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ANLISIS CUALITATIVO DE AMINOCIDOS

ARANGO F. S. MENDOZA L. P. SARMIENTO C. A.


LABORATORIO DE BIOQUMICA UNIVERSIDAD DE LOS LLANOS
VILLAVICENCIO COLOMBIA

RESUMEN
Al analizar la solubilidad de los
aminocidos Lisina, Metionina, Cistena y
acido asprtico en diferentes solventes
como H2O, HCl, NaOH, etanol, CHCl 3, se
obtienen diferentes resultados utilizando
una lectura numrica mediante la
asignacin de valores de cero a cuatro (0 a
4) correspondiente al grado de solubilidad
de cada aminocido, el ndice hidroptico
permite correlacionar los datos, siendo as
en orden de solubilidad de acuerdo a este
ndice la Lisina seria la que representa
mayor miscibilidad con el H2O, seguido del
cido asprtico, la metionina y cistena son
menos solubles en agua deb a su
estructura molecular.
Estructuralmente
la
mayora
de
aminocidos son diprticos, es decir tienen
un grupo amino y un grupo carboxilo, para
determinar el carcter anfotrico de estos
aminocidos se utiliza las curvas de
titulacin en las que se obtienen los valores
de pK de estos grupos ionizables y el punto
isoelctrico; al graficar los resultados de la
titulacion se analiza la curva en donde se
hace visible las zonas de amortiguacin, en
estas zonas se encuentran los valores de
pK del aminocido en donde se afecta el
grupo ionizables, estos pK corresponde a
1,97 y 9,16 con un punto isoelctrico de
5.56. Valores de pH en los que los grupos
ionizables se ven afectados.
Separar una mezcla de aminocidos por
cromatografa de capa fina permite
identificar cada uno; estos presentan un
factor de retencin a ser arrastrados por un
solvente, al sembrar muestras de glicina y
lisina junto con una muestra desconocida

realizar el proceso, el disolvente arrastra


consigo las muestras sembradas, la glicina
presenta un factor de retencin de 0,3 a
diferencia de la lisina que presenta una
mayor afinidad a la fase estacionaria con
un factor de retencin de 0,2, la muestra
desconocida presento la misma afinidad a
la fase estacionaria que la lisina, por lo que
se analiza que la muestra de lisina es la
misma muestra desconocida.
PALABRAS
CLAVES:
solubilidad,
separacin por cromatografa de capa fina,
curvas de titulacin, ndice hidroptico,
factor de retencin, punto isoelctrico, pK.

INTRODUCCIN
Los aminocidos poseen cualidades y
propiedades
qumicas
similares
a
compuestos orgnicos, estos se pueden
agrupar en 4 grupos fundamentales como
son por grupo funcional, polaridad, acidez o
basicidad; en la naturaleza existen cientos
de
aminocidos
con
diferentes
caractersticas, pero solo 20 forman parte
de las protenas, estructuralmente estn
compuestos por un grupo amino, un grupo
carboxilo, un tomo de hidrogeno y una
cadena lateral, unidos al carbono alfa; al
contener un grupo amino y un grupo
carboxilo, estos se pueden comportar de
forma anftera, es decir como cidos o
bases.1

1 PRINCIPIOS DE BIOQUIMICALibro Lehninger


Cuarta Edicin
David L. Nelson, Michael M. Cox.

La Cistena es un aminocido categorizado


como polar no cargado, hace parte de los
aminocidos no esenciales, es Hidrofbico,
su cadena lateral est formada por un tiol,
que es un grupo sulfhidrilo unido a un
carbono el cual est unido al carbono alfa
del aminocido, dado a la composicin de
su cadena lateral, este aminocido
participa en las reacciones enzimticas
debido al que al oxidarse produce puentes
disulfuro. El cido Asprtico
es un
aminocido no esencial que qumicamente
acta como un cido ya que su cadena
lateral contiene un grupo carboxilo, es
soluble en medio acuoso pero muy poco
soluble en solventes orgnicos. La Lisina
es un aminocido esencial que acta
qumicamente como una base debido a que
su cadena lateral contiene un grupo amino
protonable, es soluble en medio acuso pero
no es compuestos orgnicos.
Los aminocidos presentan propiedades y
caractersticas similares, son solubles en
medio acuoso pero poco solubles en
solventes orgnicos, esto debido a la

