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CROMATOGRAFIA

INTRODUCCIN.-

Las primeras separaciones, con resultados positivos, por medio de mtodos
cromatograficos fueron llevadas a cabo por tswett en el ao 1906, este botnico
ruso consigui separa algunos pigmentos coloreados de hojas de plantas
utilizando una columnas de almina.
El desarrollo total de estas tcnicas se produjo, no obstante, a partir del ao
1931, en que Kuhn y lederer comenzaron a utilizarlas de manera sistemtica. La
cromatografa de lquidos (CL) sufri un relativo estancamiento a partir del ao
1952 en que Martn y james impulsaron el desarrollo de la cromatografa de gases
(CG) , que acaparo los esfuerzos tericos encaminados al conocimiento profundo
de la cromatografa. No obstante, las limitaciones de la cg en cuanto al tipo de
muestra analizables (voltiles o derivados voltiles de las mismas), origino, en la
segunda dcada de los sesenta, una vuelta a considerarla la cl cuyas limitaciones,
en este sentido, se reducen a la posibilidad de disolver la muestra, en lo que
confiere un rango mucho ms amplio de aplicacin. Este hecho, junt0 con la
aparecen de fases estacionarias con dimetro de partculas mucho menores que
los utilizados hasta entonces (3 a 25 um), que permiten obtener columnas de
mayor eficacia llevo a una utilizacin cada vez ms extensa de este tipo de
cromatografa.








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MARCO TERICO.-

Cromatografa.- es un mtodo de separacin de diferentes componentes de una
muestra, este mtodo logra la separacin de los mismos a travs del paso de una
muestra por una fase estacionaria con la ayuda de la fase mvil, cada componente
de la muestra tiene propiedades particulares que permitir su interaccin en forma
diferente entre la fase estacionaria y mvil, de esta forma cada componente se
retrasa en forma particular y si el caudal, las caracterstica de la fase estacionaria
y mvil y la longitud de la columna son las adecuadas se lograra la separacin
completa de todos los componentes de la muestra.
El objetivo principal de un estudio cromatografa es lograr la separacin de todos
los componentes en una muestra, para ello es necesario jugar con una serie de
factores cromatograficos, es por ello que es necesario conocer como estn
relacionados los diferentes factores experimentales con las ecuaciones
cromatografas.

Clasificacin de los Mtodos Cromatograficos:

A.-CROMATOGRAFIA LIQUIDOS (fase mvil liquida)
Fase estacionaria solida: se trata de solidos finamente divididos (con gran
superficie especifica)
Cromatografa de adsorcin.- la fase estacionaria solida retiene a los
solutos por un doble efecto de adsorcin fsica y qumica. las
interacciones implicadas son del tipo de fuerza de van de Waals
Cromatografa de cambio inico.- el slido retiene a los solutos gracias a
atraccin electrosttica. la fase estacionaria solida lleva en la superficie
cargas electrostticas fijas, que retiene contracciones mviles que
pueden intercambiarse por iones de la fase mvil.
Cromatografa de exclusin .- la fase estacionaria es un material poroso
, retiene a las molculas en funcin de su tamao , en ocasiones se
denominan tambin cromatografa de filtracin sobre los geles o de
permeabilidad en geles

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Fase estacionaria liquida:
Cromatografa de reparo .- la fases estacionaria ES un lquido
inmovilizado sobre un material inerte solido que solo acta de soporte

Cromatografa de afinidad o de fases enlazadas.- la fase estacionaria es
generalmente un polmero de tipo liquido inmovilizado sobre un slido
inerte por enlaces covalentes.
En ambos casos la separacin se debe a equilibrios de distribucin de
los solutos entre fases mviles y estacionarias controladas por la
diferente solubilidad de los mismos en las distintas fases.
B. CROMATOGRADIA DE GASES (fase mvil gaseosa)
Cromatografa de absorcin (o cromatografa gas-solido).-la fase
estacionada es un slido finamente dividido, que retiene a los solutos por
adsorcin.
Cromatografa de particin o reparto.- la fase estacionaria es un lquido
retenido por impregnacin o por enlace sobre un slido inerte. Se basa en
equilibrios de distribucin.
C. CROMATOGRAFIA DE FLUIDOS SUPERCRITICOS (la fase mvil es
un fluido supercrtico)
Un fluido supercrtico es un fluido calentado a t y P superiores a las crticas.
Posee algunas caractersticas propias de un gas y algunas propias de un lquido.
La fase estacionaria puede ser liquida o slida.
Clasificacin atendiendo al modo se lleva a cabo l a separacin (como se ponen
en contacto las fases):
Cromatografa en columna: l fase estacionaria se introduce en un tubo
estrecho a travs del cual se hace pasar la fase mvil. Esta se desplaza por
capilaridad, gravedad o presin. Pueden emplearse fases mviles liquidas,
gaseosa o fluidos supercrticos.
Cromatografa plana: la fase estacionaria se coloca en un soporte plano. En
cromatografa plana en flujo de fase mvil se consigue por capilaridad o por
capilaridad y gravedad. Solo pueden emplearse lquidos como fases
mviles. Existen:
cromatografa en papel: la fase estacionaria est constituida por el agua
retenida en la celulosa. Tambin existen papeles cambiadores de iones.
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cromatografa en capa fina: la fase estacionaria es un slido absorbente
finamente dividido o un lquido inmovilizado sobre un slido colocado sobre
una placa plana.

