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Alimentos transgnicos.

Definicin, ventajas y desventajas


Publicado por Jorge Cabeza | Last updated Jul, 03 2013

Los transgnicos, conocidos tambin como OMG (Organismo Modificado Genticamente),
son aquellos alimentos cuyos genes han sido manipulados artificialmente. Hasta ahora la
mayora de las manipulaciones que se realizan tienen como objetivo conseguir vegetales
resistentes a insectos y herbicidas.
La modificacin gentica Bt dota a los vegetales de un gen bacteriano que les permite
segregar una toxina que elimina cierto tipo de insectos.
La tolerancia a los herbicidas permite a los productores emplear herbicidas muy potentes
para eliminar las malas hierbas sin que los vegetales modificados genticamente sufran
daos.
Qu OMG se comercializan?
En la Unin Europea slo se comercializan para su consumo humano ciertos tipos de maz
y soja tratados genticamente, pero lo cierto es que estos componentes se encuentran
presentes en ms del 60% de los alimentos transformados como por ejemplo la harina y el
chocolate.
Para evitar que los consumidores ingieran OMG sin saberlo las leyes exigen el etiquetado
de modificado genticamente a todos aquellos alimentos en los que los transgnicos estn
presentes en una concentracin mayor al 0,9%. El problema de este etiquetado radica en
que una persona, sin saberlo, puede estar consumiendo por ejemplo un filete de ternera que
ha sido alimentada con transgnicos pero que no est obligado a llevar ningn tipo de
etiqueta por ello.
Ventajas de los OMG
Los productos modificados genticamente presentan una mejor calidad en sus semillas, y
una gran tolerancia a sequas, inundaciones y cambios climticos.
En la actualidad se encuentran en fase de desarrollo diversos productos para mejorar las
propiedades de los alimentos y que resulten ms nutritivos o de mayor tamao y que tarden
ms tiempo en degenerarse.
Desventajas del uso de transgnicos
Como consecuencia de la resistencia obtenida por los OMG, se utilizan herbicidas mucho
ms potentes que conllevan a una mayor contaminacin del suelo con productos qumicos.
Adems los herbicidas pueden filtrase del suelo a los acuferos y contaminar tambin las
aguas subterrneas.
Otro de los problemas que est surgiendo en relacin al uso de transgnicos es la aparicin
de insectos y malas hierbas que van hacindose cada vez ms resistentes a los insecticidas y
herbicidas.
En la actualidad se est trabajando en la produccin de semillas modificadas genticamente
para que sean estriles, es decir, que solo podran plantarse una vez y los agricultores se
veran obligados a pagar cada ao una gran cantidad de dinero si quisiesen seguir
sembrando estas semillas.
Otro problema de los OMG es que estn comercializados por una pequea cantidad de
empresas que tienen monopolizado el mercado mundial y en muchos casos la produccin
de transgnicos es ms costosa que la de productos ecolgicos.
De la misma forma el uso de estos productos conlleva tambin la prdida de biodiversidad
y efectos en el medioambiente impredecibles.
Riesgos para la salud
Hasta la fecha no se ha realizado ningn estudio oficial acerca de los posibles daos que
pueden ocasionar a los seres humanos el consumo de estos productos. Aunque existen
diversos estudios de carcter independiente que pueden aportar algo de luz sobre este tema.
Este tipo de estudios han relacionado los OMG con la aparicin de reacciones alrgicas,
bacterias resistentes a antibiticos e incluso problemas de fertilidad y disminucin de la
funcin renal y heptica.
Alternativas al consumo de transgnicos
Si se quiere estar seguro de que no se est consumiendo OMG lo mejor es apostar por los
productos ecolgicos ya que tanto en la agricultura como en la ganadera est prohibido su
uso.
La asociacin ecologista Greenpeace posee tambin una lista actualizada peridicamente
con aquellos alimentos que estn libres de OMG y aquellos que, aunque no lo refleje en su
etiqueta, son sospechosos de llevarlos en su composicin.
En la actualidad cada vez hay ms personas preocupadas por su alimentacin que exigen su
derecho a estar informados de todos aquellos productos que ingieren. Hoy en da cada vez
ms comestibles tienen su origen en un laboratorio y es muy necesario conocer de cerca los
OMG y disponer de datos que puedan orientar a las personas hacia su consumo.
Jorge Cabeza
Tcnico en Energas Renovables, Qumico Ambiental, Tcnico en Medio Ambiente y
apasionado de los videojuegos. Tambin me gusta leer sobre todo literatura fantstica e
histrica. Espero poder aportar mi granito ...
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Riesgos de los cultivos transgnicos
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Octubre de 2005, por Transgnicos | Visitas: 47222
Sumario
Efectos sobre la salud humana
1. Aumento de la toxicidad
2. Aumento de las alergias
3. Propagacin de resistencias a los (...)
4. Recombinacin de virus y bacterias
5. Aumento del nivel de residuos (...)
El proceso de creacin de organismos manipulados genticamente (OMG) est rodeado de
incertidumbres, que pueden dar lugar a multitud de efectos imprevistos [1]. La insercin de
ADN extrao en una posicin no deseada dentro del genoma puede potenciar, silenciar o
perturbar los procesos de produccin de protenas. El promotor insertado puede tambin
activar a otros genes presentes en la planta, modificando su comportamiento. La presencia
de la protena extraa puede alterar vas metablicas importantes para la planta. Puede
ocurrir tambin, y ocurre con frecuencia, que se hayan insertado demasiadas copias de
ADN extrao, o que se integren mltiples segmentos genticos con reordenaciones. O que
el ADN extrao se haya contaminado durante la manipulacin en el laboratorio. Cualquiera
de estos sucesos puede provocar perturbaciones importantes en la planta manipulada
genticamente (MG) [2].
En 2000, se revel que la soja resistente al herbicida Roundup de Monsanto, cultivada en
miles de hectreas en el mundo a partir de 1997 -el primer producto transgnico autorizado
en Europa- contiene segmentos adicionales de ADN, insertados de forma accidental. El
ADN de la soja ha sufrido reordenaciones que pueden dar lugar a cambios en las protenas
producidas por las plantas, con efectos completamente imprevisibles [3]. Se ha demostrado,
adems, que algunos de los fragmentos insertados se transcriben, sin que se conozca el
producto ni como afecta ste a la planta [4]. En los estudios de caracterizacin
independientes llevados a cabo se han detectado numerosas anomalas de este tipo en las
variedades transgnicas analizadas [5].
Los trastornos originados por el proceso de manipulacin gentica en las plantas pueden
manifestarse de inmediato, o al cabo de varias generaciones. Tambin pueden aparecer en
determinadas condiciones ambientales o de estrs. Durante una ola de calor padecida en
1999 en EE UU, por ejemplo, la soja transgnica de Monsanto padeci una devastadora -y
misteriosa- infeccin por un hongo, que provoc considerables daos en grandes
superficies. Posteriormente se demostr que las plantas eran ms vulnerables al ataque del
hongo debido a una produccin de lignina inusualmente alta, asociada a la manipulacin
gentica del cultivo, que haca que con la ola de calor los tallos se agrietasen [6]. Este
problema ocasion prdidas considerables a los agricultores del sur de EE UU. Tambin se
ha observado que los tallos del maz Bt tienen un contenido de lignina ms elevado que el
convencional, siendo rechazado en algunos casos por la ganadera [7].
Es relativamente frecuente tambin que las plantas MG inactiven (apaguen) los genes
extraos, un mecanismo que parece activarse en situaciones de estrs ambiental o
fisiolgico de las plantas [8]. En uno de los numerosos casos documentados, la infeccin de
cultivos transgnicos resistentes a un herbicida por el virus del mosaico de la coliflor
provoc el apagado de los genes extraos, haciendo que las plantas resultasen vulnerables
al herbicida [9]. Se cree que la prdida de un 20% de la cosecha de algodn MG en EE UU
en 1997 fue debida asimismo a la inactivacin del transgen de resistencia al herbicida, que
provoc la cada de las cpsulas (las semillas de algodn) al ser fumigado el cultivo [10].

Efectos sobre la salud humana
1. Aumento de la toxicidad
Las plantas tienen mecanismos naturales de defensa. Uno de estos mecanismos es la
produccin de toxinas que las protegen de determinadas enfermedades y de los herbvoros.
La manipulacin gentica puede inducir la produccin de dosis mayores de estas sustancias
txicas, su presencia en el fruto o en partes de la planta donde antes no se producan, o la
aparicin de compuestos totalmente nuevos dainos para la salud [11].
Tambin puede provocar otras alteraciones en la composicin de los alimentos, con efectos
desconocidos para la salud humana. La transformacin de cultivos mediante ingeniera
gentica puede, por ejemplo, potenciar la produccin de sustancias que son saludables
cuando se consumen en pequeas cantidades, como algunas vitaminas y minerales, pero
que pueden tener efectos txicos en dosis mayores a las habituales. En la soja resistente al
Roundup, por ejemplo, se han detectado alteraciones del nivel de fitoestrgenos producidos
por la planta, cuyo efecto se desconoce y que no se tuvieron en cuenta en la evaluacin de
seguridad requerida en el proceso de autorizacin [12]. Tambin puede darse una prdida
de las cualidades nutritivas de un alimento, al disminuir determinados compuestos o
aparecer sustancias antinutrientes, que impiden su correcta asimilacin.
En varios estudios de toxicidad se han detectado trastornos en los animales alimentados con
OMGs. En ensayos realizados con ratas a las que se aliment con tomates transgnicos
Flavr Savr -el primer tomate transgnico autorizado en EE UU-, varios animales
presentaban principio de lcera en el revestimiento del estmago. El proceso de
autorizacin de este tomate, sin embargo, sigui su curso sin que se verificara la causa de
esta anomala, que la empresa Calgene -promotora del tomate- nunca lleg a explicar
adecuadamente, segn un memorando interno del departamento de salud estadounidense en
el que se cuestiona la validez de las conclusiones del estudio de riesgos presentado por
dicha empresa [13]. En uno de los primeros ensayos independientes realizados con ratas
alimentadas con patatas insecticidas Bt se observaron alteraciones significativas del
revestimiento del intestino delgado al cabo de 14 das de dieta transgnica [14]. Otro
estudio llevado a cabo en Escocia con patatas MG insecticidas (en este caso transformadas
para la produccin de otra protena insecticida del grupo de las lectinas, presentes en
muchos seres vivos) revel trastornos similares en el intestino de las ratas a los 10 das de
dieta, observndose tambin problemas en el crecimiento de los animales y en el desarrollo
de sus rganos vitales, as como trastornos inmunolgicos [15]. Otra investigacin
realizada en Italia revelaba alteraciones morfolgicas significativas -sin causa aparente- en
las clulas del hgado de ratones alimentados con soja transgnica [16]. Ms recientemente,
el comit cientfico del gobierno francs se pronunciaba en contra de la aprobacin de un
maz autorizado por la Comisin Europea en Octubre 2004, por considerar que las
anomalas aparecidas en los estudios toxicolgicos eran muy preocupantes y que no se
encontraba en situacin de concluir la inexistencia de riesgos para la salud animal. La
documentacin sometida a consideracin de dicho comit cientfico -que Monsanto se neg
a hacer pblica alegando secreto comercial- revelaba daos en los riones y en las clulas
sanguneas de ratones que haban consumido el maz transgnico [17]. Estas alteraciones
nunca han llegado a investigarse a fondo, sin embargo, se han intentando silenciar.

