Biodiversity, Bioprospecting

and Development
Historia de
itacnico

la

produccin

de

cido

El cido itacnico se produjo histricamente

por diversos productos qumicos mtodos:
(1) Destilacin destructiva de cido ctrico, y
este fue el principal mtodo de producirlo
antes de la dcada de 1960; (2) calentar la
solucin aconitato calcio produce en el
refinado de azcar de caa proceso; (3) El
mtodo patentado que implica Montecatini
propargilo cloruro; (4) La oxidacin del xido
de mesitilo y la subsiguiente isomerizacin
del cido ctrico formado; y (5) La oxidacin
de isopreno. El anhdrido maleico tambin se
utiliza en la produccin de IA pero el proceso
an no ha alcanzado la industrializacin.
Ninguno de estos (u otro) procesos compiten
favorablemente
con
la
produccin
fermentativa proceso [22], y la IA se produce
ahora casi en su totalidad por fermentacin
de azcares por Aspergillus terreus [23].
El cido itacnico fue descubierto para ser un
metabolito biolgica cuando se encontr que
la producida por una cepa de Aspergillus que
era posteriormente llamado Aspergillus
itacnico [24] mientras Calam et al. [25]
descubri que A. terreus tambin se puede
acumular en IA an mayor cantidades que A.
itaconicus. La Investigacin de la Regin
Norte Laboratorio (NRRL) del Departamento
de Agricultura de los Estados Unidos (USDA)
proyect varias cepas de tipo salvaje y
identificado A. terreus NRRL 1960, ya que la
IA productores ms prolficos cepa [26] que
luego pas a convertirse en la cepa ms
publicada. Al mismo instituto,
Tambin se hicieron intentos preliminares
para desarrollar un proceso biotecnolgico
para la produccin de IA [27]. Ms tarde, los
procesos industriales optimizados eran
establecido proporcionando al mercado
limitado con IA.

Los principales avances en la produccin IA

se produjo dentro de la prxima dos decadas.
Basado en el nmero de publicaciones
cientficas grabados, se puede inferir que el
inters en la produccin IA luego disminuy.
Tras la publicacin de un informe publicado
por los Estados Unidos ' Departamento de
Energa (DoE) que enumera IA como uno de
los 12 que promete productos qumicos
formulario disponible biomasa [28], hubo un
renovado inters en su produccin (Figura 2).
Biosntesis de cido itacnico
El proceso de la biosntesis de cido
itacnico ha sido un tema de discurso
acadmico y est siendo recientemente
acordado. En 1931, Kinoshita [24] sugiere
que IA fue producida en A. terreus por el
descarboxilacin de aconitato. Esto fue
apoyado por los estudios de seguimiento de
Bentley y Thiesse [29-31] que descubri la
presencia de un aconitato cisdescarboxilasa
(GAD) de la enzima que se propuso catalizar
la produccin de IA. Dwiarti et al. [32] mostr
que el va a travs de la aconitasa y CAD era
ms probable (Figura 3) y aislado y
caracterizado la enzima CAD. En 2008, el
gen CAD fue identificado por Kanamasa y
compaeros de trabajo [33], quien lo utiliz
para transformar Saccharomyces cerevisiae,
que demuestra que el gen era de hecho
responsable de la produccin de la enzima
CAD, y que el CAD enzima cataliza la
produccin de IA. Li et al. [34] A.
transformado niger clulas con el gen CAD y
fueron capaces de iniciar la produccin de IA
en A. niger. La revisin por Klement y Buchs
[35] a fondo discute los detalles de la
biosntesis y regulacin IA en A. terreus.
La figura 3 muestra una va para
produccin de smiplified IA en A. terreus
El
cido
fermentativa

