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DEFINICIN

La fotosntesis toma su nombre de sus races griegas foto (luz) y sntesis


(unin). Su definicin ms sencilla es la formacin de oxgeno y glucosa
a partir de CO2 un donador de hidrgeno y energa luminosa. Esta
reaccin en eucariontes puede ser resumida en la siguiente sencilla
ecuacin:

CO2

H2O

+ Energa luminosa

C6H12O6

O2

Cabe mencionar que la definicin no refleja el complicado proceso que


soporta toda la vida en la Tierra como la conocemos.
Durante los millones de aos de existencia de la Tierra en algn
momento de la evolucin celular aparecieron organismos procariontes
capaces de utilizar energa solar captndola con molculas capaces de
utilizar molculas sencillas como agua y bixido de carbono para
elaborar compuestos orgnicos ms complejos como los carbohidratos.
Esta aparicin cambio paulatinamente nuestra atmsfera y las
condiciones de vida de los primeros organismos, haciendo necesaria su
adaptacin a la presencia de O2 en ella. Actualmente los organismos que
no tenemos la capacidad de captar la energa solar y producir glucosa
somos hetertrofos pues requerimos de los auttrofos (los que producen
su propio alimento) para vivir. Ms an los humanos necesitamos no solo
del alimento sino de la energa acumulada por estos organismos en
combustibles como el petrleo y la madera para fabricar satisfactores de
nuestras necesidades.
Para la evolucin biolgica la presencia de estos organismos que
sintetizan alimento es la base de todos los ecosistemas terrestres y
marinos y sus mutaciones o modificaciones tendrn un impacto en la
diversidad vegetal y animal que conocemos hasta ahora y que
dejaremos a las futuras generaciones.
Por otro lado, en la actualidad el hombre est en posibilidad de
manipular genticamente a estos organismos para obtener ventajas en
la produccin de alimentos y beneficiarse de ello, pero a su vez esta

intervencin pudiera tener consecuencias no solo biolgicas, sino


polticas, culturales y econmicas.

DATOS HISTRICOS
Desde principios del siglo XVIII (1727) se documenta el hecho de que los
vegetales se nutren al menos parcialmente de algo contenido en la
atmsfera, para fines del siglo Joseph Priestley descubre el oxgeno y
describe que las plantas lo producen y los animales lo consumen. Cerca
de la mitad del siglo XIX Henri Dutrochet encuentra que la clorofila es
necesaria para la produccin de oxgeno por las plantas y Julius von
Sachs prueba que las plantas producen almidn en un proceso que
depende de la luz (fotosntesis) y que utiliza clorofila. En 1882 Theodor
Englemann, utilizando un aparato modificado por Carl Zeiss para
proyectar un espectro de luz separado por un prisma sobre una placa
microscpica, describi que la luz roja es la ms eficiente para que
ocurra la fotosntesis. En 1883 A. Meyer describe detalles de la
estructura del cloroplasto y A. Schimper describi su replicacin y que
son similares a algunas bacterias fotosintticas.
En los primeros aos del siglo XX, Einstein sugiri que la luz y otras
radiaciones del espectro electromagntico viajan en paquetes discretos
llamados fotones que al interactuar con la materia se aniquilan de forma
completa, nunca en partes. Segn su teora fotoelctrica se necesita un
fotn para desprender un electrn. M.S. Cvet (1906) separo mediante
cromatografa los pigmentos de las hojas de las plantas; en 1913 R.
Willsttter y Stoll aislaron la clorofila que despus caracterizaran.
Hevesy en 1923 fu el primer investigador en usar isotopos radiactivos
como tcnica de seguimiento en fisiologa vegetal. Un adelanto
importante en el estudio de la fotosntesis se dio en el ao de 1927
cuando Warburg y Negelein desarrollaron la espectrofotometra y K.
Lohmann describe el ATP.
En 1935 por primera vez se enuncia un modelo de membrana que
incluye no solo lpidos sino tambin protenas (Danielli y Davson) y en
1936 Wood y Werkman describen dos fases de la fotosntesis, una
requiere luz y otra no, dos aos despus Robert Hill aisla cloroplastos y
descubre que desprender oxgeno al ser iluminados siempre y cuando
tengan un aceptor de electrones. En 1941, Ruben, Randall, Kamen y
Hyde muestran que el oxgeno desprendido en la fotosntesis proviene
del agua, hecho muy importante debido a que antes se tena la idea que
el oxgeno desprendido era lo que quedaba del CO 2 al incorporarse el
carbono en la glucosa y en este mismo ao F. Lippmann y H. Kalckar
definen la funcin general en el metabolismo del ATP. Calvin y Benson

