UNIVERSIDAD AGRARIA DEL ECUADOR

FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS

AGRONOMA

TRABAJO AUTONOMO DE BIOLOGA MOLECULAR GRUPO#5

DRA. LORENA PULGAR

INTEGRANTES:

-ALEJANDRA GALLARDO
-SALOMON VERA
-DAVID PEAFIEL
-VANESSA MOREIRA
-LIVIO ROMERO
-CAROLINA BRIONES

PRIMERO A SEGUNDO SEMESTRE

SEDE GUAYAQUIL
PERIODO LECTIVO
2014-2015

INDICE

Contenido
1. INTRODUCCIN.....................................................................................................3
2. OBJETIVOS.............................................................................................................4
2.1

OBJETIVO GENERAL....................................................................................4

2.2

OBJETIVO ESPECFICO...............................................................................4

3. DESARROLLO DEL TEMA..................................................................................5

3.1

La induccin de una protena recombinante PRCTICA #10.....................5

3.2

MARCO TEORICO.........................................................................................9

3.3 La separacin de protenas por la electroforesis en geles desnaturalizantes

de poliacrilamida PRCTICA #11...........................................................................12
3.4

MARCO TERICO.......................................................................................18

RESUMEN..............................................................................................................19

CONCLUSIN.......................................................................................................21

BIBLIOGRAFA.....................................................................................................22

Trabajos citados.............................................................................................................22
7

Anexo.......................................................................................................................23

NDICE DE FIGURAS
Figura 1: Vector de expresin procarionte.........................................................................5
Figura 2: Mapa del vector pGex........................................................................................8
Figura 3: Electroferesis....................................................................................................14

1. INTRODUCCIN
Para poder tener una buena investigacin debemos tener en claro estas dos
investigaciones ya que hablaremos de: la induccin de una protena
recombinante y la separacin de protenas por la electroforesis en geles
desnaturalizantes de poliacrilamida ya que estos dos temas fueron sacados de
breves prcticas de laboratorio y se concluy lo siguiente.

Gracias a los avances de la Biologa Molecular es posible producir grandes

cantidades

de

protenas

seleccionadas,

por

la

tecnologa

del

ADN

recombinante. Se prepara al insertar el gen que queremos expresar en un

vector, para luego transferirse en una clula husped. Donde ser insertada.
Este mtodo ha ayudado a diferentes procesos en la medicina e industrias.
Un vector de recombinacin es la molcula que resulta de la unin de un DNA
vector con el DNA de inters.

Un DNA vector es un vector de clonacin que permite introducir en una clula

hospedera un fragmento de DNA que se pretende clonar; en esta clula
hospedera el vector se replica y expresa, en su caso

La electroforesis es una tcnica de separacin basada en la migracin

diferencial de especies cargadas en un medio conductor, el cual se encuentra
bajo la influencia de un campo elctrico. Las protenas se separan comnmente
sobre un soporte slido de poliacrilamida. Los geles formados por
polimerizacin de acrilamida tienen gran poder de resolucin para protenas de
pequeo a moderado tamao

2. OBJETIVOS
2.1 OBJETIVO GENERAL
Analizar como acta la induccin de una protena recombinante y observar que
vamos a obtener de la separacin de protenas por la electroforesis en geles
desnaturalizantes de poliacrilamida

2.2 OBJETIVO ESPECFICO

Explicar los componentes y el requerimiento de las expresiones de las

protenas recombinantes.

Entender el sistema de expresin, aplicada en las clulas procariotas

Recopilar informacin secundaria acerca de la desnaturalizacin de las

protenas mediante geles.

Reconocer que la electroforesis es fundamental en la desnaturalizacin

de las protenas.

