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Libia Mara Prez Castro, Mara Jos Saquero, Javier Daro Beltrn Herrera
Caracterizacin morfolgica y patognica de Colletotrichum sp. como agente causal de la antracnosis en ame
Dioscorea sp.
Revista Colombiana de Biotecnologa, vol. V, nm. 1, julio, 2003, pp. 24-35,
Universidad Nacional de Colombia
Colombia
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Revista Colombiana de Biotecnologa,

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Caracterizacin morfolgica y patognica de

Colletotrichum sp. como agente causal de la antracnosis
en ame Dioscorea sp.
Morphological and pathological characterisation of
Colletotrichum sp. as casual agent of anthracnose in
Dioscorea sp.
Libia Mara Prez Castro*, Mara Jos Saquero**, Javier Daro Beltrn Herrera***
RESUMEN
Cepas de Colletotrichum gloeosporioides y Colletotrichum dematium fueron aisladas de plantas de ame en el departa-

mento de Sucre. Se realiz una descripcin macro y microscpica encontrndose que el color predominante de la
colonia fue lila. La esporulacin fue mayor a 58.000 conidias /ml para la mayora de las colonias. La rata de crecimiento tuvo un rango entre 4 -7 mm / da. Las conidias de los aislados de Colletotrichum gloeosporioides son cilndricas con un extremo redondeado y el otro agudo y un tamao que vara entre 7-8 micras y 3-4 micras de ancho. As
mismo Colletotrichum dematium se caracteriz por presentar colonias radiales de color gris, conidias falcadas y fusiforme con ambos extremos agudos; y un tamao que varia entre 16-18 micras de largo y 3-4 micras de ancho. En C.
gloeosporioides se observ que las colonias mostraron diferencias morfolgicas macroscpicas y caractersticas microscpicas similares. Igualmente, se evalu la compatibilidad vegetativa, enfrentando aislamientos de diferente
origen geogrficos, los cuales mostraron compatibilidad en un 90% de los aislados enfrentados. Adicionalmente, se
realizaron pruebas de patogenicidad para evaluar la virulencia de los aislados sobre hospederos tolerantes y susceptibles. Los aislados mostraron un alto grado de variabilidad en cuanto a su virulencia. La coleccin de aislados de
Colletotrichum podra ser utilizada para trabajos de caracterizacin molecular y evaluar la tolerancia del germoplasma
de ame a este patgeno.
Palabras claves: Colletotrichum, ame, antracnosis, fitopatologa.
ABSTRACT
Colletotrichum gloeosporioides and Colletotrichum dematium strains were isolated from yam plants in the Sucre department. Macro- and microscopic descriptions were made, finding that the predominant colour for the colonies was
light purple. Sporulation was higher than 58,000 conidia/ml for most colonies. Growth rate lay within a range of 4 to
5mm/day. C. gloeosporioide isolate conidial morphology revealed a cylindrical spore having one rounded end whilst
the other was acute shaped. Conidia length and width averaged between 7-8 micras and 3-4 micras, respectively. C.
dematium colonies, however, were characterised by being grey and having radial growth. The flcate and fusiform
conidia tapered at the acute apex. They had a length and width of 16-18 micras and 3-4 micras, respectively. C.
gloeosporioides colonies showed different macroscopic morphology but similar microscopic characteristics. Vegetative compatibility was evaluated amongst different geographical isolates resulting in 90% compatibility. A pathogenic assay was done for evaluating isolate virulence on tolerant and susceptible cultivars. The isolates showed
great variability regarding their virulence. The Colletotrichum isolate collection represents a tool for use in molecular
characterisation and evaluating yam germplasm tolerance to this pathogen.
Keywords: Colletotrichum, yam, anthracnose, phytopathology.

Biloga con nfasis en biotecnologa. Universidad de Sucre. E-mail: libiamari@hotmail.com

** Biloga con nfasis en biotecnologa. Universidad de Sucre. E-mail: majobaga@yahoo.com
*** Master en biologa molecular de plantas tropicales. Master en fitopatologa. Doctor en fitopatologa.
Departamento de Biologa. Universidad de Sucre. Sincelejo - Sucre. Colombia. E-mail: belherr@tutopia.com

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CARACTERIZACIN MORFOLGICA Y PATOGNICA DE Colletotrichum sp. COMO AGENTE DE LA ANTRACNOSIS EN AME