en 1948 informaron que el fosfoglicerato es uno de los primeros


productos de fijacin del CO2, principio de la descripcin completa del
destino del carbono que conforma el Ciclo de Calvin-Benson que les
diera el premio Nobel en 1961.
En 1951, Robert Hill confirm que la fotoproduccin de oxgeno por los
cloroplastos es independiente del uso del CO 2 y que el oxgeno se
produce por la presencia de sustancias solubles de la planta o de
reactivos que puedan aceptar hidrgeno, lo que hasta ahora se conoce
como la reaccin de Hill.
En 1956, R. Emerson y sus colaboradores encontraron que dos haces de
luz provocaban mas produccin de oxgeno por fotn que la suma de del
producido por cada haz de forma independiente, a lo que se le llamo
Efecto Emerson.
Kortschak et al., adems de Hatch y Slack (1965/66) describieron un
mecanismo sumamente eficiente usado por las plantas tropicales para
unir CO2 (Plantas C4). En 1970, L. Margulis presenta su teora de la
endosimbiosis donde propone que los cloroplastos son descendientes de
bacterias fotosintticas que vivan dentro de otras clulas y en 1971
Vernon resume el concepto de que los pigmentos se ensamblan en las
membranas de los tilacoides de los cloroplastos formando un centro de
reaccin de molculas de clorofila y pigmentos accesorios. En 1972, con
la ayuda de la novedosa tcnica de congelacin-fractura para
microscopa electrnica de barrido, Singer y Nicholson presentan el
modelo del mosaico fludo para las membranas celulares en donde se
propone ms claramente la interaccin de lpidos y protenas en
distintas zonas.
En 1988 se present un fuerte avance en el estudio de la fotosntesis, la
cristalizacin del centro de reaccin de una bacteria fotosinttica y su
resolucin por cristalografa de Rayos X, trabajo por el cual Deisenhofer,
Huber y Michel recibieron el premio Nobel.
En la actualidad, adems de cada vez mejores descripciones por
cristalografa de rayos X de las diferentes molculas involucradas, se ha
dado una sucesin de investigaciones basadas en mutaciones de genes
que codifican diferentes protenas para analizar su participacin en el
proceso fotosinttico; asimismo la utilizacin de tcnicas de
transferencia gentica para fortalecer el rendimiento en la produccin de
carbohidratos.
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ASPECTOS INTRODUCTORIOS
Es importante introducir algunos conceptos que nos ayudarn a
comprender mejor el proceso de la fotosntesis y sus formas de
evaluacin o demostracin experimental.
Radiacin electromagntica. La radiacin electromagntica es una
forma de energa radiante que es de naturaleza dual pues presenta
propiedades tanto de onda como de partcula. Entre sus propiedades de
onda posee una componente elctrica y una componente magntica,
que son perpendiculares, pero slo la componente elctrica interacciona
comnmente con la materia. Uno de sus parmetros es la frecuencia
que se define como el nmero de ondas que pasan por un punto fijo en
la unidad de tiempo, se puede expresar la frecuencia de otra forma
como nmero de unidades de longitud de onda en 1 cm y se llama
nmero de onda. Entre sus propiedades de partcula encontramos que
las ondas viajan en paquetes discretos llamados fotones y que cuando
interacta con la materia lo hace mediante la aniquilacin de fotones
completos.
La radiacin electromagntica puede considerarse como constituida por
ondas de energa. En cada una de estas ondas, la distancia entre dos
crestas (o valles) consecutivas es la longitud de onda. La radiacin slo
se absorbe o emite en unidades definidas llamadas fotones. La energa
de los fotones es proporcional a la frecuencia de la radiacin.
La intensidad de un haz de radiacin est caracterizada por su poder de
radiacin, que es proporcional al nmero de fotones por segundo que se
propagan en el haz que transporte radiacin de una sola longitud de
onda o sea monocromtico; un haz policromtico contiene radiacin de
diversas longitudes de onda.

La gama completa de radiaciones del espectro electromagntico


comprende diferentes longitudes de onda que de acuerdo a su tamao
poseen ms o menos energa (Fig. 1). Las longitudes de onda
correspondientes al espectro de luz visible (luz solar) es entre 400 y 700
nm aproximadamente, por debajo de 400 nm se encuentra la radiacin
ultravioleta y por encima de 700 nm la radiacin infrarrojo.

Fig. 1. Radiaciones electromagnticas. Es importante apreciar que entre mayor sea la


longitud de onda, menor es la frecuencia y la energa.

Cuando una molcula, por ejemplo un pigmento fotosinttico, absorbe


un fotn de luz est absorbiendo un cuanto de energa y pueden suceder
varias cosas:

que la molcula la absorba y posteriormente la reemita


como un fotn de longitud de onda mayor, al regresar a su
estado fundamental,
que produzca cambios y transiciones electrnicos,
vibracionales y rotacionales, manifestados como calor o
cambios en la molcula como puede ser la emisin de un
electrn.
que se disperse
que se refleje

Uniones entre molculas. Brevemente mencionaremos que pueden


ser fuertes o dbiles. Las uniones fuertes en este espacio se
consideraran como sinnimo de enlaces covalentes. Un enlace covalente
es una unin en que dos molculas se unen compartiendo uno o ms
pares de electrones para estabilizarse y la energa requerida esta
aproximadamente entre 30 y 110 KCal/Mol.
Entre las uniones dbiles encontramos aquellas que requieren muy
pocas kilocaloras por lo que se rompen relativamente fcil, proceso muy
importante en los sistemas biolgicos pues permiten cambios
conformacionales rpidos que favorecen diferentes funciones de los
organismos, ejemplos de ellas son los enlaces inicos, los puentes de

hidrgeno, las uniones hidrofbicas y las uniones de corto alcance como


lo son las fuerzas de Van der Walls.
Reacciones oxido-reduccin. Una oxidacin es la remocin de uno o
ms electrones de un tomo o de una molcula y una reduccin es el
proceso contrario, la adicin de electrones. La oxidacin requiere un
aceptor y la reduccin un donador de electrones y debido a que estas
especies no se encuentran libres, siempre que haya una oxidacin habr
una reduccin asociada, a lo que se le llama reaccin de xido reduccin
o redox y las sustancias o tomos involucrados se llaman par redox. En
los sistemas biolgicos existen muchos ejemplos de este tipo de
reacciones, muchas oxidaciones se llevan a cabo sustrayendo el mismo
nmero de protones que de electrones, forma en la cual la carga neta no
vara al oxidarse, a este tipo de oxidaciones se les llama
deshidrogenaciones y al proceso de reduccin hidrogenacin. Es
importante mencionar que existen un pequeo grupo de molculas
llamadas transportadores biolgicos que pueden ser oxidados en un
lugar y reducidos en otro, siendo capaces de transportar electrones de
un lado a otro a travs del citoplasma, un ejemplo es el NADP+.

