Microscopio

Portas y cubre-objetos
Soporte de preparaciones
Cubeta
Lanceta
Alcohol
Metanol
Giemsa
Sangre obtenida por un pinchazo en el pulpejo del dedo
1. Limpiar el pulpejo del dedo con una gota de alcohol hacer una punci!n para
conseguir una gota de sangre.
". #epositar la gota de sangre en un lado y en el centro de un porta bien limpio.
$. Seguidamente con el empleo de un porta de borde esmerilado se hace un
%rotis o e&tensi!n de sangre. 'l porta con el (ue se hace la e&tensi!n debe
deslizarse bien colocado y lo m)s per%ectamente aplicado en su borde contra
el otro porta sobre el (ue se hace la e&tensi!n. S!lo debe pasarse una *ez
de %orma continua e ininterrumpida.
+. 's con*eniente realizar dos o tres e&tensiones con el %in de seleccionar para
la tinci!n la mejor lograda. Las e&tensiones o %rotis deben secarse al aire lo
m)s r)pidamente posible. La desecaci!n se %acilita con mo*imiento en %orma
de abanico nunca soplando o por calor. La r)pida desecaci!n e*ita la
de%ormaci!n de los gl!bulos sangu,neos.
1. #epositar el porta con la e&tensi!n de sangre encima del soporte de
tinciones y -ste sobre la cubeta.
". #ejar caer sobre la e&tensi!n unas gotas de metanol y esperar (ue el alcohol
se e*apore con lo (ue se consigue el %ijado.
$. #epositar cubriendo toda la e&tensi!n unas gotas de Giemsa e*itar la
desecaci!n y dejar actuar el colorante unos cinco minutos.
+. La*ar la preparaci!n hasta (ue arrastre todo el colorante.
.. /omando el porta por los cantos secar aireando el porta o bien al calor muy
lento de la llama del mechero.
1. Con d-bil aumento e&plorar la preparaci!n para localizar la zona en la (ue el
%rotis es m)s per%ecto. Los lugares m)s aptos son a(uellos en los (ue la
e&tensi!n de los gl!bulos se ha conseguido en una sola capa est)n bien
te0idos y no se han producido precipitados de los colorantes. Cuando se
obser*e una zona apta pasar a aumentos m)s %uertes.
". 'n el campo del microscopio se *er)n con un dominio predominante los
gl!bulos rojos hemat,es o eritrocitos te0idos en color rojo. 1o tienen
n2cleo y son m)s delgados por el centro (ue por los bordes. Los gl!bulos
blancos o leucocitos de identi%ican %)cilmente por la presencia de n2cleo. 3ay
*arias clases de gl!bulos blancos4
o los lin%ocitos algo mayores (ue los gl!bulos rojos con un n2cleo muy
*oluminoso (ue ocupa casi todo el gl!bulo aparece %uertemente te0ido en
color *ioleta oscuro.
o los monocitos son los leucocitos mayores poco %recuentes normalmente
hay (ue desplazarse por la preparaci!n para encontrar alguno. /ienen un
n2cleo muy grande y redondeado (ue aparece te0ido en color *ioleta. 5's
bueno (ue recuerdes su %unci!n (ue es la de %agocitosis6.
o los polinucleares presentan el n2cleo como %ragmentado o con aspecto
arrosariado.
o los eosin!%ilos con granulaciones abundantes de color rojizo y el n2cleo
te0ido de color azul marino. 'stos gl!bulos aumentan su n2mero en caso
de parasitosis o procesos al-rgicos.
o los bas!%ilos presentan un n2cleo te0ido de rojo y las granulaciones del
citoplasma de color muy oscuro.
Las pla(uetas aparecen como pe(ue0os %ragmentos te0idas de color *ioleta.
'stas c-lulas inter*ienen en el proceso de coagulaci!n sangu,nea.
$. Si la e&tensi!n ha salido bien merece la pena conser*arla. Para ello a0adir
una gota de euparal dp& u otro producto similar y colocar un cubre-objeto.
+. 'l n2mero promedio de gl!bulos rojos en el hombre es de ..777.777 por mm
$
de sangre. La ci%ra media de gl!bulos blancos es de 8.777 a 9.777 por mm
$
.
3ay por tanto un gl!bulo blanco por cada :77 ! 877 gl!bulos rojos. Por lo
tanto para *er todos los tipos de gl!bulos blancos debes buscarlos en
distintos campos de la preparaci!n. 'l n2mero de pla(uetas es de unas
".7777 por mm
$

'l objeti*o de esta pr)ctica es obser*ar e interpretar %iguras de distintas %ases de
la mitosis en c-lulas *egetales.
