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Pontificia Universidad Catlica de Chile

Facultad de Ciencias Biolgicas
Fisiologa BIO 135C
Profesor Rodrigo Valenzuela Bassi
Instructora Carolina Oses
Ayudante Gua Natalia Snchez







Trabajo Prctico Nmero 1





Integrantes: Natalia Elgueta
Dbora Salazar
Rodrigo Vargas

Grupo: 7-A

Viernes 29, Agosto 2014.

2

INTRODUCCION

La fisiologa es la ciencia encargada de estudiar el comportamiento y
funcionamiento de las estructuras en nuestro organismo; buscando entender como
el organismo lleva a cabo cada uno de sus procesos biolgicos, manteniendo
siempre un estado de equilibrio tanto en su estado basal, como en equilibrio con el
entorno, intercambiando por ejemplo energa y sustancias, pondremos especial
nfasis en la actividad celular, especficamente la membrana plasmtica
i
.
La membrana celular, es la estructura externa de todo organismo vivo,
constituida principalmente por fosfolpidos, stos forman una bicapa hidrofbica
que logra separar el medio interno del externo, es a travs de ella por donde son
intercambiadas todas las sustancias que ingresan y salen de la clula, tales como
nutrientes, iones, minerales, agua, desechos, etctera. Los mecanismos por los
cuales se logra el movimiento de estas molculas son variados, en primer lugar la
difusin a travs de la bicapa donde molculas pequeas atraviesan directamente
la membrana, o la difusin facilitada por protenas, stas ubicadas en la
membrana, forman canales o transportadores que permiten el flujo de sustancias
desde un lado a otro de la membrana.
ii

En ste prctico, se abordara la osmosis, definida como el flujo de solvente
a travs de una membrana semipermeable; causado por la diferencia de
concentracin de solutos.
Durante esta experiencia se observar el cambio de volumen que sufrirn
los glbulos rojos, usados como material de estudio, tras someterlos a diferentes
concentraciones. Por otro lado pondremos a prueba la permeabilidad de ests
importantes clulas frente a diversas sustancias que pueden ser de tipo
hipotnica, isotnica e hipertnica frente al lquido intracelular, experimentando
cambios conformacionales en el glbulo rojo, quien puede llegar a sufrir hemlisis,
crenacin o seguir isoosmtico segn corresponda en cada caso

3

RESULTADOS
OSMOSIS

1) Grafique en Excel, la abscisa las osmolaridades de las soluciones de NaCl
y en la ordenada los valores de los volmenes globulares. Coloque los
puntos correspondientes a las lecturas de los volmenes globulares
obtenidos para las diferentes soluciones. A travs de estos puntos trace
una recta. Realice una regresin lineal y dibuje la recta resultante. Trace
una lnea paralela a la abscisa, que pase por la ordenada en el punto del
valor medio de las lecturas de los tubos testigos. A que corresponde la
osmolaridad indicada para el punto en donde se cruzan las dos lneas
rectas?
xii


Tubo
Concentracin
(g/L)
Concentraci
n (mol/L)
Concentraci
n (mOsm/L)
Volumen
eritrocitario
(%)
Volumen
Ajustado
(%)
Tonicidad
Testigo - - - 60 60 -
Solucin
1
3,65 0,062 124 30 60 Hipotnico
Solucin
2
8,77 0,15 300 28 56 Isotnico
Solucin
3
23,4 0,4 800 18 36
Hipertnic
o
Tabla 1: Volumen eritrocitario (%) y ajustado (%) observado en cada una de las
soluciones donde fueron agregadas las muestras sanguneas



Figura 1: Volumen eritrocitario en funcin de la concentracin de NaCl observada
tras someter las distintas muestras de sangre a cada una de las soluciones.
y = -1,2487x + 65,576
R = 0,9908
0
10
20
30
40
50
60
70
0 5 10 15 20 25
V
o
l
u
m
e
n

E
r
i
t
r
o
c
i
t
o
s

(
%
)

