Facultad de Ciencias Biolgicas

BIOL252-BIO252

Microscopa

Dr. Juan Carlos Velsquez M.

Microscopio en la historia

Microscopio en la historia

Antecedentes histricos de la microbiologa. El Microscopio

Imgenes de Hooke y Leeuwenhoek

Microscopio compuesto actual

Aumento efectivo mximo:

Hasta 2000X
Resolucin mxima: 0,2 mm

Microscopa de luz
En la microscopa de luz, el espcimen se aprecia gracias al contraste
mnimo entre la muestra y el medio que la rodea.

Clulas naturalmente pigmentadas se visualizan ms fcilmente al

microscopio

Mejorando el contraste de la muestra. Tinciones

Tincin simple

Tinciones diferenciales. Tincin de Gram

Gram (-)

Gram (+)

Contraste de fases - Campo oscuro

Microscopa de fluorescencia
Clulas de ratn

Bacterias

Permite marcar estructuras especficas o clulas determinadas con

fluorforos (emiten luz cuando son excitados)

Tinciones diferenciales. Tincin de Gram de un paso

Usando una mezcla de colorantes fluorescentes se aprecia la diferencia

entre Gram (+) (anaranjado) y Gram (-) (verde).

Microscopa electrnica
Transmisin
Virus

Bacteria en divisin

Es anlogo al microscopio ptico de campo

claro pero utiliza electrones en vez de luz

Microscopa electrnica
Barrido
Bacterias creciendo en el estoma

Bacilos

Permite tomar imgenes tridimensionales

porque capta los electrones que rebotan en
las clulas cubiertas con una delgadsima
pelcula de un metal denso.

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Fisiologa bacteriana

Dr. Juan Carlos Velsquez M.

Componentes externos
Exopolisacridos (Glicoclix): Capa o cubierta de polisacridos que se
dispone por fuera de la pared celular de bacterias Gram (+) y Gram (-)

Cpsula
Unin firme a la bacteria (estructura
rgida y
compacta).
Importante
en
patogenicidad
(Inhibe
la
Fagocitosis).)
Facilita la adherencia a superficies inertes.
Antignico (antgeno K)
Capa mucoide (slime)
Unin dbil a la bacteria
No tiene una organizacin determinada
Participa en la formacin de biopelculas
Protege de la accin del complemento, Microfotografa de cpsula
(Klebsiella pneumoniae)
anticuerpos y antimicrobianos.

Tinciones especiales. Tincin negativa de cpsula

Se utiliza para observar la cpsula alrededor de las bacterias.
Se llama tincin negativa ya que tie todo menos la cpsula.

bacteria

cpsula

Morfologa

Pared Celular: responsable de

la morfologa celular

Envoltura celular

Bacterias Gram (+): Pared gruesa de Peptidoglicn, c. Teicoico y

Lipoteicoico, Protenas asociadas (M).
Bacterias Gram (-): Pared delgada de Peptidoglicn, periplasma,
Membrana Externa (LPS o LOS, Porinas,
Lipoprotena)

Envoltura celular. Gram positivo

Envoltura celular. Peptidoglicn

Peptidoglicn (murena):
Capas de polisacridos entrelazadas
por puentes peptdicos.

Cadena
polisacrida:
N-acetil
glucosamina (NaG) + c. N-acetil
murmico (NaM)
Puentes: Tetrapptidos (unido a NaM)

Peptidoglicn. Gram (+) y Gram (-)

Gram positivo. cidos teicoicos y lipoteicoicos

Estructura del Ribitol

(c. Teicoico producido
por B. subtillis)

Polisacridos acdicos presentes slo en Gram positivos.

Ac. Lipoteicoico:
Polmero de Glicerol fosfato unido (anclado) a lpidos de membrana citoplasmtica
Ac. Teicoico:
Polmero de Ribitol fosfato unido de manera covalente al peptidoglicn

Funciones:
-Estabilizacin del peptidoglicn
-Adhesin celular (Adhesina)
-Le dan la carga negativa a la envoltura bacteriana

Envoltura celular. Gram negativo

Membrana externa. Lipopolisacrido

Lipopolisacrido (LPS):
Molcula compleja, formada por una porcin lipdica (Lpido A o
endotoxina) anclada en la membrana externa, y unidades repetidas
de un monmero compuesto por distintos azcares (Regin
altamente variable y antignica; antgeno O, antgeno Somtico)

Unidad repetida de polisacrido

(Antgeno O)

Core
Oligosacrido central

ENDOTOXINA !!!

