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INMUNOLOGICO
Introduccin
Para determinar las causas de las fallas o alteraciones inmunolgicas disponemos de
numerosas tcnicas de laboratorio. Tambin por medio de pruebas de biologa molecular
se puede evaluar en mayor detalle el funcionamiento de una clula, de un sistema o
determinar anormalidades en un mecanismo especfico.
Evaluacin de la quimiotaxis
La movilizacin de las clulas PMNs hacia los focos de inflamacin es de gran
importancia en la defensa del husped contra la infeccin puesto que tienen la
capacidad de ingerir y destruir partculas extraas. El movimiento puede ser
espontneo en ausencia de estmulos o dirigido hacia un gradiente de concentracin
de productos qumicos (factores quimiotcticos), originados en el foco inflamatorio
(quimiotaxis).
Con el empleo de la cmara de Boyden se mide la magnitud de migracin de PMNs
frente a un estmulo quimiotactico
Las cmaras aisladas por filtros son herramientas adecuadas para determinar con
exactitud el comportamiento de quimiotaxis.
Las clulas mviles se colocan en la cmara superior, mientras que con la sustancia de
ensayo disuelta se llena la primera cmara inferior. El tamao de las clulas mviles
que son investigadas determinan el tamao del poro del filtro, y esto es esencial para
elegir un dimetro que permite una transmigracin activa.
Una de las patologas que afectan la quimiotaxis es el sndrome de ChdiakHigashi
donde las gigantes vesculas intracelulares inhiben la normal migracin de las clulas
La quimiotaxis se encuentra aumentada en la psoriasis, artritis y disminuida en la
esclerosis mltiple
Prueba de la agarosa
Sobre una capa de agarosa se perforan 3 orificios equidistantes uno del otro. En el
central se deposita suspensin de clulas del paciente y en los laterales sustancias
quimioatractantes y buffer control. La distancia de migracin de clulas hacia el pozo
que contiene la sustancia quimioatractante
es comparada con la distancia de
migracin de clulas haca con el buffer control
Ventajas
Quimioluminiscencia
Fundamento:
Dos compuestos qumicos reaccionan para formar un intermediario en estado excitado
(alta energa), que se des-excita liberando parte de su energa como fotones de luz
para alcanzar su estado fundamental.
Los neutrfilos emiten pequeas cantidades de radiacin electromagntica despus
de la ingestin de microorganismos. Cuando estos grupos regresan a su estado basal
emiten energa lumnica y se cuantifican en el laboratorio.
Evaluacin de la inflamacin
Eritrosedimentacion
Consiste en medir la velocidad con la que sedimentan (decantan, caen) los glbulos
rojos o eritrocitos de la sangre, provenientes de una muestra de plasma sanguneo
(tratado con solucin de citrato o con EDTA), en un periodo determinado de tiempo.
Es un ndice inespecfico, sobre la existencia de inflamacin que no orienta ni sobre la
localizacin o causa. Un valor normal descarta una infeccin bacteriana
G6PDH
D- glucosa-6-fosfato + NAD
-Gluconolactona-6-fosfato + NADH
Deteccin a 340
nm.
Extendido de sangre.-
Estudio de subpoblaciones de Ls
Es necesario dar los sgtes pasos:
a) Separacin de linfocitos de las dems clulas sanguneas, por medio de
centrifugaciones por densidad diferencial, para lo cual se emplea concentraciones
variables de Ficoll Hypaque
b) Marcar las diferentes subpoblaciones con fluorocromos (rodamina,
fluorescena) por medio de Acs monoclonales contra las diferentes molculas CDs
que caracterizan distintas subpoblaciones de Ls.
c) Citometra de flujo; Tcnica de anlisis celular, se basa en pasar una suspensin
de clulas de una en una por delante de un haz de laser focalizado. El impacto de
cada clula con el rayo de luz produce seales que corresponden a diferentes
parmetros celulares y que son captados por distintos detectores. Estos convierten
dichas seales en electrnicas que son digitalizadas permiten cuantificar los Ls
El monitoreo de subpoblaciones linfocitarias en el sndrome de inmunodeficiencia
adquirida (SIDA), fundamentalmente la cuantificacin en sangre perifrica de las
clulas CD4+ y los linfocitos CD8+ aportan un valor diagnstico y pronstico en
esta patologa
Con Acs Mcs que reconozcan diferentes CDs presentes en membranas de Ls y Mos, se
puede determinar el grado de madurez de las clulas, es til para clasificacin de
leucemias implicaciones pronosticas y tratamiento que establecen el grado de
madurez de Ls.
Estudio de Citoquinas
Existe un juego de reactivos comerciales que permiten detectar y cuantificar cada una
de las diferentes citosinas, como la Citometra de flujo
Inmunidad humoral
Se hacen acudiendo a diferentes mtodos. Unos cuantifican inmunoglobulinas, otras
evalan la reaccin Ag-Ac, otras sirven para detectar concentraciones bajas de
determinadas protenas.
