Enzimas 1192503537544742 2

ENZIMAS
Prof.: Angel Roco Videla
Introduccin
Las enzimas son catalizadores biolgicos, la cuales
pueden no slo aumentar la velocidad en factores que van
desde 106 a 1012 , sino que son altamente especifica.
Actan slo en determinadas molculas, llamadas sustrato
(esto es, reactivos). Se ha calculado que una clula
promedio puede contener unas 3000 enzimas diferentes,
cada una de las cuales cataliza una reaccin especfica.
Las enzimas no operan independientemente, existe un

control interno que activa ciertas enzimas cuando se
requieren, y las desactiva cuando se ha formado suficiente
producto.
Una teora sobre la especificidad de las enzimas es la
llamada teora de la llave cerradura. Una enzima es
generalmente una molcula grande de protena que
contiene uno o ms sitios activos donde se lleva a cabo
las reacciones con los sustratos, el resto de la molcula
mantiene la integridad tridimensional de la red.
PRODUCTOS
ENZIMA
MODELO LLAVE CERRADURA
Sustrato
Enzima
Productos
Complejo
enzimasustrato
Enzima
De acuerdo con la Hiptesis el sitio activo tiene una

estructura rgida , similar a una cerradura. Una molcula
de sustrato tiene la estructura complementaria que causa
que embonen, y funciona como una llave.
Aunque parece perfecta la hiptesis existen varias
discrepancias, por ejemplo se sabe que sustratos de
diferentes tamaos embonan con el mismo tipo de
enzima. Hoy se sabe que el sitio activo de una enzima
tiene gran flexibilidad , durante una reaccin cambia para
acomodarse a la molcula de sustrato.
Propiedades de las enzimas

Las enzimas son muy especficas para los reactantes o
sustratos, sobre los cuales actan. Una enzima puede
reaccionar con un grupo de sustancias de estructuras
estrechamente relacionadas, mientras que otra slo
puede actuar sobre un compuesto molecular nico.
Muchas enzimas presentan estereoespecificidad, lo cual
significa, que actan sobre un solo estereoismero del
sutrato.
Tal vez el aspecto general ms importante de la

especificidad de las enzimas es la especificidad de
reaccin, esto es, la falta de formacin de subproductos
de desecho. La especificidad de reaccin se refleja en los
rendimientos excepcionales de producto, los cuales son
prcticamente del 100%. La eficiencia de las enzimas no
solo ahorra energa para la clula viva, sino que tambin
evita la formacin de subproductos del metabolismo
potencialmente txicos.
Algunas enzimas funcionan como puntos de control en el

metabolismo el metabolismo puede ser controlado a travs
de:
* alteraciones en las concentraciones de enzimas
* Alteraciones en las concentraciones de sustratos y de
inhibidores de enzimas
* Con la modulacin de los niveles de actividad de algunas
enzimas.
Las enzimas ms comunes son protenas globulares y

poseen la capacidad para unirse especficamente a una o
varas molculas.
Las molculas de sustrato se unen, en una hendidura un poco
hidrofbica que se conoce como el sitio activo, el cual con
frecuencia est situado entre dos dominios o subunidades de
una protena o en una indentacin, algo parecido una bolsa
de un extremo de un barril.
Las enzimas que intervienen en la regulacin del metabolismo

son por lo general de mayor complejidad que las enzimas que no
son reguladoras.
Las enzimas son molculas oligomricas que tienen sitios de
unin diferentes para sustratos y para moduladores, (compuestos
que actan como seales reguladoras).
Clasificacin de las enzimas