2. Aumento de las alergias
Los cultivos transgnicos pueden introducir en los alimentos nuevos compuestos que
produzcan alergias. Cuando se transfiere a una planta ADN de una especie con propiedades
alergnicas, existe un riesgo de que el consumo de la variedad transgnica provoque
reacciones alrgicas. Un ejemplo muy citado es el caso de la transferencia a la soja de un
gen de la nuez de Brasil, cuyas propiedades alergnicas son conocidas; con el gen extrao
se trasladaron a la soja transgnica las propiedades alergnicas de la nuez de Brasil [18]. En
este caso el problema era previsible, puesto que se saba que algunas personas eran
alrgicas a dicho fruto.
Lo grave, sin embargo, es que tambin pueden producirse reacciones alrgicas a nuevas
protenas procedentes de una especie que no tenga un historial de efectos alergnicos. Hay
que tener en cuenta que se estn introduciendo en los alimentos protenas derivadas de
bacterias, de virus, de insectos, de ratones y de multitud de otras especies que nunca han
formado parte de la alimentacin humana. La inmensa mayora de los alrgenos
alimentarios conocidos son protenas con caractersticas peculiares, como estructura
molecular muy grande, relativa estabilidad al calor y solubilidad en el agua. En un estudio
realizado en Holanda, los investigadores descubrieron que 22 de las 33 protenas
procedentes de cultivos MG analizadas contenan secuencias de ADN idnticas a las
presentes en alrgenos conocidos [19]. Pero hay compuestos alergnicos que no encajan en
esta descripcin, y no se dispone de ninguna tcnica que permita descubrir a priori sus
propiedades alergnicas [20].
La aparicin de alergias por exposicin a nuevos compuestos alimentarios puede tardar
aos en desarrollarse, y ms an en detectarse, siendo difcil la identificacin de la
sustancia alergnica [21]. Por otra parte, en la Unin Europea hasta 2004 unas normas de
etiquetado inadecuadas han impedido realizar un seguimiento de los efectos de los OMG
sobre la salud, mientras que en EEUU la absoluta falta de informacin al consumidor
difcilmente permitira verificar posibles propiedades alergnicas en los alimentos
transgnicos [22]. Es significativo, sin embargo, que en los ltimos aos las alergias en
Estados Unidos se hayan disparado, mientras que en el Reino Unido aumentaron un 50%
coincidiendo con la importacin de soja transgnica, aunque no se ha podido comprobar
una relacin directa de este incremento -al que seguramente contribuye el deterioro
generalizado de la alimentacin y de la calidad de vida- con el consumo de alimentos
manipulados genticamente [23].
La existencia de cultivos transgnicos en el entorno tambin puede originar problemas de
alergias (al polen, etc.). En Filipinas la poblacin de una zona en la que se cultivaban
variedades transgnicas insecticidas ha desarrollado una misteriosa enfermedad alrgica
que se piensa puede estar asociada a estos cultivos [24]. De hecho, est demostrado que los
compuestos insecticidas producidos de forma natural por la bacteria Bacillus thuringienses
(Bt), fabricados ahora en versin transgnica por las plantas en millones de hectreas de
cultivos, pueden ser alergnicos para los seres humanos [25]. Una de las toxinas Bt de los
cultivos insecticidas transgnicos es un inmungeno sistmico y de las mucosas tan potente
como la toxina del clera [26].

3. Propagacin de resistencias a los antibiticos
La mayor parte de los cultivos MG que se comercializan actualmente llevan genes
marcadores de resistencia a los antibiticos, empleados en el proceso de manipulacin
gentica. Se ha demostrado que el ADN y las protenas pueden resistir el proceso de
digestin, permaneciendo intactos en el estmago de los mamferos, donde conviven con
multitud de bacterias, pasando incluso al torrente sanguneo y a otros rganos del
cuerpo [27]. La ingestin de alimentos transgnicos que contienen la enzima que degrada el
antibitico pudiera, en consecuencia, anular la eficacia de un medicamento consumido con
la comida. Ms preocupante an es la posibilidad de que los genes marcadores pasen de los
alimentos a bacterias presentes en el estmago y en el intestino de las personas (y del
ganado), que desarrollaran resistencia a antibiticos valiosos en medicina. Se ha
comprobado experimentalmente que la posibilidad de transferencia de genes de alimentos
transgnicos a bacterias gastrointestinales, que se deca era altamente improbable, no solo
ocurre, sino que se da con una frecuencia mayor de la esperada [28]. Como consecuencia
de esta transferencia, podran perder su eficacia tratamientos mdicos actuales de
considerable importancia en la lucha contra enfermedades infecciosas [29].
La resistencia a los antibiticos es tambin preocupante en el caso de cultivos destinados a
pienso para animales domsticos, actualmente la mayor parte de los OMG.
Parte del ADN contenido en los alimentos se degrada durante el proceso de elaboracin o
cocinado, pero el resto es ingerido intacto. Durante la digestin la mayor parte del ADN
consumido se hidroliza. Sin embargo, Netherwood et al. han demostrado la presencia de
ADN transgnico intacto en el intestino delgado, que puede ser incorporado a bacterias en
este medio.
Se ha demostrado tambin que el ADN puede pasar de los residuos vegetales de los
cultivos a bacterias del suelo [30], aumentando de forma alarmante la posibilidad de
propagacin de resistencia a los antibiticos en los miles de hectreas de OMG cultivados.
Las variedades de maz insecticida cultivadas en Espaa desde 1998 hasta 2005 llevaban un
gen de resistencia a la ampicilina en todas las clulas de la planta, y constituyen un
importante riesgo para la salud pblica. Diversas asociaciones mdicas e instituciones
internacionales han recomendado reiteradamente la retirada de este tipo de cultivos
transgnicos [31]. En abril 2004 la Agencia Europea de Seguridad Alimentaria dictamin
asimismo la retirada del mercado de estas variedades, que en Espaa deban haberse
eliminado a partir de enero 2005 (y no en julio 2005, permitiendo otro ao de cultivo), tras
ms de seis aos de cultivo de este maz transgnico en ms de 20.000 hectreas [32].

4. Recombinacin de virus y bacterias
La profusa utilizacin en ingeniera gentica de virus, de bacterias y de plsmidos
bacterianos, todos ellos con una gran capacidad de recombinacin y de intercambio de
material gentico con otros microorganismos, y diseados para atravesar las barreras de las
especies, constituye una autntica bomba de relojera, pudiendo contribuir a la creacin de
nuevas enfermedades con enormes riesgos para la salud humana [33].
La seguridad del promotor ms utilizado en ingeniera gentica (procedente del virus de
mosaico de la coliflor) ha sido tambin cuestionada en diversas publicaciones, que sealan
que su inestabilidad y caractersticas estructurales aumentan el riesgo de que se incorpore a
otro material gentico (recombinndose y reactivando virus dormidos, por ejemplo), dando
lugar a nuevos patgenos ms virulentos y con gran capacidad de infeccin [34].

5. Aumento del nivel de residuos txicos en los alimentos
Es evidente que el aumento en el uso de herbicidas asociado a los cultivos transgnicos
contribuir a incrementar en los alimentos los residuos de este tipo de productos, que se
sabe tienen efectos dainos para la salud. Segn un estudio realizado en Australia, la soja
resistente al herbicida Roundup contiene un nivel de residuos de glifosato, el componente
activo de este herbicida, hasta 200 veces mayor que la soja convencional [35].

Los principales compuestos herbicidas asociados a los cultivos transgnicos son el glufosinato de
amonio y el glifosato [36].
El glufosinato de amonio est asociado a casos de toxicidad neurolgica, respiratoria,
gastrointestinal y hematolgica, as como a defectos congnitos en seres humanos y
mamferos. Es txico para las mariposas y numerosos insectos beneficiosos, as como para
las larvas de almejas, las ostras, la Daphnia (mosca de agua) y algunos peces de agua dulce,
especialmente la trucha arco iris. Afecta negativamente a bacterias y hongos beneficiosos
para el suelo por su capacidad de fijacin del nitrgeno. Se ha descubierto adems que
algunas especies consideradas plaga para los cultivos son muy resistentes al glufosinato,
mientras que sus enemigos naturales son muy vulnerables a este compuesto, lo cual puede
tener efectos catastrficos para la agricultura. La accin del glufosinato en las plantas
provoca la acumulacin de un nuevo metabolito, cuyos efectos en la cadena alimentaria no
se han tenido en cuenta, aunque se sabe que los mamferos pueden regenerar a partir de este
compuesto el herbicida txico, que puede tener efectos neurolgicos y graves repercusiones
en la salud.
El glifosato mata a las plantas inhibiendo la actividad de una enzima fundamental para la
sntesis de aminocidos importantes para la planta, y es la causa ms frecuente de
reclamaciones y casos de envenenamiento en el Reino Unido. Se han registrado trastornos
de numerosas funciones fisiolgicas despus de una exposicin a este producto a niveles de
uso normales. En los estudios realizados se detect que la exposicin al glifosato casi
duplicaba el riesgo de aborto espontneo, y que los hijos de quienes trabajan con glifosato
presentaban un elevado ndice de trastornos neurolgicos y de comportamiento. El glifosato
es un agente genotxico en mamferos, peces y sapos, por lo que su utilizacin cerca de los
cauces fluviales est prohibida en algunos pases. En las lombrices la exposicin a las dosis
de glifosato aplicadas habitualmente en el campo provoc una mortandad de ms del 50% y
lesiones intestinales importantes en los individuos que sobrevivieron al tratamiento. El
Roundup, herbicida de Monsanto cuyas ventas se han disparado con la introduccin de los
cultivos resistentes y cuyo principal compuesto activo es el glifosato, provoca disfunciones
en la divisin celular, que podran estar asociadas con algunos tipos de cncer en seres
humanos.