Membrana externa. Porinas

Definicin
Grupo de protenas que generan poros o canales
acuosos que permiten el paso de pequeas
molculas hidroflicas a travs de membranas
biolgicas
Estructura de Barril
(16-18 hebras empacadas en forma antiparalela)

Canal hidroflico interior

Exterior altamente hidrofbico
Se encuentran en la membrana externa

Envoltura celular. Gram negativo, periplasma

Posee consistencia de gel

Representa un 20 a 40% del
volumen celular total
Ambiente altamente oxidante (reacciones de oxidacin como
formacin de puentes dislfuro intra e inter moleculares)

Contiene al peptidoglicn
En general, contiene tres tipos de protena:
- Enzimas hidrolticas (metablicas y detoxificantes)
- Protenas de unin para sustratos especficos (carriers)
- Quimioreceptores (involucrados en quimiotaxis)

Envoltura celular. Gram positivo y Gram negativo

Bacterias Gram (+)

Bacterias Gram (-)

Envoltura celular. Membrana citoplasmtica

Modelo mosaico fluido

Singer y Nicholson, 1972

Envoltura celular. Membrana citoplasmtica

Esta molcula de
fosfolpido

es parte de una
bicapa lipdica

Esteroles
(eucariontes)

La bicapa lipdica y protenas

asociadas a ella constituyen
la membrana citoplasmtica

Hopanoides
(algunos procariontes)

No contiene esteroles

la bicapa lipdica forma

el andamio de la
membrana citoplasmtica

Funciones de la membrana citoplasmtica

Barrera de permeabilidad
Separa el medio interno y externo
Permeabilidad selectiva a solutos

Rol estructural
Sntesis y transporte de macromolculas
Sealizacin al medio intracelular
Quimiotaxis

Generacin de energa
Gradientes de iones
Sntesis de ATP

Funciones de la membrana citoplasmtica

Transporte de Solutos

La membrana citoplasmtica se encuentra

poblada de mltiples protenas responsables
del transporte selectivo de solutos

Tipos de transporte de solutos

Uniporte
Antiporte
Simporte

Funciones de la membrana citoplasmtica

Obtencin de Energa
Generacin de potenciales de membrana
(bombeo de iones H+, Na+,etc.)
Reacciones de xido/reduccin
Sntesis de ATP
Fotosntesis*

Funciones de la membrana citoplasmtica

Receptores y Sensores

Sistemas encargados de detectar

cambios en el medio ambiente del
microorganismo y de enviar esta
informacin al medio intracelular
por medio de una seal molecular
Objetivo:
Modificar la fisiologa bacteriana
para lograr adaptarse a las
condiciones del medio externo

Apendices proteicos. Flagelo

Filamentos helicoidales formados

por polmeros de flagelina
Anclado a maquinaria rotatoria
presente
en
la
membrana
citoplasmtica (cuerpo basal) a
travs de una estructura de
gancho (hook)
Apndice responsable de la
movilidad bacteriana (consumo de
energa)
Factor de Virulencia
Antignico

Apendices proteicos. Flagelo

Gram Negativo

Interviene en la patogenicidad de
ciertas especies (Ej: Helicobacter
pylori, Pseudomonas spp.).

Gram Positivo

Su carcter proteico le brinda propiedades

altamente antignicas (Antgeno H o flagelar)

Flagelo. Autoensamblaje
Las flagelinas y dems componentes del flagelo son transportados
hasta la punta del mismo por su interior.

Apendices proteicos. Flagelo

Flagelo pertrico
Salmonella enteritidis
Flagelo montrico (polar)
Vibrio cholerae

Flagelo anftrico
Spirillum sp.

Flagelo loftrico
Helicobacter pylori

Flagelo. Movilidad

Flagelo polar

Flagelo pertrico

Flagelo. Movilidad
Taxia: Movimiento dirigido en respuesta a un gradiente fisicoqumico

Ejemplos de Taxias:
Quimiotaxia
Fototaxia
Aerotaxia
Las bacterias sienten peridicamente su microambiente y procesan
esa informacin a travs de una va de transduccin de seales que
controla el sentido y la velocidad de la rotacin flagelar
Los procariontes mviles se acomodan bien a su entorno (fisicoqumico)
y pueden alejarse o aproximarse a un hbitat en respuesta a diversos
estmulos
Este mecanismo representa un medio de competir con xito con otros
organismos y lograr su supervivencia

Flagelo. Movilidad y quimiotaxia

Quimiotaxia: La direccionalidad del movimiento est dada por variaciones en

la proporcin de tiempo en que el flagelo est rotando a favor o en contra de
los punteros del reloj. De esta forma:

Rotacin a favor de los punteros del reloj (Clockwise): NADA EN TUMBOS

Rotacin en contra de los punteros del reloj (Counter clockwise): NADA
EN LNEA RECTA

Mecanismo molecular de la quimiotaxia

- Transductores (Sensores en la membrana) captan la presencia de atractantes o

repelentes
- Transductores estn en contacto con CheA (kinasa) y CheW. En respuesta a la unin
de repelente CheA se fosforila y a su vez fosforila a CheY (regulador)
- CheY fosforilado interactua con el motor para causar movimiento CW y tumbos.
- Atractantes disminuyen la fosforilacin de CheA, CheY no se une al flagelo y la
bacteria se mueve CCW

Apendices proteicos. Fimbrias o pili (pilus)

Pequeos apndices o microfibrillas de

naturaleza proteica (Pilina).
Papel en adherencia especfica (con
bacterias y clulas eucariontes)
No participan en el movimiento.
Las fimbrias se clasifican de acuerdo a
su modo de expresin y ensamblaje en
tres tipos principales:
Pertricas
Tipo Curli
Tipo IV (polar)

Fimbrias

Apendices proteicos. Fimbrias o pili (pilus)

Apndice retrctil de mayor longitud.