INTRODUCCIN
El cultivo de ame {Dioscorea sp), de gran importancia socioeconmica para los pequeos productores
de la Costa Atlntica, ha sido afectado por un nmero considerable de organismos entre virus, bacterias y hongos, entre los que se destacan Fusarium
oxisporum, causante de la marchitez de la planta y
Colletotrichum gloeosporioides causante de la antracnosis (Osorio y Ramrez, 1989) La alta incidencia de
esta ltima caus la reduccin del 94% en el rea
sembrada durante los aos de 1989 y 1990 produciendo la desaparicin de clones susceptibles con la
consiguiente reduccin de la variabilidad gentica
de la poblacin de Dioscoreas. (Lpez y Gamero,
1998)
El hongo Colletotrichum es uno de los gneros
patgenos de plantas ms importantes y de mayor
distribucin en el mundo ya que ataca especialmente cultivos de regiones tropicales y subtropicales.
(Manners et al., 2000; Waller and Brigde, 2000). La
sintomatologa se presenta en las hojas, pecolos y/o
tallos. Inicialmente las hojas afectadas presentan puntos rojizos, las lesiones crecen en forma irregular y
se unen entre s ocasionando necrosis total de la hoja
(Negrete y Redondo, 1997). En cuanto a las condiciones predisponentes, tenemos que la enfermedad
se ve favorecida durante los periodos de invierno por
lluvias intensas y fuertes con alta humedad relativa,
ocasionando en muy poco tiempo brotes epidmicos
severos que comprometen casi toda la planta en desarrollo (Melotto et al. 2000). La severidad de la
antracnosis ha llevado a los productores a realizar
aplicaciones exageradas de fungicidas, causando
contaminacin ambiental, un aumento en los costos
de produccin y en algunos casos el abandono total
del cultivo ante el fracaso de sta practica.
El agente causal de antracnosis Colletotrichum
sp. ha tomado gran importancia en cultivos a nivel
mundial, intentndose desarrollar sistemas que modelen los procesos de infeccin y mecanismos de
resistencia bioqumica para tener mayor conocimiento que sustente el manejo del patgeno. (Rodrguez
y Redman, 2000)
En Colombia existe deficiente informacin
de la biologa de Colletotrichum sp., de su diversidad
gentica, capacidad patognica y la epidemiologa
de la enfermedad en los cultivos de ame, lo cual
restringe y obstaculiza el conocimiento sobre la es-

tructura poblacional del hongo, la que se constituye

en una herramienta importante para formular estrategias de manejo (Romero, 1990).
Por tal razn, este trabajo tiene como objetivo
identificar y caracterizar Colletotrichum sp. como
agente causal de antracnosis en Dioscorea sp., mediante estudios morfolgicos, patognicos y de compatibilidad somtica a partir de aislamientos provenientes de las principales zonas productoras de ame
en el departamento de Sucre.

METODOLOGA
Se recolectaron muestras de hojas con sintomatologa
tpica de la enfermedad en diferentes grados de infeccin provenientes de 7 municipios productores de
ame: Ovejas, Tol Viejo, Sampus, Sincelejo, San
Juan de Betulia, Los palmitos y Corozal, utilizando
el mtodo de muestreo en zig zag (Lpez y Gamero,
1998). El aislamiento del patgeno se llev a cabo
en condiciones de laboratorio, a partir de fragmentos de tejidos cortados en los lmites de las lesiones
en las hojas de ame. Estos fueron previamente tratados con una solucin de hipoclorito de sodio a una
concentracin de 0.525% por 5 min de acuerdo con
Agostini et al.(1992) y Cedeo et al. (1994). Se propusieron las siguientes variaciones as: 0.525 % por
5,10 y 15 min; 1% por 5 y 10 min, a 2% por 5 min y
a 5.25% por 1 min; luego fueron lavados tres veces
con agua destilada estril y finalmente se secaron
con papel filtro estril. Cada uno de los fragmentos
previamente desinfectados fue llevado a cmaras hmedas o sembrados directamente en medio nutritivo
Papa Dextrosa Agar (PDA). De estos dos sistemas
se realizaron aislamientos de esporas que posteriormente fueron cultivados en PDA, incubndose durante varios das a una temperatura aproximada de
28 C y una humedad relativa del 90%.
Una vez obtenidos los aislamientos, cada colonia se mantuvo en PDA, realizando repiques
cada vez que era necesario.
Posteriormente se hizo la purificacin de los
aislamientos mediante cultivos monospricos aplicando la tcnica de dilucin (Echandi, 1971). Los
aislamientos purificados fueron caracterizados
morfolgicamente haciendo descripcin macro y
microscpica del patgeno, incluyndose color y
forma de la colonia, aspecto y color del micelio;
forma, tamao, segmentacin y esporulacin de

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la conidia y medicin de la tasa de crecimiento

(Sutton, 1992; Bertrn, 2000). La forma y el tamao de las conidias se determin utilizando
microscopa de luz. Para las mediciones se utiliz
un micrmetro adaptado al ocular y calibrado para
el objetivo 100X.
Estudios parciales de compatibilidad somtica
o vegetativa fueron realizados debido a la alta variabilidad observada en las cepas aisladas; la cual
se manifestaba por las diferencias en la morfologa y color de las colonias. Para estos estudios se
sembraron dos aislamientos de diferente origen
geogrfico por cada caja petri, ubicndose de
manera equidistante. Las colonias se incubaron a
28 C, realizndose lecturas a los 2, 4, 6 y 8 das;
siendo este ultimo periodo de tiempo el que permiti evidenciar la formacin de anastomosis hifal.
Con el propsito de observar al microscopio de
luz las caractersticas de compatibilidad o incompatibilidad que podran existir entre los aislamientos, en una de las repeticiones de la prueba se
incluy superficialmente dentro del medio una laminilla de vidrio, la cual, una vez fuera invadida
por el crecimiento micelial de las colonias, se retirara de la caja y se realizara el respectivo montaje. Lo anterior tuvo como objetivo observar e
identificar aquella zona de afinidad micelial en la
que el micelio de las colonias se combina por completo, presentando as una fusin conocida como
anastomosis hifal.
Para las pruebas de patogenicidad se utilizaron ocho cepas puras de Colletotrichum, aisladas
en cada uno de los diferentes municipios, las cuales presentaban caractersticas tpicas de
Colletotrichum sp. segn Sutton (1980). El diseo
estadstico utilizado fue un factorial de 2 x 2, la
prueba completamente al azar y tres repeticiones.
Las pruebas se llevaran acabo en condiciones
controladas de humedad, temperatura, luminosidad y uniformidad. La cmara de pruebas constaba de una bolsa plstica, hermtica y transparente, de 20 x 25 cm, que contena un papel filtro estril y humedecido con agua destilada estril sobre el cual se coloc la respectiva hoja de ame a
evaluar, de acuerdo con la metodologa descrita por
Martnez y Zambrano (1994) y Smith et al. (1997).
La prueba incluy cepas de Colletotrichum sp.
aisladas de las diferentes zonas ameras del departamento de Sucre utilizadas para la prueba de