Notas
[1] Kiran SK, Pooja BM, Trevor TA. 2005. Genetic transformation technology: status and
problems. In Vitro Cellular and Development Biology Plant, March-April 2005, vol. 41,
no. 2, pp. 102-112.
Schubert, D. 2005. Sensible regulations for GE food crops. Nature Biotechnology, 23, 785-
787. Julio 2005.
[2] European Commission. 2004. European Communities. 2004. Measures Affecting the
Approval and Marketing of Biotech Products. (DS291, DS292, DS293). First Written
Submission. pp. 14-15
Royal Society of Canada. 2001. Elements of Precaution. Recommendations for the
Regulation of Food Biotechnology in Canada. An Expert Panel Report on the Future of
Food Biotechnology. 14-19
Government of Norway. 2004. European Communities -Measures Affecting the Approval
and Marketing of Biotech Products. Third Party Submission by Norway. PP. 8-9.
[3] Windels, P. Taverniers, I. Depicker, A. Vn Bockstaele, D & de Loose, M. (2001)
Characterisation of the Roundup Ready soybean insert. European Food Research
Technology, 213: 107-112.
Monsanto (2002b) Transcript Analysis of the Sequence Flanking the 3 End of the
Functional Insert in Roundup Ready Soybean Event 40-3-2.
[4] A. Rang, B. Linke, B. Jansen. 2004. Detection of RNA variants transcribed from the
transgene in Roundup Ready Soybean. Eur. Food Res. Technol. 220: 438-443.
[5] A. Wilson, J. Latham, R. Steinbrecher. 2004. Genome Scrambling - Myth or Reality?
Transformation-Induced Mutations in Transgenic Crop Plants. Econexus Technical Report.
Ver tambin: ISIS, Unstable Transgenic Lines Illegal, Nota informativa. 03.12.03.
Government of Norway. Op. cit. pp. 18-20.
[6] Coghlan, A. (1999) Splitting headache. Monsantos modified soya beans are cracking
up in the heat. New Scientist, 20 Nov. 1999.
[7] Saxena D. Y Stotzky G. 2001. Bt corn has a higher lignin content than non-Bt corn.
American Journal of Botany 88:1704-1706.
[8] Finnegan J. y McElroy D. 1994. Transgene inactivation: plants fight back!.
Bio/Technology 12:883-88.
[9] Nadia S., Al-Kaff et al. 2000. Plants Rendered Herbicide-Susceptible by Cauliflower
Mosaic Virus-Elicited Supresin of a 35S Promoter-Regulated Transgene. Nature
Biotechnology. Vol 18, pp. 995-999.
[10] Union of Concerned Scientists. Unexpected boll drop in glyphosate-resistant cotton.
The Gene Exchange. Fall 1997.
[11] Royal Society of Canada. Op. cit.. Captulo 4. pp. 46-47
European Commission. Op. cit. pp. 15-16
Putzai A. et al. 2003. Genetically modified foods: potential human health effects. Food
Safety: Contaminants and toxins (ed. JPF DMello). pp. 347-372. CAB International,
Wallingford Oxon UK.
[12] Lappe, M.A. Bailey, E.B., Childress, C. & Stechell, K.D.R. (1998/1999), Altrerations
in Clinically Important Phytoestrogens in Genetically Modified Herbicide-Tolerant
Soybeans, Journal of Medicinal Food, 1:241-245.
[13] Hines, F.A. 1993. Flavr Savr Tomato (Pathology Review PR-152; FDA Number FMF-
000526); Pathology Branchs Evaluation of Rats with Stomach Lesions from Three Four-
Weeks Oral (Gavage) Toxicity Studies (IRDC Study Nos. 677-002, 677-004 and 677-005)
and an Expert Panels Report. Memo to Linda Kahl, Biotechnology Policy Branch, June 16,
1993
[14] Fares NH, El-Sayed AK. 1998. Fine structural changes in the ileum of mice fed on
delta-endotoxin-treated potatoes and transgenic potatoes. Natural Toxins 6, 219-233.
[15] Ewen S. y Pusztai A. 1999. Effect of diets containing genetically modified potatoes
expressing Galanthus nivalis lectin on rat small intestine. The Lancet 1999, 354, 1353-4.
[16] Malatesta M, Caporaloni C, Gavaudan S, Rocchi MBL, Serafn S, Tiberi C, y
Gazzanelli G. 2002. Ultrastructural morphometrical and immunocytochemical analysis of
hepatocyte nuclei from mice fed on genetically modified soybean". Cell Structure and
Function 27: 173-180 (2002)
[17] Rosa M. Tristn. Polmica por un estudio sobre el riesgo potencial de los transgnicos
para la salud. El Mundo. 24.05.2005
[18] Nordlee J A, Taylor S L, Townsend
[19] Kleter GA y Peijnenburg Ad ACM. 2002. Screening of transgenic proteins expressed
in transgenic food crops for the presence of short amino acid sequences identical to
potential IgE-binding linear epitopes of allergens. BMC Structural Biology 2002, 2:8.
[20] Bindslev-Jensen C y Poulsen LK. 1997. Hazards of unintentional/intentional
introduction of allergens into foods. Allergy 1997, 52, 1184-6.
Helm RM y Burks AW. 2000. Mechanisms of food allergy. Current Opinion in
Immunology 2000., 12, 647-53.
Ver tambin: Royal Society of Canada. Op. cit. pp. 60-61.
[21] Bernstein et al. 2003. Clinical and Laboratory Investigation of Allergy to Genetically
Modified Foods. Genetically Modified Foods, Mini-Monograph, Volumen 111, No. 8, June
2003. Citado en Government of Norway (2004), pg. 23.
FAO/WHO. 2000. Safety Aspects of Genetically Modified Foods of Plant Origin. Report of
Joint
FAO/WHO Expert Consultation on foods derived from biotechnology. May 19-June 2.
Geneva. World Health Organisation. Citado en: Royal Society of Canada 2001. pp. 61
[22] Bereano Phil y Peackock E. 2004. To eat or not to eat? An obscure UN agency tries to
provide an answer. Seedling. GRAIN Abril 2004.
[23] York Nutritional Laboratory, citado en the Express, 12.3.99.
[24] Maize allergy raises hackle. New Scientist. Issue 2437. 6 March 2004.
Traavik, T. & Smith J. Bt-maize (corn) during pollination, may trigger disease in people
living near the cornfield. 24 febrero 2004
T. Traavik. The Cartagena Protocol, the Precautionary Principle, sound science and
early warnings. Norwegian Institute for Gene Ecology, report march 2003.
[25] Bernstein I L, Bernstein J A, Miller S et al. 1999. Immune responses in farm workers
after exposure to Baciullus thuringiensis pesticides. Environmental Health Perspectives.
107: 575-82.
Bernstein et al., 2003. "Clinical and Laboratory Investigation of Allergy to Genetically
Modified Foods". Genetically Modified Foods, Mini-Monograph, Volume 111, No. 8, June
2003
Kleter, G.A. and Peijnenburg, AACM. 2002. Screening of transgenic proteins expressed in
transgenic food crops for the presence of short amino acid sequences identical to potential
IgE-binding linear epitopes of allergens. BMC Structural Biology 2:8
[26] Vzquez-Padrn RI, Moreno-Fierros L, Neri-Bazn L, de la Riva G. Y Lpez-Revilla
R. 1999. Intragastric and intraperitoneal administration of Cry1Ac protoxin from Bacillus
thuringiensis induce systemic and mucosal antibody responses in mice. Life Sciences, 64,
1897-1912.
[27] Mercer D, Scott K, Bruce-Johnson A, Glover L y Flint H. 1999. Fate of free DNA and
transformation of the oral bacterium Streptococcus gordonii DL1 by plasmid DNA in
human saliva. Applied and Environmental Microbiology, Vol. 65, no. 1, pp.6-10.
Schubbert et al. 1994. Ingested foreign (phage M13) DNA survives transiently in the
gastrointestinal tract and enters the bloodstream of mice. Mol Gen Genet. 242(5):495-504.
Schubert, R., D. Renz, B. Schmitz, W. Doerfler. 1997. Foreign (M13) DNA ingested by
mice reaches peripheral leukocytes, spleen and liver via intestinal wall mucosa and can be
covalently linked to mouse DNA. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94: 961-966.
Hohlweg y Doerfler. 2001. On the fate of plants or other foreign genes upon the uptake in
food or after intramuscular injection in mice. Mol Gen Genomics 265: 225-233.
Einspanier et al. 2001. The fate of forage plant DNA in farm animals; a collaborative case-
study investigating cattle and chicken fed recombinant plant material. Eur Food Res
Technol. 212:129-134
Palka-Santani et al. 2003. "The gastrointestinal tract as the portal of entry for foreign
macromolecules: fate of DNA and proteins". Mol Gen Genomics. 270:201-215.
Chowdhury EH, Kuribara H, Hino A, Sultana P, Mikami O, Shimada N, Guruge KS, Saito
M, Nakajima Y. 2003. Detection of corn intrinsic and recombinant DNA fragments and
CrylAb protein in the gastrointestinal contents of pigs fed genetically modified corn Bt11.
Journal of Animal Science, 81, 2546-51.
[28] British Food Safety Standards (FSA). 2002. Evaluating the risk associated with using
GMOs in human foods. FSA report. Pg. 22-27.
Netherwood et al., 2004. "Assessing the survival of transgenic plant DNA in the human
gastrointestinal tract". Nature Biotechnology , Volume 22, No. 2.
Heritage, J. 2004 - The fate of transgenes in the human gut - Nature Biotechnology 22 (2):
170-172
[29] Courvalin P. 1998. Plantes Transgeniques et antibiotiques. Les OGMs risquent-ils
daggraver le problme crucial de la rsistence bacterienne? La Recherche 309. Mai 1998.
[30] Sengelov G., Kowalchuk G.A, Sorensen S.J. 2000. Influence of fungal-bacterial
interactions on bacterial conjugation in the residuesphere. FEMS Microbiol. Ecol. 31_ 39-
45.
[31] British Medical Association Board of Science and Education. 1999. The Impact of
Genetic Modification on Agriculture, Food and Health - An Interim Statement.
Royal Society Canada. Op. cit.
OECD (Organisation for Economic Co-operation and Development). 2000. GM Food
Safety: Facts, Uncertainties, and Assessment. The OECD Edinburgh Conference on the
Scientific and Health Aspects of Genetically Modified Foods; 28 Feb.-1 March 2000.
Chairmans Report.
WHO 2000. Joint FAO/WHO Expert Consultation on Foods Derived from Biotechnology.
Food and Agricultural Organization of the United Nations/World Health Organization. Ow,
D., Topic 12: Marker Genes.
[32] Agencia de Seguridad Alimentaria Espaola. La EFSA apuesta por una evaluacin
rigurosa de la resistencia a antibiticos en los OGM. Comunicado de la Agencia de
Seguridad alimentaria de 23.04.2004
[33] Grupo de Ciencia Independiente. 2003. Defensa de un Mundo Sustentable sin
Transgnicos. Red del Tercer Mundo. Captulo 8.
Ho MW, Traavik T, Olsvik O, Tappeser B, Vyvyan H, von Weizsacker C y McGavin GC.
1998. Gene Technology and Gene Ecology of Infectious Diseases. Microbial Ecology in
Health and Disease. 10: 33-59
[34] Ho MW, Ryan A y Cummins J. 1999. Cauliflower mosaic viral promoter - A recipe
for disaster? Microbial Ecology in Health and Disease, 11, 194-7.
Grupo de Ciencia Independiente. Op. cit. Captulo 9. y pg. 33.
Ver tambin: Government of Norway. Op. cit. pg. 26.
[35] Silvia Ribeiro. Transgnicos: un asalto a la salud y al medio ambiente. Conferencia
sobre transgnicos organizada por Accin por la Biodiversidad con motivo de la
presentacin del sitio de Biodiversidad en Amrica Latina. Abril 2000
[36] FUENTE: Grupo de Cientficos Independientes. En defensa de un mundo sustentable
sin transgnicos
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Las plantas transgnicas
Jaime Padilla
Panacea o amenaza?
Cultivos que producen su propio insecticida, jitomates que conservan su frescura y
sabor durante varias semanas, capullos donde crece algodn de colores, son algunos
ejemplos de lo que la biotecnologa ha logrado a travs de las llamadas plantas
transgnicas, un campo de investigacin y desarrollo tan fascinante como polmico.
Las plantas transgnicas forman parte del grupo de los llamados organismos modificados
genticamente y son el resultado del avance de las tcnicas de la biologa experimental, as
como de la bsqueda de soluciones a diversos problemas de la produccin agroindustrial.
Muchos de los conceptos y procedimientos necesarios para obtenerlas se desarrollaron
durante los ltimos veinte aos; sin embargo, sus aplicaciones comerciales slo pudieron
ser financiadas por las grandes compaas que hoy dominan el mercado de la
agrobiotecnologa.
Lo que distingue a las plantas transgnicas es que poseen una o ms caractersticas que no
fueron heredadas de sus antecesores. En cada una de sus clulas llevan genes "aadidos"
artificialmente, es decir, fragmentos adicionales de cido desoxirribonucleico (ADN)
provenientes de otra especie de planta, un virus, una bacteria o un hongo; estos genes
contribuyen a producir nuevas sustancias, a modificar el ritmo del desarrollo de la planta o,
bien, a aumentar su capacidad de defensa contra factores adversos.
El inters en el desarrollo de plantas transgnicas es el de mejorar la calidad y
productividad de los cultivos; adems, estas plantas constituyen una poderosa herramienta
de investigacin.
La ensalada transgnica
El aspecto de una planta transgnica no es, en general, sorprendente; no se trata de
calabazas gigantes, ni de limones con formas extraas, ni papas que saben a jitomate. A
primera vista, una planta transgnica es semejante a las que no han sido transformadas. El
cambio lo llevan en su interior y ste s es asombroso: ya es posible adquirir semillas para
cultivar plantas de varias especies que producen un bioinsecticida (cultivos Bt), lo que ha
reducido significativamente la aplicacin de pesticidas qumicos; otras plantas son
resistentes a un tipo de herbicida, lo cual permite que el combate de malezas o "malas
yerbas" sea ms efectivo pues los cultivos no resultan daados. En particular, destaca una
variedad de jitomate diseada para tener una maduracin retrasada en sus frutos que hace
posible que stos permanezcan ms tiempo frescos en color, textura y sabor. En algunos
pases existen ya en el mercado productos derivados de plantas transgnicas de soya,
algodn, papa, maz y jitomate, principalmente. Y quiz pronto se sumen otros a la lista;
actualmente se realizan pruebas de campo y de tipo sanitario de variedades de calabacita
que pueden evitar el ataque de ciertos virus, de oleaginosas como la colza (canola), que
contienen una proporcin ms saludable para el consumidor de aceites en sus semillas, y
tambin de papayas y otros frutales que pueden tolerar el aluminio txico de suelos cidos
y absorben mejor el fsforo disponible. Se investiga, adems, la posibilidad de desarrollar
plantas que puedan ser vehculos de vacunacin: se trata de que la propia planta produzca la
vacuna y sta sea administrada con el alimento mismo, digamos un pltano; otras
posibilidades son plantas que produzcan anticuerpos, diversos frmacos e incluso plsticos
biodegradables.
Una muestra del potencial comercial de las plantas transgnicas es el hecho de que en los
Estados Unidos se estn probando actualmente cultivos de este tipo usando casi 100 genes
distintos, introducidos en por lo menos 35 especies vegetales diferentes.
La modificacin gentica
De dnde surge una planta transgnica? Para conocer la respuesta es preciso recordar que
los genes son partes o regiones definidas del ADN, esa larga molcula informativa que
poseemos todos los seres vivos nuestro genoma y que est formada por combinaciones
enormes de cuatro "letras" moleculares denominadas bases nitrogenadas. Cada gene
contiene una instruccin especfica para la fabricacin de una protena, la cual se"dobla" en
una forma caracterstica para funcionar ya sea como enzima, fibra muscular, hormona o
toxina. As, cada protena participa en alguna parte de las numerosas estructuras y
actividades de la clula. Normalmente conocemos la funcin de los genes a travs de la
protena que codifican (y viceversa). En aos recientes, ha crecido el inters por conocer
mejor cules son los genes importantes para el crecimiento, la nutricin y aqullos
relacionados con la susceptibilidad a las enfermedades o la resistencia a los parsitos, para
poder incidir en los factores que hacen que las plantas que cultivamos sean productivas,
saludables y ms resistentes, o que aumenten su valor nutricional.
La idea central de la modificacin gentica, en este caso de la creacin de plantas
transgnicas, es que si un gene tiene influencia directa en alguna propiedad de un
organismo determinado, es muy posible que el mismo gene afecte esa propiedad en otros
organismos. Y esto se ha comprobado: la adicin de genes especficos en varios organismos
produce gracias a la protena que estos genes originan algunos cambios significativos,
heredables y frecuentemente tiles.
En el caso particular de las plantas, como se pueden regenerar plantas completas a partir de
clulas individuales o grupos de ellas, una clula a la que se le ha insertado un gene de otro
organismo puede dar origen a plantas completas con copias del gene adicional en el tallo,
las hojas, la raz, las flores o el fruto.
La ingeniera gentica de plantas para usos agrcolas se nutre tambin de estrategias
basadas en el conocimiento del modo en que varios organismos aprovechan su medio
ambiente. Se sabe que diversos patgenos tienen formas de evitar la accin de sus propias
toxinas o que muchos insectos tiene enemigos que los atacan de modo muy especfico.
Como existen genes involucrados en este tipo de capacidades, su insercin en el ADN de
las plantas puede darle a stas formas especiales de tolerancia o defensa ante plagas y
enfermedades. Por ejemplo, existe un grupo de bacterias del suelo (Bacillus thuringensis),
que produce una protena insecticida que no es txica a muchas especies tiles. Durante
casi dos dcadas, extractos de este organismo se han rociado en los cultivos para
protegerlos, pero hace cuatro o cinco aos se logr introducir en diversas especies de
plantas el gene bacteriano responsable de la toxina, de modo que ahora ellas mismas
producen el insecticida.
Los riesgos y la polmica
En la aplicacin comercial de las plantas transgnicas se han considerado varios riesgos
potenciales que pudieran reducir su efectividad o, lo que es peor, que generen problemas de
salud, agronmicos o ecolgicos en el futuro.
En primer lugar, la posibilidad de que los procesos de transformacin y regeneracin de las
plantas produzcan en ellas alteraciones no deseadas (por ejemplo en su tamao, coloracin
o rendimiento) se descarta por medio de pruebas que se realizan en invernaderos y en el
campo. Sin embargo, es posible que se presenten efectos en el ambiente en una extensin o
en un plazo ms largos. Al reproducirse las plantas transgnicas, su polen puede contribuir
a que los transgenes sean diseminados en otras plantas compatibles (de la misma especie
pero de distinta variedad), en las especies silvestres (que a veces son malezas) o en especies
ancestrales de las formas cultivadas, generando problemas ecolgicos, comerciales y
legales. ste es todava un aspecto que debe evaluarse, considerando el tipo de
reproduccin de las especies en cuestin. En Mxico existe preocupacin por el maz y
otros cultivos (jitomate, chile, calabaza), ya que nuestro pas es fuente primordial de
riqueza en biodiversidad de tales especies.
Se considera tambin que las variedades transgnicas diseadas para producir nuevas
toxinas contra plagas (por ejemplo, el algodn Bt) podran tener efectos nocivos en
organismos benficos como abejas y catarinas, o bien, que esas toxinas se acumulen en las
cadenas alimenticias e incluso promuevan la resistencia de las plagas. Se han planteado ya
diversas estrategias para el manejo agrcola y una reglamentacin que disminuyan algunos
de estos riesgos. Una de esas estrategias, por ejemplo, es destinar una parte del terreno de
cultivo a la siembra de plantas no transgnicas, a fin de conservar el equilibrio en la
poblacin de plagas y evitar que aquellas que desarrollen resistencia a la toxina se
multipliquen.
Otra preocupacin importante se refiere a la posibilidad de un impacto negativo en la
nutricin y la salud humanas; este riesgo es muy bajo dadas las pruebas y controles
sanitarios a los que se somete cualquier producto nuevo destinado al consumo humano. Un
punto ms de la discusin es el derecho, tanto de los consumidores como de cada nacin, a
comprar o no productos transgnicos; para ejercer este derecho es preciso que los productos
se comercialicen por separado, no mezclados junto con los convencionales, y que sean
fcilmente identificables. En este sentido, hay posturas encontradas entre los Estados
Unidos, que se oponen a etiquetar sus productos, y sus socios de la Unin Europea, que
exigen el etiquetado.
La situacin se ha complicado, adems, por la necesidad de que la regulacin de diversos
aspectos sobre el uso de los productos derivados de plantas transgnicas a nivel mundial sea
compatible con los acuerdos internacionales de comercio.
Hasta el momento prevalece una falta de consenso entre los pases sobre cmo regular la
produccin, distribucin y venta no slo de plantas transgnicas y sus derivados, tambin
de otros organismos modificados genticamente. Un esfuerzo importante pero que no
resolvi la cuestin fue la reunin mundial celebrada el pasado mes de febrero en
Cartagena de Indias, Colombia, convocada para aprobar el llamado Protocolo de
Bioseguridad.
Desde el punto de vista sanitario, se ha constatado que las variedades transgnicas ya
comercializadas no son distintas de las convencionales; otras estn todava pendientes de
aprobacin. Con respecto a los efectos en el ambiente, hay cierto acuerdo en que es
necesaria ms investigacin, tanto de las empresas de agrobiotecnologa como de
instituciones acadmicas y organismos pblicos.
De cualquier manera, la perspectiva de una agricultura complementada con el cultivo de
plantas transgnicas es an muy promisoria y una de nuestras mejores opciones para
satisfacer la demanda de alimentos de una poblacin humana en continuo crecimiento.
Herramientas de investigacin
En el Instituto de Biotecnologa de la UNAM se realizan investigaciones sobre la
localizacin, estructura y funcin de varios genes vegetales. Para ello se utilizan
frecuentemente plantas transgnicas como una herramienta experimental que permite
estudiar ms directamente la accin de algunos genes. Entre otros, aquellos que inciden en
la capacidad de asociacin con otros organismos, la tolerancia a la sequa, el desarrollo de
races, la sntesis de pigmentos y las respuestas a los daos que sufre la planta.
Normalmente se utilizan especies de fcil transformacin y regeneracin como el tabaco, la
leguminosa Lotus o bien, una plantita de la familia de las crucferas llamada Arabidopsis
thaliana. Estas plantas deben cultivarse en condiciones controladas, es decir, cmaras de
crecimiento donde se determina de antemano la temperatura, la cantidad de luz y la
duracin del ciclo iluminacin-oscuridad. Otras plantas como el frijol o el maz, por su
tamao, se cultivan en invernaderos, donde estn sujetas a cambios ms parecidos a los que
tendran en el campo. En cualquier caso, esto permite desarrollar muchas de ellas de
manera aislada, hasta que producen flores y semillas.
Tambin se busca localizar y "etiquetar" otros genes con efectos en el metabolismo, el
desarrollo y la interaccin con el ambiente utilizando tcnicas de "barrido genmico"
(genome scanning); esta labor puede contribuir a conocer y preservar mejor nuestra
diversidad biolgica y a generar variedades de diversos cultivos adaptados a nuestros
recursos y necesidades.
Jaime Padilla es bilogo e investigador-docente. Trabaja en el Instituto de Biotecnologa de
la UNAM y coordina el rea de Bioqumica y Biologa Molecular en la Facultad de
Ciencias de la Universidad Autnoma de Morelos.
4444444444444
Revista de Proteccin Vegetal
versin On-line ISSN 2224-4697
Rev. Proteccin Veg. v.22 n.2 La Habana Mayo-ago. 2007

