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TCNICAS DE AISLAMIENTO DE BACTERIAS Y MEDIOS DE CULTIVO 20 de Febrero de 2015

Universidad Autnoma de Ciudad Jurez. Instituto de Ciencias Biomdicas. Programa
Mdico Cirujano. Microbiologa I. Grupo P Laboratorio 2.
Alejandra Aguilera Meja (129034) Guadalupe Acosta Bezada (135998) Jacqueline Ruiz
Aguirre (127683) Ana Jocelyn Padilla Portillo 133074
La gran importancia del aislamiento adecuado de bacterias en medios de cultivo propicios
para su posterior estudio y anlisis radica en cantidad de conjeturas que se han realizado
gracias a estas investigaciones. El medio de cultivo es la solucin en que se pretende aislar
a los microorganismos, este debe poseer ciertas caractersticas que ayuden al organismo a
proliferar. El aislamiento puede realizarse por medio de diversas tcnicas que dependen del
objetivo que se busque, estos se revisaran a continuacin.
OBJETIVO
Que los alumnos desarrollen las tcnicas
de siembra comunes de aislamiento de
bacterias y que conozcan algunos medios
de cultivo comunes para bacterias y
adquieran el criterio para seleccionarlos
segn sus necesidades.
PALABRAS CLAVE
Cultivo puro, medio de cultivo, tcnicas de
aislamiento, colonias.
INTRODUCCIN
En la naturaleza y formando parte de la
flora normal o patolgica de diversos
huspedes, no suelen encontrarse
poblaciones bacterianas integradas por
una nica especia. Al contrario, suelen
encontrarse mezclas de bacterias, a
menudo muy complejas, con cientos de
especies (como en el intestino grueso,
vagina, sarro dentario, etc.) Para estudiar
una bacteria en el laboratorio e
identificarla es necesario tener una
poblacin bacteriana homognea.

Estas
poblaciones
bacterianas
homogneas que normalmente se
obtienen como una poblacin de
bacterias descendientes de una sola
bacterias (clon) se denominan cultivos
puros. Las tcnicas que permiten obtener
cultivos puros a partir de mezclas de
bacterias, separando las diversas especies
existentes en la mezcla, reciben el
nombre de tcnicas de aislamiento.
Cuando se cultiva una muestra, lo primero
que se hace es sembrar la muestra en un
medio de cultivo apropiado para que el
microrganismo que buscamos crezca. Si
como resultado de esta siembra
obtenemos colonias aisladas que nos
permitan obtener cultivos puros, decimos
que hemos aislado el microorganismo.
(De la rosa, et al, 2011)
Un medio de cultivo es un sustrato o
solucin de nutrientes en los que crecen y
se multiplican los microrganismos en el
laboratorio, con el objeto como ya se
mencion de aislar diferentes especies

Tcnicas de aislamiento de bacterias y medios de cultivo

Liquido

Consistencia

Slido

Medios de cultivo

Semislido
Sintticos/Qumicamente
definidos
Origen
Naturales/Qumicamente
no definidos
Simples

Enriquecidos

Selectivos

Composicin y utilizacin

Diferenciales

se suministran por maceracin y adicin

de sangre, suero, extracto de levaduras,
liquido asctico, etc.
Los medio pueden clasificarse segn
consistencia, origen, composicin y
utilizacin.
Los medios simples poseen los requisitos
nutricionales mnimos para permitir el
desarrollo bacteriano en general, los
medios enriquecidos son medios
comunes a los que se les aaden ciertos
componentes como la sangre, suero,
liquido
asctico,
huevo,
glucosa,
vitaminas, etc. que permiten el aporte de
factores de crecimiento o sustancias que
neutralizan agentes inhibidores del
crecimiento en bacterias exigentes
nutricionalmente.