La mayor parte de las enzimas tienen un nombre que se forma
adicionando el fijo "-asa" al nombre del sustrato sobre el cual
actan o a un trmino que describe las reacciones que catalizan.
Por ejemplo, la ureasa tiene la urea como sutrato. La

alcoholdeshidrogenasa cataliza la remocin de hidrgenos de
los alcoholes.
A pesar de ello, algunas enzimas, como tripsina o la

quimotripsina, an se reconocen por sus nombres histricos.
La Unin Internacional de Bioqumica asigna un nmero a cada
enzima y clasifica a las enzimas en seis grupos importantes de
acuerdo a la clase general de reacciones qumicas que catalizan:
1.- Las xidorreductasas catalizan reacciones de oxidacinreduccin. La mayor parte de estas enzimas se conocen como
deshidrogenasas, pero algunas de ellas reciben el nombre de
oxidasas, peroxidasa, oxigenasas, o reductasas.
Ejemplo
Enzima : Lactato deshidrogenasa
Descripcin de la reaccin :Oxidacin de alcohol secundario.
Lactato a piruvato ( una cetona)
Coenzima que
dinucletido)
participa:
NAD+
Nicotnamida
adenina
O
C
L-lactato
HO
NAD+
CH3
piruvato
C
O
+ NADH +
H+
CH3
2.- Las transferasas catalizan reacciones de transferencia de

grupos. Muchas de ellas requieren de la existencia de
coenzimas. Estas enzimas o sus coenzimas son sustituidas en
forma covalente por una porcin de la molcula del sustrato.
Ejemplo
Enzima :Alanina transaminasa ( Alanina aminotransferasa)
Descripcin de la reaccin :Transferencia de un grupo amino
Coenzima que participa: Fosfato de piridoxal
L-alanina
C
+
H3N
C O
-cetoglutarato
C O
CH2
CH2
CH3
C O
piruvato
C
O
C O
H3N
L-glutamato
CH
CH2
CH2
C O
CH3
3.- Las hidrolasas catalizan la hidrlisis. Son una clase

especial de transferasas, el agua les sirve como un
receptor del grupo transferido.
Ejemplo
Enzima :tripsina
Descripcin de la reaccin :Hidrlisis del enlaces peptdicos Lis-Y
o de Arg-Y donde Y es igual o diferente a Pro,
Coenzima que participa: Ninguna
NH3
Residuo de lisina dentro de una

cadena peptdica
CH2
CH2
CH2
CH2
NH
CH
Fragmento de
polipptido con
lisina C-terminal.
NH3
CH2
O
+
CH2
CH2
CH
R
CH
NH
H3N
CH2
H2O
O
NH
CH
C O
Fragmento de
polipptido nuevo
N-terminal
4.- Las liasas catalizan las reacciones de eliminacin no

hidroltica, no oxidante, o la lisis de un sustrato en reacciones
que generan un enlace doble. En la direccin inversa, una
liasa cataliza la adicin de un sutrato a un doble enlace de un
segundo sustrato. Una liasa que cataliza una reaccin de
adicin en las clulas se denomina con frecuencia sintasa
Ejemplo
Enzima :piruvato descarboxilasa
Descripcin de la reaccin :Descarboxilacin de piruvato
Coenzima que participa: Tiamina pirofosfato
piruvato
C
O
H+
CH3
HC
CO2
CH3
Acetaldehido
10
5.- Las isomerasas catalizan reacciones de

isomerizacin. Debido a que estas reacciones tienen
un solo sustrato y un producto, son por lo regular
reacciones enzimticas ms sencillas
Ejemplo
Enzima :Alanina racemasa
Descripcin de la reaccin :Interconversin de ismeros
alanina
de
Coenzima que participa: Fosfato de piridoxal
C O
+
H3N
C
CH3
L-Alanina
C O
H
NH3
CH3
D-Alanina
11
6.- Las ligasas catalizan la ligadura o unin de dos

sustratos en reacciones sintticas que requieren el ingreso
de la energa qumica potencial de un nuclesido
trifosfato, como el ATP. A las ligasas se les da el nombre
de sintetasas
Ejemplo
Enzima :Glutamina sintetasa
Descripcin de la reaccin :Sntesis de L-glutamina, dependiente de
ATP
Coenzima que participa: ATP
O
C
H3N C H
CH2
CH2
O C
ATP
NH4
O
C
H3N C H
CH2
ADP
Pi
CH2
O C
NH2
12
La ecuacin de velocidad enzimtica