ESTRUCTURAS CELULARES Y MOLECULARES PARTICIPANTES


Plantas superiores. Aunque la fotosntesis se lleva a cabo no solo en
plantas superiores sino tambin en algas eucariontes unicelulares y
procariontes como bacterias y algas verde-azules, es importante
mencionar la compleja estructura de las hojas de las plantas. De manera
sencilla las hojas de las plantas han evolucionado de acuerdo al medio
ambiente en el que viven, siendo triunfadoras en la seleccin natural
aquellas con caractersticas que les permitan un funcionamiento idneo.
Las hojas e la mayora de las plantas son de apenas unas cuantas
clulas de espesor lo que permite que se expongan en una mayor
extensin a la energa radiante del sol. En la superficie superior e inferior
tienen una delgada capa de clulas que forman la epidermis y ambas
capas estn recubiertas por una cutcula que es una proteccin ms
fuerte de contiene ceramidas que les da cierta impermeabilidad y
resistencia a la prdida de la humedad. En la epidermis existen unos
poros de apertura regulable llamados estomas que permiten la entrada
de CO2, en el tiempo necesario y que convenientemente poseen
cloroplastos. Dentro de la hoja existe una capa intermedia de clulas
llamada mesfilo, las cuales contienen la casi totalidad de los
cloroplastos por lo que la fotosntesis se realiza en este lugar. Adems,
las hojas contienen una vascularizacin que suministra agua y sales
minerales y transportan los carbohidratos a otras partes de las clulas.
En las plantas que efectan una va alterna para la fotosntesis, llamadas
C4, existen unas clulas llamadas del parnquima vascular que poseen
un tipo diferente de cloroplastos llamados dimrficos.
Cloroplastos. Las plantas superiores contienen una gran variedad de
plstidos en donde se realizan funciones muy importantes, estos
organelos derivan de un ancestro comn, aunque despus de su
desarrollo presentan una variedad de tamaos, formas y funciones; este
desarrollo est dirigido por genes de las clulas que los contienen.
De inicio fueron clasificados solo por su color en cloroplastos (verdes),
cromoplastos (amarillos o rojos) y leucoplastos (blancos); en la
actualidad se reconocen los cloroplastos (con gran proporcin de
clorofila), amiloplastos (reserva e almidn), cromoplastos (carotenos),
oleinoplastos (aceites), proteinoplastos (protenas), proplstidos
(pequeos y no diferenciados, fundamentalmente en races) y
etioplastos (plastos de las plantas que crecen en la oscuridad). Todos
ellos poseen un genoma propio capaz de codificar un pequeo nmero

de genes, por lo que muchas de sus protenas son codificadas por el


ncleo de la clula y las protenas son importadas al plstido. Es
importante recordar que la presencia de material gentico y de una
doble membrana son las bases de la teora endosimbitica que postula
que estos plstidos y las mitocondrias entraron como organismos
simbioticos en otra clula, los organismo procariontes ms parecidos en
la actualidad a los plstidos seran las algas verde-azules o
cianobacterias.
En plantas superiores, los cloroplastos son cuerpos discoidales o
elipsoidales que miden entre 2 y 10m de dimetro y 1m de grosor. En
algas pueden ser ms grandes y de forma ms complicada. En plantas
superiores puede haber docenas de cloroplastos en el citoplasma de
cada clula verde, mientras que en organismos eucariontes unicelulares
solo puede haber uno o dos.

Se han distinguido dos tipos de


cloroplastos:
el
lamelar,
caracterstico de algas, y el formado por grana, caracterstico de plantas
superiores; esta rodeado por dos membranas, cada una de
aproximadamente 5 nm de grosor con un espacio de aproximadamente
10 nm entre ellas. Aparentemente cada una presenta la estructura de

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una unidad de membrana, es decir, una bicapa de fosfolpidos entre dos


de protena. Las membranas tienen permeabilidad diferencial, lo cual
favorece que entre materia prima para la fotosntesis y despus salgan
los productos de sta.
Dentro del cloroplasto hay un material semifluido incoloro que contiene
protenas DNA, RNA y ribosomas que participan en la sntesis de varias
protenas del cloroplasto; muy similar a la matriz mitocondrial llamado
estroma. Aqu es donde se localiza la mayora de las enzimas requeridas
en las reacciones de la fase oscura.

La membrana interna se invagina formando dobleces apareados


llamados lamelas. A ciertos intervalos las lamelas se ensanchan y
forman bolsas o sacos planos llamados tilacoides, y stos se acomodan
uno sobre otro para formar los grana.
Segn el modelo de Hodge, la clorofila se encuentra dentro de los
tilacoides entre capas de molculas de protena y fosfolpidos. Se cree
que los transportadores de electrones y enzimas fosforiladoras de los
fotosistemas I y II estn en la membrana de los tilacoides.

Pigmentos fotosnteticos. La clorofila es el pigmento responsable del


color verde de las plantas. Sin embargo, una planta no verde no
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siempre carece de clorofila; a menudo sta se encuentra enmascarada