De enriquecimiento

De transporte

De recuento

bacterianas, proceder a su identificacin y

llevar a cabo una serie de estudios
complementarios.
Ilustracin 1 Clasificacin de los medios de cultivo

Los sustratos energticos y la materia

orgnica sinttica pueden suministrarse
por sustancias nutritivas en la maceracin
de viseras y carne. Los aminocidos o
pptidos los aportan las peptonas, que
contienen todos los productos de
degradacin de las protenas, sin
vitaminas y su composicin exacta vara
segn el tipo de sustrato y enzima
utilizados, como pepsina, tripsina,
papana etc. Los factores de crecimiento

Para
cultivar
un
determinado
microorganismo antes debemos conocer
los criterios que debe satisfacer un medio
para que este sea totalmente adecuado y
productivo. Primero debe contener los
nutrientes
adecuados
para
el
microrganismo que se desea desarrollar.
Tambin debe contener humedad
suficiente, un PH ajustado de manera
apropiada y una concentracin
conveniente de oxgeno, tal vez ausente
por completo. El medio que se va a
sembrar debe ser estril, es decir, en un
principio
no
debe
contener
microorganismos viables, de modo que el
cultivo contenga solo los microbios (y su
descendencia) que se agreguen al medio.
Por ltimo el medio de cultivo sembrado
debe incubarse a la temperatura correcta.

Tcnicas de aislamiento de bacterias y medios de cultivo

Se dispone de una amplia variedad de

medios de cultivo para el crecimiento de
microorganismos en el laboratorio.

Casi todos estos medio, disponibles en

comercio, estn constituidos por
componentes mezclados con anterioridad
y solo precisan el agregado de agua y
luego la esterilizacin. Cuando se desea
que las bacterias se desarrollen sobre un
medio solido se agrega un agente
solidificante como el agar, que consiste un
polisacrido complejo proveniente de un
alga marina que se utiliza desde hace
mucho tiempo como espesante de
alimentos como jaleas y helados. El agar
posee
algunas
propiedades
muy
importantes que lo convierten en valioso
para la microbiologa y aun no se ha
encontrado un sustituto satisfactorio.
Entre sus propiedades se encuentra el que
pocos
microorganismo
pueden
degradarlo, el que se licua a temperaturas
de alrededor de 100C y el que no altera a
las bacterias cuando se vierte sobre ellas.
(Tortora, et al, 2007)
MATERIALES Y MTODOS
I. Cultivo y aislamiento de bacterias en
placa, por la tcnica de estra cruzada
1. Se sembraron placas por separado de
medio tripticasa-agar-soya o de agarnutritivo, con cultivos puros de las
siguientes bacterias: Staphylococcus
aureus, Escherichia coli, Pseudomonas
aeruginosa,
Bacillus
subtilis,
Streptococcus pyogenes. Para lograrlo, se
desarroll el mtodo de siembra de la
estra cruzada en placa, girando la caja al

ir rayando hasta formar un pentgono,

siguiendo las indicaciones del profesor,
con el fin de ir diluyendo el inculo. Al
final de la siembra las bacterias quedaron
bien separadas unas de otras.
2. Se us una mezcla de todas las
bacterias en una placa del mismo medio y
con la misma tcnica, a partir de una
suspensin en caldo nutritivo o en agua
destilada.
3. Se invirtieron todas las placas, con la
tapa hacia abajo se metieron a la
incubadora a 37C, durante 24 horas.
4. Se sacaron las placas de la incubadora y
se observ el crecimiento bacteriano.
5. Se determinaron y anotaron los errores
efectuados en la siembra, cuando no se
obtuvo la separacin de las colonias.
6. Se notaron las diferencias entre las
colonias, segn la especie bacteriana. Se
hizo una tabla de las caractersticas
morfolgicas con los datos observados,
para cada bacteria, tomando en cuenta
dimetro
aproximado,
color,
transparencia,
brillo,
elevacin
pigmentos.
II. Cultivo en medio lquido.
1. Se sembraron las mismas bacterias, en
tubos
con
caldo-tripticasa-soya
inoculando una asada de la bacteria. Se
dej un tubo testigo sin inocular.
2. Se incubaron todos los
sembrados a 37 C por 24 hs.

tubos

Tcnicas de aislamiento de bacterias y medios de cultivo

3. Se sacaron de la incubadora sin agitar

los tubos. Se not una turbidez, un
sedimento, una pelcula superficial, o
combinados.