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compatibilidad somtica y patogenicidad. Las cepas escogidas fueron: la cepa nmero 9 proveniente de Sincelejo, la 36 proveniente de Sampues,
la 113 proveniente de Tol Viejo, la 202 proveniente de San Juan de Betulia, la 306 proveniente de
Corozal, la 404 proveniente de los Palmitos, la 405
proveniente de Ovejas y la 138 proveniente de
Chocho (Sincelejo). Se evaluaron dos especies de
ame, la primera especie D. alata Linn. perteneciente a la variedad "osito" la cual es susceptible
a la antracnosis y D. Rotundata Poir, variedad
"espino", la cual es tolerante a la antracnosis (Campo y Luna, 1998).
Se evaluaron dos concentraciones de conidias
5x105 conidias/ml y 1x106 conidias/ml, presencia
o ausencia de manchas necrticas, tamao de
manchas, tiempo de aparicin de manchas, nmero de manchas necrticas. Para la prueba, la
hoja sana se llev al laboratorio donde fue lavada
tres veces con hipoclorito 5.25 % y enjuagada con
agua destilada estril; luego se someti a incubacin en cmara hmeda por 5 das con el propsito de detectar infecciones latentes.
Una vez confirmada la ausencia de contaminantes se realiz la inoculacin de acuerdo al diseo. Se coloc en la superficie foliar una gota de
inoculo de acuerdo con Alahakoon ef al. (1996).
Las respectivas hojas inoculadas se ubicaron en
cmaras hmedas. Luego, la prueba se realiz en
condiciones de humedad, luz y temperatura controladas. Los datos fueron analizados en el programa estadstico S.A.S. Se realizaron observaciones peridicas para detectar el desarrollo de
sntomas y signos de la infeccin.

RESULTADOS Y DISCUSIN
Los resultados denotan variabilidad en cuanto a
la expresin de los sntomas sobre las hojas en
dependencia con el hospedero. En Dioscorea alata
variedad "osito", los sntomas primarios son puntos rojizos de apariencia hendida, forma irregular,
halo amarillento con puntos concntricos de color
caf oscuro, estas manchas crecen paulatinamente
hasta unirse y necrosar, dando la apariencia de
hundimiento al tejido necrosado (figura 1). De ellas
se aislaron consistentemente hongos del gnero
Colletotrichum, cuya descripcin est de acuerdo
con lo reportado por otros autores (Negrete y Redondo, 1997; Winch et al. 1984).

CARACTERIZACIN MORFOLGICA Y PATOGNICA DE Colletotrichum sp. COMO AGENTE DE LA ANTRACNOSIS EN AME

critas para D22 con variaciones en la forma de la mancha, las cuales tienden a ser irregulares para D. rotundata. De igual forma la ocurrencia de conidiomas y
acrvulos en la hoja dependen del hospedero observndose sobre "espino" y la variedad 861104 de D.
alata.

Figura 1. Manchas necrticas tpicas de la

antracnosis en D. alata cv. Osito

As mismo, se obtuvieron aislamientos a partir de

una mancha de aspecto alquitranse redonda de color caf oscuro por el haz, caf claro por el envs y de
aspecto brillante. Estas manchas se unen necrosando
el tejido foliar, causando as la muerte descendente
de la planta. De estas manchas fueron aislados hongos del gnero Colletotrichum sp. Este tipo de manchas se present principalmente sobre el hospedero
Dioscorea alata cv. Diamante 22 (D22) (Figura 2). Las
caractersticas morfolgicas de las cepas de Colletotrchum sp. aisladas de las manchas anteriormente
descritas, correspondieron con las caractersticas morfolgicas reportadas para Colletotrichum gloeosporioides (Sutton, 1992). Sobre Dioscorea rotundata variedad "espino" se aislaron cepas de Colletotrichum que
tienen caractersticas morfolgicas propias del gnero, pero que no corresponden con las reportadas para
Colletotrichum gloeosporioides; stas se asocian con
las caractersticas descritas para Colletotrichum dematium, cuyas manchas tienen semejanza con las des-

Figura. 2. Manchas necrticas tpicas de la

antracnosis en D. alata cv. D22

A partir de este material colectado se obtuvo un

cepario conformado por 32 cepas de C. gloeosporioides y 4 de C. dematium. En este cepario se estudio el
desarrollo de las colonias observndose que C. gloeosporioides presentaba colonias radiales, con bordes
enteros. En cuanto al color de las colonias el 61 % fue
Lila, es decir 20 colonias; el 21% fue curuba, correspondiendo a 8 de las colonias, el 9% fue morada es
decir 3 de las colonias, 6% fue crema o sea 2 de las
colonias y un 3% fue salmn o sea para 1 colonia.
(Figura 3)

Aunque el color observado en las colonias es caracterstico del gnero Colletotrichum, hubo variacin
en las tonalidades de los colores predominantes, teniendo como caracterstica principal la atenuacin del
color a medida que aumentaba la edad del cultivo, estas caractersticas de la variacin en el color de las
colonias han sido reportadas por Adaskaveg y Hartin
(1997) quienes indican que las variaciones en la morfologa de las colonias estn en dependencia con el
medio o sustrato as como tambin a las diferentes
temperaturas a las cuales se sometan. En nuestro
estudio no se tuvieron en cuenta estos parmetros ya
que las condiciones de incubacin, temperatura, humedad y oscuridad constante permanecieron homogneas para todos los aislamientos, siendo difcil utilizar estos criterios para agruparlos; sin embargo, estos
resultados pueden tener valor como marcadores en
estudios posteriores.

