Universidad Nacional Autnoma de Mxico.

Facultad de Estudios Superiores Zaragoza.

Qumica Farmacutica Biolgica.
Laboratorio de qumica orgnica.
Informe de la practica No.2
Cromatografa en columna y placa fina
de chile cascabel

Alumnos: Conchillos Zapatero Esteban.

Serrano Loranca Sada Mathizu.
Profesor: Manuel Lpez
Grupo: 2355
Fecha de entrega: 08/03/16
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Resumen:

Se realizo esta prctica con el fin de conocer la tcnica de cromatografa en capa

fina y columna como mtodos de separacin, y as obtener los componentes de un
extracto de macerado de chile cascabel, al mismo tiempo saber elegir al eluyente
adecuado, en este caso es una mezcla de hexano y acetato de etilo, asi como otra
mezcla de hexano con benceno, elegido mediante pruebas en capa fina y que
posteriormente ser el utilizado en columna para separar las fracciones del
componente natural.
Asi como elegir el disolvente que se usara para empaquetar la columna.

Introduccin:

La cromatografa puede definirse como la tcnica de separacin de una mezcla de

solutos, basndose esta separacin en la diferente velocidad con que se mueve
cada uno de los solutos a travs de un medio poroso, arrastrados por un
disolvente en movimiento.
La cromatografa agrupa un grupo importante de mtodos que permite separar
componentes estrechamente relacionados en mezclas complejas, lo que en
muchas ocasiones resulta imposible en otros mtodos.
En todas las separaciones cromatografas la muestra se desplaza con una fase
mvil que puede ser un gas, un lquido o un fluido supercrtico. Esta fase mvil se
hace pasar a travs de una fase estacionaria con la que es inmiscible y que se fija
a una columna o a una superficie slida. Las dos fases se eligen de tal forma que
los componentes de la muestra se distribuyen de modo distinto entre la fase mvil
y la fase estacionaria.

Aquellos componentes que son fuertemente retenidos por la fase estacionaria se

mueven lentamente con el flujo de la fase mvil por el contrario los componentes
que se unen dbilmente a la fase estacionaria, se mueven con rapidez.
Como consecuencia de la distinta movilidad, los componentes de la muestra se
separan en bandas o zonas discretas que pueden analizarse cualitativa y/o
cuantitativamente.
En la cromatografa en columna un tubo estrecho contiene la fase estacionaria a
travs de la cual hace pasar la fase mvil por preparacin. En la cromatografa en
plano, la fase estacionaria se fija sobre una placa plana o a los intersticios de un
papel, en este caso la fase mvil se desplaza a travs de la fase estacionaria por
capilaridad o por gravedad.
Adsorbentes
La sustancia adsorbida se llama adsorbato y la fase sobre cuya superficie se
acumula el adsorbato se llama adsorbente. En un slido, las interfaces son fijas,
cuando es liquido la interface es mvil y la superficie de contacto puede variar
debido a la tensin superficial. Los adsorbentes se dividen en dos grupos
principales: los polares (almina, slice, carbonato clcico) y los no polares (carbn
activo, talco). Entre los del primer grupo la intensidad de la adsorcin es
determinada por la polaridad de las molculas. En el comportamiento de los del
segundo grupo el papel fundamental es desempeado por las dimensiones y
formas de las molculas.
Eluyentes
El poder de la adsorcin depende tanto de la naturaleza del disolvente como de la
del adsorbente. Por lo general para llevar la mezcla de compuestos a columna se
utiliza un disolvente relativamente poco polar para el desarrollo del cromatograma
y para la elusin de los productos adsorbidos un disolvente mas polar todava.

Objetivo: Identificar el eluyente correcto para la cromatografa en capa fina y

posteriormente identificar los componentes que le dan color al chile cascabel por
una cromatografa en columna.
Hiptesis: Si se sabe que las diferentes tonalidades del color rojo son: (amarillo,
naranja, rojo claro y fuerte) en la pigmentacin del chile cascabel, ya que, la
antocianina que tiene como pigmento el chile cascabel otorga el color rojo a este,
y por medio de los Eluyentes empleados los cuales fueron determinados en capa
fina se podrn observar las coloraciones de estos.
Variables:
Independiente: Volumen de la muestra, Tiempo de duracin fase mvil.
Dependiente: Coloracin de los pigmentos y separacin de estos.
Variables aleatorias: Temperatura ambiental.