Concentracin (g/L)
% vs concentracion
Pruebas de Solucin
Testigo
4

Interpretacin Tabla de Datos N1
La medicin del tubo testigo del volumen eritrocitario dio un 60%, el cual se
encuentra relativamente elevado con respecto a la bibliografa que afirma que no
ms del 55% del volumen est compuesto por clulas, si este resultado se
mantiene una vez medido el volumen corpuscular medio podra ser indicativo de
una anemia macroctica, donde glbulos rojos presentan un gran tamao pero la
hemoglobina contenida no es capaz de transportar todo el oxgeno necesario, esta
anomala se presenta en pacientes con deficiencias en el factor intrnseco, en la
vitamina B12 o en el cido flico.
Como se observa en la tabla 1, la primera solucin de NaCl 3.65g/L, con
una osmolaridad de 124mOsm aproximadamente, no mostr cambios en el
volumen eritrocitario con respecto al tubo testigo, mnimo por otro lado, fue el
efecto observado en el tubo 2, cuya concentracin de sal era de 8.77g/L y
300mOsm donde el volumen eritrocitario disminuy a un 56%. La tercera solucin
mostr el efecto ms significativo, donde la alta concentracin de cloruro de sodio
(23,4g/L) caus una alta disminucin en el volumen eritrocitario hasta slo un
36%.
Por otro lado en la figura 1, se observa por un lado, la tendencia a disminuir el
volumen eritrocitario en funcin de la concentracin de NaCl y la recta paralela a
las absisas mostando el volumen eritrocitario testigo; el punto donde la recta
paralela a la abscisa (color naranjo) con la recta extrapolada de con la obtenida de
las pruebas realizadas con las distintas soluciones de NaCl corresponde al punto
donde las osmolaridades son iguales, o dicho de otro modo, es el valor real de
la osmolaridad de la muestra; dado que el volumen de eritrocitos ajustados es el
mismo. Si bien este nmero alcanzado es menor al esperado (4,0 g/L aprox.) esto
se debe a que al interior de las clulas, el cloruro de sodio no es el nico
componente involucrado en el equilibrio osmtico de la clula. Los valores de
volumen de eritrocitos medidos evidencian el efecto producido tras someter cada
muestra de sangre a distintas concentraciones salinas. En el primer punto en una
solucin hipo-tnica no se observan cambios relevantes en el volumen
eritrocitario, la segunda solucin produjo una disminucin mnima en el porcentaje
de eritrocitos de la muestra, empezando a notarse el efecto del cambio de
tonicidad y, la salida de agua desde la clula con tal de equilibrar la osmolaridad
del medio; por ltimo la muestra ms concentrada causa una notable reduccin en
el volumen dado el flujo de agua desde el eritrocito hacia el exterior. El volumen
eritrocitario fue ajustado segn la dilucin realizada de un 50%.



5

2) Cul es la osmolaridad de la solucin de suero fisiolgico (NaCl 9 g/L)?
xii

Solucin NaCl 9g/L
-

Dado que cada molcula de NaCl aporta dos partculas osmolarmente activas:
-

Expresado en miliOsmoles:
-

iii




3) Defina los siguientes trminos
xii


Permeabilidad
Capacidad que tiene un material de atravesar una membrana sin alterar su
estructura interna. La velocidad con que este material fluye por la membrana,
depende principalmente de la porosidad, la densidad y la presin. La
Permeabilidad Selectiva es una propiedad de la membrana plasmtica que
permite slo el paso de ciertas sustancias a travs de ella. Este mecanismo de
entrada y de salida regula el funcionamiento de la clula.

Osmosis
Fenmeno fsico relacionado con el movimiento de un solvente a travs de
una membrana semipermeable, producto de la diferencia de concentracin de
soluto.



Presin Osmtica
Presin exacta y necesaria que se debe aplicar a una solucin para detener la
osmosis. Depende del nmero de partculas en solucin, sin importar su
naturaleza.

Isoosmtico
Solucin de electrolitos que ejerce la misma presin osmtica que la
solucin ubicada al otro lado de la membrana


6

Hiperosmtico
Solucin de electrolitos que posee una mayor presin osmtica que
la solucin ubicada al otro lado de la membrana

Hipoosmtico
Solucin de electrolitos que posee una menor presin osmtica que
la solucin ubicada al otro lado de la membrana

Osmolaridad
Expresin de la concentracin de soluto osmticamente relevante en un
solvente, en trminos de nmero de partculas que influyen en la presin osmtica
de la solucin. Se expresa como el nmero de osmoles de soluto por volumen de
solucin. Su unidad de medida es Osmol/L.

Presin Onctica
Presin osmtica ejercida por las molculas de gran tamao, como
protenas, presentes en el plasma que impiden el paso de agua fuera de los vasos
capilares haca el tejido. Los capilares son impermeables a especies con elevado
peso molecular como las protenas, por lo que se acumulan en el plasma llevando
al agua hacia el interior con una presin determinada.


Tonicidad
Estado presente en una clula debido a la diferencia de concentraciones de
iones dentro de esta en relacin al medio extracelular. Se habla adems de la
habilidad de una solucin de alterar el tono o forma celular debido al gradiente de
agua producido por la diferencia de concentracin.

Isotnico
Solucin que presenta una concentracin igual de soluto al medio
interno celular.

Hipertnico
Solucin que presenta una concentracin de soluto mayor al medio
interno celular. Produce el fenmeno de crenacin.

Hipotnico
Solucin que presenta una concentracin de soluto menor al medio
interno celular. Produce el fenmeno de hemlisis.








7

PERMEABILIDAD SELECTIVA



Tabla 2: Fenmenos ocurridos tras agregar una gota de sangre a cada una de las
soluciones enumeradas, segn la osmolaridad y tonicidad de cada una, se espera
a priori distintos eventos.



