INSTITUTO TECNOLGICO DE

CHIHUAHUA

MICROBIOLOGA AMBIENTAL

CUANTIFICACIN DE MESFILOS
POR EXTENDIDO EN PLACA
HECTOR EDUARO MENDEZ ZUBIATE
10060622

Docente:
Ing. Mara Abigael Lozano Saucedo

4.- CUANTIFICACIN DE MESFILOS POR EXTENDIDO EN PLACA

4.1 Objetivos
El fundamento de la tcnica consiste en contar las colonias, que se desarrollan en el
medio de eleccin despus de un cierto tiempo y temperatura de incubacin,
presuponiendo que cada colonia proviene de un microorganismo de la muestra bajo
estudio que se realizara por medio de la tcnica de extendido en placa la cual solo
favorece al crecimiento en la parte superior del agar

4.2 Introduccin
La presencia y extensin de contaminacin fecal es un factor importante en la
determinacin de la calidad de un cuerpo de agua. Las heces contienen una variedad
de microorganismos y formas de resistencia de los mismos, involucrando organismos
patgenos, los cuales son un riesgo para la salud publica al estar en contacto con el
ser humano. El examen de muestras de agua para determinar la presencia de
microorganismos del grupo coliforme que habitan normalmente en le intestino humano
y de otros animales de sangre caliente, da una indicacin. Dada la limitada capacidad
de algunos miembros del grupo de organismos coliformes para sobrevivir en agua; sus
nmeros tambin pueden emplearse para estimar el grado de contaminacin fecal.

Extendido en placa
La tcnica se basa en contar las unidades formadoras de colonias o UFC presentes
en un gramo o mililitro de muestra. Se considera que cada colonia que desarrolla en el
medio de cultivo de eleccin despus de un cierto tiempo de incubacin a la
temperatura adecuada, proviene de un microorganismo o de un agregado de ellos, de
la muestra bajo estudio; ese microorganismo o microorganismos son capaces de
formar la colonia, es decir una UFC. Para que las colonias puedan contarse de manera
confiable, se hacen las diluciones decimales necesarias de la muestra, antes de
ponerla en el medio de cultivo (2).

4.3 Materiales y Equipos

3 Tubos de ensaye
4 Cajas petri
4 Pipetas de 1 ml
4 Pipetas de 10 ml
1 Vaso de precipitado de 50 ml
Incubadora RIOSSA MOD EC-23
Propipeta
Muestra de agua (llave del patio ) 10ml
Agua destilada 50 ml
1.88 gr Agar para mtodos estndar
4 Agitadores en forma de L
Autoclave (marca All American modelo No.25x).
Balanza analtica (marca Adventurer Pro modelo AV812C).
Cuenta colonias marca FELISA M.R

4.4 Procedimiento
1. Se prepar el agar para mtodos estndar agregando 1.8 gr de agar y se le
agreg 80 ml de agua destilada. Figura 1

Figura 1 Agar utilizado

2. Se esteriliz el material en el autoclave a 15 psi de presin durante 20 minutos
3. El agar y el agua destilada se metieron a otra autoclave a 15 psi durante 15
min.
4. Se prepararon las muestras de agua

vertiendo primero 10 mililitros de la

muestra en un tubo de ensaye, despus de ah se prosigui a hacer las

diluciones tomando de la muestra directa 1 mililitro de agua y depositndola en

otro tubo de ensayo con agua destilada previamente esterilizada para hacer las
diluciones y as continuamente hasta llegar a la dilucin de 1-1000. Figura 2

Figura 2 Preparacin de diluciones.

5. Se vaci en las cajas Petri el agar y se dej solidificar. Figura 3

Figura 3 Agares solidificados

6. Se agreg .1 ml de la muestra directa y las diluciones correspondientes a cada
caja petri cuidando de no utilizar la misma pipeta para no afectar en las
concentraciones de las muestras. Posteriormente se extendi con un agitador
en forma de L de manera uniforme sobre el agar para que quede toda la
muestra de agua esparcida uniformemente ya que el crecimiento de los
microorganismos sern en la parte superior. Figura 4

Figura 4 Vaciado de muestra en agares

7. Se introdujeron las cajas Petri en la incubadora a temperatura de 35 grados

centgrados durante 24 horas.
8. Al da siguiente se observ en el contador de colonias.