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Por otra parte, la variabilidad presente en este

estudio se puede explicar por las diferentes variedades de hospederos de donde fueron aisladas as como
tambin por las barreras geogrficas y las variaciones
agroclimticas entre los sitios de aislamiento.
El micelio presente en todos los aislamientos se
caracteriz por ser esponjoso y denso, presentndose una variacin de blanco 90.6% a crema 9.4% para
la cepa de Colletotrichum gloeosporioides (Figura 4)
y para C. dematium micelio con cirro grisceo. La
esporulacin de las colonias fue mayor a 58.000 conidias / mi para todos los aislamientos de C. gloeosporioides, existiendo una variacin en la esporulacin dado que hubo cepas con esporulacin hasta
de 1.488.000 conidia/mi. As mismo, se observ una
marcada relacin entre el crecimiento total que al-

Figura 4. Conidias caractersticas de

Colletotrichum gloeosporioides

canz la colonia y su grado de esporulacin, como lo

observado en el aislamiento 404 proveniente de Los
Palmitos, que tuvo un crecimiento de 88 mm a los 8
das y la ms alta esporulacin (ver Tabla 1). Dentro
de los factores que inducen o favorecen la esporulacin se encuentran la temperatura, pH, luz y la proporcin entre carbono y nitrgeno en el medio de
cultivo (Jacson y Bothas, 1990; Jacson y Schisler,
1992). As mismo, se comprob que exposiciones
cortas de irradiacin UV estimulan la produccin conidial. En nuestro caso slo se debi a las condiciones de laboratorio y medio, pero sin efecto de radiacin ultravioleta. Timmick, citado por Romero (1999),
estudiando los sistemas de cultivos ha reportado que
los mtodos de inoculacin y la cantidad de medio
tienen un profundo efecto sobre la esporulacin.
Igualmente, Jacson y Slinger (1993) comprobaron

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que la composicin de aminocidos presente en el

medio influye sobre ella. Vale la pena aclarar que en
este estudio se obtuvo una abundante esporulacin
bajo condiciones de oscuridad constante y sin utilizar ningn factor externo que la estimulara. Estas
condiciones fueron similares a las reportadas por
Romero (1999); pero en su estudio no se obtuvieron
resultados significativos.

Los 31 aislamientos del ao 2000 presentan

conidias ovoides, en donde la mayora de ellas presenta un extremo redondeado y otro agudo; su citoplasma es uniforme, observndose que algunas de
ellas presentan vacuolas de gran tamao (Figura 4).
La longitud de las conidias va desde 4 M a 17 M,
la mayor longitud promedio la tuvo el aislamiento 144
proveniente del corregimiento de Choch, Municipio
de Sincelejo y la menor longitud promedio fue encontrada en el aislamiento 38, proveniente del
corregimiento de San Luis, Municipio de Sampus.
Para la variable longitud de conidia se encontr un
promedio total 8.06 M y un coeficiente de variacin
de 11.5 % el cual indica la homogeneidad de la poblacin y la confiabilidad estadstica de los datos,
los cuales son similares a lo reportado por Moreno y
Gallardo (1999). El ancho de las conidias va desde
1.5 M a 6.0 M, el menor promedio lo tuvo el aislamiento 202 proveniente de San Juan de Betulia y el
mayor promedio lo tubo el aislamiento 9 proveniente
del corregimiento de Las Palmas, municipio de
Sincelejo; con un promedio total de 3.06 mieras. Se
observ homogeneidad en el ancho de las conidias
entre todos los aislamientos, lo cual se confirma con
el coeficiente de variacin para esta prueba, siendo
menor al 20.9%, pero este no es un marcador
morfolgico para diferenciar entre especies.

CARACTERIZACIN MORFOLGICA Y PATOGNICA DE Colletotrichum sp. COMO AGENTE DE LA ANTRACNOSIS EN AME

Igualmente, C. dematium presentaba conidias

ahusadas con ambos extremos agudos y un tamao
que varia entre 16 a 18 micras de largo y de 3 a 4
micras de ancho (Figura 5).

Lo anterior estara de acuerdo con el anlisis

estadstico de los datos de caracterizacin, que muestran una estrecha relacin entre las variables ancho
y longitud de conidia con un r de Pearson de 0.51932
(Tabla 2).
Con base en los datos de la curva de crecimiento en PDA (Figura 6), tomados hasta los ocho das
despus de la siembra, se determin una variacin
de la tasa de crecimiento entre 2.5 y 6.04 mm cada
12 horas. La tasa de crecimiento ms alta la present el aislamiento de los Palmitos (Sucre) con 88 mm
en ocho das. El coeficiente de variacin para esta
prueba fue de 31.8%, siendo el coeficiente ms alto
con respecto a las otras variables analizadas, indicando con ello mayor heterogeneidad en el comportamiento de los aislamientos en respuesta a las caractersticas fisiolgicas de cada cepa y su interaccin con factores ambientales y el medio de cultivo.
Lo anterior fue similar a lo observado por Rivero
(1986) quien afirma que las condiciones ambientales favorecen o no el desarrollo del organismo y afectan su expresin fenotpica.