por los pigmentos accesorios no verdes. Todas las clulas fotosintticas
que producen oxigeno contienen 2 tipos de clorofila, una de las cuales
siempre es la a. La otra puede ser clorofila b (plantas verdes), clorofila c
(algas pardas, diatomeas, dinoflagelados), o clorofila d (algas rojas). Los
organismos fotosintticos que no producen oxigeno bacterias
fotosintticas- nunca tienen clorofila a; contienen tipos sencillos de
clorofila, que pueden ser bacterioclorofila o clorobium-clorofila o ambos
tipos.
Cualquier forma de clorofila contiene la estructura porfirina consistente
en 4 anillos pirrlicos unidos por sus tomos de nitrgeno a un tomo de
magnesio. Cada clorofila tiene un quinto anillo con solo tomos de
carbono. Exceptuando a la clorofila c, todas las clorofilas tienen una
larga cadena fitol. La diferencia entre clorofilas es la estructura de las
cadena laterales ligadas a los anillos pirrlicos. Por ejemplo, la clorofila
a tiene un grupo metilo en el anillo 3, mientras que la clorofila b tiene un
grupo aldehdo en ese lugar.
Un anlisis de la estructura de la clorofila y de su disposicin en el
cloroplasto muestra que estn muy relacionadas con la funcin que
desempea. Por una parte, la molcula necesita poseer electrones que
se exciten fcilmente, pero a la vez que no la inestabilicen lo suficiente
como para buscar combinarse rpidamente con alguna sustancia
inadecuada. La estructura de los anillos pirrlicos, con sus enlaces
conjugados, tiene precisamente estas propiedades. Cualquier sistema
conjugado posee electrones particularmente mviles que se excitan con
poca cantidad de energa, como la que conforma la luz visible.
Asimismo, la clorofila es muy estable, aunque fcilmente excitable,
porque en su estructura de anillos cerrados en crculo los electrones
exteriores no pertenecen a un tomo o enlace individual, sino al
complejo alrededor del cual oscilan.
Cuando la clorofila recibe la estimulacin por los fotones, desprende
electrones que reducen el NADP+ por lo sera de esperarse que la
eficiencia de la fotosntesis acompaara los cambios realizados por la
diferente absorcin de la clorofila en distintas longitudes de onda; sin
embargo, esto no sucede debido a que existen otros pigmentos capaces
de absorber energa radiante en otros rangos de longitud de onda lo que
hace a la fotosntesis un proceso muy eficiente absorbiendo energa
prcticamente en cualquier rango del espectro visible.

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Aunque la energa es asimilada en un amplio espectro, parte de ella se


pierde al transferirla de una molcula a otra hasta llegar al pigmento
que absorbe a la mayor longitud de onda en el visible o sea, la de menor
energa. Por lo anterior, es importante realizar la transferencia de
energa de una molcula de clorofila a otras y de los pigmentos
accesorios a la clorofila a con eficiencia. Esto se logra gracias a la
disposicin molecular de la clorofila en los cloroplastos. Puesto que la
cadena fitol es soluble en lpidos y el resto es soluble en protena, se
crea un acomodo muy compacto de las molculas, lo que les da cercana
fsica. Cuando una de las molculas es excitada, rpidamente pasa su
energa a la molcula vecina por resonancia.
Consecuentemente, debe existir algn sitio que acumule o guarde la
energa de excitacin para que no circule demasiado tiempo y se pierda
como calor; esta trampa de energa debe absorber luz de la menor
energa posible, esto es 700 nm en el espectro visible, lo que hace
eficientemente la clorofila a, con distintas subfracciones que absorben
desde 660 hasta cerca de 700, formando una unidad cooperativa, parte
de un sistema de pigmentos o fotosistema llamado P 700. P700 absorbe a
mayor longitud de onda, y por tanto menor energa, que las molculas
que lo rodean. Entonces ellas le pueden pasar energa a P 700 pero no
viceversa, por lo que hay un flujo unidireccional.
Por ltimo, el mecanismo de asimilacin de energa mencionado no es
suficiente para explicar el hecho de que luz monocromtica de 700 es
ineficiente para producir la fotosntesis en cloroplastos y que la adicin
de un segundo haz de luz de longitud de onda menor (650) aumenta de
forma sinrgica la eficiencia global. Este efecto de luz doble conocido
como efecto Emerson llevo a postular la idea de que al menos existen
dos trampas diferentes, a esta segunda se le conoce como P 690.
Resumiendo, los pigmentos en los cloroplastos parecen estar agrupados
en dos partes o sistemas de pigmentos llamados sistema de pigmentos I
o fotosistema I (PSI) y sistema de pigmentos II o fotosistema II (PSII). El
mismo grupo del Dr. Emerson describi que ambos sistemas estn
acoplados qumicamente, ms que a travs de la sola transferencia de
energa, este acoplamiento comprende varias reacciones de oxidacinreduccin similares a la cadena de transporte de electrones en
mitocondrias. Al parecer los electrones que se sustraen del agua se
transfieren a la cadena de transporte de electrones mediante PSII y de la
cadena al NADP+ por el PSI.

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REACCIONES DE FASE LUMINOSA


Consiste en la captura de fotones, cuya energa es utilizada finalmente
para la produccin por una parte de una molcula transportadora
llamada, nicotinamida-adenin-dinucletido fosfato reducida (NADPred) y
por otra de energa qumica almacenada, adenosin-trifosfato (ATP). El
reductor se produce cuando la clorofila atrapa fotones, los cuales excitan
las molculas de NADP de esta manera provocan el ascenso de
electrones a un nivel de energa superior. Los electrones no regresan a
la molcula de clorofila porque reducen molculas de NADP+ a NADPH.
Por otra parte, la energa qumica almacenada se produce cuando la
clorofila atrapa fotones que excitan las molculas de NADP, con lo que
provocan el ascenso de electrones a un nivel de energa superior, del
que si regresan, mediante la liberacin gradual del exceso de energa.
Dicha energa se utiliza para acoplar fosfato inorgnico (Pi) con adenosin
bifosfato (ADP) para producir ATP.
La molcula que recibe definitivamente al electrn excitado de la
clorofila a y que por tanto queda reducida por el, es el NADPox. La
clorofila no reduce al NADPox cuando su potencial es positivo, sino
cuando, gracias a la absorcin de la energa de un fotn, ha adquirido un
potencial mas bajo que el del NADPox. La energa luminosa (fotones)
captada por la clorofila se utiliza para disminuir el potencial redox de
la clorofila, de tal manera que sta pueda ser un agente reductor del
NADPox.
Un fotn incide sobre un conjunto de molculas del pigmento clorofila a
transmitindole su energa, actuando como catalizador fotoqumico. Se
cree que entre dichas molculas hay una especializada en recibir y ceder
electrones excitados, llamada P700 que es parte del PSI. P700 cede su
electrn excitado y queda con una deficiencia electrnica. El electrn es
recibido por una protena transportadora de electrones que contiene
azufre y hierro llamada ferredoxina. A su vez la ferredoxina cede el
electrn a la ferredoxina- NADPox. El proceso continua con acumulacin
de NADPred hasta que se agota el NADPox. Dado que los electrones no
regresan a la clorofila a, a este proceso se le ha llamado flujo de
electrones no cclico.
El mecanismo mediante el cual se regeneran las molculas de clorofila a
es igual a aquel mediante el que se produce el NADPred: la excitacin de
molculas pigmentarias cuyos electrones pasan por varios compuestos
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hasta llegar a un aceptor final. El recorrido del electrn que regenera a