Parte experimental

Capilares

Reactivos:
Chile cascabel

Material:

Acetato de etilo

Pinzas

doble

Algodn

Acetona
Sustancias a utilizar
Gel slice para capa
fina

columna

de

presin

Hexano

Gel

Tubos de ensaye

slice

para

Frascos con tapa

Instrumentos:
Pipetas graduadas 1 y

Embudo

5 mL

Vasos de precipitado

Bureta 25mL

Vidrio de reloj

Balanza analtica

Agitador de vidrio

Equipo:

Porta objetos

Bomba de vacio
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Tcnica:
Cromatografa en capa fina.
Actividades preliminares:
Macerar de dos a tres chiles cascabel en un frasco mbar con 30mL de acetato de
etilo, el cual se dejar reposar 1 semana.
Lavar de 10 a 15 portaobjetos perfectamente evitando tocarlos con las manos
descubiertas (uso preferente de guantes) para evitar dejar rastro de grasa en las
placas y dejar secar completamente a temperatura ambiente.
Preparar la papilla con gel slice para capa fina y un poco de acetato de etilo en un
vaso de precipitado hasta formar una sustancia homognea y un tanto cremosa,
una vez realizado esto no dejar que la papilla se seque, de lo contrario se volver
polvo y se deber agregar ms acetato de etilo.
Colocar un poco de papilla en los portaobjetos una vez secos y esparcir
homogneamente en toda la superficie, colocar el portaobjeto en un superficie
plana y dando un ligero golpe a la placa con la mesa evitar que se formen grumos
de papilla y dejar secar a temperatura ambiente.
Tomar de 1 a 2mL de los disolventes

propuestos (metanol, acetato de etilo,

cloroformo, hexano, acetona, cloruro de metileno) y colocarlos en un frasco

perfectamente limpio, seco y que no sea muy alto ni muy ancho, una vez tomadas
las muestras de cada disolvente con un capilar separado con ayuda de un
encendedor tomar un poco de extracto del macerado de chile cascabel y colocar
microgotas sobre las placas hechas previamente aumentando la proporcin
conforme las gotas puestas, una vez hecho esto colocar las placas dentro de los
frascos y tapar rpidamente para que la atmosfera interior se sature con el
disolvente.

Dejar que el eluyente ascienda por las cromatoplacas hasta un nivel de

aproximadamente 1cm por debajo del borde superior y as evitar que estas se
ahoguen.
Extraer la cromatoplaca del frasco y marcar hasta donde ha llegado la separacin
de los componentes.
Si un disolvente no es capaz de separar los componentes, intentar hacer mezclas
con ellos, jugando con la polaridad.

Cromatografa en columna
Colocar un tapn de algodn en el fondo de la columna.
Preparar la papilla para columna con gel slice y el disolvente elegido en la
cromatografa en capa fina (relacin hexano-acetona 8-2) y verter en la columna
con ayuda de un embudo de vidrio, agregar 50mL de hexano, abrir la bureta y
dejar que el eluyente recorra toda la fase estacionaria. No dejar que la columna se
seque, se forman grietas y ser necesario golpearla levemente y enfriar la
columna con algodn y acetona, para as evitar que el disolvente se evapore.
Al macerado de chile cascabel el cual fue puesto en el rotavapor para concentrar
los compuestos coloridos agregar una relacin de 5mL 8-2 de hexano-acetona
para que se disuelva y as poder agregarlo a la columna con la ayuda de un
embudo, no sin antes agregar 1cm de sal comn a la columna para que al
momento de agregar el eluyente este no rompa la fase estacionaria, hecho esto
verter el chile a la columna y enseguida adicionar un poco ms de hexano. Como
la cromatografa ser por gradiente, esperar a que los componentes desciendan
un poco antes de aumentar la polaridad con acetona.
Preparar las placas para capa fina mientras los componentes descienden, disolver
la gel slice para capa fina en acetato de etilo en un vaso de precipitado hasta
formar una sustancia homognea y un tanto cremosa, una vez realizado esto no
dejar que la papilla se seque, de lo contrario se volver polvo y se deber agregar
ms acetato de etilo.
6

Lavar de 10 a 15 portaobjetos perfectamente evitando tocarlos con las manos

descubiertas (uso preferente de guantes) para evitar dejar rastro de grasa en las
placas y dejar secar completamente a temperatura ambiente.
Agregar a la columna una relacin de 100mL con una relacin 95-5 hexanoacetona para aumentar la polaridad del eluyente, si las fases no descienden
suficientemente rpido, hacerlo con ayuda de una bomba de vaco. No dejar de
agregar eluyente a la columna. Una vez que las fracciones del componenete
lleguen a la parte inferior de la columna comenzar a sacar las fracciones en tubos
de ensaye.
Separar las fracciones que sean necesarias y realizar con ellas cromatografas en
capa fina.
Colocar las cromatoplacas en la mezcla de hexano-acetona 8-2 y registrar lo que
sucede.

Diagrama de flujo cromatografa en capa fina

7

Inici
o

Lavar los
portaobjetos y
dejar que se
sequen a
temperatura
ambiente

Colocar un
poco de
papilla a
cada
portaobjeto y
esperar a que
sequen a
temperatura

Preparar la
papilla con gel
slice y acetato
de etilo.

Probar con
diferentes
disolventes
hasta encontrar
el adecuado
que separe ms
componentes
del chile.

Con un capilar
tomar un poco
del extracto de
chile cascabel
y colocar en las
placas

Fin
Diagrama de flujo cromatografa en columna.