composicin de la cadena lateral que hace


a cada aminocido diferente uno de otro; el
grupo amino y carboxilo que contienen los
aminocidos permite que se pueden
comportar como cidos o bases, por la
estructura del aminocido la tendencia de
un grupo amino o carboxilo a ceder un
protn al reaccionar con cido o base es
diferente, quedando cargado positiva o
negativamente, el punto donde la carga
neta del aminocido es cero se le designa
punto isoelctrico o pH isoelctrico,
arrojando diferentes curvas de titulacin al
reaccionar con otros compuestos.
En el presente trabajo, la aplicacin de
pruebas de solubilidad con diferentes
solventes en las muestras de aminocidos,
permiten llevar acabo los anlisis
necesarios para caracterizarlos, conocer
sus pK, observar su afinidad y factor de
retencin al aplicar la prueba de
cromatografa de capa fina.
RESULTADOS Y DISCUSIN
SOLUBILIDAD DE AMINOCIDOS
Forma de lectura:
0= no soluble.
1=poco soluble.
2=medio soluble.
3=soluble.
4=muy soluble.
Tabla 1: Solubilidad de Aminocidos.
Solv.
Mue.
Cys
Met
Asp
Lys

H2O

La glicina y la Metionina son aminocidos


No Polares Hidrofbicos, este carcter
permite
llevar
acabo
interacciones
hidrofbicas dentro de la protena, la forma
de la protena y dado a su tamao da
flexibilidad a la estructura de est. Todos
los aminocidos con excepcin de la
Glicina presentan actividad ptica, esto
debido a que su cadena lateral est
compuesta por un tomo de hidrogeno a
diferencia de la metionina cuya cadena
lateral est compuesta por un tioeter, es
decir un puente de azufre entre la cadena
carbonada; En general la glicina es un
aminocido no esencial lo que indica que el
organismo lo puede sintetizar por s mismo,
por su tamao da flexibilidad y forma
interaccin hidrofbicas dentro de la
protena; siendo la Glicina del mismo grupo
con la Metionina, esta ltima hace parte de
los aminocidos esenciales, los cuales el
cuerpo no puede sintetizar por s mismo.

0
2
1
4

HCL
0.1M

NaOH
0.1M

ETANOL

CHCl3

Indice
hidro
patico

1
4
3
4

1
2
3
4

0
2
1
0

1
0
0
0

2.5
1.9
-3.5
-3.9

Los aminocidos
tienen propiedades
diferentes segn sus grupos R, en especial
su polaridad o tendencia a interactuar con
el agua, la polaridad de los grupos R puede
cambiar de apolar o hidrofobico a muy
polar o hidrofilico y estn clasificados as:
Con grupos R apolares y alifticos

Con
grupos
R
aromticos
(generalmente apolares)

Con grupos polares sin carga

Con grupos cargados negativamente

Con grupos cargados positivamente

En la tabla 1 de solubilidad de
aminocidos, la metionina es medio soluble
en agua (H2O) , muy soluble en cido
clorhdrico (HCl), medio soluble en
hidrxido de sodio (NaOH), medio soluble
en etanol (CH2OH), y no es soluble en
cloroformo (CHCl3) , Por otra parte segn
los datos tericos presenta un ndice
hidroptico de (1.9) es poco soluble en
(H2O) el cual coincide con la escala
propuesta en el laboratorio , esto es debido
a
que la metionina pertenece a los
aminocidos con grupo R no polares
(hidrofobicos), este aminocido tiene un
grupo R con un tomo de azufre que en
este caso podra formar
puentes de
hidrogeno con el HCl, NaOH Y con el
CH3CH2OH en cambio con el CHCl3 no
puede formar puentes de hidrogeno por tal
motivo es insoluble en cloroformo.
Por otra parte la Cistena de acuerdo a los
resultados obtenidos en el laboratorio es
insoluble en H2O, la cistena forma parte
de los aminocidos con grupo R polares

(no cargados), tiene un grupo tiol, que es


aproximadamente tan cido como el grupo
OH de la tirosina, y puede formar puentes
de hidrogeno con, HCl, NaOH, CH 3CH2OH,
pero insoluble en compuestos apolares
tales como el CHCl32 es por esta razn que
los datos obtenidos en el laboratorio son
errneos al compararlos con la literatura.
La cistena participa en los procesos
enzimticos ya que se oxida fcilmente
formando un aminocido dimtrico unido
covalentemente llamado cistina en la que
estn unidas 2 molculas de cistena
mediante un puente disulfuro. Los puentes
disulfuros de este tipo se encuentran en
muchas protenas estabilizando sus
estructuras.
El cido aspartico con respecto a la tabla 1
pudimos observar que tiene un ndice
hidroptico tericamente
bajo (-3.5),
soluble en H2O el cual no concuerda con
los datos arrojados por el laboratorio, este
aminocido pertenece al Grupo R cargado
negativamente (acdicos) ya que tienen un
segundo grupo carboxlico.
De acuerdo al ndice hidroptico de los
aminocidos de la tabla 1, La lisina es
mas miscible en agua que el cido
aspartico, la metionina, y la cistena ya que
su ndice hidroptico es ms bajo que los
dems aminocidos, estos valores al ser
comparados con la escala propuesta en el
laboratorio permite verificar que la lisina es
muy soluble en (H2O), pero insoluble en
compuestos orgnicos, ya que pertenece al
grupo R cargado positivamente (bsicos)
en el cual el grupo R tiene una carga neta
2 Informacin de Aminocidos
http://acemucsc.galeon.com/articulos/Bioquimica/am
inoacidos.htm