Polmero de protena retrctil (Pilina)
Papel en adherencia: Pili tipo IV,
curli.
Intervienen en el proceso de
conjugacin (Intercambio de material
gentico entre bacterias): Pili sexual

Pili tipo IV

Fimbria tipo curli

Bacterias en conjugacin

Fimbrias

Pilus (Pili sexual)

Esporas
Se describen slo en dos gneros bacterianos
importantes para el ser humano:
Clostridium y Bacillus
Ocurre en respuesta al agotamiento de algn
nutriente
Las esporas se originan dentro de la clula
(Proceso de diferenciacin celular)
Estructura compuesta fundamentalmente por
DNA bacteriano muy compactado

Funcin: resistencia al calor, desecacin,

radiacin, etc.
Viables por cientos de aos

Tinciones especiales. Tincin de esporas

Se realiza con verde malaquita (el cual presenta
afinidad por las esporas) y una tincin de contraste.

Cuerpos de inclusin (grnulos)

Depsitos de diversos metabolitos primarios y
secundarios para reservas de energa o de elementos
a usar en reacciones biosintticas (Glicgeno,
polihidroxibutirato PHB, polifosfatos, etc)
Grnulos o corpsculos densos (muy compactos)
Generalmente, material poco soluble o insoluble

Grnulos de PHB en
Rhodovibrio sodomensis

Chromatium buderi con glbulos de azufre

Cuerpos de inclusin. Vesculas de gas

Cianobacteria

Vesculas de gas para

regular la flotacin

-Representan una forma de motilidad que permite que las clulas floten en
respuesta a factores medioambientales
-Poseen paredes rgidas para resistir la presin
-La protena principal de una vescula de gas la constituye la GvpA,
altamente hidrofbica

Ribosomas
Partcula ribonucleoproteica 70S (RNA + Protenas)
Compuesta por 2 subunidades de distinto peso
50S (subunidad mayor: 31 prots. + rRNA 23S + rRNA 5S)
30S (subunidad menor: 21 prots. + rRNA 16S)
Presente en miles de copias en el citoplasma bacteriano
(Aspecto granular del citoplasma)
Responsable de la sntesis proteica

Subunidad
mayor

Subunidad
menor

Ribosomas

Ribosomas: Sntesis proteica

Polisoma
(Collar de perlas)

Genoma bacteriano. Cromosoma.

Replicn autnomo (Ori y Ter de replicacin)
Generalmente, formado
(sobreenrollado)

por

DNA

circular

de

doble

hebra

Existe
como
una
megamolcula
desoxirribonucleoproteica
(DNA+protenas) no envuelta por membranas

Tamao variable (H. influenzae ~0,8 Mb; E. coli ~ 4,5 Mb; Pseudomonas ~
8 Mb; etc.)
Se presenta en copia nica (Las bacterias son haploides) Existen
bacterias con 3, 4 y hasta 5 cromosomas.
Normalmente, contiene el patrimonio gentico de cada bacteria

Genoma bacteriano. Plsmidos (plasmidios)

Replicones autnomos (se replican de manera independiente al
cromosoma bacteriano)
DNA circular de doble hebra (sobreenrollado)
Tamao variable (menor que el cromosoma)
Nmero de copias variables (1 a >100)
Capacidad de transferencia horizontal (conjugacin, etc.)
Contienen genes no esenciales, que aportan una ventaja adaptativa
(resistencias a antibiticos y metales pesados, rutas metablicas, toxinas
y factores de virulencia)

Plasmidio relajado

Plasmidio sobreenrollado

Principales estructuras bacterianas

Facultad de Ciencias Biolgicas

BIOL252-BIO252

Morfologa y agrupaciones
bacterianas

Dr. Juan Carlos Velsquez

Morfologa

Pared Celular: responsable de

la morfologa celular

Agrupaciones bacterianas
Planos de divisin celular definen la agrupacin bacteriana

Principales agrupaciones bacterianas

Cadena
(del griego: Strepto)

Streptococcus pyogenes
(Fascitis necrotizante, infecciones de garga

Principales agrupaciones bacterianas

Racimo
(del griego: Staphylo)

Staphylococcus aureus
(Imptigo, endocarditis,)

Principales agrupaciones bacterianas

Agrupaciones pequeas
y empacadas
(Ttradas, octetos)
Pares
(Diplo)

Sarcina lutea
Neisseria gonorrhoeae
(Gonorrea)