4.6 Resultados

Se pudo observar a simple vista que se desarrollaron solo dos colonias en la muestra
1-10

y una colonia muy pequea en la muestra directa. Esto indica que s hay

presencia de mesfilos en el agua pero en muy pequea cantidad lo cual nos indica
segn la norma NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-092-SSA1-1994, BIENES Y
SERVICIOS. MTODO PARA LA CUENTA DE BACTERIAS AEROBIAS EN PLACA la
cul indca que si hay presencia de microorganismos pero solo con 1 UFC Y 2 UFC
respectivamente, estos estn dentro de la norma segunlas especificaciones. (figura 5)

Figura 5. Limite permisible en agua de coliformes

4.7 Conclusiones
Debido a que la prctica arrojo datos de que existan UFC presentes en el agua se
puede llegar a la conclusin que esos organismos pueden ser Shigella, Escherichia
coli, Vibrio y Salmonella ya que estos son los ms probables de encontrar en el agua
debido a sus caractersticas de crecimiento.

Organismos capaces de crecimiento aerbico ya sea 308 1k (35 1C) 310 1k

(37 1C). en estsos se encuentran los Organismos coliformes fecales en los cuales
se encuentra ESCHERICHIA COLI.
4.8 Bibliografa
(1) http://www.conagua.gob.mx/CONAGUA07/Noticias/NMX-AA-042-1987

(2) http://www.salud.gob.mx/unidades/cdi/nom/127ssa14

COLUMNA Winogradsky
Objetivo

Diferenciar los grupos microbianos presentes en un microambiente.

Relacionar la diversidad microbiana presente en un microambiente
con algunas de sus caractersticas fisiolgicas.

Introduccin
El estudio de las comunidades microbianas en condiciones de laboratorio puede
realizarse fcilmente en una columna de Winogradsky, la cual simula un
microecosistema o microambiente que ilustra cmo los microorganismos ocupan
microespacios altamente especficos de acuerdo con sus necesidades vitales, tales
como: requerimientos de carbono, energa y oxgeno, as como la interdependencia,
de forma tal que la actividad metablica de un microorganismo posibilita el crecimiento
de otros y viceversa. Estas columnas, que llevan el nombre del microbilogo ruso que
las utiliz por primera vez, son sistemas completamente autoreciclables.
Las columnas de Winogradsky se preparan con muestras de suelo colectadas en
ambientes hmedos, las cuales son enriquecidas con compuestos orgnicos e
inorgnicos y finalmente son expuestas a una fuente de luz natural. En ellas se
observa que despus de 3 4 semanas de incubacin aumenta la cantidad de los
distintos tipos de microorganismos, mismos que de acuerdo con sus caractersticas
fisiolgicas se establecen en las diferentes zonas a lo largo de la columna, lo que se
conoce como sucesin. De esta forma, el resultado es una columna estratificada
(zonas de diferente color) tanto en el suelo como en el agua, donde cada estrato se
relaciona con un proceso qumico-biolgico.
En la zona inferior de lodos se desarrollan organismos fermentadores que producen
alcohol y cidos grasos como subproductos de su metabolismo. Estos productos de
"desecho" constituyen el sustrato para el desarrollo de bacterias reductoras de sulfato,
las cuales como resultado de su metabolismo liberan sulfuros que difunden a la zona
superior oxigenada creando un gradiente en el que se desarrollan bacterias
fotosintticas que utilizan el azufre.
Por encima de esta zona pueden desarrollarse las bacterias prpura que no utilizan el
azufre y que obtienen su energa de reacciones luminosas, pero que emplean cidos
orgnicos como fuente de carbono para su sntesis celular.