ARTCULO RESEA


ESTRATEGIAS DE INGENIERA GENTICA PARA LA
OBTENCIN DE PLANTAS RANSGNICAS RESISTENTES A
GEMINIVIRUS. EXPERIENCIA DEL CENSA

STRATEGIES OF GENETIC ENGINEERING FOR THE OBTAINMENT
OF TRANSGENIC PLANTS RESISTANT TO GEMINIVIRUSES.
EXPERIENCE AT CENSA
Madelaine L. Quiones*, A. Vega**, Yamila Martnez* y E. Rodrguez***
* Grupo de Fitopatologa, Direccin de Proteccin de Plantas y ** Grupo de Virologa
Animal, Direccin de Microbiologa. Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria (CENSA).
Apartado 10, San Jos de las Lajas, La Habana. Cuba. Correo electrnico:
madeqp@censa.edu.cu; ***Facultad de Ciencias. Universidad de Mlaga, Espaa.


RESUMEN
Los begomovirus constituyen el principal problema para la produccin del cultivo del
tomate (Lycopersicon esculentum Mill.) en la mayora de las regiones tropicales y
subtropicales, causando prdidas de un 100% del rendimiento. Para el control de los
mismos se han aplicado varias estrategias convencionales de lucha, las que prometen
obtener resultados alentadores a largo plazo. La aplicacin de la transgenesis en
plantas para conferir resistencia a virus hace de esta alternativa una herramienta de
gran importancia para el desarrollo de una agricultura ms sostenible. Entre las
estrategias ms utilizadas se encuentran: la resistencia conferida por la sobreexpresin
del gen de la protena de la cpsida viral (CP), uso de cidos nucleicos defectivos
interferentes, expresin de los ARNs de genes de inters utilizando la expresin de
ARNs antisentido, as como de pequeos fragmentos de ARN viral como inductores del
silenciamiento gnico post-transcripcional. En Cuba, se han identificado tres
begomovirus afectando este cultivo, el Virus del Encrespamiento Amarillo de la Hoja
del Tomate (TYLCV), Tano Moteado del Tomate (ToMoTV) y Mosaico Habana del
Tomate (ToMHV), pero el TYLCV ha sido el de mayor diseminacin e incidencia. Dado
el impacto que conllevan las prdidas ocasionadas por los geminivirus y el aporte de la
ingeniera genticapara su control, el presente artculo refiere aspectos sobre las
principales estrategias desarrolladas para la obtencin de plantas transgnicas
resistentes a estos, el impacto de esta tecnologa en la agricultura actual y los
resultados especficos obtenidos en el CENSA.
Palabras clave: ingeniera gentica; plantas transgnicas; resistencia derivada del
patgeno; geminivirus.

