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INTEGRANTES
BIOTECNOLOGIA
1
INDICE
ANTECDENTES…………………………………………………………………………....................4
OBJETIVOS ........................................................................................................................... 5
HIPOTESIS ............................................................................................................................. 6
ALCANCE .............................................................................................................................. 6
MUESTREO ................................................................................................................... 9
TECNICA DE AISLAMIENTO PARA
LACTOCOCCUS…………………………………………………………………….9
REVIVIFICACIÓN .......................................................................................................................... 9
AISLAMIENTO .............................................................................................................................. 9
SELECCIÓN ................................................................................................................................. 9
ADAPTACIÓN ............................................................................................................................. 10
PRESERVACIÓN ........................................................................................................................ 10
FACTIBILIDAD ......................................................................................................................11
BIBLIOGRAFIA .....................................................................................................................12
CRONOGRAMA ....................................................................................................................13
2
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
La industria láctea en el mundo genera 420 millones de leche en toneladas por año de las
cuales 145 mil millones de ton/año corresponden a suero lácteo.
La alta capacidad contaminante del suero de leche por su contenido en proteínas y lactosa
(materia orgánica) permite la reproducción de microorganismos produciendo cambios en el
DBO que varía entre 30,000 a 50,000 mg/l, además de la cantidad de ácido láctico presente
va alterar los procesos biológicos que se llevan a cabo en las plantas de tratamiento
aumentando los costos.
Según estudios realizados en la FAO han demostrado que en una fábrica de queso que
procesa 280.000 litros de leche cruda por día, por ejemplo, produce alrededor de 250.000
litros de suero líquido y puede contaminar tanta agua como una ciudad de 50.000
habitantes.
Se describieron por primera vez bacteriocinas como las colicinas producidas por Escherichia
coli (Gratia, 1925), Rogers (1928) identificó una sustancia de naturaleza peptídica (nisina),
producida por Lactococcus lactis subsp. lactis que inhibía a microorganismos Gram
positivos, incluyendo patógenos y alterantes de alimentos.
Se piensa que el 99% de las bacterias pueden producir cuando menos una bacteriocina y la
unica razón de que no se hayan aislado es debido a que han sido muy poco estudiadas
(Gordon y O’Brien, 2006).
De Vuyst y Vandame (1994) citan diferentes generos de microorganismos productores de
bacteriocinas dentro de los más empledos, Lactococcus lactis subsp lactis, Pediococcus
acidilactici, Lactobacillus plantarum, Leuconostoc mesenteroides, Carnobacterium divergens
Lactobacillus helveticus, en función de sus características bioquímicas y modo de acción.
La nisina es la única bacteriocina autorizada como aditivo alimentario especialmente por su
actividad frente a los clostridios, reconocida por la FDA.
En países desarrollados como Estados Unidos, México, China se está prestando especial
interés el aprovechamiento de este residuo, en el Ecuador no se conoce datos de
aprovechamiento de suero por lo cual se toma como referencia Alpina-Ecuador que realiza
tratamientos de sus líquidos residuales para minimizar la carga orgánica, indicando que un
kilo gramo de leche puede obtener 100 gramos de queso y el 90% restante corresponde a
suero, contaminando, 2000 veces más que el agua residual doméstica, haciéndola más
difícil y costosa para tratar, de esta manera se aprovecha una cantidad de 33.600 toneladas
evitando tratar más de 1.507 toneladas de DQO, generando alimentos de valor agregado
como lactosa en polvo.
IMPORTANCIA Y JUSTIFICACION
OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL.
OBJETIVOS ESPECÍFICOS
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HIPOTESIS
HIPOTESIS NULA:
HIPOTESIS ALTERNA:
Se obtuvo microorganismos (lactococcus ) a partir de lactosuero para la producción de
nisina.