Inici
o

Empaquetar la
columna con la
papilla hecha
con gel de slice
y hexanoacetona

Agregar al
extracto de
chile cascabel
5ml de hexanoacetona 8-2, y 8
verterlo a la
columna

Lavar los
portaobjetos y
dejar que se
sequen a
temperatura
ambiente

Colocar un
poco de
papilla a
cada
portaobjeto y
esperar a que
sequen a
temperatura

Separar las
fracciones y
hacer
pruebas en
capa fina con
ellas en una
mezcla de
de los aparatos:
Esquemas

Agregar a la
columna 50mL
de hexano y
dejar que el
eluyente
recorra la fase
estacionaria

Agregar a la
columna una
relacin de
95-5 de
hexano
acetona
(100mL) para
aumentar la

Fin

hexano-acetona
8-2.

Cromatografa en capa fina.

9

Cromatografa en columna

Cromatografa en columna en el
laboratorio

10

Costo de los reactivos

Resultados cromatografa en capa fina

La distancia recorrida por el compuesto se mide generalmente desde el centro de

la mancha, los clculos se simplifican si el denominador es 10. Para que los RF
sean reproducibles deben ser fijadas una serie de condiciones (Espesor de la
placa, fase mvil, fase estacionaria, cantidad de muestra). El mximo valor de RF
que se puede alcanzar es de 1, lo ideal es un RF entre 0.65 y 0.7.
Si el Rf < 0.6.65 el eluyente es de muy baja polaridad para la separacin.

Si el Rf = 0.65-0.7 el eluyente es el ideal para la separacin.

Si el Rf > 0.7 el eluyente es de muy alta polaridad para la separacin.
a)
b)
c)
d)
e)
f)

Acetato de Etilo: Frente: 6 cm Nueva posicin 5 cm RF: 0.83

Etanol: Frente: 7 cm Nueva posicin: 4 cm RF: 0.57
Cloroformo: Frente: 7 cm Nueva posicin: 5 cm RF: 0.7142
Acetona: Frente: 6 cm Nueva posicin: 5 cm RF: 0.83
Hexano: Frente: 7 cm Nueva posicin: 6 cm RF: 0.8571
1.6mL de haxano + 0.4mL de acetona: Frente 6cm Nueva posicin: 4.3
RF: 0.7166
g) 1.6 de hexano + 0.4 de cloroformo: Frente 6cm Nueva posicin: 5.2 RF:
0.8666

Al trmino de todas las cromatografas con los disolventes diferentes, y con las
mezclas de estos, se observo detalladamente su arrastre y la separacin de
componentes de cada uno, llegando a la conclusin de que la mezcla ideal se
encontr con la mezcla de los siguientes disolventes y su proporcin:
1.6 mL de Hexano y .4 mL de acetona, ya que se observ mayor separacin de
componentes.

Resultados cromatografa en columna.

De la cromatografa en columna se obtuvieron 20 tubos de ensaye con distintos
tonos de amarillo, aunque la diferencia no era tan significativa, se obtuvieron otros
5 con diferentes tonos de rojo y naranja.

Anlisis de resultados:

Aunque en la cromatografa en capa fina se logr determinar que la relacin 8-2

hexano- acetona funcionaba como mezcla para separar algunos componentes, se
decidi llevar a cabo una cromatografa en columna por gradiente que consiste en
aumentar la polaridad del eluyente paulatinamente de la fase mvil para as poder
lograr una separacin ms marcada, esto fue hecho, ya que, un solo eluyente no
permite una elucin suficientemente rpida de todos los componentes.
Para la cromatografa en columna se puede concluir que todas las fracciones
amarillas que se tomaron al principio son parte de un solo componente ya que al
realizar con ellas cromatografa en capa fina no hubo separacin en colores
alguna, sin embargo, al realizar cromatografa en capa fina de las ultimas
fracciones de rojos y naranjas en ellas s se pudo notar una separacin de colores
por las cromatoplacas, esto nos indica que an haba que separar ms
componentes de las ultimas fracciones que por falta de tiempo ya no se pudieron
realizar correctamente.

Conclusiones:
Se logr comprobar la hiptesis de los colores presentes en los componentes del
chile cascabel, sin embargo, no se obtuvieron todas las fracciones que debieron
resultar.
En la cromatografa en columna se logr el objetivo, el cul era encontrar al
eluyente o mezcla de estos adecuada para separar los componentes del chile
cascabel.

Bibliografa:

D.L. Pava, G.M. Lampman. Introduction to Organic Laboratory

Techniques
W.B. Saunders, 1988.

BRIEGER. Qumica Orgnica Moderna. Curso Prctico de Laboratorio.

Primera Edicin en espaol. Harper & Row Publishers INC. Espaa.
1970.
DANIELS. Curso de Fisicoqumica Experimental. Centro Regional de
Ayuda Tcnica AID. McGraw -Hill. Primera edicin en espaol. 1972.
Brewester RQ. Et al curso prctico de qumica orgnica experimental.

Madrid: Alhambra; 1978

Eaton DC. Laboratorio de investigacin de qumica orgnica. New York:

McGraw-Hill. 1989