ABSTRACT
Begomoviruses constitute the principal problem for the production of tomato crop
(Lycopersicon esculentum Mill.) in tropical and subtropical regions, causing yield
damages of 100%. Conventional strategies for the control of these viruses which
promise to obtain long term results have been developed. The application of
trangenesis in plants for conferring resistance to virus is a tool of great importance for
the development of a more sustainable agriculture. Among the main strategies
developed are: resistance by the over expression of the coat protein (CP), use of
interfering defective nucleic acids, expression of RNAs from genes of interest, as well
as the use of antisense RNAs and short RNAs as inductors of post-transcriptional gene
silencing. In Cuba, three begomoviruses have been identified in tomato crops: Tomato
Yellow Leaf Curl Virus (TYLCV), Tomato Mosaic Havana Virus (ToMHV) and Tano
Tomato Mottle Virus (TToMoV), but TYLCV has had the greatest incidence and
dissemination. Due to the impact on damages caused by geminiviruses and the role
played by the genetic engineering in their control, the present article reviews the
aspect related to the main strategies developed for obtainment of transgenic plants
resistant to geminiviruses, the impact of this technology in the current agriculture and
the specific results obtained at CENSA.
Key words: genetic engineering; transgenic plants; pathogen-derived resistance;
geminiviruses.