la clorofila a es el siguiente: un fotn incide sobre un conjunto de
molculas del pigmento clorofila b y le trasmite su energa. Una
molcula cede su electrn excitado a un aceptor aun no identificado Q,
que queda de esta manera con una deficiencia electrnica. Q transfiere
el electrn a una sustancia llamada plastoquinona. De la plastoquinona
el electrn pasa al citocromo b599, compuesto que tiene fierro. De este
citocromo el electrn pasa al citocromo f o c 555 y de ste a la
plastocianina, una protena que tiene cobre. Es la plastocianina la que
cede el electrn a la molcula P700 de clorofila a.
La clorofila b, al igual que la a, simplemente cede electrones
temporalmente, y por tanto es un catalizador. Los electrones que
corrigen las deficiencias electrnicas de la clorofila b provienen del agua
y ste es el verdadero agente reductor del NADPox, pues se acumula en
forma oxidada como O2
El flujo no cclico de electrones es una reaccin de xido-reduccin en la
que el agua es el agente reductor y el NADPox es el agente oxidante; se
acumulan el O2 como compuesto oxidado y el NADPred como compuesto
reducido. Pero dado que es una oxido-reduccin que ocurre en el
sentido contrario al espontneo requiere de una entrada de energa. Es
la energa solar la que invierte el sentido natural de la reaccin. La
ecuacin es:

nhv + 2 Pi + 2ADP + H2O + NADP


2ATP + 2H2

NADPH + O 2 +

el flujo de electrones no cclico es la combinacin de dos mtodos


opuestos pero complementarios, para relacionar compuestos de
diferente potencial redox: un mtodo brusco, la excitacin de
electrones por absorcin de energa luminosa, y un mtodo gradual, la
liberacin de pequeas cantidades de energa por la oxido-reduccin de
una serie de compuestos de potencial muy cercano entre si. Podra
considerarse una falta de precisin del sistema que la excitacin llevara
al electrn a un potencial redox menor que el necesario para reducir al
NADPox o a la clorofila a y despus liberar el excedo de energa hasta
llegar a un potencia adecuado. Sin embargo, el exceso de energa no se

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desperdicia, pues en sitios determinados se usa para acoplar ADP con Pi


dando ATP, una forma ms de energa qumica potencial, en otras
palabras, hay una fosforilacin no cclica. Cuya principal funcin es la de
producir un compuesto rico en energa y fuertemente donador de
hidrogeno, como es el NADPred. Sin embargo, si hay un proceso dentro
de las reacciones luminosas cuya nica funcin es la produccin de un
compuesto que no es reductor pero si rico en energa, el ATP.
Al iluminar cloroplastos aislados se ha observado que en ausencia total
de donadores o aceptores de electrones se forma ATP a partir de ADP y
Pi, sin acumulacin de un compuesto reducido.
Tambin se ha
observado que la formacin de ATP depende directamente de la
intensidad y duracin de la iluminacin; entre ms tiempo se iluminen
los cloroplastos y mayor sea la intensidad, mas ATP se forma. Dado que
no se detecta un producto reducido, se supone que no hay una
transferencia neta de electrones. Sin embargo, la acumulacin de un
compuesto con un enlace de alta energa donde no lo haba indica que
aun cuando los electrones no estn produciendo una reduccin neta, si
estn fluyendo. Se supone que lo que sucede es que hay oxidacin y
reduccin del mismo compuesto, a saber, la clorofila P 700. Puesto que la
nica fuente posible de energa para unir Pi y ADP es la energa radiante
dada a los cloroplastos, se supone que dicha energa genera electrones
con un alto nivel energtico. Esos electrones regresan a la clorofila a
partir de la ferredoxina va citocromo b6 - en vez de continuar hacia el
NADP a llenar las deficiencias electrnicas que ellos mismos dejaron. Si
estn presentes el ADP y el Pi, ocurre formacin de ATP, es decir, una
fosforilacion; si no estn presentes el ADP y el Pi, la energa se pierde
como fluorescencia y calor. La ecuacin general del flujo cclico de
electrones es:
nhv + Pi + ADP

ATP + H 20

Las reacciones luminosas las llevan a cabo ambos fotosistemas


conectados en serie.
Los dos sistemas y el complejo citocromo estn incluidos en la
membrana tilacoide. Los electrones captados del agua en el fotosistema
II se transfieren al fotosistema I a travs de las quinonas (Q), el complejo
citocromo b6f y la plastocianina (PC). En el fotosistema I, los electrones
se excitan de nuevo por la luz, para su transferencia a travs de una
serie de intermediarios a la ferredoxina. La ferredoxina reducida reduce
el NADP+.
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En cada uno de los dos centros de reaccin, P 680 y P700, los electrones
suben a un estado excitado mediante la absorcin de fotones. En cada
fotosistema, los electrones excitados pasan por una cadena de
transporte electrnico, que impulsa el bombeo de iones hidrogeno al
interior de la luz del tilacoide. El modo de coneccin de los dos
fotosistemas se denomina a veces esquema Z, debido al patrn de
cambios energticos que se ha descrito.