3. DESARROLLO DEL TEMA

3.1
La induccin de una protena recombinante
PRCTICA #10
Podemos decir que con la ayuda de la tecnologa hemos podido descubrir
muchas cosas de las cuales podemos decir que una protena recombinante es
una forma manipulada de una protena por lo cual se genera de varios modos
para producir grandes cantidades de protena por lo tanto modificar secuencias
genticas y hacer productos comerciales tiles ya que as podemos decir que
la formacin de la protena recombinante se lleva a cabo en vehculos
especializados llamados vectores. Adems que en los ltimos aos se han
hecho breves estudios del mismo porque la tecnologa recombinante es el
proceso involucrado en la formacin de la protena recombinante.

Figura 1: Vector de expresin procarionte

Fuente: es.123rf.com/imagenes-de-archivo/antibiotico.html

Normalmente en las materias relacionadas con la gentica se analiza la

estructuracin, composicin y accin que realizan las protenas adems
actualmente,

se es capaz de crear enormes cantidades de conjuntos

de

aminocidos

especficos

utilizando

la

tecnologa

de

la

recombinacin. Mayormente un ADN hibrido o recombinante se dispone

al incluir el gen que queremos manifestar por lo tanto en un vector ser
su fuente de llegada a dicho individuo por lo tanto se cede al interior de
una clula lo cual hospedera o host donde la protena que queremos es
sintetizada ya por lo tanto esta tcnica ha sido empleada en la
elaboracin de grandes cantidades de protenas con intenciones para
mejorar la salud ya que as podemos experimentar con ellas y tambin
ayudar e avances a la industria
Por lo tanto se ha podido concluir que las clulas bacterianas han sido
ampliamente empleadas como clulas que habitan para la fabricacin
de protenas hibridas con grandes modelos de los cuales diremos que
os genes clonado que incluyen el encargo para la protena va integrada
dentro

de

un

vector

de

manifestacin

que

tiene

todos

los

ordenamientos de observacin transcripcional y traduccional

Ya que adems podemos decir que la tecnologa de ADN recombinante es un
modo de estudiar las funciones e interacciones de la protena por lo que en la
actualidad se la usa con frecuencia pero esto se hace aislando la secuencia
objetivo de ADN y luego transfirindola a un vector de clonacin que tenga la
capacidad de autorreproducirse ya es de suma importancia saber que el ADN
del vector de clonacin van a interactuar con el ADN objetivo y produce un
nuevo prototipo de informacin de gen llamada ADN recombinante ya que as
sabremos que el ADN recombinante se transfiere al ARN, que a su vez
produce la protena recombinante.
Ya que que por eso podemos decir que el desarrollo de dicha tecnologa ha
servido para el buen uso de la ingeniera gentica en las ltimas dcadas ha
favorecido el avance de la industria biotecnolgica aplicada a la sanidad
humana y animal y consecuente mejora de la calidad de vida. La utilizacin de
protenas recombinantes como productos teraputicos, como vacunas y como
herramientas en ensayos de diagnstico est siendo cada vez ms extendida.
Gracias a los avances de la Biologa Molecular, se es posible producir grandes
cantidades

de

protenas

seleccionadas,

por

la

tecnologa

del

ADN

recombinante. Se prepara al insertar el gen que queremos expresar en un

vector, para luego transferirse en una clula husped. Donde ser insertada.
Este mtodo ha ayudado a diferentes procesos en la medicina e industrias.
Un vector de recombinacin es la molcula que resulta de la unin de un DNA
vector con el DNA de inters.
Un DNA vector es un vector de clonacin que permite introducir en una clula
hospedera un fragmento de DNA que se pretende clonar; en esta clula
hospedera el vector se replica y expresa, en su caso.
Reactivos y procedimiento
MATERIALES REQUERIDOS
-

Matraces Erlenmeyer de 100 mL y 250 mL estriles

Microcentrfuga
Termoblock
Incubadora a 37 C con agitacin
Espectrofotmetro y celdas de espectrofotometra
Congelador -20oC
Mechero de Bunsen
Micropipetas y puntas de 1,000 y 200 L
Tubos de 1.6 mL
Bacterias de E. coli DH5 transformadas con el vector pGEX-6P o
similar
Medio LB, preparado en la Prctica No. 2
Ampicilina (100 mg/ml; preparada en la Prctica No.2
Hielo/contenedor
IPTG (100mM)
Buffer de carga para protenas