INTRODUCCIN
Las enfermedades virales causan prdidas significativas en todos los cultivos de
importancia econmica, que estas afectan. Las mismas provocan un impacto negativo
en la agricultura mundial, por lo que durante muchos siglos los agrnomos y
fitopatlogos han realizado un considerable esfuerzo para controlar las mismas. Su
control se basa fundamentalmente, en la deteccin a tiempo de la enfermedad para
evitar el establecimiento y diseminacin de sus agentes causales. En este sentido, la
prevencin mediante la evaluacin frecuente de los semilleros y el uso de variedades
con altos niveles de tolerancia o resistencia a virus constituyen los elementos de mayor
importancia para su control. Para la prevencin de estos patgenos se hace necesario
el uso de un grupo de medidas de manejo integrado, que comprenden, desde la
aplicacin de prcticas culturales tradicionales, hasta la lucha contra el vector y otras
posibles fuentes de virus, as como, la aplicacin de nuevas tecnologas de avanzada
que permitan de conjunto con las tcnicas tradicionales realizar un control ms
eficiente de estas entidades patgenas (36).
Los geminivirus causan prdidas devastadoras en varios cultivos de importancia
econmica, particularmente en los pases tropicales y subtropicales (25,34). Estos se
caracterizan por presentar partculas isomtricas geminadas (del latn, gemini: dobles),
variando su tamao entre 30-36nm de largo y 18-20nm de ancho, teniendo como
principales vectores, la mosca blanca y diferentes especies de saltahojas (Homoptera:
Cicadellidae), adems de algunas chinches de los rboles (Membraceae). Estos virus
integran la segunda familia ms extensa de virus de plantas y est compuesta por
cuatro gneros: Mastrevirus, Curtovirus, Topocuvirus y Begomovirus que se distinguen
por su vector, gama de hospedantes y caractersticas de su genoma. El genoma viral
est compuesto por una cadena sencilla de ADN circular, de aproximadamente 2.7-2.8
Kb, que se presenta en algunos miembros como un solo componente (genoma
monopartito) y en otros, como dos componentes (genoma bipartito). La mayora de los
begomovirus tienen dos componentes genmicos el ADN-A y ADN-B, ambos esenciales
para la infectividad. El ADN-A presenta seis genes: Ac1 codifica para una protena
esencial para la replicacin viral (Rep) en asociacin con la ADN polimerasa del
hospedante, Ac2 codifica una protena activadora de la transcripcin (TrAP), Ac3
codifica una protena potenciadora de la replicacin (REn), Av1 y Av2 codifican la
protenas de la cpsida y la protena de pre-cpsida, respectivamente. La funcin del
gene Ac4 aun no est completamente esclarecida. En el componente B se localizan los
genes Bv1 y Bc1 que codifican protenas relacionadas con el transporte nuclear y el
movimiento, respectivamente. A diferencia los begomovirus monopartitas presentan
un nico componente genmico donde se localizan todos los genes esenciales para la
replicacin, transcripcin, encapsidacin y movimiento viral (43).
Tres begomovirus se han identificado en el cultivo del tomate (Lycopersicon
esculentum Mill.) en el pas: Virus del Encrespamiento Amarillo de la Hoja (de las
siglas en ingls TYLCV) (22), Mosaico Habana (ToMHV) (23) y Moteado Tano del
Tomate (ToMoTV) (37). La alta incidencia del TYLCV constituye el principal problema
para la produccin de tomate en muchos pases (46). Cuba no es una excepcin,
donde se ha podido cuantificar prdidas desde el 40-100% en campos comerciales de
tomate, adems de haberse informado en los ltimos aos su presencia en nuevos
hospedantes de importancia econmica, tales como pimiento (34) frijol (26) y calabaza
(24).
Antes del advenimiento de la ingeniera gentica, las metodologas de mejoramiento
tradicional fueron aplicadas al desarrollo de plantas resistentes a virus de cultivos
importantes agronmicamente. En adicin, tcnicas estndares de fitopatologa, que
incluyen cuarentena, erradicacin, rotacin de cultivos y uso de semilla certificada libre
de virus se han utilizado como herramientas de valor para el control de enfermedades
virales.
Para el caso especfico de los geminivirus, se han aplicado mtodos de control
tradicionales y de nueva generacin, obtenindose resultados alentadores en muchos
casos (6,16,20,27,29). Estrategias no convencionales son desarrolladas en la
actualidad en muchos laboratorios del mundo. Los avances en el campo de la biologa
molecular y la ingeniera gentica, han permitido desde hace ms de una dcada, la
obtencin de plantas transformadas que portan informacin gentica fornea y les
confiere resistencia a virus (6,10, 27,30).
Varios mtodos que emplean el uso de la ingeniera gentica han sido evaluados y
demostrados satisfactoriamente para la obtencin de plantas trangnicas resistentes a
geminivirus (42). Entre los ms relevantes se pueden mencionar, la sobreexpresin en
plantas de genes virales (gen que codifica para la protena de la cpsida cp) (4), uso
de cidos nucleicos defectivos interferentes (41) y la expresin de los ARN de genes de
inters (rep, AV2) utilizando construcciones antisentido (6,30,31,32,33), as como un
pequeo fragmento del ARN viral que desencadena el denominado mecanismo de
silenciamiento gnico post-transcripcional (de las siglas en ingls PTGS) (29,31).
En este sentido, la aplicacin de estas estrategias han posibilitado en gran medida
apoyar el control de estos patgenos de inters y obtener en menor tiempo; y de
forma ms especfica variedades resistentes a geminivirus, cuyo proceso reduce a la
mitad el tiempo necesario destinado a obtener una variedad mejorada por la va
clsica. No obstante, a pesar del desarrollo alcanzado, la aplicacin e introduccin de
esta tecnologa para obtener plantas con los caracteres deseados, an contina siendo
un tema de gran debate a nivel internacional. Los riesgos asociados con la liberacin
de las plantas al medio ambiente natural que pudiera traer consigo el escape de los
transgenes y la introgresin de estos en el pool de genes silvestres, el impacto del
producto de los transgenes sobre otros organismos y el ecosistema parecen ser los
principales obstculos, por los cuales an esta tecnologa no ha logrado una aceptacin
pblica adecuada y una aprobacin regulatoria a nivel mundial (12).
En Cuba, desde hace algunos aos el Centro de Ingeniera Gentica y Biotecnologa
(CIGB) trabaja en la obtencin de plantas transgnicas con resistencia a diferentes
plagas y enfermedades que afectan a las plantas, as como el uso de plantas como
biofbricas de enzimas de uso industrial, productos biofarmacuticos u otros
obteniendo resultados novedosos en este campo. En el caso especfico del Centro
Nacional de Sanidad Agropecuaria (CENSA), se trabaj en la obtencin especfica de
vectores que contienen construcciones genticas para expresar el gene c1 que codifica
para la protena de la replicacin del TYLCV y su expresin transitoria en protoplastos
obtenidos a partir de plantas de Nicotiana bentahmiana (35). Este artculo resea tiene
como objetivo dar una breve panormica sobre las diferentes estrategias desarrolladas
para la obtencin de plantas transgnicas resistentes a geminivirus a nivel mundial, el
impacto de esta tecnologa en la agricultura actual y los resultados especficos
obtenidos en el CENSA.
Estrategias desarrolladas para el control de enfermedades causadas por
geminivirus mediante tcnicas de ingeniera gentica.
Sanford y Johnston (39), propusieron el concepto de resistencia derivada del patgeno
como va alternativa a la creacin de genes de resistencia. Ellos sugirieron que los
genes de los patgenos, cuando eran expresados por un organismo "hospedante
potencial" podran conllevar a que el mismo se hiciera resistente al patgeno. Teniendo
en cuenta esta teora, en la actualidad las tcnicas de ingeniera gentica que
involucran el uso de genes derivados del patgeno para el control de virus estn
siendo de amplia aplicacin (27,32).
Diversas estrategias se han diseado y obtenido con resultados altamente
satisfactorios. Entre las principales a destacar se encuentran: la resistencia conferida
por la sobreexpresin en plantas de genes virales (CP) (4), la cual muestra que la
sobreexpresin de un gen desencadena en estas plantas un mecanismo de
competencia por la maquinaria celular y las hace mucho ms resistentes a la infeccin
contra el virus del cual se obtuvo la secuencia de esta protena. Otra estrategia se basa
en la resistencia mediada por el uso de molculas defectivas (41) y establece que los
cidos nucleicos defectivos interferentes (DI) son mutantes de delecin de las
secuencias genmicas virales, las cuales dependen de sus parentales para la
replicacin y que al igual que los ARN satlites, son capaces de aminorar los sntomas
producidos e interferir en la replicacin del virus.
Una de las estrategias ms trabajadas en la actualidad lo constituye el uso de
fragmentos del ARN viral, en el caso especfico de los geminivirus se trabaja con la
resistencia mediada por la replicasa viral, o sea, uso del gen c1 que codifica para la
protena Rep con el propsito de interferir con la replicacin viral y as conferir
resistencia. La interferencia con la accin de la protena Rep representa una de las
opciones ms promisorias para la resistencia derivada del patgeno contra las
enfermedades causadas por geminivirus. Dos vas son empleadas para su uso: la
primera est relacionada con la resistencia mediada por la expresin del gen c1
ubicado en antisentido en una construccin gentica (6) y la segunda involucra el
silenciamiento gnico post-transcripcional (de las siglas en ingls PTGS) utilizando
pequeos fragmentos de ARN interferentes (ARNsi) que se basan en el silenciamiento
gnico dependiente de homologa (29,31,32).
- Resistencia conferida por la sobreexpresin de genes virales (protena de la cpsida).
La resistencia mediada por la protena de la cpsida es uno de los primeros mtodos
que se aplic al control de muchos virus de plantas (45) y es la fuente de resistencia
ms frecuente derivada del patgeno. Las plantas transgnicas que expresan el gen de
la cubierta proteica viral, son mucho ms resistentes a la infeccin contra el virus del
cual se obtuvo la secuencia de la protena de la cpsida (PC). El primer reporte de este
tipo de resistencia se obtuvo en 1986, mediante la introduccin del gen de la PC del
Virus del Mosaico del Tabaco (TMV) en el genoma de las plantas de tabaco (1).
Siguiendo este primer ejemplo, la resistencia mediada por la protena de la cpsida ha
sido efectiva al conferir resistencia contra al menos 30 virus de plantas. Sin embargo,
el mecanismo responsable de esta resistencia en el hospedante aun no est bien
entendido en todos los casos.
Se han postulado dos teoras que explican la resistencia mediada por la protena de la
cpsida: la primera plantea que la PC impide el desnudamiento del ARN viral tan
pronto como los capsmeros del virus son removidos, de forma que el desensamblaje
del virus no ocurrir o estar retardado, si los niveles de la PC estn por encima de los
mximos normales (38). La otra teora seala que la PC se une a un receptor celular,
que permite la entrada y/o el desensamblaje del virus. Al unirse al receptor queda
bloqueado el sitio de entrada del virus a la clula y eliminada tambin la posibilidad de
que se formen complejos para el desensamblaje.
En el caso especfico de los geminivirus un ejemplo de esta estrategia lo muestra la
sobreexpresin en plantas de tomate del gen v1 que codifica para la PC de TYLCV. El
mismo se situ bajo el control transcripcional del promotor 35S del Virus del Mosaico
de la Coliflor (CaMV) y se clon en vectores Ti de Agrobacterium, luego se
transformaron plantas de tomates sensibles a la infeccin por el TYLCV. Las plantas
transgnicas expresando el gen v1 se inocularon con TYLCV utilizando moscas blancas
alimentadas sobre plantas infectadas con el virus, estas respondieron con retardo en la
aparicin de los sntomas y se recuperaron de la enfermedad con un incremento de la
resistencia en inoculaciones repetidas. Todas las plantas transformadas que se
recuperaron expresaron la PC del TYLCV (19).
Trabajos realizados que involucran el uso de este mtodo aplicado al control de otros
virus de plantas sugieren la posibilidad de ocurrencia de dos posibles riesgos que
parecen estar asociados a esta alternativa: la encapsidacin de genes heterlogos y la
recombinacin. Esto fue demostrado al infectar con el Virus de las Venas Necrticas
Amarillas de la Remolacha (BNYVV), plantas transgnicas que expresaban el gen de la
CP del Virus de la Sharka o Plum Pox Virus (PPV) (21). Sin embargo, en el evento de
encapsidacin heterloga el cambio en la progenie del virus es limitado a una
generacin porque la informacin gentica del virus permanece intacta. En contraste,
la recombinacin entre los genomas virales y los transgenes conteniendo protenas de
cpsida resultaron en cambios permanentes en la constitucin gentica de la progenie
viral (14).
- Resistencia mediada por cidos nucleicos defectivos interferentes (DI).
Los cidos nucleicos interferentes defectivos (DI), son mutantes de delecin de
secuencias genmicas virales, que dependen de sus virus parentales para su
replicacin. Al igual que los ARN satlites, son capaces de aminorar los sntomas
producidos por el virus al cual se encuentra asociado y de interferir en su replicacin.
Frishchmuth y Stanley (15) descubrieron un brillante acercamiento a la resistencia de
geminivirus, al introducir un clon dimrico que contiene el genoma B (ADN-B) del Virus
del Mosaico Africano de la Yuca (ACMV) en el genoma de plantas de N. benthamiana
utilizando tcnicas de agroinoculacin. En este experimento las plantas transgnicas
desarrollaron sntomas atenuados al compararlos con las plantas no transformadas
utilizadas como controles. La transmisin sucesiva de savia entre plantas transgnicas
evidenci una disminucin en los niveles de ADN viral y acrecent la atenuacin de los
sntomas y el nmero de plantas asintomticas con muy bajo contenido de ADN viral,
lo cual demostr que el efecto del ADN DI en la proliferacin del virus es acumulativo.
La infeccin por el Virus del Encrespamiento de la Remolacha (de las siglas en ingles
BCTV) est asociada con la sntesis de novo de una poblacin heterognea de ADNs
viral subgenmico. Otro ejemplo del uso de estas partculas interferentes se demostr
al agroinocular con BCTV plantas de N. benthamiana transformadas con una
construccin que contena una repeticin parcial de un ADN subgenmico y se observ
una disminucin de los sntomas tpicos a la infeccin (13). Esta disminucin en los
sntomas est asociada con la movilizacin del ADN subgenmico de la copia integrada.
En un intento por mejorar la resistencia, plantas de N. benthamiana se transformaron
con una construccin que contena un dmero parcial de un ADN subgenmico mucho
ms pequeo. Estas plantas no mostraron resistencia a pesar de que el ADN
subgenmico se moviliz del genoma del hospedante. Para un mejor entendimiento de
las bases del fenmeno de interferencia, ellos compararon la habilidad del BCTV de
replicarse y acumularse en discos de hoja de plantas transgnicas resistentes y no
resistentes. En estas, ambos ADNs subgenmicos interfirieron con la replicacin del
virus pero solo en las resistentes el ADN de interferencia suprimi eficientemente la
acumulacin viral (13).
- Resistencia mediada por el ARN viral.
Inicialmente se pens que las plantas transgnicas que expresaban las protenas
virales podran conferir proteccin contra el virus. En algunos estudios se ha
demostrado que la expresin de las protenas ha sido la responsable de la resistencia
al virus, pero en diversos casos tambin se ha demostrado que esta resistencia ocurre
a nivel del ARN (43).
Un mtodo de regulacin de genes en el organismo se realiza a travs del uso de
molculas de ARN complementarias las cuales son capaces de unirse al ARN transcripto
de genes especficos y de este modo previenen su traduccin. Los investigadores del
tema han desarrollado dos teoras que argumentan y demuestran la resistencia
obtenida en experimentos in vitro con vistas a obtener plantas altamente resistentes.
La primera relaciona la resistencia mediada por la expresin del gen c1 de los
geminivirus en direccin antisentido en una construccin gentica (6) y la segunda
est asociada con el PTGS mediado por un pequeo fragmento de ARN y se basa en el
silenciamiento gnico dependiente de homologa (29,31,32).
ARN antisentido
Secuencias antisentido apropiadas incorporadas en el genoma de la planta han
mostrado que estas bloquean la actividad de genes especficos, por lo que constituyen
otra variante para la obtencin de resistencia; a este ARN se le ha denominado ARN
antisentido o ARN mic (ARN complementario interfiriendo con el ARN mensajero). En
este caso se piensa que la resistencia conferida por el ARN antisentido est dada por
una interaccin entre el ARN viral y el ARN antisentido, el complejo que se forma
puede ser rpidamente degradado y el ARN viral estar incapacitado para la traduccin
(5).
Utilizando este basamento se han obtenido plantas transgnicas de tabaco que
contienen una construccin gentica que incluye una secuencia de ADN antisentido del
gen c1 del geminivirus del Mosaico Dorado del Tomate (TGMV); donde c1 codifica para
una protena absolutamente requerida para la replicacin del ADN de TGMV. Cuando
estas plantas se infectaron con el virus mediante agroinoculacin, la frecuencia de
desarrollo de sntomas se redujo significativamente en un nmero de lneas
antisentido, lo cual estuvo correlacionado con la abundancia de ARN antisentido
transcripto y con una reduccin en el ADN viral en los tejidos de hojas infectadas (9).
Bendahmane y Gronenborn (6), informaron la obtencin de plantas transgnicas
resistentes a un aislado de TYLCV empleando casetes de expresin que contenan
ARNs antisentido. El blanco del ARN antisentido es una porcin del ARN mensajero de
la protena Rep. Las plantas transgnicas de N. benthamiana obtenidas expresando el
ARN antisentido de c1 mostraron resistencia a la infeccin por el TYLCV. Algunas de las
lneas resistentes fueron asintomticas y la replicacin de TYLCV casi completamente
suprimida. La resistencia mediada por transgenes demostr ser efectiva en al menos
dos generaciones de la progenie. As mismo se ha informado recientemente por otros
autores el uso de una construccin antisentido conteniendo el gen rep del Virus del
Encrespamiento de las Hojas del Tomate (ToLC) (30,33).
A pesar de los altos niveles de resistencia obtenidos utilizando esta variante, dos
problemas principales o desventajas son atribuidos al mismo, el primero relacionado
con un sustancial exceso de ARN antisentido que requiere frecuentemente una efectiva
reduccin de los niveles de ARNm blanco y el otro problema es que este mtodo solo
es factible de aplicarlo a virus que se replican en el ncleo de las clulas y no para
virus que se encuentran en el citoplasma ya que las molculas antisentidos
transcriptas son producidos en el ncleo. En el caso de los geminivirus donde el ADN
viral se encuentra abundante en el ncleo esta estrategia es de mucho valor (17).
Silenciamiento gnico postranscripcional (PTGS)
El PTGS es un proceso altamente especfico en el cual el ARN con homologa al ARN
transgnico inductor es especficamente degradado en el citoplasma. Diversos
mecanismos se han propuesto para explicar como este sistema de degradacin del
ARN secuencia-especfica podra ser activado, esto incluye el aumento de los niveles
del ARNm del transgen por encima del "umbral" requerido, lo que trae como
consecuencia la induccin del sistema de degradacin, la metilacin de los transgenes,
lo que resulta en una produccin de ARNs aberrantes prematuros para iniciar el
mecanismo de degradacin y la formacin de los ARNs de doble cadena que son
capaces de inducir una degradacin directa de lo ARNs. Un modelo de cuatro etapas se
ha propuesto para esclarecer la va por la cual ocurre el silenciamiento del ARN (43).
Evidencias genticas recientes muestran la posibilidad de que la ruta del silenciamiento
del ARN est ramificada y que las ramas que se forman convergen en la produccin de
los ARNs de doble cadena (ARNdc). Estos ARNdc pueden ser producidos por las ARN
polimerasas dependientes de ARN codificadas por el hospedante o bien codificadas por
el virus, por la transcripcin de promotores convergentes, o a partir de loci
reorganizados. Las largas molculas de ARNdc son procesadas en pequeas molculas
de 21-25 nucletidos, denominadas ARN interferentes (de las siglas en ingls siRNAs),
por una enzima endonucleasa ARNdc- especfica similar a la ARNasa III y denominada
DICER (43).
Los ARNs interferentes del ARN molde, con ambas cadenas sentido y antisentido son
incorporados en una endonucleasa multi-subunidad, denominado complejo del
silenciamiento inducido del ARN (de las siglas en ingles RISC) o complejo de
interferencia especfica del ARN, que es guiado a este ARN molde por apareamiento de
bases y por consiguiente ocurre el corte del ARN de secuencias similares, lo que trae
consigo la produccin del ARNdc (3,18,44). Los ARNs pequeos de interferencia no
solo se han encontrado y asociado con el PTGS en plantas. Un proceso similar
denominado ARN de interferencia (de las siglas en ingles RNAi) se ha determinado en
Caenorhabditis elegans y utilizado como marcador para el silenciamiento gnico.
Tambin se han encontrado evidencias de que los virus pueden a la vez ser blancos e
inductores del PTGS y pueden conllevar al PTGS, lo que sugiere que el PTGS acta
como un mecanismo de defensa natural de las plantas ante la invasin de ARN virales
o secuencias de ADN tales como elementos transponibles o el ADN-T de Agrobacterium
(43).
Los resultados obtenidos a partir de la recuperacin natural de plantas infectadas con
la cepa de Camern del Virus del Mosaico Africano de la Yuca (ACMV-CM) y la
correlacin encontrada entre esta respuesta natural y los altos niveles de ARN
citoplsmasticos pequeos e interferentes (ARNsi) apoyan el mecanismo del
silenciamiento gnico post-transcripcional como una estrategia de control efectiva para
los geminivirus (8). En los geminivirus, se ha demostrado el silenciamiento de un
transgen conteniendo el gen GUS puesto bajo la regulacin del promotor del TYLCV por
la infeccin de virus homlogos pero no de heterlogos. Este fenmeno ocurre debido
a la hipermetilacin de secuencias derivadas del promotor TYLCV.
Una estrategia de control basada en el PTGS fue demostrada cuando clulas de plantas
que fueron transfectadas simultneamente con ACMV (CM) y con un ARNsi sinttico
diseado como molde del gen Ac1 del virus mostr una reduccin en los niveles de
acumulacin viral del ARNm de Ac1 en ms del 90% y en el 70% del ADN viral,
comparado con los controles utilizados. Consecuentemente la expresin transgnica
del ARN de doble cadena del gen Ac1 revela una resistencia durable al Virus del
Encrespamiento de la Hoja del Algodn en tabaco (2) y al TYLCV en tomate (46).
Otro ejemplo concreto de este tipo de estrategia fue demostrado recientemente donde
se analiz el efecto de los ARNsi sobre la inhibicin de la expresin del gen de la
protena de la cpsida del TYLCV, donde se evidenci en las plantas transgnicas de
tomate la ausencia de sntomas tpicos de la enfermedad, an luego de siete semanas
de la inoculacin con el virus, mientras que las no transgnicas se infectaron a las dos
semanas postinoculacin, demostrndose la factibilidad de esta alternativa para
conferir resistencia a este virus (47).
Impacto de la transgnesis en plantas en la agricultura mundial
No es menos cierto que el crecimiento de la poblacin mundial tiende a la duplicacin
en los prximos 10 aos y que adems de satisfacer el aumento de la demanda de
alimentos como resultado de ese crecimiento, el incremento de la produccin de
alimentos tendr que satisfacer el aumento del consumo per cpita debido al
mejoramiento de la calidad de vida, calculndose que para el ao 2025 habr que
aumentar la produccin de alimentos en al menos 50% de la que actualmente se
produce. La conclusin inevitable derivada de esto es que para poder satisfacer la
demanda, la humanidad tendr que aumentar el rendimiento de las reas sembradas.
Adems este incremento tendr que ser el resultado del uso de menos tierra, agua y
menos plaguicidas, por lo que varios factores biticos y abiticos de estrs, as como
varias condiciones desfavorables de post-cosecha, tambin darn lugar a prdidas
significativas en las producciones agrcolas. Por lo tanto, se necesitar de variedades
de cultivos ms estables y con mejores rendimientos, as como mejores formas de
manejo con el propsito de aumentar la productividad y la sostenibilidad de los cultivos
(40).
A fin de enfrentar estos retos ser necesario disponer de nuevos conocimientos
derivados del avance cientfico ininterrumpido, el desarrollo de nuevas tecnologas
adecuadas y una amplia difusin de dichos conocimientos y tecnologas, as como la
capacidad de introducirlos y utilizarlos racionalmente en todo el mundo. En este
contexto es que el uso de nuevas tecnologas que al ser aplicadas junto a mtodos
tradicionales de mejoramiento y manejo de los cultivos cobra una importancia
primordial en la produccin sostenible de alimentos para la poblacin existente. La
biotecnologa de plantas podra contribuir sustancialmente al rescate de las cosechas
perdidas por el ataque de plagas y enfermedades, as como en el mejoramiento de la
produccin y calidad de los productos obtenidos.
La necesidad urgente de mtodos sustentables para la produccin agrcola del mundo
con el objetivo de satisfacer las demandas de una poblacin mundial en constante
crecimiento hace de la tecnologa del uso de plantas transgnicas o de los tambin
denominados, organismos genticamente modificados (OGMs) en la agricultura; una
opcin de valor a tener en cuenta. Las plantas transgnicas con caracteres tan
primordiales como la resistencia a las plagas, enfermedades y herbicidas, son
sumamente importantes y necesarias cuando no se ha detectado resistencia inherente
en las especies locales. Por otra parte, estas poseen entre sus beneficios la mayor
flexibilidad para administrar el cultivo, menor dependencia de insecticidas qumicos,
mayores rendimientos, facilidad de cosecha y mayor proporcin de esta para su
comercializacin. Para el consumidor esto significa menor costo del alimento y ms
valor nutritivo en estos.
A pesar de los resultados demostrados en el uso de la transgnesis en plantas para
conferir resistencia a diversas plagas y enfermedades, as como para la expresin de
protenas de inters teraputico e industrial; y las ventajas que esta tecnologa podra
traer para el desarrollo biotecnolgico y socieconmico, no ha conseguido tener una
aceptacin favorable por el pblico. Los principales problemas estn relacionados con
preocupaciones intrnsecas sobre las plantas y los genes en s, as como
preocupaciones extrnsecas relacionadas con la salud de los consumidores, el medio
ambiente y la socioeconoma (28).
Como toda tecnologa nueva, la transgnesis enfrenta importantes desafos como
resultado de la percepcin del pblico en general, de tendencias ambientalistas y
econmicas, as como la predominancia de las compaas multinacionales en el
desarrollo y beneficios de esta tecnologa. Estudios realizados han identificado riesgos
potenciales inherentes a esta novedosa tecnologa, que incluye riesgos para la salud y
el medio ambiente. Este ltimo, se refiere especialmente a los riesgos potenciales que
pudieran atentar contra la biodiversidad. Aqu se han propuesto como riesgos, la
adquisicin por parte del cultivo de rasgos de "maleza", el desarrollo de resistencias en
las plagas y la dispersin o flujo del transgn. En cuanto a los riesgos potenciales para
el ambiente se encuentran el flujo e introgresin de genes. De todos los riesgos
potenciales atribuidos a los cultivos transgnicos, el flujo de genes y su impacto en la
biodiversidad, contina siendo estudiado y evaluado, especialmente en regiones o
pases que son centros de origen o centros de diversidad gentica.
El flujo vertical de cultivo a cultivo o a parientes silvestres es relevante. Este flujo
involucra la produccin de hbridos viables que expresan el transgn y con capacidad
de adaptacin en hbitats naturales o de cultivo. Hay que tener en cuenta que el flujo
de genes es una de las fuerzas del proceso de evolucin y domesticacin de los
cultivos y que no es extrao que algunos cultivos, ej. trigo, canola, han resultado de la
recombinacin de ms de un genoma. Para determinar el potencial del flujo de genes
en la agrobiodiversidad, cada cultivo debe ser analizado con respecto a los siguientes
factores: biologa reproductiva, modificacin gentica (naturaleza del transgn,
nmero de copias insertadas, expresin), dispersin del polen, flujo de genes de
cultivo a cultivo (hibridizacin-posibles consecuencias), definicin y estatus de la
planta silvestre o maleza, flujo de genes del cultivo a parientes silvestres
(compatibilidad y distribucin), hibridacin, posibles consecuencias del flujo. Entre los
factores que afectan la dispersin del polen y la polinizacin cruzada se encuentra:
tamao (rea) del cultivo fuente y receptor de polen, vectores de polen, factores
ambientales (clima, barreras biolgicas y fsicas), viabilidad del polen, grados de
alogamia en el cultivo, grado de sincronizacin en la floracin. En caso de que el flujo
de genes haya sido exitoso, tiene lugar entonces la hibridacin y la introgresin.
Han sido reportadas tasas de flujo de genes de un 1% entre cultivos y parientes
silvestres, pero puede llegar hasta 100% cuando el cultivo y los silvestres se
encuentran muy cercanos. En algunos casos, las poblaciones de especies silvestres
introgresadas han mostrado mayor diversidad gentica que aquellos que se encuentran
separados del cultivo. La introgresin por flujo de genes ha resultado ser importante
en la evolucin y domesticacin de una docena de especies estudiadas (11).
A pesar de los riesgos asociados al uso de esta tecnologa de avanzada es importante
sealar que la biotecnologa puede ofrecer un gran potencial para desarrollar una
agricultura ms compatible con el uso sostenible de los recursos naturales. Esto se
puede lograr conectando la conservacin y uso de la biodiversidad con el desarrollo
sostenible de la agricultura. La biotecnologa est contribuyendo a revelar en detalles y
precisin la estructura gentica de las plantas y de la biodiversidad, y este
conocimiento est contribuyendo a aumentar la productividad de reas intervenidas, a
reducir la contaminacin ambiental y agregar valor a la agrobiodiversidad.
Construccin de un vector quimrico conteniendo el gen c1 del TYLCV aislado
en Cuba y expresin transitoria en protoplastos de N. benthamiana.
Experiencia del CENSA.
En los laboratorios de Virologa Vegetal del CENSA y el de gentica de la Facultad de
Ciencias de la Universidad de Mlaga se construyeron los plsmidos que contienen los
genes virales de inters del TYLCV aislado y caracterizado en Cuba (35), los que fueron
utilizados para la construccin del vector que se emple en la transfeccin de clulas
de protoplastos de N. benthamiana y podr ser de utilidad en la generacin de plantas
transgnicas resistentes a este aislado viral posteriormente.
El vector (pTYCU11) obtenido (Fig. 1) est compuesto por una construccin gentica
que contiene un dmero del origen de replicacin del virus y un transgen integrado por
el gen c1 (en la orientacin antisentido) del virus TYLCV, bajo el control de las
secuencias: promotora del CaMV 35 S, secuencia ocs poly A y secuencia amplificadora
de la transcripcin del transgen (EN), as como un marcador para la seleccin, en este
caso un gen de resistencia a antibiticos (Kanamicina).