Los datos cinticos reflejan las relaciones entre la cantidad de
producto P de la reaccin formada en la unidad de tiempo,
[P]/t, y las condiciones experimentales bajo las cuales la
reaccin tiene lugar.
La base de la mayor parte de las mediciones cinticas es la
observacin de que la rapidez o velocidad (v) de una reaccin
vara directamente con la concentracin de cada sustrato o de
cada catalizador. Esta afirmacin se escribe en una ecuacin
que se llama ecuacin de la velocidad.
Por ejemplo, la velocidad de ecuacin para la conversin

no enzimtica de SP una reaccin de isomerizacin se
escribe como:
[P]/t = v = k [S]
El smbolo k es la constante de velocidad. Las constantes
de velocidad indican la rapidez o la eficiencia de una
reaccin. Una grfica de velocidad en comparacin a [S]
para esta reaccin podra ser una lnea recta que aumenta
linealmente con la concentracin del sustrato.
13
El orden cintico general de una reaccin es la suma de

los exponentes en la ecuacin de velocidad y nos dice
cuantas molculas estn reaccionando en la etapa ms
lenta de la reaccin.
Un reaccin de primer orden es aquella en la cual un
solo componente est reaccionando. La constante de
velocidad para una reaccin de primer orden se
expresa en unidades de la recproca del tiempo ( s-1)
Reaccin de primer orden
[E]
14
Para una reaccin complicada como la reaccin

de S1 + S2 P1 + P2
La velocidad se determina por las concentraciones de
ambos sustratos.Si ambos sustratos estn a concentraciones similares la
ecuacin de velocidad es :
v = k [S1]1 [S2]1
Esta reaccin es de primer orden con respecto a cada
reactante y de segundo orden general.-
Las reacciones de segundo orden tambin se denomina

bimolecular porque dos molculas reaccionan formando
los productos. Las constantes de velocidad para las
reacciones de orden tienen las unidades M-1 s-1. Con
frecuencia se estudian reacciones con ms de dos
reactantes, pero debido a que los clculos se pueden
volver muy complejos, se escogen condiciones de modo
que las reacciones se efecten en varias etapas, y que
cada etapa sea de primer o de segundo orden.-
15
Si la concentracin de uno de los reactantes es tan alta

que permanece prcticamente constante durante el curso
de la reaccin se dice que la reaccin es de pseudo
primer orden.
v= k [S1]1 [S2]o = k [S1]1
Las condiciones de psuedo primer-orden se utilizan en

anlisis que se llaman ensayos enzimticos que determinan
las concentraciones de las enzimas.
En los ensayos enzimticos, todos los reactantes, con

excepcin de la enzima, existen en exceso para asegurar
que las condiciones de la reaccin sean de pseudo - primer
orden . El ensayo se lleva a cabo a una temperatura
constante lo suficiente elevada para producir una actividad
alta, pero no para desnaturalizar a la enzima.
Baja estas condiciones, hay suficientes molculas de
sustrato para convertir todas las molculas de E en ES (
saturacin).
16
En los ensayos, por lo regular las enzimas estn en

concentraciones muy bajas en comparacin con los
sustratos. Sin embargo, en el interior de las clulas, no
estn necesariamente saturadas. La concentracin de
una enzima en una muestra de prueba se puede
determinar con facilidad por comparacin de su
actividad con una curva de referencia
Los momentos iniciales de una reaccin bimolecular se

puede escribir como:
k1
E+S
kcat
ES
E+P
k-1
La velocidad medida durante este corto periodo se
denomina velocidad inicial vo
17
Las velocidades iniciales se obtienen a partir de curvas de progreso,

grficas de la concentracin del producto contra el tiempo. La velocidad
es la tangente o pendiente [P]/ t en el origen de una curva de
progreso.
2E
[P]
E
Tiempo
La ecuacin de Michaelis-Menten
Cuando se comenzaron a analizar las variaciones en las
concentraciones del sustrato con el fin de derivar las
ecuaciones de velocidad de los procesos enzimticos, se
hicieron dos observaciones importantes.
1.- a concentraciones elevadas de sustrato, E esta
saturada con S, y la velocidad de reaccin es
independiente de la concentracin de sustrato. El valor de
vo para una solucin de E que est saturada con S se
llama velocidad mxima vmx.
18
2.- A concentraciones bajas de sustrato , la reaccin es de