Figura. 5 Conidias y conidioma tpicos de C. deamtium

Segn los estudios realizados por Adaskaveg y

Hartin (1997), se considera que el tamao de las
conidias es una caracterstica que puede variar tanto en condiciones de campo como en condiciones
controladas, sin embargo, en este estudio se encontr poca variabilidad en cuanto al tamao de las conidias, presentndose longitudes promedias muy similares entre los aislamientos estudiados; esta caracterstica podra ser utilizada como base para identificar los aislamientos en cuanto el tamao de las
conidias, como lo reportan algunos autores (Simmons, 1965; Holliday, 1995; O' Neill, 1996).
En la Figura 6 se presenta el crecimiento de
ocho aislamientos de Colletotrichum, seleccionados para las dems pruebas a realizar
teniendo en cuenta caractersticas morfolgicas como el color, y aspecto del micelio y diferente origen geogrfico.
La prueba de compatibilidad ha sido ampliamente utilizada como sistema modelo
para evaluar los mecanismos de regulacin

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REVISTA COLOMBIANA DE BIOTECNOLOGA Vol. V N 1 Julio 2003 24 - 35

de genes, relaciones evolutivas, el origen y desarrollo de la sexualidad en hongos (Vaillancourt et a/.,

2000). Es decir, para establecer la variabilidad gentica existente entre dos aislamientos encontrndose que, aislamientos compatibles con capacidad
de anastosomarse y formar heterocariontes estables
comparten un origen comn y un grupo de genes,
por lo tanto se ubican en un mismo grupo de compatibilidad vegetativa (VCG) (Katan, 2000).

los aislamientos se enfrentaron con ellos mismos, por

ejemplo, el aislamiento 9 con 9, observndose microscpicamente la fusin hifal (Figura 8).

Para este estudio se estableci que todos los aislamientos tienen el mismo origen vegetativo ya que
los enfrentamientos realizados mostraron la formacin
de lo denominado como "masa salvaje" (Romero, 1999)
producto de la anastomosis hifal (Figura 7).
Figura 8. Anastomosis hifal resultado
del enfrentamiento de dos cepas

De igual forma la anastomosis nter fue observada con el seguimiento microscpico, aunque
no se confirma la presencia de un heterocarionte
viable, ya que para la confirmacin de este es necesaria la utilizacin de mutantes y estudios
bioqumicos (Katan, 2000) que no eran el objeto
de este estudio.

Figura 7. Masa salvaje resultado de la anastomosis hifal.

La evaluacin microscpica de la prueba de compatibilidad para los ocho aislamientos seleccionados

mostr la formacin de puentes hifales entre los diferentes aislamientos en el 90 % de los enfrentamientos realizados. Estas observaciones se hicieron a las
48 horas de su siembra inicial, con revisiones peridicas cada ocho horas, lo cual ayud a una familiarizacin con las hifas de cada aislamiento y a evidenciar las uniones intra hifales cuando los aislamientos fueron enfrentados con ellos mismos.
As mismo, se observ la formacin de puentes
nter hifales cuando se enfrentaron aislamientos de
diferente origen geogrfico y se hizo el mismo seguimiento microscpico.
A pesar de que la literatura reporta que es difcil
diferenciar entre anastomosis hifal inter e intra, en este
estudio se pudo confirmar la anastomosis intra ya que

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Sin embargo, la prueba permiti dilucidar relaciones genticas tales como la existencia de una
compatibilidad vegetativa comn dentro de la poblacin, como tambin es importante resaltar que,
a pesar de la variabilidad morfolgica de las cepas aisladas, existi un 90% de compatibilidad
vegetativa. Podra pensarse as, que su capacidad de anastomarse conllevara a una mayor agresividad, lo que podra predecir a futuro continuos
problemas con este hongo (Corell et al. 2000), justificando as la necesidad de continuar evaluando
materiales tolerantes a la enfermedad.
La prueba de patognicidad logr determinar las
respuestas de los hospederos a las cepas de
Colletotrichum sp. aisladas. Seis de las ocho cepas
seleccionadas desarrollaron lesiones tpicas de
antracnosis similares a las encontradas en el campo
(Figuras 9 y 10). En todos los casos se re-aislaron
cepas con caractersticas morfolgicas similares a
las usadas en la inoculacin. Las inoculaciones de
las cepas 113 y 202 no presentaron manchas sobre
ninguno de los hospederos; para el caso del hospedero D. rotundata cv. "espino" ninguna de las cepas
desarroll manchas sobre el tejido a excepcin de la
cepa 36.

CARACTERIZACIN MORFOLGICA Y PATOGNICA DE Colletotrichum sp. COMO AGENTE DE LA ANTRACNOSIS EN AME

Figura 9. Mancha resultado de la inoculacin

sobre el hospedero susceptible.