Diagrama de flujo funcional del Cromatografo de gases
























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CROMATOGRAFIA DE GASES DE COMPUESTOS VOLATILES EN
ARANDANOS

EL ARNDANO
El arndano o bilberry (Vaccinium myrtillus L) pertenece a la familia de los
berries o bayas (Morton & Macleod, 1990). Esta familia incluye especies
herbceas y de arbusto que contienen frutos comestibles que a su vez
pertenecen a varias familias botnicas tales como la Rosaceae (fresa,
frambuesa), Ericaceae (arndano: blueberry, bilberry), Saxifragaceae
(grosella: currants, gooseberry) y Vitaceae (uva).
El arndano se consume tradicionalmente en Norteamrica (EE.UU. y Canad),
y algunos pases europeos como as tambin en Japn. Estados Unidos es el
principal productor, consumidor, exportador e importador de arndano del
mundo (fuente: FAO).
El arndano aparece en forma silvestre en diversas regiones de Norteamrica y
Europa desde hace siglos, est incorporado en la dieta habitual de
canadienses, estadounidenses y europeos, quienes la consumen como fruta
fresca, deshidratada o congelada, en comidas dulces o saladas, y se utiliza en
aplicaciones industriales tan diversas como productos farmacuticos,
colorantes, pastelera, jugos concentrados, purs, mermeladas, salsas,
helados, yogures, golosinas, conservas, etc. Canad y los Estados Unidos
consiguen casi el 90% de la produccin mundial de arndano, de los cuales, un
70% corresponde a cultivo silvestre y un 30% a cultivado. Otras importantes
naciones productoras Europeas son Alemania, Francia, Polonia, Holanda,
Austria, Espaa e Italia. La tendencia de consumo del arndano y otras bayas
(frambuesas, moras, zarzas), es creciente en Norteamrica, Canad y algunos
pases europeos por la incorporacin progresiva del concepto de la
alimentacin sana y natural (Barret et al., 2005).
El hbitat natural de los arndanos en Espaa se encuentra localizado en Los
Pirineos y Picos de Europa. Existen en la actualidad algunas plantaciones
localizadas en la provincia de Cceres, Asturias y Huelva. El principal destino
de los arndanos en Espaa es la exportacin como producto fresco, as como
la industria congeladora y conservera. (De la Jara Ayala, 1987).

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Identificacin de los aromas del arndano
Los compuestos voltiles de las bayas han sido estudiados muy extensamente
en las ltimas dcadas (Morton & Macleoid, 1990). En estos estudios resulta
muy importante el mtodo de aislamiento de los aromas que incluyen varios
tipos de extraccin con disolventes y destilaciones y concentraciones de
voltiles en espacio de cabeza. En muchos casos, la evaluacin sensorial ha
sido utilizada junto con la identificacin instrumental de los compuestos
voltiles para determinar la cualidad del aroma y la importancia de los aromas
de las bayas, es decir, obtener informacin referente a la fuerza e impacto de
los componentes olorosos.
La caracterizacin qumica de los aromas de los arndanos ha sido investigada
por von Sydow & Anjou (1969). En estos estudios, ms de 100 compuestos
voltiles han sido identificados. Von Sydow & Anjou (1969) sugirieron que los
compuestos impacto del aroma de los arndanos son el trans-2-hexen-1-ol, 3-
metilbutanoato de etilo y el 2-metilbutanoato de etilo. Parliment & Kolor
(1975) y enfatizaron la importancia del trans-2-hexenal, trans-2- hexen-1-ol y
el linalool sobre el olor caracterstico de los arndanos.
En este trabajo, se hizo un anlisis cualitativo de los aromas presentes en una
muestra de arndanos licuada y filtrada. Para ello se compraron los arndanos
en estado comercial de madurez y se licuaron. El zumo se filtr empleando un
filtro Supelco de 0.45 m y se tomaron 20 ml que fueron guardados en un
contenedor hermtico de cristal con tapn inerte. La fraccin aromtica es
separada y concentrada mediante Extraccin en Fase Slida (SPE). Se emple
como fase sorbente resinas Lichrolut EN (Merck) y el lavado del cartucho se
realiz con agua Milli-Q y elucin con 1 mL de diclorometano. El extracto fue
analizado mediante cromatografa de gases con deteccin por Espectrometra
de Masas (40-250 m/z). Se emple una columna DB-WAXetr de 30 m x 0.25
mm x 0.25 m. Los criterios empleados para la identificacin fueron la
coincidencia del espectro de masas con el presente en las libreras NIST05 y
Wiley7n y la comparacin de los ndices de retencin lineales. Los
procedimientos de extraccin y el anlisis fueron realizados por el Laboratorio
de Anlisis del Aroma y Enologa, Universidad de Zaragoza, Espaa. El
cromatograma obtenido se muestra en la Figura 2.9 donde se puede observar
que hay 5 picos que son mayoritarios; (1) trans-2-hexenal, tR = 14.3 min (2)
2-butil-1-octanol, tR = 16.2 min; (3) 1-hexanol, tR = 18.1 min; (4) trans-2-
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hexen-1-ol, tR = 20.2 min; (5) 1-hexadecanol, tR = 47.7 min. El pico
detectado a 50 minutos se identific como
Tributilfosfato y se consider una contaminacin procedente de los filtros.
Como se puede observar, el trans-2-hexen-1-ol es el componente ms
abundante entre los compuestos voltiles del arndano despus de preparar la
muestra