Medicin de Inmunoglobulinas
Electroforesis.-
Inmunoelectroforesis
La Inmunoelectroforesis es el nombre genrico que reciben un amplio nmero de
mtodos bioqumicos para la separacin y caracterizacin de protenas basadas en
la electroforesis y la reaccin con anticuerpos. Todas las variantes de la
Inmunoelectroforesis requieren inmunoglobulinas, anticuerpos que van a reaccionar
con las protenas que se desea separar o caracterizar.
Es una tcnica que pone en evidencia la falta de alguna clase de inmunoglobulina.
En la inmunodeficiencia variable comn se manifiesta por la falta de IgA e IgG
Dosificacin de IgE
Esta Ig es citoflica, sus concentraciones plasmticas son pequeas y no
detectables por inmunodifusin radial es necesario acudir a la nefelometra
Reacciones Aglutinacin
Pruebas de aglutinacin: Se basan en la unin de antgenos particulados a los
anticuerpos, preferentemente de clase IgM. Suele tratarse de pruebas muy
sensibles pero con poca especificidad.
Esta prueba es til para el diagnstico de tifo exantemtico, fiebre tifoidea,
igualmente lo es en la clasificacin de grupos sanguneos del sistema ABO.
Prueba de Coombs
La prueba de Coombs (tambin conocida como prueba de antiglobulina) es un
examen de sangre que se usa en inmunologa y hematologa. Este anlisis puede
detectar la presencia de anticuerpos en suero que reaccionan con antgenos en la
superficie de los glbulos rojos
Existen 2 variantes de esta prueba:
Prueba de Coombs directa: cuando la anti globulina humana se emplea
para detectar anticuerpos unidos a eritrocitos in vivo
Fundamento: investigar anticuerpos anti-Rh
que se encuentran
recubriendo los eritrocitos del recin nacido.
En casos de eritroblastosis fetal, anemia
hemoltica
y reacciones
hemolticas por transfusin puede haberse efectuado el recubrimiento in
vivo del eritrocito.
Se utiliza
para
investigacin de enfermedades autoinmunes
que
involucran la unin de inmunoglobulinas y/o fracciones del complemento a
los glbulos rojos, tambin en investigacin de reacciones dudosas en una
transfusin
Hemaglutinacin
Estas pruebas se basan en la capacidad de algunos patgenos (p.ej. el virus de la
influenza) para causar la aglutinacin de los eritrocitos. Pueden utilizarse para
detectar el patgeno (pruebas de hemaglutinacin) o los anticuerpos dirigidos
Prueba de citotoxinas
Permite la deteccin e identificacin de anticuerpos especficos por la lisis de
clulas blanco en presencia del complemento.
Se pone en incubacin el complemento y clulas con anticuerpos contra su
membrana, se producir la activacin del mismo
y como consecuencia
alteraciones en la membrana de las clulas las cuales se hacen permeables.
Tiene aplicacin en el diagnstico de bordetella pertussis
Radioinmunoanlisis
Se basa en evidenciar el antgeno anticuerpo a travs de la utilizacin de una
antigamaglobulina humana marcada con un radioistopo y la utilizacin de un
sustrato que dar una reaccin de color
Ventajas: alta sensibilidad y especificidad, es una tcnica rpida
Desventajas: la radiacin es un problema serio en la salud es cancergena, el
equipo es de alto costo
s tras cada fase de replicacin y, a continuacin, dejar que las hebras de ADN
vuelvan a unirse para poder duplicarlas nuevamente.
Por lo general, la PCR es una tcnica comn y normalmente indispensable en
laboratorios de investigacin mdica y biolgica para una gran variedad de
aplicaciones. Entre ellas se incluyen la clonacin de ADN para la secuenciacin,
la filogenia basada en ADN, el anlisis funcional de genes, el diagnstico de
trastornos hereditarios, la identificacin de huellas genticas (usada en tcnicas
forenses y test de paternidad) y la deteccin y diagnstico de enfermedades
infecciosas.
Aplicaciones
Permite el genotipar la especie o especies que provocan un determinado cuadro
infeccioso
La PCR tambin se puede usar en revisiones mdicas rutinarias, como en los
servicios de donantes de sangre, para test de rutina. A travs de esta tcnica se
pueden detectar infecciones en el donante (como VIH o Hepatitis B) mientras an
estn en el periodo de incubacin
El diagnstico de enfermedades hereditarias presentes en el genoma es un
proceso largo y complicado que puede acortarse significativamente gracias a la
PCR. Cada uno de los genes prueba se pueden amplificar mediante sus
correspondientes cebadores y posteriormente secuenciar para detectar la
existencia de mutaciones.