SOLUCIONES
Utilice bata y guantes en todo momento para preparar las soluciones.
-

Solucin stock SDS 10% (p/v) (10 mL) Preparada en la Prctica No1
Tris-HCl 0.5 M pH 6.8 (100 mL) PMTris 121.14

Disolver 6.05 g de Tris base en 60 mL de agua Milli-QTM. Ajustar a pH de 6.8

agregando HCl 6 N. Dejar enfriar la solucin a temperatura ambiente. Ajustar
el volumen a 100 mL. Almacenar a 4 C. Antes de usar el cido clorhdrico,
consulte la seccin de Seguridad en el laboratorio de Biologa Molecular.
-

Solucin stock de azul de bromofenol 0.5% (p/v) (10 mL)

Disolver 0.05 g de azul de bromofenol en 10 mL de agua destilada. Guardar a

temperatura ambiente. Antes de usar el azul de bromofenol, consulte la
seccin de Seguridad en el laboratorio de Biologa Molecular
Buffer de carga para protenas
-

Agua Milli-QTM
Tris/HCl 0.5 M pH 6.8
SDS 10% (w/v)
Glicerol
Azul de bromofenol 0.5 % (w/v)

3.55 mL
1.25 mL
2.00 mL
2.50 mL
0.20 ml

Guardar a temperatura ambiente. Agregar 50 L de -mercaptoetanol a 950

L del buffer de carga justo antes de su uso.
Solucin de IPTG 100 mM

Figura 2: Mapa del vector pGex

Fuente: www.aquarico.com/web.../GPEx%20Brochure.pdf

Experimento:
El da anterior a la prctica:
1.
Inocular con la cepa bacteriana 20 mL de medio LB con ampicilina a
100 g/ml en un matraz Erlenmeyer de 100 mL estril y dejar por 14-16 horas
a 37 C en agitacin (150 rpm).
El da de la prctica:
Antes de iniciar la Prctica, consulte las recomendaciones de
seguridad especificadas para cada sustancia utilizada (ver Seguridad en el
laboratorio de Biologa Molecular al final del Manual).
Utilice bata y guantes en todo momento.

1.
Agregar 0.25 mL del cultivo bacteriano a 25 mL de medio LB con
ampicilina en un matraz Erlenmeyer de 250 mL estril (es muy importante la
aireacin).
2.

Incubar en agitacin a 37 C hasta alcanzar una A600 de entre 0.6 a 1.0.

3.
Tomar una muestra de 1.5 mL del cultivo bacteriano
induccin) y mantenerla en hielo hasta su procesamiento posterior.

(sin

4. 4.
Agregar el IPTG al cultivo (concentracin final de 1 mM).
Incubar en agitacin a 37 C por al menos 2 h.
5. 5.
Tomar una muestra de 1.5 mL del cultivo bacteriano (con
induccin) cada hora y mantenerlas en hielo. A la par, medir la densidad
ptica.
6. 6.
Centrifugar las muestras a 13,000 rpm por 3 min a 4 C.
7. 7.
Decantar y resuspender las pastillas con 100 L de buffer de
carga.
8. 8.
Hervir las muestras por 4 min a 95 C
9. 9.
Centrifugar a 13,000 rpm por 3 min a 4 C.
10. 10. Colectar el sobrenadante en nuevos microtubos.
11. 11.
Almacenar las muestras a -20 C hasta su anlisis por
electroforesis.