primer orden con respecto al sustrato (segundo orden
general : de primer orden con respecto a S y de primer
orden con respecto a E). La forma de la curva de vo en
comparacin a [S] es una hiprbola rectangular.
vmx
vo
Orden cero con respecto a S
Primer orden con respecto a S
0
[S]
La ecuacin de velocidad para una hiprbola de este tipo es

y=
ax
b+x
Donde a es la asntota de la curva ( el valor de y a un valor

infinito de x) y b es el punto sobre el eje de la x que
corresponde a un valor de y al infinito /2. Podemos obtener la
ecuacin de velocidad para la reaccin bimolecular:
E+S
ES
E+P
19
Por sustitucin de cuatro trminos de la cintica enzimtica

en la ecuacin general para una hiprbola rectangular tenemos
y = vo , x = [S], a = vmx. El cuarto termino b en la ecuacin
general es la constante de Michaelis Km definida como la
concentracin de sustrato cuando vo es igual a la mitad vmx.
vmx
vo = vmx
2
[S]
La ecuacin completa de velocidad:

y=
vmx[S]
km + [S]
Esta se denomina ecuacin de Michaelis-Menten.
20
Constante de velocidad y la eficiencia cataltica

Las constantes cinticas de las reacciones enzimticas Km
y kcat se pueden utilizar para medir la eficiencia cataltica
de las enzimas.Km es una medida de la estabilidad del complejo ES
kcat es la constante de velocidad de primer orden para la
conversin de ES a E + P. Es una medida de la actividad
cataltica de una enzima y nos dice cuantas reacciones
por segundo puede catalizar una molcula de enzima.
La relacin kcat / Km es una constante de velocidad de

segundo orden aparente para la formacin de E + P a
partir de E + S cuando la reaccin general est limitada
por el encuentro de S con E. Esta constante se aproxima a
108 a 109 M-1s-1. , que es la mayor velocidad a la cual dos
solutos sin carga se pueden aproximar entre si por
difusin.
Los valores absolutos de estas constantes indican la
potencia de cada enzima como catalizador.
21
vmx
Regin A
vo
vo = kcat [E]1 [S]0
[S]
La constante cataltica , es la constante
de velocidad de primer orden para la
conversin del complejo ES a E+P . Se
mide con mayor facilidad cuando la
enzima esta saturada de sustrato.
Regin B
vo = kcat/km [E]1 [S]1
La relacin kcat/km es la constante de
velocidad de segundo orden a
concentraciones muy bajas de sustrato
Conversin de la ecuacin de Michaelis-Menten

Par hacer ms fcil el estudio de la cintica de una reaccin
enzimtica es posible transformar la ecuacin de una
hiprbola a una ecuacin lineal. La transformacin ms
utilizada es la grfica de Lineweaver-Burk o de reciprocos
dobles.
1
vo
Km
Vmx
1
[S]
1
Vmx
22
Se usan los valores de 1/vo contra 1/[S] para la grfica. El

valor absoluto de 1/km se obtiene de la intercepcin de la
lnea en el eje de la x y el valor de 1/Vmx se obtiene del
intercepto en el eje de las y.
Los valores de kcat se pueden obtener a partir de
mediciones de Vmx slo cuando se conoce la
concentracin absoluta de la enzima. Los valores de km se
pueden determinar an cuando las enzimas no se hayan
purificado, mientras una enzima en una preparacin
impura pueda catalizar la reaccin que se observa.
1/vo
ECUACIN DE
LINEWEAVER-BURK
1/vmx
-1/km
1/[S]
23
FACTORES QUE AFECTAN

LA ACTIVIDAD ENZIMTICA
Y EL EFECTO DE LOS
INHIBIDORES ENZIMTICOS
Prof: Angel Roco Videla
Efecto del pH sobre la actividad enzimtica
Aunque los perfiles de las curvas de actividad en funcin del pH de

muchas
enzimas
son
acampanadas,
pueden
variar
considerablemente de forma.
24
La relacin entre pH y la actividad de cualquier enzima

depende del comportamiento cido-base de la enzima y del
sustrato.
La forma de la curva de actividad-pH vara con la
concentracin del sustrato, ya que el valor de KM de muchas
enzimas vara con el pH.
La relacin pH actividad de una enzima puede constituir un
factor en el control intracelular de su actividad, esto debido a
que el pH optimo de una enzima no es necesariamente
idntico al pH de su entorno intracelular normal.
Efecto de la temperatura sobre la actividad enzimtica