positiva esto es debido a que tiene un


segundo grupo amino en la posicin de su
cadena aliftica, lo cual le permite
interactuar mediante interacciones dbiles
del tipo ion dipolo.
CURVA DE TITULACIN
Muestra: Metionina (Met, M)
Figura 1:
Metionina.

Estructura

del

Aminocido

Estructuralmente el Aminocido Metionina


contiene un grupo carboxilo, un grupo
amino, un tomo de Hidrogeno y una
cadena lateral tioeter, es decir un puente de
azufre entre una cadena carbonada; al
contener los grupos carboxilo y amino se
puede comportar como acido o base
dependiendo de la sustancia con la que
reaccione denominndoseles anfteras,
cada uno de estos grupos son ionizables
presentan una fuerza en la cual la molcula
es capaz de disociarse denominada pK, en
la que estos grupos puede ganar o perder
protones quedando cargados positiva o
negativamente, el promedio de los pK se
obtiene el punto isoelctrico donde la carga
neta es cero, estos valores son diferentes
para cada aminocido debido a su

estructura; La titulacin3 del aminocido


con un cido como cido clorhdrico 1M
(HCl) el aminocido acta como donar de
protones, acidificndose a medida que se
aumenta el volumen del titulante; al titular
con Hidrxido de Sodio (NaOH), el
aminocido acta como aceptador de
protones.
Tabla 2: Datos prcticos titulacin con HCl
0,1 M y NaOH 0,1 M, en muestra de
Aminocido Metionina.
Volumen pH
Volumen pH
HCl
NaOH
0
5.80
0
5.70
1
5.58
1
7.76
2
3.30
2
8.11
3
3.11
3
8.23
4
2.96
4
8.47
5
2.85
5
8.60
6
2.76
6
8.71
7
2.66
7
8.79
8
2.59
8
8.88
9
2.51
9
8.95
10
2.46
10
9.03
11
2.39
11
9.09
12
2.34
12
9.15
13
2.27
13
9.24
14
2.23
14
9.30
15
2.18
15
9.36
16
2.13
16
9.44
17
2.09
17
9.50
18
2.05
18
9.58
19
2.01
19
9.67
20
1.97
20
9.76
21
1.94
21
9.86
22
1.90
22
9.93
23
1.87
23
10.06
24
1.80
24
10.13
25
1.78
25
10.44
26
1.75
26
10.77
27
1.73
27
11.11
28
1.71
28
11.35
3 Titulacin de Aminocidos, En
http://depa.pquim.unam.mx/proteinas/estruct
ura/histitul.html Consultado el da 12 de
Enero de 2012.

29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41

1.69
1.67
1.65
1.63
1.61
1.59
1.58
1.56
1.55
1.54
1.53
1.52
1.51

29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41

11.50
11.61
11.69
11.76
11.81
11.86
11.90
11.94
11.97
11.99
12.02
12.04
12.06

Grafica 1: Curva de titulacin Aminocido


Metionina.

10

2.28+ 9.21
=5.74
2

Datos Prcticos
pKa Metionina

1.97+ 9.16
=5.56
2

%E=

pH

4
2
0
0

20

Volumen

Datos Tericos
pKa Metionina

pI =

Porcentaje de error

HCl

Formula:
pKa1+ pKa 2
pI =
2

pI =

12

-60 -40 -20

Punto Isoelctrico: 5.74

pK1= 1,97
pK2= 9,16

14

pH

Alfa-COOH: 2.28
Alfa-NH3+: 9.21

NaOH

40 60

5.745.57
x 100=2
5.74

Grafica 2: Curva de titulacin Aminocido


Glicina.