Imagen simplificada de la fotosntesis. Principales protenas de la membrana


tilacoides qur soportan el flujo lineal de electrones. (a) Organizacin transmembranal
de las protenas de los principales complejos fotosintticos en su estado de
oligomerizacin nativo, resuelto por cristalografa de rayos X (Daniel Picot). (b)
Representacin esquemtica de la va del flujo lineal de electrones y de la
translocacin de protones a travs de grandes complejos de protenas cuya estructura
atmica se muestra en parte a. Los electrones son extrados del agua en el lado
lumenal
de las membranas y trasladado a NADP en el lado del estroma. La transferencia de
electrones es impulsada por el centro de reaccin de dos distintos fotosistemas -PSII y
PSI- que constituyen el centro de separacin de cargas inducida por la luz, entre la
clorofila
fotosensible
y
una
molcula receptora. El intersistema de acarreadores electrnicos consiste en un
conjunto de molculas de plastoquinona disueltas dentro de la bicapa lipdica, un
complejo de protenas transmembranal -complejo de citocromos b6f- que comprende
un grupo de Fe-S y cuatro grupos hemo, una pequea protena que contiene llamada
plastocianina, que esta disuelta en el lumen de los tilacoides y que es sustituida por un

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citocromo soluble, C6, en algunos organismos fotosintticos. Los protones translocados


a travs de la membrana durante el flujo lineal de electrones son utilizados por la ATP
sintasa transmembranal para impulsar la sntesis de ATP. Tomada de Eberhard, Finazzi,
y Wollman.

Es importante mencionar que los electrones captados por el agua


mencionados antes, son solo un caso especial del esquema general de la
fotosntesis, en 1937, Robert Hill descubri que al iluminar cloroplastos
que carecen de CO2 en presencia de un aceptor de electrones artificial,
el ferricianuro [Fe(CN) 63-], se produce O2 con la reduccin concomitante
del aceptor. Demuestra que el CO2 no participa directamente en la
reaccin de produccin de O2.
En 1941, cuando se pudo disponer del istopo 18O, Samuel Ruben y
Martin Kamen demostraron que la fuente del O 2 que se forma en la
fotosntesis es el H2O:
H218O + CO2

(CH2O) +

18

O2

En el caso de las bacterias sulfurosas purpreas se utiliza sulfuro de


hidrogeno con la siguiente ecuacin:
H2S + CO2

S + 2H2 + 2e-

Resumiendo la contribucin de Hill a la ecuacin general de la


fotosntesis es el esclarecimiento del origen del O 2 enunciando la
ecuacin general:
CO 2

+ H2A

C 6H12O6 + 2A +

H2O

18

REACCIONES DE FASE OSCURA


Las
sntesis
del
proceso
fotosinttico
se
llevan
a
cabo
independientemente de la presencia o ausencia de luz. Mediante estas
reacciones lo que ocurre son dos eventos: la fijacin del CO 2 y el ciclo
de reduccin del carbono.
La fijacin del CO2 implica que su carbono se integra a otras molculas
con carbono para la construccin de cadenas ms largas.

H2O

+ CO2 + Ribulosa-1,5-difosfato
difosfoglicrico

2 cido 3-

Ya que se ha fijado el CO 2, relacionaremos los productos de la fase


luminosa con las reacciones de la fase oscura integrando cada reaccin
hacia la sntesis de carbohidratos:

Acido 3-fosfoglicrico + ATP


+ ADP + Pi

Acido difosfoglicerico + NADPH


+ NADP

acido difosfoglicrico

fosfogliceraldehdo

El fosfogliceraldehdo (PGA) es un compuesto importante porque puede


seguir en el ciclo de reduccin del carbono o puede salir y seguir
reducindose hasta producir carbohidratos sencillos o complejos, etc.
Uno de los caminos que puede seguir es el siguiente:
2 PGA
carbohidrato) +

hexosa fosfatada (un

Pi

Otro papel muy importante del PGA es la reintegracin de la ribulosa1,5-difosfato y de esta manera evitar que se detenga la fijacin de
carbono por falta de un aceptor inicial. La manera en que esto se lleva a
cabo es cclica, pues las molculas de PGA (C3, de tres carbonos)
19

producen molculas de ribosa-5-fosfato (de cinco carbonos), que con


ATP se transforman en ribulosa-1,5-difosfato (cinco carbonos) la cual tras
fijar CO2 vuelve a producir dos molculas de PGA para volver a comenzar
el ciclo.
Podemos caracterizar a las reacciones de la fase oscura como un
proceso de oxido-reduccin en la que el NADPH es el agente reductor y
el CO2 el agente oxidante; se acumula NADP como compuesto oxidado y
un carbohidrato como compuesto reducido. Esta reaccin, al igual que
las de los flujos cclicos y no cclico de electrones, ocurre en contra del
sentido espontneo, por lo que tambin requiere una entrada de
energa. Pero en este caso no es la energa de un fotn la que invierte el
sentido de la reaccin, sino el ATP producido durante las reacciones
luminosas.
En el ciclo descrito por Calvin-Benson entran 3 molculas de ribulosa1,5-difosfato, las cuales aceptan una molcula de CO 2 cada una, o sea, 3
en total. Al reaccionar la ribulosa-1,5-difosfato y el CO 2 se forman 3
molculas de un compuesto de 6 carbonos, de estructura desconocida.
Dicho compuesto, rpidamente se rompe en dos molculas iguales de
cido 3-fosfoglicrico. Las 6 molculas de acido 3-fosfoglicrico son
reducidas por el NADPH y el ATP de las reacciones luminosas, lo que da
como resultado 6 molculas de fosfogliceraldehdo. Cinco de ellas
vuelven a entrar al ciclo para regenerar la ribulosa-1,5-difosfato y la
sexta representa la ganancia del ciclo, que puede oxidarse en las
mitocondrias o seguir reducindose. La frmula general es:
6-ribulosa-1,5-difosfato + 6CO2 + 18ATP + 12NADPH