4 .Se dedujo la causa por la que no se

forman colonias en medio lquido y por
qu no se aslan las bacterias.
Se
anotaron
detalladamente
los
resultados en todos los experimentos.

RESULTADOS
MEDIOS DE CULTIVO
STAPHYLOCOCUS
AUREUS

ENTEROBACTER

OBSERVACIONES
En este tubo hubo menor
turbidez que el de
Enterobacter cloacae, de color
amarillento, sin sedimento y
sin velo superficial.
En este tubo se observa que
tomo un aspecto amarillento
claro, es turbio y hubo
sedimentacin y velo
superficial.

CLOACAE

STAPHYLOCOCUS AUREUS

En esta imagen se aprecian

pequeas colonias con un
dimetro de 1mm aproximado
de color blanco, su aspecto es
circular, su elevacin es
convexa y un borde
redondeado

ENTEROBACTER CLOACAE

En esta imagen se aprecian

pequeas colonias con un
dimetro de 3mm aproximado
de color blanco, su aspecto es
circular, su elevacin es
convexa y un borde
redondeado, y no es
translcido

Tcnicas de aislamiento de bacterias y medios de cultivo

Aqu podemos ver la diferencia

de tamaos en algunos
cultivos

CULTIVO POR ESTRA CRUZADA

Ilustracin 2Resultados observados
DISCUSIN
Para nuestra prctica se utiliz el agar
nutritivo, el cual muestra en algunas
literaturas, que de acuerdo al agar el olor
de la bacteria puede variar, inclusive se
dice que puede variar el color del agar de
acuerdo al agar. Las caractersticas de las
bacterias solan ser significativas, las
cuales ayudaban al mtodo de
identificacin, por ejemplo una de las
muestras caractersticas de las bacterias,
era su forma, su olor, su coloracin, los
bordes y tamao. En el caso de
Staphylococus Aereus, se mostraron
pequeas colonias de color blanco, las
cuales se muestran como esa
caracterstica peculiar de tal bacteria. Se
obtuvo un resultado adecuado ya que se
desarroll la prctica con extrema
asepsia, ya que al momento de inocular y
estriar dentro de la caja Petri, siempre
estuvo el mechero en el margen
adecuado, para mantener nuestra rea de
trabajo
estril.
Todos
cultivos
desarrollaron
apropiadamente
las
colonias, de la cepa inoculada del agar, se
utiliz el mtodo apropiado para el
desarrollo de estas, en el caso del medio
lquido, se utilizaron las mismas medidas

de asepsia, de mantener la asa dentro de

los mrgenes de esterilizacin, para que al
igual que el agar nutritivo, se siguiera la
metodologa apropiada, para no alterar la
prctica, en algunos casos cuando no se
inocula adecuadamente, es muy difcil
diferenciar las bacterias, ya que todas
echas se pueden desarrollar en el agar
nutritivo,
se
utiliz
la
asa
apropiadamente, se inocularon las
bacterias en la caja Petri por 24 horas,
para descubrir sus caractersticas
diferenciales de cada colonia.
CONCLUSIN
Se concluye con un comentario acerca de
la importancia de la realizacin de
aislamientos de diversas sepas para su
estudio y control con fines clnicos y de
investigacin.
BIBLIOGRAFA
1- Microbiologa en ciencias de la salud:
conceptos y aplicaciones; De la rosa
M, Prieto J, Navarro J; 3 Edicin;
Editorial Elsevier; 2011;
2- Introduccin a la microbiologa;
Tortora G, Funke C, Case L; 9Edicin;
Editorial medica Panamericana; 2007