Finalmente, en la zona aerobia crecen las Cianobacterias y algas las cuales como
producto de su metabolismo liberan oxgeno. Tambin pueden crecer bacterias que
oxidan compuestos del azufre y del nitrgeno hasta sulfatos y nitratos
respectivamente. Todos estos grupos sintetizan su materia orgnica a partir del CO2

Material y Equipo

Clavo oxidado
1 gramo de Cscara pulverizada de huevo
1gramo CaSO4
2 gramos de KSO4
80 gramos de Tierra
50 mililitros de agua de charco
Probeta (100ml-500ml)
Vaso precipitado (500ml)

Agitador
Papel aluminio
Tiras de papel

Mtodos
1.- Se llen 1/3 del volumen de una probeta de 100ml con lodo previamente hmedo.
2.- Se adicion 0.5g de sulfato de calcio y 0.5g de carbonato de potasio.
3.- Se enriqueci el medio con tiras de papel delgadas, una yema de huevo, cascara
de huevo y un clavo oxidado.
4.- se mezclaron bien todos los ingredientes y se compacto la mezcla, se cubri con
agua de charca hasta la parte superior de la probeta. Como se muestra en la figura 1

Figura 1. Compactando los ingredientes.

5.-Se tap con papel aluminio y se coloc la probeta en un lugar donde reciba la luz
del sol.

6.- Se incub durante 8 semanas. Figira 3

Figura 2 Columna de Winogradsky.

7.- Se tomaron muestras de diferentes regiones de la columna. Figura 3

Figura 3 Obtencin de muestra.

8.- Se realiz tincin de Gram para cada una de las muestras. Como se muestra en la
figura 4

Figura 4 Tincin de Gram.

9.- Se observ en el microscopio.

Los resultados al observar al microscopio fueron los siguientes:

En la parte superior de la columna donde se encuentran los organismos aerobios se

pudo identificar lo que parece ser un alga debido a su coloracin y a su ramificacin
que tiene al parecer se le ofrman tallos y de estos salen unas pequeas hojitas, esta
alga parece tener forma de trbol lo cual indica que pertenece a la familia de las
(figura 5 y 6)

Figura 5 Alga.

Figura 6

En la parte media de la columna se pudo observar un organismo de tipo bacilo pero

este tiene un tamaa mucho ms grande que los bacilos normales, este no puede ser
un bacilo ya que se observ sin tincin de gram por lo tanto al no tener coloracin
estos no se pueden ver a simple vista al microscopio con el objetivo de 40. Lo que se
llega a la conclusin de que es posiblemente un organismo superior al parecer un
pequeo gusano. Figura 7.

Figura 7 Posible gusano

De igual manera en la parte media de la columna se encontr con lo que parece ser
una raz, tiene una tonalidad azul y pareciera como si fuera una hifa de un hongo por
su coloracin pero en este porta objetos no se tii para observar hongos as que
posiblemente o no estaba bien lavado el porta objetos o el reflejo de la luz sobre el
vidrio le dio la tonalidad a este posible cuerpo radicular. Figura 8

Figura 8

Este es un organismo que se encontr en la parte superior de la columna ya aplicando

tinsion de gram y con el objetivo de 100. Al parecer es un organismo esta segmentado
lo que indica que puede ser un parasito figura 9 y 10

Figura 9

Enl aparte inferir de la columna se encontraron alguson

bacilos y lo que parece ser un acienobacteri apor su tamao mas grande que los
bacilos y su tonalidad roja figura 11

RESULTADOS
Despus de haber pasado el tiempo necesario se observaron algunas anomalas en la
composicin de la columna, ya que por la parte superior de la columna emergi todo el
liquido que se encontraba al inicio de la preparacin. Respecto a los dems
experimentos, este fue un caso nico ya que no se repiti este fenmeno.
Los resultados observados en el microscopio fueron los que se muestran en la tabla
11.7.
Tabla 11.1. Observaciones en el microscopio.
ZONA DE LA COLUMNA

OBSERVACIONES

CONCLUSIONES

ANAEROBIA

Cocos y bacilos purpuras y en

algunos casos negros.

AEROBIA

No se tom muestra

Posibles bacterias
reductoras de sulfato o
bacterias prpura
sulfreas

CONCLUSIONES
Debido a que el lquido que se encontraba en la parte superior de la columna emergi,
se cree que las probabilidades de que las zonas aerobias y anaerobias de la columna
sufrieran alteraciones son altas, tambin se cree que existe la posibilidad de que en
algn momento se tubo una limitacin grande de nutrientes necesarios para la
supervivencia de los microorganismos, es por ello que no se pudieron observar en
algunas partes de las columnas crecimiento de microorganismos.