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MICROBIOLOGA GENERAL
REA MICOLOGA
AO 2011
TRABAJO PRCTICO N 1
Tema: Elementos a utilizar en el laboratorio de Micologa
Tcnicas de siembra y aislamiento.
Objetivos
Materiales
Tcnicas
TRABAJO PRCTICO N 2
Tema: Macromorfologa de las colonias fngicas
Micromorfologa del desarrollo fngico vegetativo
Tcnicas de siembra de cepas fngicas
Objetivos
Materiales
Caja de trabajo.
Placas de Petri con desarrollos de hongos filamentosos y levaduriformes
crecidos en distintos medios de cultivo slido.
Placas de Petri estriles.
Placas de Petri con medio de cultivo Sabouraud.
Soportes en V.
Agua destilada estril.
Preparados de cultivos de diferentes hongos montados con Guegun o
lquido de montar para observacin de su micromorfologa.
Tcnicas
1) Siembra de cepas fngicas para obtencin de colonias adultas:
Preparar placas de Petri con medio Agar Papa Dextrosa u otros medios
adecuados. Sembrar por un toque en el centro de la placa la cepa fngica (a
partir de un cultivo puro). Incubar a 28C entre 5 7 das. Observar. Describir.
2) Cultivo de adhesin:
En una placa de petri estril, colocar un soporte en V y un portaobjetos
previamente flameados. Depositar sobre el portaobjetos 3 cuadrados de 1 cm
de lado de un medio de cultivo apropiado. Sembrar los medios con el hongo en
estudio y cubrir con cubreobjetos previamente flameados y enfriados. Colocar
sobre la base de la caja de Petri agua destilada estril e incubar a 28C el
tiempo necesario. Para su observacin retirar el cubreobjetos y colocarlo sobre
un portaobjetos limpio en el que previamente se ha depositado una gota del
lquido de montaje adecuado.
COLOR
ANVERSO
REVERSO
SUPERFICIE
LISA
ACUMINADA
CRATERIFORME
RADIADA
UMBILICADA
CEREBRIFORME
BORDE
LISO
RADIADO
FESTONEADO
LOBULADO
CONSISTENCIA
BLANDA
FILANTE
ADHERENTE
LEOSA
ASPECTO
CREMOSO
YESOSO
CEREBRIFORME
ALGODONOSO
AFELPADO
ATERCIOPELADO
DESARROLLO
POBRE
REGULAR
ABUNDANTE
TRABAJO PRCTICO N 3
Tema: Reproduccin asexual. Conidiognesis tlica.
Objetivos
Materiales
Tcnicas
1) Observacin microscpica de elementos de conidiacin tlica:
Observar microscpicamente (con objetivos de 10x y 40x) preparaciones
montadas con Guegun o lquido de montar de esporas asexuales y elementos
de reproduccin tlica: clamidoconidios, macroconidios, microconidios,
artroconidios (holo y enterortricas), tratando de caracterizar los elementos
observados de acuerdo a los criterios de clasificacin.
TRABAJO PRCTICO N 4
Tema: Reproduccin asexual. Conidiognesis blstica.
Objetivos
Materiales
Tcnicas
1) Observacin microscpica de elementos de conidiacin blstica:
Observar microscpicamente (con objetivos de 10x y 40x) preparaciones
montadas con Guegun o lquido de montar de elementos de reproduccin
blstica: holo o enteroblsticas a partir de clulas conidiognicas determinadas
o indeterminadas, tratando de caracterizar los elementos observados de
acuerdo a los criterios de clasificacin.
TRABAJO PRCTICO N 5
Tema: Reproduccin sexuada.
Objetivos
Reconocer
sexuada
micromorfolgicamente
las
estructuras
de
reproduccin
Materiales
Caja de trabajo
Preparados de cultivos de diferentes hongos montados con Guegun o
lquido de montar para observacin de su micromorfologa
Tcnicas
1) Observacin microscpica de elementos de reproduccin sexuada:
Observar microscpicamente (con objetivos de 10x y 40x) preparaciones
montadas con Guegun o lquido de montar de elementos de reproduccin
sexuada: cleistotecios, peritecios, apotecios, ascos desnudos.
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TRABAJO PRCTICO N 6
Tema: Dimorfismo fngico
Objetivos
Materiales
Caja de trabajo
Tubos de hemlisis con suero estril
Colonias y preparados de cultivos de diferentes hongos dimrficos
Tcnicas
1) Produccin de tubos germinativos
Inocular 0,5 ml de suero estril con una pequea cantidad de levadura con
aguja. Incubar a 37C, observar microscpicamente u na gota de la suspensin
cada 30 minutos, hasta las 3 horas. La presencia de tubos germinativos
permite la identificacin rpida de Candida albicans y Candida dubliniensis.
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LQUIDO DE MONTAR
Glicerina....................................................40 g
cido lctico..............................................20 g
Fenol cristalizado......................................20 g
Agua destilada..........................................20 ml
MEDIOS DE CULTIVO
AGAR SABOURAUD GLUCOSA
Medio utilizado para el aislamiento, identificacin y mantenimiento de la gran
mayora de los hongos patgenos
Peptona......................................................10 g
Glucosa......................................................20 g
Agar-agar...................................................20 g
Agua destilada........................................1000 ml
Ajustar el pH a 5.6. Esterilizar durante 15 minutos a 121C.
Para preparar Sabouraud Glucosa Cloranfenicol agregar a la preparacin
anterior 100 ml de solucin de cloromicetina (cloranfenicol) 0.5 %P/V (en
etanol) antes de esterilizar.
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Diclorn.......................................................2 mg
(soluc. 0.2% p/v en etanol, 1 ml)
Cloranfenicol............................................100 mg
Agua destilada..............................................1 l
Despus de agregar todos los ingredientes, esterilizar por autoclavado a 121
C durante 15 minutos. PH final entre 5.5 5.8. Al macenar el medio ya
preparado lejos de la luz ya que fotoproductos del rosa de bengala son
altamente inhibitorios de algunos hongos, especialmente levaduras. En la
oscuridad el medio es estable por ms de un mes a 1-4 C. Las soluciones
stock de rosa de bengala y cloranfenicol no necesitan esterilizacin y tambin
son estables por largos perodos.
Cloranfenicol............................................100 mg
Agua destilada..............................................1 l
Agregar los componentes minoritarios y el agar a aproximadamente 800 ml de
agua destilada. Calentar para disolver el agar y completar a 1 litro con agua
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