3.2 MARCO TEORICO

Induccin de
una proteina
recombinante

Gen resistente

Gen
recombinante

ADN hibrido

Promotor

Induccin de
una proteia
recombinante

ADN hibrido: El ADN hbrido tambien se lo conoce con el nombre de ADN es una
molcula de ADN formada por la unin de dos molculas heterlogas es decir de
diferente origen

Promotor: Un promotor es una regin de ADN que controla la iniciacin de la

transcripcin de una determinada porcin del ADN a ARN
Gen Recombinante: Es una clula de ADN artificial integrada de manera
deliberada in vitropor la desunin de secuencias de ADN provenientes de dos
organismos distintos que normalmente no se encuentran juntos
Gen
resistente:
La resistencia
antibitica es
la
capacidad
de
un microorganismo para resistir los efectos de un antibitico. La resistencia se
produce naturalmente por seleccin natural a travs de mutaciones producidas
por azar

Las protenas recombinantes son aquellas que obtenemos a partir de una

especie
o
una
lnea
celular distinta a
la
clula
original.

La protena se obtiene por la expresin de un gen clonado en esa lnea celular

que
nos
interesa.

Los sistemas biolgicos donde se pueden producir protenas recombinantes

son: las Bacterias como la E. coli o la B. subtilis, tambin las Clulas
eucariontes como los Hongos en los que estn incluidas las Levaduras
ejemplo: Saccharomyces cerevisiae, Pichia pastoris y otros metilotrficos. En
general se utilizan las Clulas animales en cultivo, Clulas de insecto en cultivo
o las Plantas.
Lo que se necesita para llevar a cabo la clonacin del DNA, es saber la
secuencia del DNA que se desea clonar, el vector de clonacin, el organismo
husped y la seleccin de vectores.(Sols, 2010)

Se trata deaislar el
RNA mensajeroque
codifica para una
protena concreta y
obtener su
correspondiente DNA
complementario
(cDNA)

Este cDNA, previamente

amplificado por PCR, se
inserta en un vector
gnico que, replicado en
una clula huesped

Una vez transformadas con

el vector las clulas del
husped (en general
bacterias -Escherichia coli-, o
levaduras -Pichia pastoris-),
el cultivo se hace crecer
hasta que alcanza unos
niveles de produccin
adecuados de la protena
recombinante

(GARCA, 2014)

3.3 La separacin de protenas por la electroforesis

en geles desnaturalizantes de poliacrilamida
PRCTICA #11
Podemos decir que la electroforesis de protenas en geles van a tener una
matriz de poliacrilamida del cual es

denominada electroforesis en

poliacrilamida del cual es sin duda alguna una de las tcnicas usadas para
mezclar complejas de protenas ya que adems la electroforesis en
poliacrilamida se trata de un mtodo conveniente, rpido y econmico ya que
requiere slo cantidades de microgramos de protena.
Las protenas que se van a encontrar presente con una carga elctrica neta
van a poseer un pH diferente al de su punto isoelctrico y su propiedad se
sometern a un campo elctrico ya adems posee una velocidad de migracin
es proporcional a la relacin entre las cargas de la protena y su masa.
Los geles de poliacrilamida se preparan con acrilamida, que acta como el
radical libre de polimerizacin y N,N-metilen-bis-acrilamida, que es el agente
entrecruzante. La cual es controlada por un sistema iniciador de catlisis;
persulfato de polimerizacin que se descomponen espontneamente formando
radicales de sulfato. El TEMED es otro catalizador que forma radicales estables
en presencia de radicales sulfato, esto contribuye a que la reaccin de
propagacin no se extinga.
Puede llevarse al cabo en dos condiciones:
Condiciones no desnaturalizante: la separacin depende de la carga y el
tamao
Condiciones desnaturalizante: se pierde la estructura tridimensional de las
protenas debido a los agentes desnaturalizantes que despliegan y brindan
una carga uniforme.
El agente desnaturalizante es el detergente dodecil sulfato sdico (SDS) que
rompe las estructuras secundaria, terciaria y cuaternaria para producir cadenas
polipepticas lineales cubiertas con molculas de SDS cargadas negativamente.