Este mtodo fue eficiente en la identificacin de

la respuesta del hospedero a la antracnosis y a la
patogenicidad del aislamiento. Cinco aislamientos de
la prueba causaron lesiones tpicas de antracnosis
en las hojas, el re-aislamiento a partir de estas lesiones mostr siempre caractersticas morfolgicas similares a las cepas usadas para la inoculacin de
las hojas. El anlisis de varianza mostr diferencia
altamente significativa entre el tipo de hospedero y
la presencia de machas, calculndose un F de 32.11,
siendo la variedad susceptible la que present mayor numero de ellas. Lo anterior sugiriere la existencia de posibles razas fisiolgicas dentro de los aislamientos de C. gloeosporioides. As mismo, mediante
la prueba estadstica de Duncan se estableci que la
concentracin de 1x106 conidias/mi fue la mejor
para producir la sintomatologa tpica del hongo en
las hojas inoculadas. La prueba fue realizada en las
hojas y no en tallos ni en tubrculos debido a que la
sintomatologa presentada en campo fue predominantemente en hojas.

No todos los aislamientos fueron capaces de

causar manchas necrticas. Cuando se inocularon
las ocho cepas evaluadas en las mismas condiciones, slo las C. gloeosporioides 404 y C. gloeosporioides 405 presentaron el mayor numero de manchas y la cepa que produjo el tamao de mancha
ms grande fue la C. gloeosporioides 36. Igualmente, el hospedero tolerante D. rotundata no present
respuestas significativas a los diferentes aislamientos excepto la C. gloeosporioides 36. Con respecto a
las diferencias significativas de los aislamientos en
la habilidad para causar dao en la hoja, en general,
la mayora son patognicos para la variedad susceptible excepto las cepas C. gloeosporioides 113 y C.
gloeosporioides 202 de la prueba que no fueron capaces de producir sintomatologa en ninguna de las
variedades en estudio.
La variacin en la habilidad de las cepas para
causar dao y en el grado de agresividad del dao
causado en el hospedero susceptible se denota en
C. gloeosporioides 404, la cual caus necrosis en el
25% de la rea total de la hoja, en contraste con la
C. gloeosporioides 113 y C. gloeosporioides 202 que
no fueron patognicas (Figura11).
El hecho de que los resultados del estudio muestren diferencias entre las respuestas de los hospederos, sugiere la posible existencia de variantes entre
estas cepas. Por otra parte, en la interaccin variedad/patgeno, segn Jonsthon (2000), no se conoce con claridad por qu una especie ataca a un husped y no a otro; frecuentemente ese tipo de patrones
se establecen slo cuando todas las relaciones filogenticas han sido establecidas.
La tendencia de la severidad que present el
inoculo utilizado en las pruebas in vitro, se puede
explicar en trminos de la concentracin de esporas
provenientes de los cultivos puros, sta no es similar a lo que se presenta en el campo, ya que sobre
las hojas estn asociadas a una poblacin variada
de microorganismos saprofitos que pueden inhibir la
germinacin del hongo.

Figura 10. Respuesta de aislamientos inoculados

sobre los hospederos.

Esta explicacin es viable porque algunos autores asocian los altos porcentajes de infeccin utilizando inoculo natural, sin causar heridas, a la existencia de una asociacin sinergista de otros organismos con Colletotrichum; especialmente con bacterias del gnero Ralstonia que, luego de aprovechar
el hierro existente en la masa de conidias, promue-

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sintomatologa y tasa de infeccin, como base de

separacin de aislamientos dentro de la especie y
entre especies. De esta manera, se podra inferir que
la sintomatologa que se evidenci en la prueba es
tpica de la antracnosis, por ende del mismo patgeno, con la posibilidad de afectar diferentes especies.
Conociendo que una sola especie de Colletotrichum puede infectar mltiples huspedes y que de
igual forma un solo husped puede ser infectado por
varias especies, podemos concluir que las diferencias en los aislamientos patognicos entre dos o ms
regiones probablemente refleja las diferencias a escala gentica en el germoplasma usado y las practicas agrcolas desarrolladas en cada regin.

CONCLUSIONES
Los hongos del gnero Colletotrichum estn presentes y son los causantes de antracnosis en los cultivos
de ame Dioscorea sp. del departamento de Sucre.
ven la germinacin de los mismos e inducen la formacin de apresorios. El apresorio es una estructura sin la cual Colletotrichum es incapaz de causar
infeccin (Bailey, 1992). Para la formacin de
apresorios es necesaria la interaccin planta - patgeno y se involucra la activacin secuencial de diferentes grupos de genes que definen la penetracin
al husped (Kolattukudy et al. 2000). Estas seales
son reconocidas y utilizadas para definir las relaciones de compatibilidad e incompatibilidad entre las
especies.
Sobre este aspecto, Mc Cracken y Swinburne
(1979) determinaron que agentes quelantes como los
siderforos bacterianos procedentes de la cepa de
Ralstonia UV3 presenta una alta afinidad por el hierro contenido en la matriz conidial de Colletotrichum.
Siendo este metal un factor importante en la
estimulacin de la germinacin, por lo tanto, los estudios realizados ayudan a entender cmo en condiciones de campo existen mecanismos, microorganismos y condiciones ambientales que facilitan una
mayor velocidad de infeccin y dispersin de este
patgeno, sin descartar ni subvalorar los mecanismos propios del hongo.
Thind y Jhooty (1990) encontraron comportamientos semejantes cuando compararon aislamientos de dos especies de Colletotrichum. Al realizar
pruebas de inoculacin en frutos de aj, los autores
hacen referencia en cuanto a la expresin de la