itacnico

Fermentacin sumergida

la

produccin

Las condiciones para la produccin de IA por

Aspergillus
terreus
por
fermentacin
sumergida (SF) son similares a las del cido
ctrico produccin de A. niger. Estas
condiciones incluyen la disponibilidad de una
exceso de fuente de carbono fcilmente
metabolizable, altos niveles de disolvi
oxgeno, basado amonio-limitacin de las
cantidades de iones metlicos y una fuente
de nitrgeno.
Microorganismos
Un nmero de microorganismos han sido
seleccionados y estudiado durante la
produccin de cido itacnico. Puesto que se
observ que A. terreus produce ms IA que
A. itacnico la bsqueda de la industrial
ideales organismo para la produccin de IA
ha continuado y varios intentos de tener ha
hecho de encontrar microorganismos con
caractersticas mejoradas incluyendo un
mayor rendimiento, una mayor tolerancia al
esfuerzo cortante, y / o tolerancia a la
concentracin ms alta del producto final.
Aspergillus terreus cepas
La cepa ms usada en la produccin de IA es
una cepa nativa conocido como A. terreus
NRRL 1960, que tambin se almacena en
varios colecciones de cultivos bajo los
nombres de CBS 116.46, DSM 826, IAM 2054,
IFO 6123, IMI 44243, QM 6856 y WB 1960
[36]. Esta cepa fue grabado para producir
hasta 91 g / L IA partir de la glucosa [37].
Aspergilo terreus IMI 282743 es otra cepa
nativa que dio 5,76 g / L IA de la palma de
efluentes molino de aceite [38] mientras que
las concentraciones de IA alrededor del 54
g / L en un medio que contiene 15% de
glucosa se ha informado de cepas egipcias
de tipo salvaje [39]. A pesar de estos
rendimientos registrados en la literatura, la
necesidad de que los rendimientos an ms
altos tiene cepa necesitado mejora como
resultado de lo cual la mayora de las cepas
de alto rendimiento disponibles en la
literatura hoy se modifican cepas.

Para mejorar la produccin de IA, tanto

mutagnesis tensin y gentica modificacin
han sido exploradas en cepas de A. terreus.
Yahiro et al. [40] sucesiva mutado un tipo
salvaje cepa de A. terreus IFO6365 y aislado
una cepa denominada A. terreus TN484-M1,
que produjo hasta a 82 g / L IA dentro de los
6 das de fermentacin. La transcripcin de
los de CAD1 (La decarboxilasa del cido cisacontico gnico codificado) en el mutante
cepa fue cinco veces ms fuerte que la de
IFO6365, que era credo para tener en
cuenta la mejora del rendimiento [33].
Dwiarti et al. [41] exploraron la produccin
de almidn de sag IA utilizando el mismo /
se obtuvo la cepa y alrededor de 48,2 g L IA.
Reddy y Singh [42] SKR10 mutado A. terreus,
una
cepa
nativa,
utilizando
diversos
productos qumicos o mutgenos ultravioleta
por separado y en combinacin. Obtuvieron
dos mejores mutantes: A. terreus N45 que
produjo 50 g / L IA a partir de almidn de
maz, y A. terreus UNCS1 que produjo 32 g /
L IA a partir de extractos de residuos de
frutas. En comparacin, la cepa parental slo
sintetiza 31 g / L y 20 g / L IA de los dos
sustratos, respectivamente.
Una cepa de tipo salvaje de A. terreus se
modific mediante la incorporacin de una
modificado gen pfkA de A. niger en su
genoma [43]. Esta modificado gen pfkA
codifica para una ms corta y ms activa 6fosfato-fructo-1fragmento
de
enzima
quinasa. Ellos obtuvieron transformantes que
acumulado una mayor cantidad de IA que la
cepa nativa, aunque despus de un ya
retardo de fase. La IA obtenido de la mejor
A729 transformante fue de 45,5 g / L, que
fue ms del doble de la alcanzada por el
padre cepa (21,35 g / L).
Otros microorganismos
Varios organismos poseen varias ventajas
inherentes que puedenimpartir en el proceso
de fermentacin IA. El organismo ideal ser
uno con rendimientos de hasta (o incluso
superar) A. terreus, es susceptible de
manipulacin gentica como E. coli, puede