Los protoplastos se aislaron a partir de cinco hojas jvenes donde se obtuvo un
rendimiento de 10 X 10
6
protoplastos (7,35). Estos fueron tranfectados con la
construccin obtenida (pTYCU11) y la deteccin de la construccin insertada se realiz
mediante la hibridacin no radiactiva de cidos nucleicos tipo "dot-blot". Se emple
como sonda un fragmento del plsmido pJC2ENa que contiene el promotor 35S,
amplificador y la secuencia seal de terminacin de la transcripcin del gen ocs. El
fragmento se marc utilizando el juego de reactivos para marcaje no radiactivo
empleando la digoxigenina (DIG Nucleic Acid Detection Kit, Boehringer Mannheim), de
acuerdo a las instrucciones recomendadas por la casa comercial (35).
La hibridacin se realiz utilizando una fraccin de los ADN genmicos (125 ng)
obtenidos a las 24 y 96 horas post-inoculacin a partir de protoplastos transfectados y
no transfectados. Se utiliz como control positivo de esta deteccin el fragmento
utilizado como sonda (30 ng) (35). La deteccin mostr seales positivas en los ADN
extrados a las 24 y 96 horas a partir de los protoplastos transfectados (Fig. 2: Lneas
3 y 4); sin embargo, no se observ seal positiva en los ADN extrados a partir de
protoplastos no transfectados (Fig. 2, Lneas 1 y 2), lo cual evidencia que los
protoplastos fueron eficientemente transfectados mediante la metodologa utilizada y
que la misma puede ser de gran utilidad en los ensayos de expresin transitoria con
las construcciones que se obtengan por esta tecnologa.
El uso de dos orgenes de replicacin viral permite que al producirse la infeccin y
siempre que el virus sea capaz de expresar la protena del gen c1, sobrepasando la
inhibicin producida por el ARN antisentido se producir la formacin de partculas
extragnicas, a partir de la construccin genmica insertada. Estas partculas
contendrn una copia de la construccin gentica del ARN antisentido y se pondran en
marcha dos mecanismos adicionales para aumentar la resistencia, uno vinculado a la
competencia de las partculas al tener el mismo origen de replicacin que el virus por
la maquinaria de replicacin y el segundo la posibilidad de obtener mayor nivel de
expresin de los cassettes en clulas de la planta hospedante (Bejarano, 2000,
comunicacin personal).
Teniendo en cuenta lo anteriormente expuesto la construccin gentica pTYCU11
incrementar en clulas transformadas la expresin del gen c1 en la orientacin
antisentido, a travs del aumento del nmero de copias de la construccin gentica por
la presencia de las dos secuencias IR, por el control transcripcional bajo el promotor 35
S del CaMV y el amplificador contenido en este promotor el cual aumenta los niveles
de expresin, elementos que se han utilizado ampliamente en la ingeniera gentica de
plantas.
El montaje de la transfeccin de protoplastos de N. benthamiana con la construccin
pTYCU11, permiti la introduccin de esta metodologa en nuestro laboratorio para la
evaluacin de las construcciones genticas, con vistas a la posterior transformacin de
plantas y la obtencin de plantas transgnicas resistentes al aislado cubano de TYLCV.
Estos resultados permitirn continuar los trabajos de transformacin de plantas
siguiendo la estrategia de produccin de ARN antisentido, resultados prometedores se
han obtenido con la aplicacin de esta estrategia como alternativa al control de
enfermedades producidas por geminivirus en cultivos de inters econmico (6).
Conclusiones y perspectivas futuras
En la actualidad el desarrollo alcanzado por la biologa molecular y la ingeniera
gentica unido a la prctica de mtodos convencionales para el control de estas
enfermedades han permitido la obtencin de plantas transgnicas con alto potencial de
resistencia a enfermedades virales. Diversas estrategias se han diseado, entre las que
se encuentran, la resistencia conferida por la protena de la cpsida viral, resistencia
mediada por molculas defectivas y la mediada por el uso del ARN viral ya sea por del
ARN antisentido y por el denominado PTGS que interfieran con la replicacin viral, para
conferir resistencia. Esta ltima destacndose en la actualidad como una de las
opciones ms promisorias para la resistencia derivada del patgeno contra las
enfermedades causadas por geminivirus. De forma destacada, la tecnologa de
transformacin tiene un gran potencial de aplicacin en muchas reas de las ciencias
de las plantas, tanto bsicas como aplicadas. La introduccin de transgenes podra
facilitar nuevas alternativas en los campos de la gentica, la bioqumica y la fisiologa,
y estimular progresos en estos.
Los resultados alcanzados al transfectar protoplastos con la construccin pTYCU11
obtenida y la alta expresin de esta quimera en estos indican que la misma se replica
de forma eficiente en ellos, lo cual garantiza su posterior uso para la transformacin de
plantas y la consiguiente obtencin de plantas transgnicas de tomate y otros
hospedantes alternativos del virus, con alta resistencia a este virus.
Es una realidad que el advenimiento de los OGMs ofrece nuevas opciones en la
alimentacin y agricultura de los pases en desarrollo, pero en la actualidad tambin se
habla de la afectacin a la diversidad y ecosistemas naturales que podra conllevar un
uso desorganizado, desmedido y de lucro de esta tecnologa. Es importante destacar
que es necesario tener en cuenta los riesgos medioambientales potenciales y los
beneficios de esta alternativa en el momento de tomar decisiones sobre el uso de
OGMs. Las interacciones complejas que pueden ocurrir entre los OGMs y factores
medio ambientales necesitan de una fuerte capacidad cientfico-tcnica para evaluar y
manejar los riesgos que estos organismos pudieran conllevar. Por otra parte, es
necesario el establecimiento de un marco regulatorio internacional de bioseguridad
legislativa basado en el protocolo de Cartagena sobre la bioseguridad de la convencin
de Diversidad biolgica.
AGRADECIMIENTOS
Los autores de este artculo desean agradecer a la Comisin Interministerial de Ciencia
y Tecnologa de Espaa, por el financiamiento concedido para la ejecucin del proyecto
bilateral que permiti la obtencin de los resultados presentados.
REFERENCIAS
1. Abel PP, Nelson RS, De B, Hoffmann N, Rogers SG, Fraley RT, et al. Delay of disease
development in transgenic plants that express the tobacco mosaic virus coat protein
gene. Science. 1986;232(4751):738-743.
2. Asad S, Haris WAA, Bashir A, Zafar Y, Malik KA, Malik NN, et al. Transgenic tobacco
expressing geminiviral RNAs are resistant to the serious viral pathogen causing cotton
leaf curl disease. Arch Virol. 2003,148(12):2341-2352.
3. Baulcombe DC. RNA silencing. Curr Biol. 2002;12: R82-R84.
4. Baulcombe DC. Mechanisms of pathogen-derived resistance to viruses in transgenic
plants. The Plant Cell. 1996;8:1833-1844.
5. Bejarano ER, Lichtenstein, CP. Expresion of TGMV antisense RNA in transgenic
tobacco inhibits replication of BCTV but not ACMV geminiviruses. Plant Molecular
Biology. 1994;24:241-248.
6. Bendahmane M, Gronenborn B. Engineering resistance against tomato yellow leaf
curl virus (TYLCV) using antisense RNA. Plant Mol Biol. 1997;33(2):351-357.
7. Bilang R, Klti A, Shcrott M, Potrykus I. PEG- mediated direct gene transfer and
electroporation. Plant Molecular Biology Manual. 1994;A1:1-16.
8. Chepallan P, Vanitharani R, Fauquet CM. Short interfering RNA accumulation
correlates with host recovery in DNA virus-infected host and gene silencing target
specific viral sequences. J Virol. 2004;77:6785-6798.
9. Day A, Bejarano E, Buck K, Burrell M, Lichtenstein C. Expression of an antisense
viral gene in transgenic tobacco confers resistence to the DNA virus tomato golden
mosaic virus. Proc Natl Acad Sci. 1990;88:6721-6725.
10.Dempsey DMA, Silva HG, Klessig DF. Engineering disease and pest resistance in
plants. Trends in Microbiology. 1998;6(2):54-60.
11.Eastham K, Sweet J. Genetically modified organisms (GMOs): The significance of
gene flow through pollen transfer. European Environment Agency, Environment issue
report No. 28, Copenhagen; 2002. 75 p.
12.Frankenhuyzen KV, Beardmore T. Current status and environmental impact of
transgenic forest trees. Can J For Res. 2004;34(6):1163-1180.
13.Frischmuth