El SDS se une a regiones hidrofbicas de las protenas desnaturalizadas en

una relacin constante.
Adems todos los complejos tendrn carga negativa y migrarn en el mismo
sentido, tambin se utiliza un agente reductor de enlaces disulfuro el mecaptoetanol, que asiste en el proceso de desnaturalizacin proteica.
Otra variante es la electroforesis en geles discontinua, tienen 2 capas una
inferior o gel separador y una superior o gel concentrado. Este es el sistema
ms utilizado porque permite la formacin de bandas altamente concentrada
s de muestra en el gel superior y mayor resolucin de los componentes de la
muestra en el gel inferior.
El gel es preparado entre dos placas de vidrio que estn separados por
espaciadores, lo que permite un grosor uniforme. En la parte superior se
colocar un peine plstico que permitir formar los pozos para colocar las
muestras. Posteriormente el gel se coloca en una cmara vertical entre dos
reservorios. El reservorio superior usualmente contiene el ctodo(-) y el inferior
un nodo (+). Como las protenas no tienen color, se suele agregar azul de
bromofenol a la muestra, colorante que permite monitorear la electroforesis. Al
final, las protenas en los geles de poliacrilamida pueden teirse de azul.

Figura 3: Electroferesis
Fuente: biomodel.uah.es/tecnicas/elfo/inicio.htm

MATERIALES REQUERIDOS

Muestras de protenas totales obtenidas en la Prctica No. 9

Marcador de peso molecular
Para protenas
Micropipetas y puntas de 1,000, 200, 20 y 2
Cmara de electroforesis vertical (los volmenes para la preparacin de los
geles en esta prctica estn calculados para una cmara Mini-Protean Tetra
Cell de la marca Bio-rad)
Mdulo de ensamble, vidrios con
Separador y peine (Mini-Protean
Tetra Cell de la marca Bio-rad)
Fuente de poder
Agitador para teir geles
Transiluminador de luz blanca
Hielo/contenedor
Charolas para tincin
Agua destilada
Acrilamida/bis-acrilamida 30:8
Tris-HCl 1.5 M pH 8.8
Tris-HCl 0.5 M pH 6.8
Solucin SDS 10% (p/v)
N,N,N,N-tetrametiletilendiamina
(TEMED)

 Persulfato de amonio (PSA)al 10% (p/v)

Buffer de carga para protenas
Buffer de corrida
Solucin de Coomassie
Solucin desteidora
Termoblock a 95 C (o bao mara)
Procedimiento
1.

Verificar que los vidrios (con separadores de 1.5 mm), el peine y el

mdulo de ensamble se encuentren limpios y secos.

2.

Con ayuda del profesor, colocar los vidrios en el mdulo de

ensamble.
Despus acomodar el peine y hacer una marca sobre el vidrio a 0.5 cm por
debajo de los dientes del peine.
3.

Preparar la siguiente solucin monomrica del gel separador

combinando los siguientes ingredientes mezclar suavemente para evitar la

formacin de burbujas:
i.Agua destilada

4.045 mL

ii.

Acrilamida/bis-acrilamida 3.3 mL

iii.

Tris-HCl 1.5 M pH 8.8

iv.

Solucin SDS 10% 0.1 mL

v.

PSA 10%

50 L

vi.

TEMED

5 L

2.5 mL

La acrilamida y la bis-acrilamida son

extremadamente txicas. Antes

de usarlas, consulte la seccin de Seguridad en el laboratorio de

Biologa Molecular.

El TEMED debe agregarse hasta el final, e inmediatamente continuar

con el siguiente paso, puesto que una vez que se aade, se inicia la
polimerizacin. Antes de usar el TEMED, consulte la seccin de Seguridad en
el laboratorio de Biologa Molecular.
4.

Con una micropipeta, agregar poco a poco la solucin al espacio entre

los vidrios, hasta la marca previamente realizada.

5.

Cubrir

la

solucin

monomrica

con un

poco de agua,

agregarla lentamente.
Se debe evitar la presencia de oxgeno en la solucin del gel separador,
porque inhibe la polimerizacin al bloquear los radicales libres.
6.

Esperar a que el gel solidifique (45-60 min).

En este punto el gel puede ser almacenado a temperatura ambiente toda la

noche, agregando 5 ml de una dilucin 1:4 de solucin B para mantenerlo
hidratado.
7.

