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Unidad: 1
Semana: 4
MICROBIOLOGA AMBIENTAL
CRECIMIENTO MICROBIANO
Conceptos Fundamentales
Factores que afectan la actividad de los
agentes fsicos, qumicos y biolgicos
Esterilizacin, Desinfeccin y Antisepsia
Muerte microbiana (Factores D, Z, FI y F)
Procesos de esterilizacin (agentes,
condiciones y usos)
Monitoreo de los procesos de
esterilizacin (controles)
Remocin de microorganismos por
filtracin
OBJETIVOS
Proteccin de la salud
Mantenimiento de la calidad
Proteccin del medio ambiente
PROCESOS:
-remocin
-microbicidas
-microbiostticos
Procesos
DESCONTAMINACIN
(destruccin o remocin)
(agentes fsicos y qumicos)
-Esterilizacin
-Desinfeccin
-Antisepsia
CONSERVACIN (inhibicin)
(Agentes fsicos o qumicos)
QUIMIOTERAPIA
(inhibicin o destruccin para eliminar
patgenos)
(Agentes biolgicos)
Procesos de
Descontaminacin
Desinfeccin:
Reduccin del nmero de microorganismos en
un ambiente inanimado
Antisepsia:
Inhibicin o destruccin de microorganismos
en la superficie de tejido vivo tendiente a
prevenir una infeccin
Esterilizacin
Proceso cuyo fin es lograr en un
producto o lote AUSENCIA DE TODA
FORMA DE VIDA o sea la esterilidad
Esterilidad: Trmino absoluto
CINTICA DE MUERTE
log N sobrevivientes
Nt = No e -kt
8
7
6
5
4
3
2
1
0
0
20
40
Tiempo (min)
60
80
Tiempo en el cual se
reduce en un 90% la
poblacin inicial a una
temp dada
(disminuye un orden)
D=
log N sobrevivientes
Definicin:
8
7
6
5
4
3
2
1
0
0
D20
40
Tiempo (min)
t - to
D = -1
pend.
60
80
FACTOR DE INACTIVACIN
D=
fi = N/No
t - to
log No- log N
= 10-t/D
Resistencia a calor
RESISTENCIA
Priones
Endosporas bacterianas
Mycobacteria
Virus sin envoltura lipdica
Hongos
Bacterias
Virus con envoltura lipdica
log N sobrevivientes
8
7
6
5
4
3
2
1
0
0
20
40
Tiempo (min)
60
80
Efecto de la Temperatura
Velocidad de muerte
Temp
D
100
50 C
10
70 C
60 C
tiempo
VALOR Z
Definicin
Cambio de temperatura necesario para
reducir 10 veces (una unidad logartmica)
el valor D
2,5
log D2-log D1
log D
Z=
T2-T1
Z = 20C
Un tratamiento de 5 min.
a 100C equivale a 0,5
min
a 120C
1,5
1
0,5
0
90
100
110
120
T(C)
130
140
Influencia de la matriz
ESTERILIZACIN
Proceso cuyo fin es lograr la esterilidad de un producto o lote
SAL: sterility assurance level (probabilidad de sobrevida)
10-6 o mayor (medio interno)
10-3 (contacto con piel o mucosas)
SAL 10-6
probabilidad de una unidad no-estril es menor o igual
a 1 en 106 unidades procesadas
Tiempo de
exposicin
(min)
m.o.sobrevivientes por
unidad
SAL
100
No estril
10
No estril
2
3
1
0.1
No estril
1 No estril en 10
4
5
0.01
0.001
1 No estril en 100
1 No estril en 1000
6
7
0.0001
0.00001
1 No estril en 10.000
1 No estril en 100.000
0.000001
1 No estril en 1.000.000
Log 10
105
4
3
1
0
0
1
Tiempo
(min)
1
2
3
4
5
6
Log 10
Probabilidad de
sobrevivientes
Recuento de viables
Log 10
10
8
6
4
Bioindicador
0
1
Biocarga
D=0.5 min
a 121 C
0
6
Tiempo
(min)
2
4
6
8
10
12
Log 10
Probabilidad de
sobrevivientes
Recuento de viables
12
CONTROL DE ESTERILIZACIN
Post-proceso:TEST DE ESTERILIDAD
Indicador fsico
Indicador qumico
Indicador biolgico
Cambio de color
Microorganismo resistente
Clasificacin de AGENTES
Segn su naturaleza:
- Fsicos: Calor, radiaciones y filtracin
- Qumicos
- Biolgicos
AGENTES FSICOS
CALOR
APLICACIN
Esterilizacin
Desinfeccin
RADIACIONES
Esterilizacin
Desinfeccin
Esterilizacin
FILTRACIN
Desinfeccin
CALOR
Calor
hmedo
Calor seco
Ambos pueden
ser utilizados en
procesos de
esterilizacin
Calor hmedo
PROCESOS
Esterilizacin:
Vapor saturado a presiones mayores que la
atmosfrica
Tyndalizacin (fraccionada por vapor)
Pasteurizacin
Calentamiento a ebullicin
Apertizacin
UHT
MECANISMOS DE ACCIN
Desnaturalizacin de protenas
Destruccin de cidos nucleicos
Pasteurizacin
LHT (low temperature holding)
30 minutos a 62.8C
HTST (high temperature short time)
15 segundos a 71.6C
Destruye patgenos (Coxiella burnetti, Mycobacterium
tuberculosis) y reduce flora de deterioro
Usos: leche, lcteos, jugos de fruta
Calentamiento a ebullicin
Temperatura
100C
Tiempo Variable
Virus y toxinas pueden ser muy resistentes
Apertizacin
Producto final libre de microorganismos
capaces de crecer en el producto tratado, en
las condiciones de distribucin y
almacenamiento (temp amb) y de patgenos.