Al comparar la grfica 1 de titulacin del


aminocido Metionina con la grfica 2 de
titulacin del Aminocido Glicina, se puede
observar que mantienen la misma
tendencia de la curva, estos dos
aminocidos son diproticos, se pueden
protonar o desprotonar al reaccionar con
una sustancia acida o bsica; a medida que
se titula se cambia el pH de la muestra, en
la grfica 1 se pueden observar dos zonas
de amortiguadores donde la solucin
resiste a los cambios de pH cuando se le
agrega acido o base.

CROMATOGRAFA
Para el aminocido Metionina, los valores
segn literatura4 de pKa corresponden a
2.28 y 9.21 con un punto isoelctrico de
5.74; segn la curva de titulacin
experimental del Aminocido Metionina
(grafica #1) los valores de pK1 y pK2
obtenidos corresponden a 1,97 y 9,16 con
un punto isoelctrico de 5,56; los valores
de la literatura y prcticos no coincides con
exactitud contienen un porcentaje de error
del 2%, la titulacin de muestras se lleva a
una temperatura de 20C, dado a que a la
temperatura de Villavicencio la titulacin se
llev a una temperatura de 25C, 5C por
encima de los estndares, esto puede
variar la forma de la reaccin; la titulacin
no se llev acabo hasta obtener el pH 14 o
1, por lo cual se puede notar que la curva
no es completa, no se denota esa zona de
inicio y fin de la titulacin, por lo cual la
obtencin de los valores de pKa y el punto
isoelctrico no concuerdan con los datos
tericos.

4 Valores de pK de los aminocido PRINCIPIOS


DE BIOQUIMICA
Libro Lehninger Cuarta Edicin
David L. Nelson, Michael M. Cox.

La cromatografa de capa fina, es una


tcnica utilizada para separar sustancias
con propiedad qumicas similares, en la
que un solvente o fase mvil fluye a travs
de una fase estacionaria, la slica gel
(dixido de silicio) hasta cierto punto
denominado frente de elucin, consigo
arrastra las muestras sembradas en la
base. La fase estacionaria ser un
componente polar y el eluyente ser por lo
general menos polar que la fase
estacionaria,
de
forma
que
los
componentes que se desplacen con mayor
velocidad sern los menos polares.5
Figura 2: Lamina cromatografa.

5 Cromatografa de capa fina, en


http://www.textoscientificos.com/quimica/
cromatografia/capa-fina consultado el
da 23 de Enero de 2012.

absorbente polar, por los puentes de


hidrogeno se forman interacciones dbiles
entre las muestras, al aplicar la solucin de
ninhidrina se facilita la revelacin de la
cromatografa;
revelando
la
placa
cromatografa la lisina tienen un factor de
retencin de 0.33 a diferencia de la lisina
de 0.22, la muestra desconocida presente
un factor de retencin igual al de la lisina
de 0.22 indicando que la muestra
desconocida corresponde a otra siembra
de la muestra lisina.
CONCLUSIONES
Factor de retencin:
Formula:
b
RF=
a
a= Distancia desde el punto de siembra
hasta el frente de elucin del solvente.
b= Distancia desde el punto de siembra
hasta donde aparece la mancha de color
despus del desarrollo de la cromatografa.
Glicina (Gly)
RF=

1.5
=0.33
4.5

Lisina (Lys)
RF=

1.0
=0.22
4.5

Muestra desconocida

RF=

1.0
=0.22
4.5

La glicina es un aminocido no polar


Hidrofbico, por lo cual tiene ms afinidad a
la fase mvil del solvente, a diferencia de la
lisina que presenta ms afinidad a la fase
estacionaria, la silica gel funciona como un

La estructura bsica de todos los


aminocidos es la misma, se diferencian
por su grupo R, la solubilidad depende de
este grupo, siendo as en orden de
solubilidad la lisina es ms soluble que el
cido aptico la metionina y la cistena.
La
titulacin
permite
analizar
el
comportamiento de un aminocido en una
solucin acida o bsica; al agregar
equivalentes de cido y base, estos grupos
se desprotonan, obteniendo los valores de
pK de 1.97 y 9.17 en las zonas de
amortiguacin, con un punto isoelctrico de
5.57 concluyendo que los valores practicos
presentan un porcentaje de error del 2%
relacionado a los valores literarios.
En la cromatografa de capa fina permite
separar sustancias con propiedades
qumicas similares, la glicina presenta mas
afinidad a la fase mvil con un factor de
retencin de 0.3 es decir menos polar, la
lisina presenta un factor de retencin de 0.2
con mas afinidad a la fase estacionaria, la
muestra desconocida presento un factor de
retencin de 0.2 igual que la muestra de
lisina por lo que se puede concluir que la
muestra desconocida corresponde a otra
siembra de la muestra de lisina.