Microscopio
Porta y cubre-objetos
;idrio de reloj
Pinzas %inas
Cuchilla de a%eitar
/iras de papel de %iltro
<rce,na ac-tica clorh,drica
un bulbo de cebolla
Pinzas de madera
Mechero
'l proceso de reproducci!n celular conocido con el nombre de mitosis puede ser
estudiado eligiendo un material constituido por c-lulas (ue se hallen en continua
di*isi!. 'sta condici!n la reunen los meristemos terminales o primarios tales como
los (ue se encuentran en el )pice de las ra,ces. =n bulbo de cebolla cuya base se
mantenga en contacto con el agua durante + ! . d,as nos proporciona abundante
cantidad de raicillas j!*enes muy apropiadas para la obtenci!n de muestras
destinadas a obser*ar %iguras de mitosis.
>?G=@A 1
=nos cinco d,as antes de realizar la pr)ctica se colocar) un bulbo de cebolla
tapando la boca de un %rasco (ue se llena hasta (ue el agua toca la base de la
cebolla . >?G=@A 1. Se logra as, el desarrollo de numerosas raicillas j!*enes cuando
-stas tengan una longitud de $ cent,metros es el momento adecuado para hacer la
preparaci!n.
1. Cortar con unas tijeras %inas o cuchilla de a%eitar los . 2ltimos mil,metros
de las raicillas deposit)ndolas en un *idrio de reloj
". Cubrir la muestra con orce,na ac-tica clorh,drica. Apro&imadamente unos "
cm
$
de orce,na.
$. #ejar (ue actue el colorante durante 17 minutos.
+. /omar el *idrio de reloj por los bordes ayud)ndonos de una pinza de madera
y calentarlo sua*emente a la llama del mechero e*itando la ebullici!n y
esperar hasta (ue se emitan *apores tenues.
.. Con las pinzas %inas tomar con cuidado una ra,z y colocarla sobre un porta
cortar los 2ltimos " ! $ mil,metros y desechar el resto.
:. Colocar el cubre-objetos y encima una almohadilla hecha con papel de %iltro
sobre la (ue se ejerce presi!n con el dedo pulgar primero sua*e despu-s
m)s intensa para aplastar la muestra t-cnica conocida como s(uash
8. Aspirar con el papel de %iltro el e&ceso de colorante.
9. <bser*ar al microscopio primero a pe(ue0o aumento y luego con aumentos
mayores recorriendo di*ersos campos para descubrir en las c-lulas
obser*adas las distintas %ases de la mitosis.
La preparaci!n presenta el aspecto de una dispersi!n de c-lulas por todo el campo
(ue abarca el microscopio. Se obser*ar)n c-lulas en distintas %ases o estados de
di*isi!n celular. Con esta t-cnica de tinci!n se *en los cromosomas impregnados por
la orce,na en color morado. 'l aspecto reticulado as, como el mayor tama0o de
algunos n2cleos corresponde a las c-lulas (ue se encontraban en los procesos
iniciales de la di*isi!n mit!sica.
<bser*ar los ori%icios respiratorios 5estomas6 de las hojas.
Microscopio
Portas y cubres
Pinzas %inas
/ijeras %inas
Aistur,
Agujas enmangadas
Cubeta
Soporte de tinciones
Pocillo de montar
;erde de metilo ac-tico
3oja de lirio o de otra planta similar.
's con*eniente tratar la hoja con )cido n,trico al ".B(ue %acilitar) separar m)s
%)cilmente la epidermis.
1. 3acer con el bistur, un corte trans*ersal en una hoja de lirio o planta similar.
". Coger con una pinza %ina la %ina epidermis y tirar hasta conseguir una
pe(ue0a muestra (ue sea lo m)s transparente posible.
$. Lle*ar el trozo desprendido a la cubeta o caja de Petri con agua. Apoyar el
portaobjeto en el %ondo de la caja y ayud)ndose con la pinza e&tender el
trocito de epidermis de cebolla sobre el porta.
+. #epositar el porta-objetos sobre el soporte de tinciones a0adir unas gotas
de *erde de metilo ac-tico dejando actuar este colorante-%ijador durante
cinco minutos procurando a0adir m)s gotas si se e*apora.
.. 'scurrir el colorante sobrante y la*ar dejando caer agua con un cuentagotas
sobre la preparaci!n.
:. Colocar encima de la preparaci!n un cubreobjetos y obser*ar al microscopio
primero a pe(ue0o aumento y luego a un aumento mayor.
Se utilizar)n primero los aumentos d-biles con el %in de centrar la preparaci!n y
determinar la zona mejor para la *isualizaci!n. Cambiar despu-s a un aumento
mayor.
Las c-lulas de la epidermis de las hojas del lirio Son de %orma alargada y bastante
grandes. La membrana celular celul!sica se destaca muy clara te0ida por el
colorante. Los n2cleos son grandes y muy *isibles. 'n el citoplasma se distinguen
algunas *acuolas grandes d-bilmente coloreadas.