ALCANCE
MARCO TEORICO
s de Compuesto
Oxido- s Se da un proceso aerotolerantes ya que
Reducción Orgánicos: de carecen de catalasa,
a partir de Lactosa FERMENTACION poseen peroxidasas y
compuest en que la superóxido dismutasas que
os Oxidación es destruyen el H O y el O -
2 2 2
orgánicos. parcial de los que se forman en
átomos de carbono condiciones de aerobiosis.
presentes en la Produce un grupo de
lactosa. antibióticos polipeptídicos
llamados nisinas.
6
FORMACION DE LA NISINA
BACTERIOCINA ESPECTRO DE ACCION (A PARTIR DEL METABOLISMO DEL
LACTOCOCCUS)
Gráfico.1
7
PRODUCCION DE NISINA
Gráfico.2
En la gráfica 2 existe una comparación entre el medio M17 y lactosuero donde sigue la
misma tendencia en ambos medios. Sin embargo, el pH disminuyó hasta alcanzar valores
de 4.2 en el cultivo crecido en suero de quesos mientras que en M17 se estabilizó en 5.5.
8
MARCO METODOLOGICO
MUESTREO
Revivificación:
Se toman 10ml de suero lácteo con 90 ml de caldo M17se debe incubar en condiciones de
anaerobiosis a 37ºC por 72horas en una estufa, para adaptar a los microorganismos que se
encuentran dañados o debilitados.
Aislamiento:
Realizar diluciones decimales desde 10-1 hasta 10-4 .Tomar el tubo de la dilución menos
concentrada y sembrar por estriado en superficie con el medio selectivo y diferencial M17
agar por duplicado, las cajas se incubaran a 37ºC por 48 horas, manteniendo las
condiciones de anaerobiosis.
Realizar una resiembra con el mismo medio selectivo y diferencial M17 agar por duplicado
para obtener cepas puras.
Para comprobar la pureza del cultivo, las colonias deben aislarse nuevamente en un medio
no selectivo como agar nutritivo a una temperatura de 37ºC por un día con el método de
estrías, ya que en el medio selectivo M17 puede ocurrir que una colonia característica del
microorganismo que estamos buscando pueda contener como contaminantes en muy bajo
número otros microorganismos que no hayan crecido en este medio por estar inhibidos, pero
al subcultivarlos en condiciones favorables puedan crecer.
Selección:
Se debe tomar las colonias que muestran distinta morfología en función tamaño, forma,
borde, elevación, transparencia, color y velocidad de crecimiento.
9
Adaptación:
Preservación:
Las cepas de Lactococcus aisladas se transfieren a caldo BHI con glicerol (40% v/v) y se
congelaron a -80 ºC hasta su posterior análisis.
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FACTIBILIDAD
CANTIDAD
CANTIDAD
DE PRECIO
MEDIOS Y NECESARIA
TECNICA DISPONIBILIDAD REFERENCIA
REACTIVOS
$
ml g ml g $/500g
necesaria
M 17 BROTH
950 48,25 110 11.38 68 1,55
CALDO si
Suero de
Quesería con
si 1000 15 10 0,15 35 0,01
caseína
hidrolizada
GLICEROL si 500 100 0.9 0,18 85 3,06
LACTOCOCCUS BHI si 1000 40 3 0,2 45 0,02
LACTIS
M 17AGAR si 950 48,25 80 4,06 68 0,55
AGAR
1000 50 40 2 55 0,22
NUTRITIVO si
MUELLER-
1000 38 250 9,5 40 0,76
HINTON si
CAJAS PETRI si ― ― ― ― ― 3,19
Antibiograma si ― ― ― ― ― 5
TOTAL 14,36
11
BIBLIOGRAFIA:
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CRONOGRAMA
2 Noviembre 2009
29 Noviembre 2009
28 Noviembre 2009
30 Noviembre 2009
1 Diciembre 2009
4 Diciembre 2009
7 Diciembre 2009
9 Diciembre 2009
3 Diciembre 2009
8 Diciembre 2009
9 Diciembre 2009
11 Diciembre 2009
12 Diciembre 2009
ACTIVIDADES
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