ser fcilmente manejada como levaduras y

tendr mnimo la formacin de subproductos.
Estas cualidades deseadas pueden ser
impartido en un organismo husped a travs
de la manipulacin gentica y una pocos
intentos han dado resultados alentadores.
Aparte de A. terreus y A. itacnico, varios
otros hongos tienen tambin se han utilizado
para la produccin IA. Se detect en el caldo
de fermentacin de una cepa zeae Ustilago
mientras cribado varios Ustilago cepas para
la produccin de cido ustilagic [44]. Ms
tarde, el Iwata Corporation (Japn) registr
una concentracin de 53 g / L IA por U.
maydis utilizando glucosa como sustrato
[45,46]. Levinson et al. [47] obtuvieron 30 g /
L de IA de una cepa de la Pseudozyma
basidiomiceto antarctica en cultivos en
matraz oscilante. De manera similar, una
cepa de levadura identificado como Candida
se obtuvo despus de su examen y posterior
mutacin, que producido cerca de 53 g / L IA
en 5 das [48]. Tkacz y Lange [49]
propusieron una estrategia de introduccin
de la cisaconitate gen descarboxilasa en una
cepa por ejemplo, la produccin de cido
ctrico A. niger para la produccin IA. Esto fue
investigado por Li et al. [34,50] que
desarroll con xito transformantes de A.
niger y optimizado condiciones del medio,
dando lugar a 0,13 g / L IA produccin. Del
mismo modo, una aumento en IA produce
hasta un factor de 14-24 se obtuvo por la
orientacin las enzimas clave en la sntesis
de IA, aconitasa y CAD, a la derecha
compartimentos celulares en A. niger [51].
De manera similar Escherichia coli podran
ser modificados genticamente para la
sntesis de IA [52].

Carbon Fuente / sustrato

Azcares / Almidn

Aunque A. terreus crece bien en la mayora

de mono- y disacridos, se puede convertir
slo unos pocos de ellos en IA [53]. La
glucosa
es
un
fcilmente
sustrato
metabolizable por A. terreus y es el ms
ampliamente utilizado en IA la produccin de
[42,44,46]. La sacarosa es tambin un
sustrato comnmente utilizado.
Arabinosa, xilosa y la lactosa tambin se han
probado para la produccin IA [54,55], pero
los rendimientos fueron bajos (18% a partir
de arabinosa, 31% a partir de xilosa y menos
de 1% de lactosa). Los almidones de sag,
sorgo, dulce, patata, trigo, patata, yuca y se
han utilizado con xito para producir IA con
diferentes grados de xito y estos resultados
son resume en la Tabla 1. Estos almidones
sin embargo tienen usos alimenticios, as su
uso en la produccin de IA puede ser
considerado estar en conflicto con los
alimentos aplicaciones.
Agro-Desechos y cido orgnico
Con el precio actual de la glucosa que van
desde $ 0.35- $ 0.60 / kg y sacarosa a partir
de 0,45 $ 0,72 $ / kg, el uso de estos
azcares como sustratos para Produccin IA
contribuye significativamente los costes de
produccin. El uso de sustratos ms baratos,
como
los
agro-residuos,
podra
potencialmente llevar reducir el costo de
produccin de IA. La Tabla 1 presenta
algunos ejemplos de IA formacin utilizando
los flujos de residuos agrcolas, como el
pastel de semillas de jatropha, melaza y el
jarabe
de
maz.
Agro-residuos
son
generalmente pre-tratadas por uno o ms de
una variedad de mtodos dilucidado en
diversos informes [18,56,57].
Los principales desafos que plantea la
utilizacin de estos sustratos complejos son:
(1) Su composicin muy variable a travs de
sustratos e inclusodentro de diferentes lotes
del mismo sustrato. (2) Los rendimientos de
sustratos de crudo son generalmente ms
bajos que los de los azcares. (3) La
presencia
de
productos
qumicos

