel o a un nivel inferior.

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Relacin entre los grupos de riesgo y los niveles de seguridad

Podemos relacionar (no equiparar) los grupos de riesgo con los
niveles de bioseguridad.
Grup
o
de
ries
go

Nivel
Tipo
de Prcticas
de Equipos
de
de
laboratorio
laboratorio
bioseguridad
bioseguri
dad

Enseanza
bsica,
investigacin
Servicios
atencin
primaria,

TMA

Ninguno,
trabajo
en
mesa
de
laboratorio al
descubierto

de TMA
y
ropa Trabajo
en
protectora,
mesa
al
seal de riesgo descubierto y
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diagnstico,
investigacin

biolgico

CSB
para
posibles
aerosoles

Diagnstico
especial,
investigacin

Prcticas BSL-2
ms
ropa
especial, acceso
controlado
y
flujo direccional
de aire

CSB
adems
de
otros
medios
de
contencin
para todas las
actividades

Prcticas BSL-3
ms cmara de
entrada
con
cierre
hermtico,
salida con ducha
Unidades
de y
eliminacin
patgenos
especial
de
muy peligrosos residuos

CSB de clase III

o CSB clase II
ms
trajes
presurizados,
autoclave
de
doble puerta y
aire filtrado

Los pases o regiones debern elaborar una clasificacin nacional o

regional de los microorganismos en grupos de riesgo, teniendo en
cuenta los siguientes factores:
1.
2.

La patogenicidad del microorganismo

El modo de transmisin y la gama de huspedes del
microorganismo. Estos dos factores pueden depender de los niveles
de inmunidad existentes en la poblacin local, la densidad y los
movimientos de la poblacin de huspedes, la presencia de
vectores apropiados y el nivel de higiene ambiental.
3.
La disponibilidad local de medidas preventivas eficaces, entre
las que cabe citar la profilaxis mediante la administracin de
antisueros (inmunizacin pasiva) o vacunas; las medidas de higiene
(higiene de los alimentos y del agua, por ejemplo), y la lucha contra
los reservorios animales o los artrpodos vectores.
4.
La disponibilidad local de tratamientos eficaces, que comprende
la inmunizacin pasiva, la vacunacin posexposicin y la
administracin de antimicrobianos, antivricos y quimioterapia, y
debe tener en cuenta la posibilidad de que aparezcan
CUESTIONARIO
1. Cul es la razn de no arrojar el material contaminado en el
depsito de basura del laboratorio?

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Los residuos slidos contaminados con agentes de carcter

infeccioso, deben ser auto clavados para eliminar dicho carcter, para
despus gestionarlos como residuos inertes no peligrosos.
2. Qu entiende usted por agente patgeno?
Un agente patgeno hace referencia a un elemento que
puede provocar una enfermedad o
un trastorno
orgnico a
un husped.
3. Porque cree usted que existe riesgos y peligros en el laboratorio?
Los laboratorios son lugares en los que se manipulan productos
qumicos o agentes biolgicos peligrosos, lo que sumado a las
operaciones especficas que se realizan, hace que normalmente
presenten un nivel de riesgo elevado para la salud.
4. Qu
procedimiento
debe
realizar
contaminados con muestras biolgicas?

con

los

materiales

Todo material reutilizable contaminado deber seguir la siguiente

secuencia de tratamiento:
1. Esterilizacin La esterilizacin por calor hmedo (autoclave) es
uno de los mtodos ms empleados para la descontaminacin de
medios de cultivo y cualquier material que contiene sustancias
que se pueden adherir al emplear la esterilizacin por calor seco
(horno).
2. Lavado
3. Secado
4. Preparacin
5. Esterilizacin
6. Almacenamiento
Todo material no reutilizable contaminado deber seguir la
siguiente secuencia de tratamiento:
1. Esterilizacin (autoclave o incineracin) en bolsas rojas plsticas
de desechos biolgicos, marcadas con un cdigo de color.
2. Eliminacin de las bolsas bien anudadas.
Se recomienda que el material a desechar se coloque en contacto
con una solucin desinfectante antes de su esterilizacin
5. Qu hara usted en caso de verterse material contaminado en la
mesa y su mandil?

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Se debe remover el mandil inmediatamente, la ropa contaminada

debe ser colocada en una solucin desinfectante antes de ser
lavada.
6. Cul es la razn de no comer o beber en el laboratorio de
microbiologa?
Para evitar la contaminacin de los alimentos y evitar posibles
infecciones.
7. Qu opinin tiene usted sobre las medidas que se dan en el nivel
4 de bioseguridad?
Un laboratorio de Bioseguridad nivel 4 es aquel donde se maneja
agentes biolgicos de nivel 4 , aquellos cuyo nivel de biorriesgo es
mximo y producen grandes daos a los operadores y a la comunidad
si son liberados. No existe tratamiento.
8. Qu opina sobre el uso de los microorganismos con fines blicos?
La utilizacin de estos microorganismos o sustancias txicas (toxinas)
modificadas
genticamente,
pueden
ocasionar
situaciones
incontroladas, no solo para el que es atacando con ellas, sino tambin
para el que las est utilizando como arma, ya que estos agentes
pueden mutar, reproducirse en grandes espacios geogrficos y ser
extendidos por el viento, el agua, los vectores, los animales y por las
personas. Esto es muy difcil de controlar y el riesgo es total para
todos, aunque se hayan desarrollado vacunas (no olvidemos la
posibilidad de mutacin del microorganismo).
9. Cules son los microorganismos ms usados para estos fines?
Segn el Centro de Control de Enfermedades de Estados Unidos
(CDC, Atlanta) los grmenes susceptibles de ser utilizados como
armas, podran clasificarse en tres categoras en funcin de su
capacidad de transmisin, y su posible mortalidad. El primer grupo
(categora A) seran los agentes ms peligrosos, entre los que se
encuentra el ya popular ntrax:

CATEGORA A: ntrax o carbunco(Bacillus anthracis); toxina

del botulismo(Clostridium botulinum); peste(Yersinia pestis);
viruela(Variola major); tularemia(Francisella tularensis)
CATEGORA B: fiebre Q(Coxiella burnetti); brucelosis(diversas
especies de Brucella); muermo(Burkholderia mallei)
CATEGORA C: fiebre amarilla; tuberculosis multirresistentes;
enfermedades vricas transmitidas por garrapatas.