6-ribulosa-1,5-difosfato + hexosa + 16Pi + 18ADP +


12NADP

La ribulosa-1,5-difosfato aparece a ambos lados de la ecuacin solo para


mostrar que es un componente necesario que se regenera al final del
ciclo.
Alrededor de 1960, se describi un proceso llamado fotorrespiracin que
sucede en plantas que se encuentran sumamente iluminadas que en
lugar de producir oxgeno, lo utilizan; de hecho, cuando el CO 2 esta

20

escaso y el O2 abunda el proceso de fororrespiracin puede superar al de


la fijacin de CO2 en la fotosntesis. La explicacin resulto algo
paradjico, la enzima que fija el CO2 en la ribulosa-1,5-difosfato no tiene
una afinidad especfica por el CO 2, puede tambin captar O2 cuando ste
se encuentra en abundancia, de hecho la enzima encargada que en un
inicio se crey que solo era carboxilasa ahora se renombro y se conoce
como ribulosa-1,5 difosfato carboxilasa-oxigenasa o Rubisco.
En su accin como oxigenasa, la Rubisco cataliza la formacin de 3fosfoglicerato y 2-fosfoglicolato, ste ltimo es hidrolizado a glicolato,
por la glicolato fosfatasa, que es oxidado parcialmente formando CO 2 a
travs de reacciones realizadas en peroxisomas especializados en las
plantas llamados glioxisomas. Aunque la fotorrespiracin aparentemente
es un proceso que desperdicia el realizado por la fotosntesis, parece ser
que apareci cuando en la atmsfera primitiva haba muy poco oxgeno
y no causaba problema alguno; sin embargo, en la actualidad pudiera
haber sobrevivido el proceso evolutivo al ser un mecanismo de
proteccin del aparato fotosinttico contra la foto-oxidacin cuando no
exista suficiente CO2 para disipar la energa absorbida.
Precisamente, en 1966 Hatch y Slack describieron otra va para la
fijacin del carbono que utilizan plantas de climas calurosos y secos que
evitan la fotorrespiracin. Estas plantas poseen una anatoma
caracterstica en la cual sus finas venas estn rodeadas por una capa
muy fina de clulas de la vaina del haz que a su vez estn rodeadas por
clulas del mesfilo. Estas plantas poseen otro tipo de cloroplastos
llamados dimrficos. En esta va, el CO 2 es captado por las clulas del
mesfilo que no contienen cloroplastos, por lo que ste se condensa con
el fosfoenolpiruvato (PEP) para formar oxaloacetato (OA) que es un
compuesto de cuatro carbonos por lo que esta va tambin se conoce
como C4. El OA es reducido por el NADPH y convertido a malato que es
transportado a cloroplastos comunes para por una descarboxilacin
convertirse en piruvato y liberar CO2 que entra al ciclo de Calvin o C3 y
el piruvato regresa a las clulas del mesfilo para ser fosforilado y de
nuevo formar PEP. El resultado de este proceso es la concentracin de
CO2 en las clulas de la vaina del haz a expensas de ATP, que aunque
parezca ms ineficiente que el proceso normal o C3, en realidad es una
estrategia muy eficiente para adaptarse a las condiciones climticas en
las cuales abrir los estomas durante el da para captar CO 2 podra ser
fatal por la deshidratacin causada por la temperatura.

21

Figura de flujo de carbono. Un aspecto general del flujo de carbono y equivalentes de


reduccin los cloroplastos de la vaina, que ilustra las conexiones entre NDH dependientes e
independientes
del flujo de electrones cclico, oxidasa alternativa (PTox), CCMs postuladas como NDHdependientes y el flujo primario de carbono. Las protenas mostradas en rojo estn enriquecidos
los cloroplastos de la vaina. El transporte malato-piruvato importa malato a los cloroplastos de
las clulas de la vaina, donde se descarboxila por ME, liberando CO 2 y reduciendo de NADP+ en
NADPH. En condiciones favorables, el CO 2 es utilizado por la Rubisco en el ciclo de Calvin. El
NADPH se utiliza en el ciclo de Calvin y tambin puede usarse para conducir un flujo cclico de
electrones, el cual se asimila al complejo de NDH o a las protenas PGR5 y
PGRL1 del PSI. El flujo cclico de electrones ayuda a construir el gradiente de protones a travs
de la membrana del tilacoides y sirve para producir ATP por la ATP sintasa tipo f. Para la
fotosntesis C4 el CO2 se concentra alrededor de la Rubisco de los cloroplastos de la vaina, por lo
que el ciclo C4 es ms rpido que el ciclo C3. La mayor resistencia a la fuga de los cloroplastos
aumentar la concentracin de carbono inorgnico en torno a la Rubisco. Para reducir las fugas,
el
CO2
se
puede
convertir
en
bicarbonato (HCO3+) lo que es una reaccin lenta y espontnea (debido a que la anhidrasa

22

carbnica est ausente en los cloroplastos de la vaina), adems est conversin podra verse
favorecida por un complejo NDH en forma de U que funciona en forma similar a los complejos de
cianobacterias. Las protenas asociadas a NDH en la cadena de aceptores de electrones
(marcadas en lneas punteadas) son desconocidas en los cloroplastos de maz y otras especies
como
A.
thaliana.
La
oxidasa
alternativa
de
los
tilacoides
(PTox) puede servir para reducir el oxgeno molecular directamente y as evitar el exceso de
reduccin de la cadena de transporte de electrones. Cuatro protenas del lumen se asocian con el
complejo NDH. PGR5 y PGRL1 proporcionan una va cclica de flujo de electrones NDH
independiente.
Abreviaturas: FNR, ferredoxina reductasa, PC, plastocianina, PQ (H2), plastoquinona o
plastoquinol. Tomada de Majeran y van Wijk.