potencialmente dainos en el sustrato que se

producen naturalmente, o se forman durante
los procesos de pre-tratamiento puede
afectar a la el crecimiento y la salida del
organismo de fermentacin, una mayor
disminucin rendimientos. (4) Adems, las
impurezas en el producto final ms
aumentos costar en forma de requisitos de
purificacin caros.
Curiosamente, cido ctrico tambin se ha
utilizado como precursor en IA biosntesis.
Con el precio del cido ctrico siendo
significativamente menor que la de IA, este
mtodo puede resultar econmica [58].
Minerales y nutrientes
Al igual que muchos otros tipos de
fermentacin de hongos, IA fermentacin es
sensible a las concentraciones de metales
traza y las fuentes de nitrgeno. Itacnico
rendimiento
de
cido
se
mejora
significativamente por la presencia de
nitrgeno y trazas de Zn2 + y Fe2 + iones
[26] mientras iones fosfato debe limitarse
una vez el crecimiento del micelio se
establece para evitar carbono desviacin
hacia an ms la produccin de micelios. La
presencia y cantidades de estos iones en
sustratos complejos son por lo general fuera
del ptimo y puede influir negativamente en
los rendimientos.
Fermentacin Tiempo y temperatura
Una
amplia
gama
de
tiempos
de
fermentacin han sido estudiados por IA
fermentacin que van de dos a 14 das
[58,67]. La ptima sin embargo se ha
reportado el tiempo de produccin a ser de
siete das por muchos autores [70]. Las
temperaturas reportados para la produccin
de IA tambin varan, pero se mantiene de
forma ptima en torno a 37 C [22]. Intentos
exitosos tienen ha hecho de plantear esta
ptima y un aumento de cinco veces en la IA
Se observaron rendimientos de una cepa
parental en una cepa mutante a 40 C [71].

Oxgeno Disuelto / aireacin

La fermentacin de cido itacnico es
estrictamente aerbico. Los efectos de
oxgeno disuelto (DO) y la velocidad de
agitacin se evaluaron por Park et al. [72]. Se
observ que a pesar de que el rendimiento
total aument con DO, el rendimiento por
unidad de glucosa consumida fue mayor
cuando la DO era aproximadamente el 20%
del punto de saturacin a una velocidad del
impulsor de 0,94 m / s (Equivalente a una
velocidad de agitacin de 320 rpm). Rychtera
y Wase [73] encontr que la tasa de
aireacin ptimo fue a una velocidad de rotor
de 0,71 m / s, mientras que Riscaldati et al.
[74] inform de que la produccin aument
IA con el aumento de la tasa de hasta
agitacin a 400 rpm (una velocidad del
impulsor de 1,57 m / s).
Incluso un cese temporal de aireacin tal
como durante el manual proceso de toma de
muestras en la fermentacin de frasco de
agitacin puede daar irreversiblemente los
micelios
y
efectivamente
detener
la
fermentacin [75]. Lin et al. [76] informado
de la integracin de gen de la hemoglobina
Vitreoscilla (VGB), que reducido el impacto
de dicha interrupcin breve en la aireacin
durante fermentacin con cierto xito. La
interrupcin result en una disminucin de
slo 39,2% en la tasa de produccin IA del
transformante
PAN-VGB-2
en
comparacin
con
una
disminucin del 51,2% en A. terreus M8, el
nativo cepa. Esto puede ser atribuido al
aumento de ms de 8 veces en oxgeno
absorcin en la cepa de hemoglobina
transformada.
Las tasas de aireacin ptimas para la
produccin IA reportados en la literatura
variar ampliamente. Hay as una necesidad
de determinar los aerationneeds apropiadas
para sistemas de fermentacin especficos
con el fin de evitar ya sea pura la tensin en
los micelios debidas a las velocidades del
impulsor excesivas o mala velocidad de