Aunque las reacciones catalizadas por las enzimas parecen,
con frecuencia tener una temperatura optima, el pick que se
observa al representar la actividad versus temperatura se
produce porque las enzimas se desnaturalizan por la accin
del calor y se inactivan cuando la temperatura sobrepasa
cierto punto.
La aparente temperatura optima es el resultado de dos
procesos
1.- el incremento habitual de la velocidad de reaccin con la
temperatura.
2.- el incremento en la velocidad de desnaturalizacin trmica
de la enzima al sobrepasar una temperatura critica.
25
La
mayora
de
las
enzimas se inactivan a
temperaturas entre los 55
y 60C. Aunque existen
enzimas
capaces
de
seguir activas hasta los
85C como las enzimas de
las bacterias termoflicas.
Algunas enzimas, como

la ribonucleasa, pierden
actividad por calefaccin,
pero la recuperan por
enfriamiento,
lo
cual
indica que su cadena
polipeptdica desplegada
vuelve rpidamente a
adoptar su conformacin
nativa.
26
Inhibicin de las enzimas

Inhibicin competitiva
La caracterstica de la inhibicin competitiva es que el
inhibidor puede combinarse con la enzima libre de tal modo
que compite con el sustrato normal para unirse al centro
activo. Un inhibidor competitivo reacciona reversiblemente con
la enzima para formar un complejo enzima-inhibidor (EI)
anlogo al complejo enzima-sustrato:
E+I
EI
La molecula del inhibidor no resulta qumicamente alterada por la

enzima. Es posible definir entonces la constante de inhibicin como
Kj. Y esta sera comparable con Ks que es la constante de
disociacin del complejo enzimas sustrato.
La inhibicin competitiva se reconoce experimentalmente, debido a
que el porcentaje de inhibicin para una concentracin de inhibidor
constante disminuye al incrementar la concentracin del sustrato.
Kj = [E][I]
[EI]
27
Grficamente este tipo de

inhibicin se caracteriza
por
proporcionar
una
familia de lneas rectas
cuyo
punto
de
interseccin comn se
haya sobre el eje de 1/v.
La presencia de un
inhibidor
competitivo
incrementa KM aparente
de la enzima por el
sustrato, provocando que
se
necesite
concentraciones mayores
de sustrato para que se
alcance
la
velocidad
mxima.
Inhibicin acompetitiva
El inhibidor no se combina con la enzima liebre ni
afecta a su reaccin con el sustrato normal, sin
embargo se combina con el complejo ES para
formar un complejo inactivo ESI, el cual no
experimenta posteriores transformaciones.
ES + I
ESI
Kj =
[ES][I]
[ESI]
28
El grado de inhibicin
puede aumentar cuando la
concentracin de sustrato
se ve aumentada.
Esta
inhibicin
se
puede
reconocer grficamente al
representar 1/v frente a
1/[S] para concentraciones
constantes de inhibidor. Lo
caracterstico de este tipo
de
inhibicin es que
pendiente
permanece
constante al aumentar a
concentracin del inhibidor
pero la Vmax decrece.
Inhibicin no competitiva
Un inhibidor no competitivo puede combinarse con la
enzima libre o bien con el complejo ES, interfiriendo con
la accin de ambos. Los inhibidores no competitivos se
unen a un centro de la enzima distinto del centro activo,
a menudo para deformar a la enzima, de modo que no
pueda formarse en complejo ES a su velocidad normal y
que una vez formado no se descomponga a su velocidad
habitual para liberarlos productos. Sus efectos no se
anulan al aumentar la concentracin de sustrato.
29
En la inhibicin no competitiva la reaccin con en inhibidor produce

dos formas inactivas, EI y ESI:
E+I
ES + I
EI
ESI
Kj = [E][I]
[EI]
Kj =
[ES][I]
[ESI]
Esta
inhibicin
se
reconoce grficamente en
el hecho que las lneas no
comparten un punto de
interseccin comn. El
valor de la interseccin es
mayor para la enzima
inhibida que para las no
inhibidas, lo que indica que
decrece en
la Vmax
presencia del inhibidor y
no puede restablecerse su
valor aunque se aumente
la
concentracin
de
sustrato.
30
Inhibicin irreversible: modificacin de la enzima