Micrografas electrnicas de clulas del mesfilo de hojas de plantas de maiz. BS:


clula de la vaina, M: clula del mesfilo, Cp: cloroplasto. La escala representa 10 mm (a) y 1
mm (b). Imgenes de Turgeon, Medville y Jung. Tomadas de Majeran y van Wijk.

23

Figura comparativa C3 y C4. La distribucin de las vas fotosintticas, as como de los


transportadores entre la vaina y las clulas del mesfilo. La caracterstica clave de la fotosntesis
C4 es que la fijacin primaria del carbono es llevada a cabo por PEPC (PEP citoslico) usando
bicarbonato en lugar de CO2 como sustrato. Adems, el producto resultante de la fijacin de
carbono es OA, un cido C4, en lugar de 3-PGA, un cido C3. OAAse reduce en el cloroplasto
mesfilo por la malato deshidrogenasa (MDH) de malato (MA), que luego se
exporta a las clulas de la vaina, donde se descarboxila formando piruvato, CO2 y NADPH. El
piruvato se regenera en PEP en los cloroplastos de las clulas del mesfilo por fosfopiruvato
ortofosfato dicinasa (PPDK). Dentro del ciclo de Calvin, la fase reductiva se indica mediante una
lnea discontinua para subrayar que esto ocurre principalmente en los cloroplastos del mesfilo.
Una cantidad citoslica de bicarbonato y de CO2 se mantienen en equilibrio por la expresin
especfica de la anhidrasa carbnica (AC) del cloroplasto (CPCA), como lo demuestran estudios
protemicos
y
de
actividad.
La
actividad
de
PPDK
es
regulada por protenas bifuncionales cinasa / fosfatasa PPDK (PPDK-RP), la protemica sugiere
una interaccin estable entre PPDK y PPDK-RP en varios complejos de alto peso molecular. El
anlisis protemico comparativo mostr que enzimas especficas del ciclo de Calvin como
Rubisco, Rubisco activasa, fructosabisfosfto aldolasa (FBA), fosforilribulokinase (PRK),
sedoheptulosa-1 ,7-bisfosfatasa (PAS) y protenas del cloroplasto de 12 kDa (CP12), estn
implicadas en el ensamblaje del supercomplejo y en la (in) activacin de la PRK y de la
gliceraldehdo-3-fosfato deshidrogenasa (GAPDH) en los cloroplastos C3; tienen muy altos radios
de expresin clulas de la vaina:mesfilo. Enzimas del Ciclo de Calvin implicadas en la reduccin
de la triosafosfato (fosfoglicerato cinasa [PGK], GAPDH-A y B y la isomerasa triosafosfato [TPI]) se
localizan preferentemente en mesfilo o se distribuyen equitativamente entre la vaina y el
mesfilo. Enzimas de la biosntesis de almidn (almidn sintasa y subunidades de ADPglucosa
pirofosforilasa) tienen niveles ms altos de acumulacin en el paquete de clulas de la vaina que

24

en las del mesfilo. Se indican diversos transportadores en el interior del cloroplasto (MEP1-4,
MEX1, DIT1, DIT2, PPT, PPT*, TPT, AATP1 y ANTR2). PPT* es probablemente una protena PPT
adaptada al metabolismo C4. Los signos de interrogacin (para MEP1-4 y PPT *) indican
asignaciones provisionales. Las enzimas y las vas enriquecidas en las clulas del mesfilo se
muestran en color azul, mientras que aquellas de las clulas de la vaina se muestran en rojo.
Abreviaturas: FBP, fructosa 1,6-bisfosfatasa, RCA, Rubisco activase; EPR, ribulosa-fosfato 3epimerasa, RPI, ribosa-5P-isomerasa; TKL, transcetolasa. Tomadas de Majeran y van Wijk.

25

FOTOSINTESIS EN PROCARIONTES
La
fotosntesis tambin es realizada por organismos procariontes,
bacterias y algas verde-azules. Existen grandes diferencias en el proceso
fotosinttico realizado por ambos tipos de procariontes. Las algas verdeazules cuentan con un doble sistema de pigmentos muy parecido al de
los cloroplastos de plantas superiores, donde sus pigmentos son
ficoeritrobilina o ficocianobilina (por eso su color) mientras que las
bacterias solo utilizan un fotosistema (parecido al PSII) y sus pigmentos
(P870 o P960) son diferentes. Comnmente las bacterias utilizan otra
fuente de electrones distinta al agua, como metano, monxido de
carbono, o donadores inorgnicos como azufre o hidrgeno.

Comparacin de los diferentes tipos generales de centros de reaccin para


procariontes con los fotosistemas, segn su anlisis por cristalografa de
rayos X. Tomado Heinnickel y Golbeck.

26

ASPECTOS IMPORTANTES
FOTOSNTESIS

PARA

LA

EVALUACIN

DE

LA

Finalmente, despus de describir ampliamente el proceso fotosinttico,


es importante sealar cuales de estos elementos podran ser tiles para
evaluarlo de forma experimental. De forma sencilla podramos decir que
habra dos formas generales: Evaluar los elementos de entrada a la
reaccin como son la luz y el CO 2 o los de salida como son la produccin
de carbohidratos o de oxgeno en el caso de plantas superiores. La forma
ms sencilla usada por muchos aos es la gasometra para evaluar el
consumo de CO2 o la liberacin de O2, tambin la obtencin y
cuantificacin de los carbohidratos. Para estudios ms detallados
comenzaron a usarse reacciones que detecten los cambios oxidoreduccin en diferentes pasos con cloroplastos o complejos enzimticos
y proteicos aislados. Adems se han aislado y caracterizado muchos de
las molculas participantes y con las nuevas tcnicas de biologa
molecular se han logrado mutaciones sitio-especficas que nos han
ayudado al mejor entendimiento del proceso. En la actualidad muchos
esfuerzos se estn realizando especialmente en la transferencia
gentica o tecnologa transgnica para mejorar el rendimiento y calidad
de productos en cultivos comerciales.

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