transferencia
de
oxgeno
a
bajas
velocidades. Nuevo incremento en las tasas
de aireacin dara lugar a un crecimiento
celular mejorada, pero esto puede no
justificar lacosto adicional incurrido por el
aumento de la tasa de aireacin.
Inmovilizacin
La biosntesis de IA usando microorganismos
inmovilizados tambin han sido investigado.
La primera matriz utilizada en la produccin
de IA era gel de poliacrilamida [77]. Desde
entonces, varios otros matrices han sido
utilizado incluyendo un sistema de reactor
disco poroso, el material a base de slice,
alginato, cubos de poliuretano, y la red
fibrosa estructural de madera del tronco
papaya [27,65,67]. Vassilev et al. [61]
inform de que la tamao de poro del
soporte de espuma de poliuretano no afect
a la carga tasa de A. terreus y obtenido un
rendimiento promedio de 15,1 g / L IA ms
de cinco ciclos con el transportista.
Fermentacin en estado slido
El cido itacnico se ha producido con xito
utilizando estado slido fermentacin (SSF).
Los desechos agrcolas son los mejores
sustratos para SSF y se han utilizado para
producir con xito una serie de importantes
metabolitos. La agro-residuos puede servir
nicamente como soporte mecnico o ancla
para el organismo en cuyo caso puede ser
complementado con nutrientes adicionales, o
puede contener la mayor parte de los
nutrientes requeridos para la fermentacin.
Vassilev et al. [60] produce 44 g / L de IA
residuos de olivo secas y pressmud
remolacha utilizando Aspergillus terreus
CECT 20.365, mientras que un rendimiento
de 55 g / L IA se obtuvo en un SSF patentado
mtodo que utiliza un mutante, A. terreus
M8, en las soluciones de azcar o almidn
adsorbido hidrolizado de caa de azcar
pressmud [66].
La humedad es un factor muy importante en
SSF con un nivel ptimo de 65% -70%

report para la produccin de IA a partir de

desechos agrcolas [60].
Los niveles de humedad por debajo de este
ptimos resultados en la baja solubilidad de
los nutrientes y la disminucin de la
inflamacin de la remolacha pressmud utiliza
como sustrato mientras que en niveles
superiores a 70% el equilibrio del aire:
slidos: agua fue interrumpido, lo que afecta
negativamente a la porosidad y de partculas
la agregacin del sustrato.
Dado que las temperaturas ptimas para la
fermentacin IA son ligeramente mayor que
la ambiente, hay una necesidad de calentar
el sustrato a la cama temperatura ptima
para asegurar la germinacin de esporas y el
producto formacin. La aireacin servir el
doble propsito de proporcionar oxgeno para
las clulas y recircular el calor para evitar
puntos calientes.
La opinin generalizada es que las SAI puede
proporcionar
rendimientos
mejores
o
similares obtenido en la fermentacin
sumergida en muchas produccin bioqumica
procesos. En teora, como un proceso
estrictamente aerbico que se produce en
temperaturas elevadas y utiliza un hongo
filamentoso, la IA proceso de produccin
parece ser idealmente adecuados para las
condiciones de la SSF.
Recientemente, existe un creciente inters
por la SSF, especialmente mediante la
agricultura perder como sustratos. Sin
embargo, las condiciones de fermentacin
todava necesitan una mayor optimizacin.

Procesamiento
aguas
abajo
recuperacin del producto

la

El cido itacnico es relativamente fcil de

recuperar porque cristaliza fcilmente. Tras
el agotamiento de los azcares fermentables,
la fermentacin licor se filtra para eliminar
los slidos suspendidos y micelios. El licor es
despus se concentr por evaporacin a