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Se presentan diferentes tipos de manchas de

antracnosis dependiendo de las cepas, el hospedero
y la interaccin entre ellos.
Los aislamientos de Colletotrichum no constituyen
grupos morfolgicamente homogneos, lo cual sugiere que los aislamientos que pertenecen a distintas regiones han sufrido un proceso de evolucin convergente.
El porcentaje de esporulacin de las cepas est
directamente relacionado con su velocidad de crecimiento, encontrndose que a mayor velocidad mayor
esporulacin.
El hecho de que los resultados de la prueba de
patogenicidad muestre diferencias entre las respuestas de los hospederos sugiere de manera categrica
la posible existencia de variantes del hongo.
Por las caractersticas morfolgicas de las cepas
aisladas, no slo Colletotrichum gloeosporioides es el
causante de antracnosis en el departamento de Sucre,
sino que podran existir variantes de esta especie y/o
diferentes especies que causan la enfermedad, como
lo demuestra la deteccin de C. dematium entre las
cepas aisladas.
A pesar de la variabilidad morfolgica de las
cepas aisladas, en el 2000 existi un 90% de com-

CARACTERIZACIN MORFOLGICA Y PATOGNICA DE Colletotrichum sp. COMO AGENTE DE LA ANTRACNOSIS EN AME

patibilidad vegetativa entre ellas, su capacidad de

anastomarse podra conllevar a mayor variabilidad
gentica en las poblaciones futuras y posiblemente
a mayor agresividad, lo que podra predecir a futuro
continuos problemas con este hongo, justificando as
la necesidad de continuar evaluando materiales tolerantes a la enfermedad.

AGRADECIMIENTOS
Laboratorio de Microbiologa y Sanidad Vegetal de
la Universidad de Sucre y a CORPOICA Regional
Carmen de Bolvar y Regional Ceret Montera.

BIBLIOGRAFA
Adaskaveg, J. and Hartin, R. 1997. Characterization
of Colletotrichum acutatum isolates causing anthracnose of almond and peach n California.
Phytophatology 87(9): 979-987.
Agostini, J. P., Timmer, B. and Mitchell, C. 1992. Morphological, and pathological characteristics on
Colletotrichum gloeosporioides from citrus. Phytopathology. 82: 1377-1382.
Alahakoon, P., Screnivasa, S., Brown, A. and Mills,
P. 1996. Selection of genetic variant within
Colletotrichum gloeosporioides isolates pathogenic on mango by passaging thorough
wounden tomato fruits. Physiological and Molecular Plant Pathology. 41:227-240.
Bayley, J. A., O'Conell, R.J., Pring, R. J and Nash, C.
1992. Infected strategies of Colletotrichum species. En: Colletotrichum Biology, Phatology and
Control. Bayley. J.A and Jeger, M J. British
Society for Plant Pathology. UK.
Beltrn, J. D. 2000. Caracterizacin y diagnstico
del gnero Colletotrichum sp. causante de la
antracnosis en ame y otros cultivos. En:
AME: Produccin de semillas por Biotecnologa. 1: 54-65.
Campo y Luna. 1998. Evaluacin de la antracnosis
en ames Dioscorea alata Diamante 22 en monocultivo e intercalado con la variedad cocha
de coco. Ascolfi Informa. 24 (5): 26-27.

Cedeo, L., Mohali, S. Y Palacios, E. 1994. Antracnosis causada por dos cepas de Glomerella cingulata en frutos de parchita Venezuela. Fitopatologa Venezolana 6(2): 30-33.
www.redpav-fpolarinfo.ve/fitopatology/v062a
Corell, J., Guerber, J., Wasiwa, L., Sherill, J and
Morelock, T. 2000. nter and Intra species variation in Colletotrichum and Mechanisms which
affect population structure. En: Colletotrichum
host specificity, pathology, and host-pathogen
interaction eds. Dov Prusky, Stanley Freeman.
and Martin B. Dickman St Pal, Minnesota: ed.
APS Press the American Phytopathological Society.
Echandi, E. 1971. Obtencin de cultivos monospricos por los mtodos de dilucin y rayado. En:
Manual de laboratorio para fitopatologa general. Furrialva. Editorial Hnos. Restrepo.
Hollyday, P. 1995. Fungus diseases of tropical crops.
New York: Dover publication, Inc.
Jacson, M. and Bothas, T.R. 1990. Carbon concentration and carbon to nitrogen ratio influence
submerged-culture condition by the potential
bioherbicide Colletotrichum truncatum NRRL
13777. Environmental Microbiology. 58 (7): 3138.
Jacson, M. and Schisler D. 1992. The composition
and attributes of Colletotrichum truncatum
spores are altered by nutritional Environmental
Microbiology. 56 (11): 260-265.
Jacson, M and SLINGER, P.1993. Submerged culture conidial germination and conidiation of
bioherbicide Colletotrichum trncate are influenced by the aminoacid composition of the mdium. Journal of Industrial Microbiology. 12:
417-422.
Johston, P.R. 2000. The mportance of phylogeny in
understanding host relationships within
Colletotrichum. En: Coiletotrichum host specificity, pathology, and host-pathogen interaction.
Eds. Dov Prusky, Stanley Freeman and Martin
B. Dickman St Pal, Minnesota :ed. APS Press
the American Phytopathological Society.