Usos: Produccin de conservas en industria
alimentaria
Implementacin:
Aplicar tiempos mayores de 12 D para
esporas de Clostridium botulinum en el
producto (3-4 minutos a 121C)
Esterilidad comercial
Tyndalizacin
Qumicos
AUTOCLAVE
Temperatura C
120
110
100
15
Tiempo (min.)
Etapa de
Etapa de
Etapa de
calentamiento mantenimiento enfriamiento
Tratamientos equivalentes
TEMP.(C)
121
126
115
134
TIEMPO(min.)
15
10
30
4
F(min)
15
31
8.1
15
CALOR SECO
Aire caliente:
Equipo:Hornos elctricos
Alcance: Se consigue esterilizacin (170C, 60
minutos o 160C, 120 minutos)
Usos: a)Esterilizacin de:
materiales resistentes al calor
Sustancias no miscibles en agua (inyectables
oleosos, siliconas, vaselina lquida)
Polvos
b) Despirogenizacion (250C 45 minutos o
180C 4hs, o 650 1 min)
CALOR SECO
Mecanismo de accin:Procesos de oxidacin
Controles de proceso de esterilizacin
Indicadores fsicos y qumicos
Indicador biolgico esporas de Bacillus subtilis var.
niger
(D 160C = 0.3 a 1.8 min, Z=20C, tamao del inculo:
105 esporas)
RADIACIONES
Baja energa
Actividad
antimicrobian
a
Alta energa
Dos tipos: Radiaciones
ionizantes
no ionizantes
RADIACIONES IONIZANTES
Caractersticas:
Alta energa, baja longitud de onda
Gran poder de penetracin
Ionizan tomos y molculas
No requieren altas temperaturas
Tipos:
Rayos gamma (60Co o 137Cs)
Rayos catdicos (electrones acelerados)
Dosis:
Energa absorbida.
Unidad: Gray(Gy) = 1J absorbido por Kg
1Gy =100 rad
Parmetros:
D Dosis a la cual se reduce en un 90% la
poblacin inicial
Aplicaciones:
Esterilizacin de materiales termosensibles
(25kGy)
Esterilizacion comercial de alimentos
(radapertizacin) 30-40 kGy
Pasteurizacin de alimentos (Radicidacin)
2,5-10kGy
Mecanismos de accin:
Priones
Deinococcus radiodurans
Enterococcus faecium
D (kGy)
3
Esporas bacterianas
1.2
Virus
spp.
Hongos
Bacterias (en gral)
m.o.
Bacillus pumilus
Staphylococcus
Desventajas:
Equipo especial, personal entrenado
No todos los materiales resisten el tratamiento
Reacciones no deseadas en alimentos
RADIACIONES NO IONIZANTES
EJ: UV
Caractersticas:
Baja energa, sin poder ionizante
Sin poder penetrante
Mxima eficiencia biocida a 260nm
NO SE UTILIZAN PARA
Mecanismos de accin:
ESTERILIZAR
Sitio blanco ADN
SINO PARA:
Formacin de dmeros de timina
Usos:
Desinfeccin de superficies
Desinfeccin de aire y agua
FILTRACIN
Proceso que consiste en pasar una mezcla de
lquido y partculas o gas y partculas a travs de
un medio poroso que retiene los slidos en su
superficie, en su matriz o en ambos.
Aplicaciones:
Desinfeccin
Esterilizacin
Soluciones
Gases
Tipos de filtro
De profundidad
De membrana
Eleccin
Capacidad
Eficiencia
FILTROS DE PROFUNDIDAD
Ventajas:
-Gran capacidad
-Retiene partculas menores por adsorcin
Desventajas:
-No tiene lmite preciso de tamao de partcula
-Desprendimiento de matriz
-Retencin de gran volumen de lquido
Mecnico
Adsorcin
Filtros de membrana
Estructura: uniforme, con poros de tamao
regular y definido
Materiales: nylon, acero inoxidable, steres de
celulosa
Ventajas:
Sin desprendimiento de matriz
Delgados (150m) No retienen grandes
volmenes
Lmite de filtracin preciso
Desventajas
Baja capacidad
Usos
FILTRACIN DE AIRE
Filtros HEPA (High Efficiency Particulate Air)
Remocin de hasta el 99.97% de partculas
mayores de 0.3 micrones de dimetro
Se usan en cabinas o habitaciones de flujo
laminar
CONTROL
Retencin Mnima de un 99.97% de partculas
generadas mediante ensayo DOP(dioctilftalato)
en caliente con un dimetro de 0.3 micrones.
GRACIAS