aproximadamente un quinto de su volumen

original y luego cristalizado. Estos cristales
se lavan a continuacin y se recristalizaron
para eliminar las impurezas [14]. El cido
itacnico tambin se puede precipitar como
sales de metales tales como calcio o plomo
[78]. En comparacin con el calcio la sal, la
precipitacin de IA como una sal de plomo
tiene la ventaja de no que requiere un preconcentracin del caldo, ya que es casi
insoluble en agua. El plomo es preferible a la
precipitacin de sales de calcio debido a que
el plomo sal de IA es casi insoluble en agua
que es ms soluble que para ejemplo citrato
de calcio, y por lo tanto no se puede utilizar
tan fcilmente como la este ltimo en el
proceso
de
purificacin
de
IA
por
precipitacin. En producto situ eliminacin
tiene un gran potencial, especialmente en las
fermentaciones de alto rendimiento para
prevenir la inhibicin del producto final.
Aunque la recuperacin de cido itacnico de
soluciones modelo utilizando electrodilisis
ha sido probado [79], el separacin de
membrana como medio de recuperacin IA
est en su infancia y informacin limitada
est disponible.
Perspectivas de futuro
El cido itacnico ha ido ganando inters en
los ltimos aos de su aplicacin potencial
como una importante plataforma de qumica
de base biolgica.
El mayor potencial de mercado para el cido
itacnico est en nuevas aplicaciones como
resinas
de
polister,
detergentes
constructores y para la produccin de
insaturados metacrilato de metilo. La
aplicacin proyectada ms grande para
itacnico cido es metacrilato de metilo, lo
que puede explicar 52,2% de la mercado
mundial de cido itacnico en 2020 [13].
Resinas
de
polister
insaturadas
y
mejoradores de la detergencia puede dar
cuenta de un 18,8% y el 10,8% de mundial
mercado del cido itacnico en 2020. El
principal factor que limita a esto es la
relativamente ms alto precio de IA en

comparacin con las posibles alternativas

tales como cianhidrina de acetona. El mismo
escenario se aplica con el potencial para la
sustitucin de anhdrido maleico con IA en la
produccin de resinas de polister insaturado
(UPR) con cido fumrico como competir
monmero. Voll y Marquardt [19] tambin
produjo 3- metiltetrahidrofurano de IA, pero
concluy que el proceso de requiri una
fuente barata de IA sea factible.
Sin embargo Weastra et al. en el mismo
informe [13] postulan que la No se espera
que la capacidad de produccin de cido
itacnico a crecer dramticamente, pero en
el caso de aumento de la demanda, la
produccin de cido ctrico se puede cambiar
fcilmente a itacnico cido. El informe, sin
embargo aade la advertencia de que esto
podra cambiar si Lucite International, que ya
posee patentes sobre la produccin de
metacrilato de metilo de IA, se inicia la
produccin comercial en 2016, ya que han
anunciado en asociacin con Mitsubishi
Rayon. Su meta para producir el 50% de
metacrilato de metilo (aproximadamente
400.000 toneladas) puede resultar en
aumento significativo de la demanda de
cido itacnico. Itaconix Corporacin un
Empresa estadounidense que es lder
mundial en la produccin de polmeros IA
fabrica polmeros patentadas de quelacin y
constructores como sustitutos de los
productos qumicos a base de petrodlares
en los detergentes y agua tratamientos.
Conclusin
Actualmente cido itacnico se produce
predominantemente
por
fermentaciones
utilizando varias cepas de Aspergillus
terreus. El cido itacnico es una sustancia
qumica verstil, que se utiliza en la
produccin de polmeros con muchas
caractersticas deseables. A pesar de que
puede potencialmente sustituir los productos
qumicos derivados del petrleo como
monmero
en
diversos
procesos
de
polimerizacin, la aplicacin IA se ve
obstaculizada por su costo de produccin de

alta relativa. La forma ms prometedora para

reducir la costo de produccin IA es reducir
el coste del sustrato / prima mediante la
utilizacin
de
materiales
novedosos,
sustratos
baratos,
no
alimentarios.
Adicionalmente, fermentacin en estado
slido tambin puede ser explotada en la
reduccin de la costo de produccin.
Aumentar el rendimiento de conversin de
sustrato a IA mediante la mejora de la
eficiencia de las vas de biosntesis Ia
tambin reducir el costo.
La manipulacin gentica de E. coli y el
productor de cido ctrico prolfico Aspergillus

niger puede resultar muy valiosa en este

sentido.
Adems, la exploracin de la recuperacin
del producto ms eficientemtodos ayudarn
a minimizar las prdidas de producto y por lo
tanto reducir el costo de produccin.
En conclusin, si los planes generalizadas
para minimizar el impacto ambiental
causado por el uso de productos a base de
petroqumicos por reemplazndolos con
drop-ins o sustituciones de base biolgica
convertirse en un realidad, la produccin de
cido itacnico a continuacin, mediante
fermentacin microbiana voluntad testigo de
los rpidos avances.