ERSIDAD NACIONAL MAYOR DE S

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Universidad del Per Decana de Amrica

QUIMICA ORGNICA
FACULTAD:Ingeniera Industrial
PROFESOR:Fritz Choquesillo

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Electroforesis

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Electroforesis
La electroforesis es una tcnica para la separacin de molculas segn la
movilidad de estas en un campo elctrico a travs de una matriz porosa, la
cual finalmente las separa por tamaos moleculares y carga elctrica,
dependiendo de la tcnica que se use.
Se puede realizar con propsitos analticos de identificacin o para
caracterizacin fsica de los componentes de una muestra o para su
separacin preparativa. La migracin electrofortica de una molcula puede
realizarse dentro de cualquier medio pero generalmente es una matriz. Si
el fluido es el que se pone en movimiento, por ejemplo a travs de un
diafragma fijo, se le llama electrosmosis.

La tcnica clsica utiliza una tira recubierta de una sustancia porosa

impregnada de un electrolito. Sus extremos se sumergen en dos depsitos
independientes que contienen ambos al electrolito y estn unidos a los
electrodos del generador de corriente. La muestra se deposita en forma de
un pequeo trazo transversal en la tira. La distancia de migracin se mide en
relacin un marcador interno. Las placas son reveladas con sales de plata,
azul de Coomassie, o reactivos en particular.

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Invencin
El primer aparato sofisticado de electroforesis fue desarrollado por
Tiselius en 1937 (Aos ms tarde recibira el Premio Nobel de Qumica por
su trabajo en electroforesis de protenas.). Desarroll la moving boundary,
que se convertira en la electroforesis zonal y la utiliz para separar
protenas del suero.

Desarrollo
La electroforesis se desarroll completamente de los aos 40s a los 50s. Se
utiliz para separar molculas que van desde las protenas ms grandes,
aminocidos y hasta iones inorgnicos.

Fundamentos y Conceptos Bsicos

La electroforesis capilar (CE) es una tcnica de separacin que se ha
desarrollado gracias a los avances de la cromatografa lquida de alta
eficacia junto con los procedimientos ms tradicionales de electroforesis.
Esta tcnica permite separar bastante bien biomolculas, donde la
cromatografa lquida se muestra menos eficaz, y compuestos de pequea
masa molecular, difciles de estudiar por los procedimientos clsicos de
electromigracin en soporte.

La electroforesis capilar constituye una adaptacin particular de la tcnica

de electroforesis. Esta tcnica separativa se basa en la migracin de las
especies de la muestra en disolucin, portadoras de una carga elctrica
global, bajo el efecto de un campo elctrico y en contacto con un soporte
(medio de desplazamiento) adecuado.
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En electroforesis capilar la tira se reemplaza por un tubo capilar abierto en

sus extremos, fabricado con un dimetro pequeo (15 a 150m). El capilar
oscila entre 20 y 80cm, y est lleno de una solucin buffer. Un detector se
encuentra ubicado en un extremo del capilar, cerca del compartimiento
catdico. La seal obtenida es la base de la obtencin del electroferograma,
que muestra el registro de la composicin de la muestra. Solo las especies
que se dirigen hacia el ctodo sern detectadas.

Mtodos de Deteccin
En la deteccin UV-Vis se mide la intensidad de la luz que pasa a
travs del capilar en una pequea zona en la que se ha eliminado el
revestimiento opaco.

La deteccin por fluorescencia resulta ms sensible si se emplea una

fuente lser muy intensa, asociada a menudo a un procedimiento de
preformacin de derivados de los analitos portadores de un
fluorforo.

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Movimiento de las molculas en la electroforesis:

Las molculas siempre se mueven hacia el electrodo de polaridad opuesta a
la carga neta de la molcula (los cationes se mueven hacia el ctodo y los
aniones hacia el nodo).El medio necesita estar amortiguado al pH que
produce la direccin y taza apropiada de migracin.

Factores que afectan la electroforesis:

Composicin del solvente

Presencia de detergentes

Temperatura

Fuerza inica

Ejemplos: la estabilidad de los cidos nucleicos depende de los

iones Na+

Las protenas se agregar a bajas fuerzas inicas

Altas fuerzas inicas pueden sobrepasar la disipacin de calor

de Joule del aparato de electroforesis

Tcnicas Electroforticas
Electroforesis capilar en zona o en disolucin libre (CZE):
Es el procedimiento de electroforesis ms habitual, en el cual el
capilar es recorrido por el electrolito a travs de un medio buffer
que puede ser cido (fosfato o citrato), bsico (borato), o anftero
(carcter cido y bsico). El flujo electroosmtico crece con el pH
del medio electrofortico.