BIBLIOGRAFA

CROMATOGRAFA, En
http://www.javeriana.edu.co/Facultades/Cie
ncias/neurobioquimica/libros/celular/cromat
ografia.htm
Consultado el da 13 de Enero de 2012.
CROMATOGRAFA DE CAPA FINA, En
http://depa.pquim.unam.mx/proteinas/estru
ctura/ChrTLC.html
Consultado el da 13 de Enero de 2012.
AMINOCIDOS, En
http://acemucsc.galeon.com/articulos/Bioqu
imica/aminoacidos.htm
Consultado el da 13 de Enero de 2012.
NATURALEZA QUMICA DE LOS
AMINOCIDOS, En
http://themedicalbiochemistrypage.org/span
ish/amino-acids-sp.html
Consultado el da 13 de Enero de 2012.
PROPIEDADES DE LOS AMINOCIDOS,
En
http://www.ehu.es/biomoleculas/aa/aa2.htm
Consultado el da 13 de Enero de 2012.
ECUACIONES QUMICAS, En
http://themedicalbiochemistrypage.org/span
ish/ionic-equilibrium-sp.html
Consultada el da 14 de Enero de 2012.
AMORTIGUADORES, En
https://www.itescam.edu.mx/principal/sylab
us/fpdb/recursos/r55275.PDF
Consultado el da 14 de Enero de 2012.
ARTICULOS DE AMINOACIDOS EN
http://acemucsc.galeon.com/articulos/Bioqu
imica/aminoacidos.htm

LOS AMINOACIDOS SE PUEDEN


CLASIFICAR SEGN SU GRUPO R

Lehninger - Principios De Bioquimica


paginas: 79-80-81
TABLA PROPIEDADES, INDICE
HIDROPATICO DE LOS AMINOACIDOS
ESTANDAR
Lehninger - Principios De Bioquimica
paginas: 78

ANEXOS
1 De los 20 aminocido, mencione
cuales son triprticos.
-

cido Asprtico.
cido Glutmico.
Histidina.
Lisina.
Arginina.

2 Considera que determinar los pKa


mediante curvas de titulacin para
un aminocido con un grupo R
ionizable
puede
presentar
dificultades. Explique
Al graficar la curva de titulacin para
un aminocido diprotico se pueden
denotar las zonas o saltos donde se
encuentran los amortiguadores y la
ubicacin de pH del pKa, para los
aminocidos triproticos o con grupo
R ionizables, estas o saltos son
menos visibles para el anlisis.
3 El pH intracelular y el de la sangre
son cercanos a 7,4. A ese pH son
los aminocidos un buen buffer?.
Explique su respuesta.
S, hay muchos fluidos en nuestro cuerpo
que se deben mantener dentro de unos
lmites muy estrechos de pH. Para que este

objetivo se realice, se crea un sistema


amortiguador.
En soluciones de pH neutro los
aminocidos existen como zwitteriones
(iones doblemente cargados) en los que el
grupo carboxilo est disociado y el grupo
amino protonado.

4 El pH inicial de una solucin 0,2 M


arginina es de 14.
a Cul
es
la
estructura
predominante de la arginina en la
solucin a este pH?
La arginina es un cido triprotico
en pH acido, ya que puede donar
protones, a medida de que
aumenta
el pH este se va
desprotonando comenzando por
el grupo carboxilo del aminocido
(-COOH), seguido por el grupo
amino con doble enlace (=H2N) y
finalmente el grupo amino (-H 3N)
quedando finalmente por su
totalidad desprotonado as:

b En qu direccin se movern en
un campo elctrico.
Se mueve hacia la parte positiva
dado a que se encuentra cargada
negativamente.
5 Responda las siguientes preguntas
de seleccin mltiple (Seleccione
con una X el cuadr con la
respuesta correcta):
A.Una Placa de cromatografa luego
de ser desarrollada tiene un frente
de elucin de 6 cm y una mancha a
3 cm. Cul es el valor de Rf del
compuesto?

Figura: Desprotonacin de la
Arginina
3
0.5

2
0.2
B.
Cul es el mximo valor de
Rf para cualquier molcula en la
cromatografa en capa fina?

0.1
10

1.0
Infinito

C.
Qu significa cuando el valor
de Rf de una molcula es 1?
La molcula tiene ms afinidad por la
fase mvil.
La molcula es ms adsorbida en la fase
estacionaria.
La interaccin entre la molcula y la fase
mvil es ms dbil
Ninguna de las anteriores.