T, Engel M, Jeske H. Beet curly top virus DI DNA-mediated resistance is
linked to its size. Molecular Breeding. 1997;3(3):213-217.
14.Frischmuth T, Stanley J. Recombination between viral DNA and the transgenic coat
protein gene of African cassava mosaic geminivirus. Journal of General Virology.
1998;79:1265-1271.
15.Frischmuth T, Stanley J. Strategies for the control of geminivirus diseases.
Seminars in Virology. 1993;4:329-337.
16.Gmez O, Pion M, Martnez Y, Quiones M, Fonseca D, Laterrot H. Breeding for
resistance to begomoviruses in tropic- adapted tomato genotypes. Plant
Breeding. 2004;123(3): 275-279.
17.Hiatt W, Kramer M, Sheehy R. The application of antisense RNA to technology of
plants. Proc Nat Acad Sci. 1988;85:49-62.
18.Hutvagner G, Zamore PD. RNAi : nature abhors a double-strand. Curr Opin Genet
Develop. 2002;12:225-232.
19.Kunik T, Salomon R, Zamir D, Navot N, Zeidan M, Michelson I. Transgenic tomato
plants expressing the Tomato Yellow Leaf Curl Virus capsid protein are resistant to the
virus. Biotechnology. 1994,12:500-504.
20.Lapidot M, Friedmann M. Breeding for resistance to whitefly-transmitted
geminiviruses. Ann Appl Biol. 2002;140:109-127.
21.Maiss E, Koenig R, Lesemann DE. Heterologous encapsidation of viruses in
transgenic plants and in mixed infections. In: Third International Symposium on the
Biosafety Results of Field Tests of Genetically Modified Plants and Microorganisms;
1994. p. 129-139.
22.Martnez YM, Zabalgogeazcoa I, De Blas C, Snchez F, Peralta EL, Ponz F, et al.
Geminivirus associated with diseased tomatoes in Cuba. J Phytopathology.
1996;144:277-279.
23.Martnez Y, De Blas C, Quiones M, Castellanos C, Peralta EL, Romero J. Havana
tomato virus, a new bipartite geminivirus infecting tomatoes in Cuba. Arch Virol.
1998;143:1757-1772.
24.Martnez Y, Fonseca D, Quiones M, Palenzuela I. Presence of Tomato Yellow Leaf
Curl Virus (TYLCV) infecting squash (Curcubita pepo) in Cuba. Plant Dis. 2004;88:572.
25.Martinez Y, Muiz Y, Quiones M. A new begomovirus infecting peppers plants in
Cuba. Plant Pathology. 2006;55(6):817.
26.Martnez Y, Quiones M, Fonseca D, Potter J, Maxwell D. First report of Tomato
yellow leaf curl virus associated with beans, Phaseolus vulgaris, in Cuba. Plant Dis.
2002;86:814.
27.Mubin M, Mansoor S, Hussain M, Zafar Y. Silencing of the AV2 gene by antisense
RNA protects transgenic plants against a bipartite begomovirus. J Virol. 2007;4:10.
28.Philipon P, Tastemain C. Plantes transgniques: les graines de la discorde. Paris.
Elsevier; 1998.
29.Pooggin M, Hohn T. Fighting geminiviruses by RNAi and vice versa. Plant Molecular
Biology. 2004;55(2):149-152.
30.Praveen S, Kushwaha CM, Mishra AK, Singh V, Jain RK, Varma A. Engineering
tomato for resistance to tomato leaf curl disease using viral rep gene sequences. Plant
Cell Tissue and Organ Culture. 2005;83(3):311-318.
31.Praveen S, Dasgupta A, Varma A. Phylogenetic analysis and homologies of the
replicase of Tomato Leaf Curl Geminivirus: Implications for obtaining pathogen-derived
resistance. Virus Gene. 2004;28(1):197-201.
32.Praveen S, Mishra AK, Antony G. Viral Suppression in Transgenic Plants Expressing
Chimeric Transgene from Tomato Leaf Curl Virus and Cucumber Mosaic Virus. Plant
Cell Tissue and Organ Culture. 2006;84(1): 49-55.
33.Praveen S, Mishra AK, Dasgupta A. Antisense suppression of replicase gene
expression recovers tomato plants from leaf curl infection. Plant Science.
2005;168:1011-1014.
34.Quiones M, Fonseca D, Martnez Y, Accotto GP. First Report of Tomato Yellow Leaf
Curl Virus (TYLCV)-infecting Peppers Plants in Cuba. Plant Dis. 2002,86:73.
35.Quiones M. Estrategia de control por Ingeniera gentica a geminivirus aislado en
Cuba. Masters Thesis. Univ. Internacional de Andaluca, Espaa; 2002.
36.Quiones M, Martnez Y, Fonseca D, Gmez O. Virus del Encrespamiento Amarillo
de la Hoja del Tomate (TYLCV): Aportes a los estudios de variabilidad y diagnstico
para Cuba y la regin de Amrica Latina y el Caribe. En: Actas de la 44 Reunin de la
Sociedad de Fitopatologa Americana-Divisin Caribe, Ciudad de La Habana, Cuba;
2004.
37.Ramos PL, Guerra O, Peral R, Oramas P, Guevara RG, Rivera-Bustamante R. Taino
tomato mottle virus, a new bipartite Geminivirus from Cuba. Plant Dis. 1997;81:1095.
38.Register III JC, Beachy RN. Resistance to TMV in transgenic plants results from
interference with an early event in infection. Virology. 1988;166:524-532.
39.Sanford JC, Johnston SA. The concept fo parasite-derived resistance-deriving
resistance genes from the parasites own genoma. J Theor Biol. 1985;113:395-405.
40.Sasson A. Cultivos transgnicos: hechos y desafos. Elfos Scientiae. La Habana;
2001. p 11-16.
41.Stanley J, Saunders K, Pinner MS, Wong SM. Novel defective interfering DNAs
associated with Ageratum Yellow Vein Geminivirus infection of Ageratum conyzoides.
Virology. 1997;239:87-96.
42.Vanderschuren H, Stupak M, Ftterer Gruissem JW, Zhang P. Engineering
resistance to geminiviruses-review and perspectives. Plant Biotechnology Journal.
2007;5(2):207-220.
43.Vanitharani R, Chepallan P, Fauquet CM. Geminiviruses and RNA silencing. TRENDS
in Plant Pathology. 2005;10(3):144-151.
44.Voinnet O. RNA silencing: small RNAs as ubiquitous regulators of gene expression.
Curr Opin Plant Biol. 2002;5:444-451.
45.Wilson TMA. Strategies to protect crop plants against viruses: pathogen-derived
resistance blossoms. In: Proceedings of the National Academy of Sciences.
1993;90:3134-3141.
46.Yang Y, Sherwood TA, Patte CP, Hiebert E, Polston JE. Use of Tomato Yellow Leaf
Curl Virus (TYLCV) Rep Gene sequences to engineer TYLCV Resistance in Tomato.
Phytopathology. 2004,94:490-496.
47.Zrachya A, Kumar P, Ramakrishnan U, Levy Y, Loyter A, Arazi T, et al. Production of
siRNA targeted against TYLCV coat protein transcripts leads to silencing of its
expression and resistance to the virus. Transgenic Research. 2007;16(3):385-398.
(Recibido 2-6-2006; Aceptado 13-4-2007)

2014 1986 Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria

Carretera de Jamaica y Autopista Nacional. Apartado 10, San Jos de las Lajas, La Habana, Cuba

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