Secar con papel filtro el agua aadida en el paso 5. Cuidar de no daar

el gel.
8.

Preparar la solucin monomrica del gel concentrador combinando

los siguientes ingredientes mezclar suavemente para evitar la formacin de

burbujas.
El TEMED debe agregarse hasta el final, e inmediatamente continuar
con el siguiente paso.
9.

Con una micropipeta, agregar poco a poco la solucin al espacio entre

los vidrios, hasta llegar al borde.

10.

Colocar el peine (de 10 dientes, grosor 1.5 mm), cuidando de no atrapar

ninguna burbuja, porque pueden provocar distorsin en la superficie del gel.

11.

Esperar a que el gel solidifique (30-45 min).

12.

Retirar cuidadosamente el peine y lavar los pozos con agua destilada.

13.

Con ayuda del profesor, colocar el gel en la cmara de electroforesis.

14.

Llenar la cmara superior con buffer de corrida hasta cubrir el gel

(3 mm por encima del gel) y la cmara inferior hasta la seal marcada.

15.

Utilizando la micropipeta, cargar lentamente el marcador de peso

molecular en el pozo correspondiente al primer pozo del gel (aprox. 10-30

g). Dependiendo de la marca del marcador de peso molecular, puede
requerir que se

caliente

a 95-100

antes

de cargarse.

Evitar

burbujear con la micropipeta mientras se coloca la muestra para que sta no

se salga del pozo.
De la misma forma, cargar 35 L de cada una de las muestras de

16.

protenas totales obtenidas en la prctica previa (registrar el orden de las

muestras en los

pozos).

En

los

pozos

restantes

cargar

el

mismo

volumen de buffer de carga para protenas. Si un pozo se queda vaco, la

muestra adyacente se extender lateralmente. El volumen de muestra que
puede aplicarse en cada pozo depende del tamao del mismo (en este
caso, mximo 60 L).
17.

Con ayuda del profesor, cerrar la cmara de electroforesis y aplicar una

corriente de 200 V.
Si

la

cmara

se

coloca

adecuadamente,

se

observar

la

formacin de burbujas en los electrodos.

18.

Cuando el colorante haya migrado lo suficiente (aprox. 35 min), apagar

la fuente de poder y sacar el gel de la cmara.

19.

Teir el gel con la solucin de Coomassie durante 30 min en agitacin.

Usar un volumen suficiente para cubrir el gel.

20.

Retirar la solucin de Coomassie y cubre ahora el gel con la

solucin desteidora. Despus de 30 min en agitacin, retirar esa solucin y

cubrir nuevamente con ms solucin desteidora. Dejar en agitacin por otros
30 min.
21.

Visualizar las protenas en el gel con la luz blanca del transiluminado

3.4 MARCO TERICO

La electroforesis en poliacrilamida puede llegar a ser un mtodo conveniente, rpido y econmico en todos los aspectos de
muestra ya que se necesitan slo cantidades del orden de microgramos de protena. Las protenas presentan una carga elctrica
neta si se encuentran en un medio que tenga un pH diferente al de su punto isoelctrico y por eso tienen la propiedad de
desplazarse cuando se someten a un campo elctrico. La velocidad de migracin es proporcional a la relacin entre las cargas de
la protena y su masa. Cuanto mayor carga por unidad de masa ms rpida ser la migracin. Empleando geles de slice o de
acetato de celulosa y aplicando las protenas en una zona estrecha en torno a los electrodos se pueden determinar diferencias de
carga neta (carga total/masa) entre protenas. Este mtodo se denomina electroforesis zonal. La matriz de poliacrilamida no es un
buen soporte para este mtodo pues la migracin de las protenas en su seno no slo es proporcional a la carga neta sino tambin
al tamao y forma de las protenas. (VELEZ, 2000)

L a s e p a ra c i n d e
p ro te n a s p o r la
e le c tro fo re s is e n g e le s
d e s n a tu ra liz a n te s d e
p o lia c rila m id a

Condiciones no desnaturalizante: la separacin

depende de la carga y el tamao
Condiciones desnaturalizante: se
pierde la estructura tridimensional de las
protenas debido a los agentes
desnaturalizantes que despliegan y
brindan una carga uniforme.