33

REVISTA COLOMBIANA DE BIOTECNOLOGA Vol. V N 1 Julio 2003 24 - 35

Katan, T. 2000. Vegetative Compatibility in

Colletotrichum. En: Colletotrichum: biology, pathology and control. Bailey, J. Y Jeger, M. Eds.
CAB International.
Kolattukudy, R, Kikim, Y, Li, D., Meiliu, Z. And Rogers,
L. 2000. Regulation of melanin biosynthesis
genes during appressorium formation by
Colletotrichum lagenarium. En: Colletotrichum
host specificity, pathology, and host-pathogen
interaction eds. Dov Prusky, Stanley Freeman
and Martn B. Dickman St Pal, Minnesota: ed.
APS Press the American phytopathological Society.
Lpez, A. Gamero, G. 1998. Comportamiento de
clones de ame tolerantes a antracnosis
(Colletotrichum gloeosporioides) en tres sistemas de cultivo en la Regin Caribe. Corpoica.
C.l. Turipan.
Manners, S., Stephenson, S., Chaozu, H., Maclean.
2000. Gene transfer and expression in
Colletotrichum gloeosporioides causing Anthracnose on Stylosanthes En: Colletotrichum host
specificity, pathology, and host-pathogen interaction eds. Dov Prusky, Stanley Freeman and
Martin B. Dickman St Pal, Minnesota ed. APS
Press the American Phytopathological Society.
Martnez, M. Y Zambrano, C. 1994. Identificacin y
patogenicidad de cepas de Colletotrichum asociadas al cultivo del caf Coffea arbica en la
regin central del occidente de Venezuela. Agronoma Trop. 44 (4): 567-577.
Me Cracken, A. and Swimburne, T.1979. Siderophores
produce by saprophytic bacteria and stimulants
of germination of conidial of Colletotrichum
musaeA: 331-340.
Melotto, M., Balardin, R. and Kelly, J. 2000. Hostpathogen interaction and variability of

Colletotrichum

lindemuthianum.

En:

Colletotrichum host specificity, pathology, and

host-pathogen interaction eds. Dov Prusky,
Stanley Freeman and Martin B. Dickman St
Pal, Minnesota ed. APS Press the American
Phytopathological Society.
Moreno, A. Gallardo, Y. Anlisis de la informacin. Serie aprender investigar. ICFES. 4 (50):104-107.

34

Negrete, J. Y Redondo, A.1997. Evaluacin de la

respuesta a la antracnosis, Colletotrichum
gloeosporioides Penz. En: ames promisorios,
Dioscorea alata L en Crdoba. Tesis de grado
(ingeniera agronmica). Universidad de Crdoba. Montera Colombia.
O'Neill, N. 1996. Photogenic variability and host
resistance in the Colletotrichum trifolli / Medicago
sativa phatosystem. Plant Disease 80 (4): 450457.
Osorio, J. y Ramrez, B.1989. Principales enfermedades del ame en la regin caribe colombiana. ICA informa. Colombia. XXIII: 13-15.
Rivero, M.1986. Evaluacin Preliminar de la resistencia de cinco materiales de sorgo {Sorghum

bicolor) a la antracnosis Colletotrichum

graminicola (Ces.) Wilson). Trabajo especial
ICA-UNC.
Rodrguez, R. and Redman, R. 2000. Colletotrichum
as a model system defining the genetic basis of
fungal symbiotic lifestyles. En: Colletotrichum
host specificity, pathology, and host-pathogen
interaction eds. Dov Prusky, Stanley Freeman
and Martin B. Dickman St Pal, Minnesota ed.
APS Press the American Phytopathological Society.
Romero, S. E. 1999. Caracterizacin morfolgica,
molecular y variabilidad patognica del agente
causal de la antracnosis Colletotrichum gloeosporioides en tomate de rbol en Colombia. Tesis de maestra.(Fitopatologa). Universidad Nacional . Bogot. Colombia.
Simmonds, J. A.1965. Study of the species of
Colletotrichum causing ripe f r u i t rots in
Queensland. Queensl. Journal of Agriculture and
Animal Sciences. 22: 437-479.
Smith, J., Avellinya, S. and Korsten.1997. Infection
of cowpeas stem by C.dematium. Plantdiseases.
81(83): 832.
Sutton, B.1980. The Coelomycetes fungi imperfecti
with pyenidia acervuli and stromata.
Commonwealth Mycological Institute. Kew,
Surrey, England.

CARACTERIZACIN MORFOLGICA Y PATOGNICA DE Colletotrichum sp. COMO AGENTE DE LA ANTRACNOSIS EN AME

Sutton, B. 1992. The genus Glomerella and pathogenic variation among Colletotrichum species
isolated from strawberry. Plant disease 74: 69-76.
Thind. T. and Jhooty, J.S Studies on variability in two
Colletotrichum species causing anthracnose and
fruit y root of chillies in Punjab. Indian Phytopathology. 43(1): 53-58.
Vaillancourt, L., Wang, J. and Hanau, R.2000. nter
and intra species variation in Colletotrichum and
mechanisms which affect population structure.
En: Colletotrichum host specificity, pathology,
and host-pathogen interaction eds. Dov Prusky,
Stanley Freeman and Martin B. Dickman. St
Paul, Minnesota: . APS Press the American
Phytopathological Society.

Waller, J. M. And Bridge, P. D. Recent advantages in

understanding Colletotrichum diseases of some
tropical perennial crops. En Colletotrichum:
biology , pathology and control. Bailey, J. Y
Jeger, M. Eds. CAB International.
Winch, J. E., Newnook, F.J., Jacson, Guh. And Col, J.
1984. Studies of Colletotrichum gloeosporioides of yam, Dioscorea alata. Salomn
Islands. Plant Pathology. 33: 467.