Biologa II Turno Maana

Ros Flavio Nicols

TP N3 Desinfeccin y Esterilizacin. Crecimiento

bacteriano

Biologa II
Trabajo Prctico N3
Desinfeccin y Esterilizacin. Crecimiento Bacteriano
Introduccin
Sabemos que los procariotas son organismos ubicuos y que interaccionamos da a da con un nmero
grande y difcil de estimar, siendo sus interacciones beneficiosas o perjudiciales. En el laboratorio de
biologa debemos evitar la contaminacin de ensayos con los que estamos trabajando para eso en este
trabajo veremos las distintas formas de esterilizacin, desinfeccin y asepsia y su apropiado uso en el
laboratorio para evitar contaminaciones en nuestros experimentos segn la circunstancia, y lo aplicaremos
usndolo en la tcnica de crecimiento bacteriano a partir del mtodo de diluciones seriadas como ensayo.
Objetivos:
Cuantificar unidades formadoras de colonias en un cultivo mediantes plaqueo en medio slido.
Aplicar conceptos de trabajo en esterilidad y evaluar la presencia de posibles contaminantes en el
laboratorio de Biologa.
Material:
Capsulas de petri.
Agar de Cultivo LB.
Cultivo de Escherichia coli.
Caldo LB
Tubos Eppendorf.
Gradilla para tubos eppendorf.
Micropipetas.
Tips Esteriles.
Alcohol 96%.
Mechero Bunsen.
Rastrillo de vidrio.
Hisopo
Desarrollo
1. Antes de comenzar se limpi bien las mesadas y desinfectamos con Etanol al 96%.
2. Realizamos diluciones seriadas 1/10 del cultivo a cuantificar, utilizando medio LB (Vf=1mL).
Homogeneizamos la suspensin celular antes de pipetear.

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bacteriano

3. Paqueamos seleccionando un volumen de plaqueo adecuado al tamao de la placa en este caso

100 L Con el rastrillo de vidrio, esterilizado, esparcimos la solucin por el medio de cultivo solido.
4. Incubar a 37C por un da.
5. Cuantificamos las colonias y calculamos UFC/mL.
6. Tomamos una muestra ambiental con el hisopo y la pasamos por otra placa, incubamos a 37C por
48 horas.
Resultados:
A las 48 horas de cultivo se encontr con el siguiente recuento de colonias
Dilucin
1,00E-03
1,00E-04
1,00E-05
1,00E-06

Colonias
308
83
8

UFC/mL
3,08E+07
8,30E+07
8,00E+07

Conclusiones:
En este trabajo hemos visto distintos tipos de esterilizacion, desinfeccion y asepsia en el laboratorio
para evitar contaminaciones en nuestros experimentos, con el objeto de determinar el crecimiento de
Escherichia coli a traves del mtodo de diluciones seriadas. Se ha podido contar las colonias as como
tambin calcular las Unidades Formadoras de Colonia por mL. Se ha visto tambin que las diluciones 1E3 y 1E-6 estaban contaminadas ya que se observaron colonias de otra caracterstica esto puede ser a un
descuido en el plaqueo provocando contaminacin, adems de que tambin en la muestra 1E-3 y 1E-4
tenamos formacin de csped o eran muchas colonias a contar lo cual una muestra no pudo contarse las
colonias y con respecto a la otra el error aumenta al haber tantas colonias.
Bibliografia:
Brock, Biologa de los Microorganismos - Autor: Michael T. Madigan, John M. Martinko Publisher:
Pearson Educacion
Hans G. Schlegel, Microbiologia General Omega