4 RESUMEN
Por lo tanto se ha puede decir que la induccin de una protena
recombinante han sido ampliamente empleadas como clulas que habitan
para la fabricacin de protenas hibridas con grandes

modelos de los

cuales diremos que os genes clonado que incluyen el encargo para la

protena va integrada dentro de un vector de manifestacin que tiene
todos los ordenamientos de observacin transcripcional y traduccional

Ya que adems podemos decir que la tecnologa de ADN recombinante es un

modo de estudiar las funciones e interacciones de la protena por lo que en la
actualidad se la usa con frecuencia pero esto se hace aislando la secuencia
objetivo de ADN y luego transfirindola a un vector de clonacin que tenga la
capacidad de autorreproducirse ya es de suma importancia saber que el ADN del
vector de clonacin van a interactuar con el ADN objetivo y produce un nuevo
prototipo de informacin de gen llamada ADN recombinante ya que as sabremos
que el ADN recombinante se transfiere al ARN, que a su vez produce la protena
recombinante.

Ya que que por eso podemos decir que el desarrollo de dicha tecnologa ha
servido para el buen uso de la ingeniera gentica en las ltimas dcadas ha
favorecido el avance de la industria biotecnolgica aplicada a la sanidad humana
y animal y consecuente mejora de la calidad de vida. La utilizacin de protenas
recombinantes como productos teraputicos, como vacunas y como herramientas
en ensayos de diagnstico est siendo cada vez ms extendida.

Podemos decir que la electroforesis de protenas en geles van a tener una matriz
de poliacrilamida del cual es denominada electroforesis en poliacrilamida del cual

es sin duda alguna una de las tcnicas usadas para mezclar complejas de
protenas ya que adems la electroforesis en poliacrilamida se trata de un mtodo
conveniente, rpido y econmico ya que requiere slo cantidades de microgramos
de protena.

Las protenas que se van a encontrar presente con una carga elctrica neta van a
poseer un pH diferente al de su punto isoelctrico y su propiedad se sometern a
un campo elctrico ya adems posee una velocidad de migracin es proporcional
a la relacin entre las cargas de la protena y su masa.

Ya que adems podemos decir que cuanto mayor carga por unidad de masa ser
ms rpida la migracin ya que adems Empleara geles de slice o de acetato de
celulosa del cual va a aplicar las protenas en una zona estrecha en torno a los
electrodos ya que se pueden determinar diferencias de carga neta del cual
podemos decir que son: carga total y masa donde solo se utilizaran entre
protenas.

Podemos afirmar que este mtodo se va a denominar electroforesis zonal por lo

cual podemos decir que ser la matriz de poliacrilamida no ser un buen soporte
para este mtodo ya que la migracin de las protenas no slo es proporcional a la
carga neta sino tambin al tamao y forma de las protenas...
Podemos destacar que una ventaja de suma importancia ser los geles de
poliacrilamida que son qumicamente inertes, transparentes y estables adems
van a poseer un rango de pH, temperatura y fuerza inica.

Caractersticas de la electroforesis en geles de poliacrilamida son:

Geles de poliacrilamida son los que van a formar por la polimerizacin de la

acrilamida ya que existen acciones de agente entrecruzador tambin llamados
cross-linking' ya que adems un iniciador se suele utilizar TEMED N,N,N,N'tetrametilnediamina ya que como catalizador el in persulfato se aadir en forma
de persulfato amnico
Aqu van actuar las soluciones de acrilamida lo cual van a desgasificar el oxgeno
es un inhibidor de la polimerizacin ya que durante la polimerizacin se libera calor
que provocara la formacin de burbujas en el seno del gel.
La velocidad de polimerizacin viene determinada por la concentracin de
persulfato que son catalizadores y TEMED es el iniciador
La porosidad del gel la determina las proporciones relativas de poliacrilamida y
bis-acrilamida, siendo menor el poro cuanta ms bisacrilamida vs. acrilamida se
use.