Lo m)s signi%icati*o en esta preparaci!n es la obser*aci!n de los ori%icios
respiratorios o estomas. Se obser*a (ue est)n constituidos por dos c-lulas con
aspecto arri0onado o de habichuela c-lulas en las (ue se pueden obser*ar org)nulos
*erdes correspondientes a los cloroplastos. 'stas dos c-lulas limitan un ori%icio (ue
puede *ariar de di)metro y (ue se denomina ostiolo. 'n el siguiente dibujo puedes
reconocer las distintas estructuras.
<bser*ar c-lulas *egetales describiendo las estructuras *isibles al microscopio
!ptico.
Microscopio
Portas y cubres
Pinzas finas
Tijeras finas
Bistur
Agujas enmangadas
Cubeta
Soporte de tinciones
Pocillo de montar
Verde de metilo actico

=na cebolla
1. #e la parte c!nca*a de una de las hojas carnosas del bulbo de la cebolla y con
la ayuda de un bistur, y una pinza %ina separar una pe(ue0a porci!n de
epidermis procurando no arrancar el tejido subyacente de tal %orma (ue la
parte desprendida tenga el aspecto de una %ina pel,cula trasl2cida como el
celo%)n. FIGURA 1.
igura !
igura " igura #
igura $
". Lle*ar el trozo desprendido a la cubeta o caja de Petri con agua. Apoyar el
portaobjeto en el %ondo de la caja y ayud)ndose con la pinza e&tender el
trocito de epidermis de cebolla sobre el porta. FIGURA 2
$. #epositar el porta-objetos sobre el soporte de tinciones a0adir unas gotas
de *erde de metilo ac-tico dejando actuar este colorante-%ijador durante
cinco minutos procurando a0adir m)s gotas si se e*apora. FIGURA 3
+. 'scurrir el colorante sobrante y la*ar dejando caer agua con un cuentagotas
sobre la preparaci!n.
.. Colocar encima de la preparaci!n un cubreobjetos FIGURA 4 y obser*ar al
microscopio primero a pe(ue0o aumento y luego a un aumento mayor.
Se utilizar)n primero los aumentos d-biles con el %in de centrar la preparaci!n y
determinar la zona mejor para la *isualizaci!n. Cambiar despu-s a un aumento
mayor.
Las c-lulas de la epidermis de las hojas internas del bulbo de la cebolla son de
%orma alargada y bastante grande. La membrana celular celul!sica se destaca muy
clara te0ida por el colorante. Los n2cleos son grandes y muy *isibles. 'n el
citoplasma se distinguen algunas *acuolas grandes d-bilmente coloreadas. FIGURA
5
>igura .
<bser*ar c-lulas animales y di%erenciar en ellas algunas estructuras.
Microscopio
Portas y cubre%objetos
Cubeta
Pocillo de montar
Soporte de tinciones
Mec&ero de alco&ol
Cuentagotas
Azul de metileno
Aguja enmangada
Mucosa bucal del hombre
1. ?ntroducir el dedo en la ca*idad bucal.
". @aspar sua*emente con la u0a la cara interna del carrillo.
$. Limpiar el producto obtenido del borde interno de la u0a con una aguja
enmangada
+. #epositarla junto con una gotita de agua sobre el porta-objetos.
.. 3acer una e&tensi!n %rotando con la aguja sobre el porta.
:. Calentar a la llama del mechero sin (ue llegue a (uemar el porta sobre el
dorso de la mano.
8. Colocar el porta sobre el soporte de tinci!n encima de la cubeta.
9. Agregar unas gotas de azul de metileno o de *erde de metilo ac-tico
dejando actuar el colorante " ! $ minutos.
C. ;erter el colorante sobrante y la*ar la preparaci!n hasta (ue no suelte color.
17. Poner encima un cubre-objetos de %orma (ue -ste caiga como se cierran las
tapas de un libroD dejando caer sua*emente el cubre se e*ita todo riesgo de
(ue (ueden burbujas de aire entre el porta y el cubre.
'mpleando aumentos d-biles localizar el )rea de la preparaci!n m)s id!nea deben
desestimarse las zonas poco o muy te0idas los apelotonamientos de c-lulas unas
encimas de otras etc. 'n%ocar las c-lulas aisladas con mayor aumento. La
preparaci!n nos muestra una *isi!n parecida a un mosaico %ormado por c-lulas
planas poligonales m)s o menos irregularesD abundan las c-lulas aisladas en cuyas
caras se perciben los trazos de inserci!n de unas c-lulas con otras.
Como el material obser*ado procede de la capa super%icial capa de descamaci!n
del epitelio pluriestrati%icado de la mucosa bucal son en su mayor,a c-lulas muertas
o c-lulas (ue est)n en per,odo de degeneraci!n.
'l azul de metileno ti0e intensamente el n2cleo y con menos color el citoplasma D
-ste presenta un cierto aspecto de alteraci!n y suele ser algo granuloso.