Este tipo de molculas son capaces de unirse
covalentemente con la enzima y modifican de
modo permanentemente el
grupo funcional,
necesario para la catlisis. Este tipo de inhibicin
no puede ser tratado por los principios de
Michaelis-Menten, que supona la formacin de
complejos reversibles.
Este tipo de inhibicin es muy til para
identificarlos grupos funcionales esenciales para
el proceso de catlisis
TAREA
QUE SON LAS ENZIMAS REGULADAS
ALOSTERICAMENTE (ENZIMAS ALOSTERICAS) Y
LAS ENZIMAS MODULADAS COVALENTEMENTE?
31

Enzimas 1192503537544742 2

Cargado por

Información del documento

Título original

Derechos de autor

Formatos disponibles

Compartir este documento

Compartir o incrustar documentos

Opciones para compartir

¿Le pareció útil este documento?

¿Este contenido es inapropiado?

Copyright:

Formatos disponibles

Enzimas 1192503537544742 2

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

ENZIMAS

Prof.: Angel Roco Videla

Prof.: Angel Roco Videla

Las enzimas no operan independientemente, existe un

Prof.: Angel Roco Videla

Prof.: Angel Roco Videla

Prof.: Angel Roco Videla

De acuerdo con la Hiptesis el sitio activo tiene una

Prof.: Angel Roco Videla

Propiedades de las enzimas

Prof.: Angel Roco Videla

Tal vez el aspecto general ms importante de la

Prof.: Angel Roco Videla

Algunas enzimas funcionan como puntos de control en el

Prof.: Angel Roco Videla

Las enzimas ms comunes son protenas globulares y

Prof.: Angel Roco Videla

Las enzimas que intervienen en la regulacin del metabolismo

Clasificacin de las enzimas

Prof.: Angel Roco Videla

Por ejemplo, la ureasa tiene la urea como sutrato. La

A pesar de ello, algunas enzimas, como tripsina o la

Prof.: Angel Roco Videla

Prof.: Angel Roco Videla

2.- Las transferasas catalizan reacciones de transferencia de

Prof.: Angel Roco Videla

Prof.: Angel Roco Videla

3.- Las hidrolasas catalizan la hidrlisis. Son una clase

Prof.: Angel Roco Videla

Residuo de lisina dentro de una

Prof.: Angel Roco Videla

4.- Las liasas catalizan las reacciones de eliminacin no

Prof.: Angel Roco Videla

5.- Las isomerasas catalizan reacciones de

Coenzima que participa: Fosfato de piridoxal

Prof.: Angel Roco Videla

Prof.: Angel Roco Videla

6.- Las ligasas catalizan la ligadura o unin de dos

Prof.: Angel Roco Videla

La ecuacin de velocidad enzimtica

Prof.: Angel Roco Videla

Por ejemplo, la velocidad de ecuacin para la conversin

Prof.: Angel Roco Videla

El orden cintico general de una reaccin es la suma de

Prof.: Angel Roco Videla

Reaccin de primer orden

Prof.: Angel Roco Videla

Para una reaccin complicada como la reaccin

Prof.: Angel Roco Videla

Las reacciones de segundo orden tambin se denomina

Prof.: Angel Roco Videla

Si la concentracin de uno de los reactantes es tan alta

Las condiciones de psuedo primer-orden se utilizan en

Prof.: Angel Roco Videla

En los ensayos enzimticos, todos los reactantes, con

Prof.: Angel Roco Videla

En los ensayos, por lo regular las enzimas estn en

Prof.: Angel Roco Videla

Los momentos iniciales de una reaccin bimolecular se

Prof.: Angel Roco Videla

Las velocidades iniciales se obtienen a partir de curvas de progreso,

Prof.: Angel Roco Videla

2.- A concentraciones bajas de sustrato , la reaccin es de