5 CONCLUSIN
Aqu concluiremos que la induccin de una protena recombinante se ha puesto en
el mercado de PR producidas por bacterias ya que es muy importante a nivel
mundial porque Las ventajas de la produccin de PR sobre otros organismos
alienta la investigacin para superar las desventajas de sistemas microbianos,
como lograr modificaciones posttraduccionales y producir protenas de elevado
peso molecular. Los avances recientes en este campo, mantienen vigente el
inters en lograr sistemas de expresin y de cultivo bacteriano cada vez ms
eficientes. La ingeniera metablica y un mejor entendimiento de la fisiologa de la
bacteria durante la expresin y bajo condiciones de produccin industrial

permitirn sin duda incrementar los rendimientos y abrirn nuevas opciones de

procesamiento de PR.
Adems podemos concluir que la separacin de protenas por la electroforesis en
geles desnaturalizantes de poliacrilamida se pudo obtener lo siguiente:
-

Las condiciones desnaturalizantes en la separacin de las protenas por

electroforesis en geles de poliacrilamida es el mtodo ms utilizado a nivel
de laboratorio para la elaboracin y extraccin ya se puede obtener buenos

resultados.
La separacin electrofortica depende de la densidad de carga de las

molculas y su tamao.
La desnaturalizacin es un proceso que se puede mediante geles como el
poliacrilamida, el cual descompone en todas sus estructuras.

6 BIBLIOGRAFA
Trabajos citados
BIOQUIMICA. (22 de 12 de 2014). PROTEINA RECOMBINANTE (EN LNEA).
Recuperado el 22 de 12 de 2014 Consultado y modificado por grupo de Biologia
molecula, de Primera fuente:
http://bioquimexperimental.files.wordpress.com/2009/08/induccion-de-proteinarecombinante.ppt
CUA. (18 de 12 de 2014). MANUAL DE PRACTICAS DE BIOLOGIA MOLECULAR (EN
LNEA). Recuperado el 18 de 12 de 2014 Consultado y modificado por grupo de
biologia molecular, de http://www.cua.uam.mx/pdf/Manual%20de%20Prcticas
%20de%20BM.pdf
GARCA, R. R. (2014). UNIVERSIDAD COMPLUTENSE DE MADRID. Obtenido de
http://pendientedemigracion.ucm.es/info/otri/complutecno/fichas/tec_rrodriguez1.ht
m
SCIELO. (20 de 12 de 2014). LA SEPARACIN DE PROTEINAS (EN LNEA). Recuperado
el 20 de 12 de 2014 Consultado y modificado por grupo de Biologia molecular, de
http://www.scielo.org.mx/scielo.php?pid=S166527382011000200006&script=sci_arttext

SIRIO. (19 de 12 de 2014). MANUAL DE PRACTICA DE BIOLOGIA MOLECULAR (EN

LNEA). Recuperado el 19 de 12 de 2014 Consultado y modificado por grupo de
biologia molecular, de
http://sirio.uacj.mx/ICB/cqb/licenciaturaenbiologa/Documents/Manuales/avanzado/
BIOLOGIA%20MOLECULAR.pdf
Sols, A. G. (ENERO de 2010). BIO EXPERIMENTAL. Obtenido de
http://bqexperimental.files.wordpress.com/2010/01/induccion-de-proteinarecombinante1.ppt.
VELEZ, A. (2000). UPRM. Obtenido de http://www.uprm.edu/biology/profs/velez/poli.htm

7 Anexo

Anexo 1:
Estructura de la
poliacrilamida
Fuente:

http://biomodel.uah.es/lab/sds-page/electro_def.html

Anexo 2: Electroferesis
Fuente : http://www.sapd.es/revista/article.php?file=vol33_n3/03