Electroforesis capilar electrocintica micelar (MEKC)

En esta variante del procedimiento anterior se aade a la fase mvil
un compuesto catinico o aninico para formar micelas cargadas.
Estas pequesimas gotitas inmiscibles con la disolucin retienen a los
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compuestos neutros de un modo ms o menos eficaz, por afinidad

hidrfila-hidrfoba. Se puede utilizar este tipo de electroforesis
para molculas que tienen tendencia a migrar sin separacin, como es
el caso de algunos enantiomeros.

Electroforesis capilar en gel (CGE)

Esta es la transposicin de la electroforesis en egel de poliacrilamida
o de agarosa. El capilar est relleno con un electrolito que contiene al
gel. Se produce un efecto de filtracin que ralentiza a las grandes
molculas y que minimiza los fenmenos de conveccin o de difusin.
Los oligonucletidos, poco frgiles, se pueden separar de este modo.

Isoelectroenfoque capilar (CIEF)

Esta tcnica, tambin conocida como electroforesis en soporte,
consiste en crear un gradiente de pH lineal en un capilar con pared
tratada que contiene un anftero. Cada compuesto migra y se enfoca
al pH que tenga igual valor que su punto isoelctrico (al pI su carga
neta es nula). Seguidamente, bajo el efecto de una presin
hidrosttica y manteniendo el campo elctrico, se desplazan las
especies separadas hacia el detector. Las altas eficiencias obtenidas
con este procedimiento permiten separar pptidos con pI que apenas
difieren entre s 0.02 unidades de pH.

Electrocromatografa Capilar
Este tipo de separacin asocia la electromigracin de los iones, propio de la
electroforesis, y los efectos de separacin entre fases presentes en la
cromatografa. La tcnica consiste en la utilizacin de un capilar relleno con
una fase estacionaria, cuyo papel es doble: acta como material selectivo
que debe, por otro lado, participar en la migracin del electrolito.

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El factor de separacin es muy elevado, pero existen un cierto nmero de

problemas que limitan su aplicacin, como el efecto de los modificadores
orgnicos sobre el flujo electro-osmtico y la dificultad de un control
preciso del volumen de muestra introducido en el capilar.

Aplicaciones
Las enormes aplicaciones de electroforesis son ms evidentes en la
industria de la salud o mdica incluyendo los antibiticos y el anlisis de la
vacuna. El anlisis de las protenas y ADN son tambin importantes
aplicaciones de la electroforesis. Aparte de permitir a los investigadores
localizar y ver las diferencias en el cdigo gentico de las especies en la
tierra, el anlisis de ADN electrofortico tambin proporciona una
herramienta fiable en investigaciones forenses. Tambin se aplica en la
bioqumica, qumica clnica, forense, de alimentos, toxicologa, Farmacia,
farmacologa, enzimologa, inmunologa, microbiologa, ,botnica, citologa,
biologa molecular, etc.

Las molculas de ADN pueden ser

analizadas por mtodos
electroforticos.

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La electroforesis es una forma de analizar el ADN, o cido

desoxirribonucleico. El ADN analizado se puede utilizar en
investigaciones forenses y pruebas de paternidad.

La electroforesis ha desarrollado nuestro conocimiento sobre la

estructura y funcin de las protenas. A travs de la electroforesis,
la cantidad de protenas en la sangre o en la orina se mide y se
compara con los valores normales establecidos, los inferiores o
superiores a los niveles normales por lo general indican una
enfermedad.

Con la electroforesis, los expertos no slo son capaces de sintetizar

nuevos antibiticos, tambin son capaces de analizar qu tipos de
bacterias son resistentes a los antibiticos.

La vacuna es un anlisis de las muchas aplicaciones importantes de la

electroforesis. Hay varias vacunas que han sido purificadas,
procesadas y analizadas a travs de la electroforesis, como la vacuna
contra la influenza, la vacuna contra la hepatitis y la vacuna contra la
polio. Los pasos exactos realizados en el anlisis de la vacuna, sin
embargo, no se pueden determinar debido a razones de
confidencialidad de las empresas farmacuticas. Sin embargo, los
informes de datos de los fabricantes de vacunas, como Wyeth, Merck
y Sanofi-Aventis presentan la electroforesis como un mtodo de
anlisis eficaz de la vacuna.

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Bibliografa:
http://es.wikipedia.org/wiki/Electroforesis
http://www.aea.gob.es/media/126624/m%C3%A9todos
%20electrofor%C3%A9ticos.pdf
http://www.ehowenespanol.com/lista-aplicaciones-electroforesissobre_117270/
http://www.quiminet.com/articulos/la-electroforesis-y-susaplicaciones-en-la-biotecnologia-3005538.htm
http://javeriana.edu.co/Facultades/Ciencias/neurobioquimica/libros/
celular/electroforesis.html

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