Cuantificacin del trans-2-hexen-1-ol
Hirvi & Honkanen (1983) determinaron las concentraciones caractersticas de
los aromas presentes en diferentes especies de arndanos encontrando que en
la especie Vaccin um myrtillus L. la concentracin aproximada de trans-2-
hexen-1-ol era de 0.01 mg kgi-1.
En este caso, empleando la muestra de arndanos licuada y filtrada que se
utiliz durante la identificacin aromtica (apartado 1.2.1), se procedi a
evaluar la concentracin detrans-2-hexen-1-ol Como resultado, la
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concentracin de este compuesto observada en las muestras licuadas de
arndanos estaba comprendida en un rango entre 20-30 mg kg-1.

Caractersticas del trans-2-hexen-1-ol
Del estudio anterior se procede a seleccionar el trans-2-hexen-1-ol como aroma
impacto del arndano a estudiar en este trabajo. Su estructura qumica se
muestra en la Figura 2.11 y las propiedades fsico-qumicas ms importantes,
extradas de las hojas de datos de seguridad del producto (Anexo I), se recogen
en la Tabla 2.5.

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Mtodo analtico del trans-2-hexen-1-ol
Para analizar la concentracin del trans-2-hexen-1-ol se emple la
cromatografa de gases, el equipo fue el GC-2010 de Shimadzu con detector de
llama acoplado (FID). Las caractersticas del mtodo de anlisis se resumen en
la Tabla 2.6.
Un cromatograma caracterstico del anlisis de una disolucin modelo de trans-
2-hexen- 1-ol se presenta en la Figura 2.13. El pico a un tR de 0.849 minutos
corresponde al etanol y el de tR= 4.069 min es el del aroma.
Para determinar cuantitativamente las concentraciones de aroma de las
muestras analizadas se precisa obtener una curva de calibrado, para lo cual es
necesario la preparacin de unos patrones que poseen diferentes
concentraciones de aroma dentro del rango en el que se encuentran las
muestras y todas ellas con una concentracin constante de etanol. En la Figura
2.14 se muestra una recta de calibrado tpica de la concentracin de trans-2-
hexen-1-ol en disolucin modelo.
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Conclusin:
podemos evaluar e identificar los aromas ms esenciales del arndano
conocindolos segn los resultados del cromatograma obtenido se muestra
donde se puede observar que hay 5 picos que son mayoritarios; (1) trans-2-
hexenal, tR = 14.3 min (2) 2-butil-1-octanol, tR = 16.2 min; (3) 1-hexanol, tR
= 18.1 min; (4) trans-2-hexen-1-ol, tR = 20.2 min; (5) 1-hexadecanol, tR =
47.7 min. El pico detectado a 50 minutos se identific como

Bibliografa:

Barret, D.M., Somogyi, L. & Ramaswamy, H. Process ng F uits: Science and
Technology. CRC Press, London, 2005.
Buttery, R.G. & Teranishi, R. Gas-liquid chromatography of aroma of vegetables
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Cigi, I.K., Plavec, J. & Zupani-Kralj, L. Determination of the geometrical
isomers of thyl 2,4-decadienoate. Journal of Chromatography A, 847 (1999) 359-
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