Interpretacin tabla de datos N2

En la tabla 2 se describen los resultados obtenidos tras agregar una gota de
sangre a cada uno de los tubos con distintas soluciones de solutos y
concentraciones diferentes. Slo en los tubos numero 1 (4mL de agua destilada),
nmero 2 (4mL NaCl 0,05M), nmero 4 (4mL NaCl 0,15M + detergente) y nmero
5 (4mL NaCl 0,3M + detergente) mostraron hemlisis, siendo el de menor tiempo
el tubo que contena slo agua destilada, mientras que el tubo con 0,05M de sal
demor el doble en causar la hemlisis; y en los tubos 4 y 5 que contenan
detergente demoraron en promedio 4,5 segundos en destruir la clula. En el resto
de los tubos, no se observaron cambios significativos una vez agregada la gota de
sangre, en contra de lo que se esperaba, los tubos que contenan soluciones
hipertnicas no se observ la crenacin de las clulas durante el tiempo de
medicin.









8

4) Describa las caractersticas de permeabilidad de la membrana plasmtica
del glbulo rojo de acuerdo a los resultados obtenidos.
xii


Segn los resultados, la membrana plasmtica de glbulos rojos, permite el
paso de NaCl, dado que retrasa el efecto hemoltico de una solucin hipotnica. A
su vez es permeable a NH4Cl, urea, glicerol y glucosa; ya que ante soluciones
hipertnicas, la crenacin no ocurri ya que el equilibrio de estos componentes
junto al flujo de agua, logr mantener estables las muestras de glbulos rojos.
Sin embargo, segn la bibliografa, s debi haber ocurrido la muerte de las
clulas por crenacin en las soluciones hipertnicas compuestas por glicerol y
glucosa, dado que estos solutos no permean a travs de la membrana, sino que
su transporte desde y hacia la clula esta mediada por protenas transportadoras
iv
.

5) Qu puede concluir respecto a la selectividad de la membrana por NaCl,
NH4Cl, glicerol, urea y glucosa?
xii


Los compuestos probados para este trabajo prctico, mostraron ser
permeables a la membrana de la clula. Siendo el cloruro de sodio, cloruro de
amonio, urea, glicerol y glucosa, compuestos que pueden atravesar la membrana
celular de los glbulos rojos. Pero como se respondi en la pregunta anterior, la
permeabilidad de la glucosa y del glicerol est regulada por protenas
transportadoras.

6) Qu es coeficiente de difusin?
xii


El coeficiente de difusin es un valor que representa la facilidad con que un
soluto atraviesa una membrana que separa dos cmaras; corresponde a un
coeficiente de proporcionalidad proveniente de la ley de Fick que afirma que el
flujo de una sustancia desde una cmara a otra es directamente proporcional a la
diferencia de las concentraciones en dichas cmaras y al coeficiente de difusin; e
inversamente proporcional al grosor de la membrana. Como se expresa en la
siguiente ecuacin:

v


Dnde: J es el flujo, D es el coeficiente de difusin, c es la diferencia de
concentraciones y es el espesor de la membrana.




9

7) Qu molcula tendra un coeficiente de difusin mayor y por qu?
xii


Con los resultados obtenidos no se podra determinar qu sustancia posee el
mayor coeficiente de difusin, sin embargo por su tamao y carga neutra la urea
posee el menor coeficiente de difusin, tal como lo afirma Stanton, en el libro
Fisiologa de Berne & Levy
vi
.

8) ) Discuta que mecanismos operan en cada tubo para producir o no
hemlisis
xii


Los primeros dos tubos que presentaron hemlisis, fue por la diferencia de
tonicidad del medio, la cual caus el ingreso excesivo de molculas de agua lo
que produjo que la membrana colapsara y se observara la hemlisis.
Por otro lado, la aplicacin del detergente caus la solubilizacin de la membrana,
por lo que se observa hemlisis, sin intercambio de agua en el medio; sino que
una destruccin completa de la membrana celular.
En el resto de los tubos de prueba no se observ hemlisis o crenacin de los
glbulos rojos.

9) Describa el mecanismo de accin del detergente para solubilizar la
membrana?
xii

El detergente causa hemlisis debido a que es su estructura posee dos reas, una
altamente lipfila y por ende afn a las molculas que componen la membrana
plasmtica; y una segunda rea altamente hidrfila que permite ser soluble en
medio acuoso. Por lo tanto el detergente permite separa los fosfolpidos que
componen la membrana y los deja libre en el medio acuoso, causando as la
destruccin de la membrana plasmtica, compuesta por una bicapa de fosfolpidos
que logra mantener separados los medios intra y extra-celulares.















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DISCUSIN

OSMOSIS

Se analiz el comportamiento de muestras de sangre ante distintas
concentraciones de NaCl, con el objetivo de observar el proceso de osmosis y
observar el efecto de la osmolaridad en las clulas, se observ que en medios
hper-tnicos, como en el caso de la solucin 3 (23,4g/L) el volumen de eritrocitos
disminuye considerablemente, este fenmeno denominado crenacin, es causado
por la flujo abundante de agua desde la clula, con tal de poder equilibrar la
presin osmtica con la de su entorno. Por otro lado, la solucin 1 (3.65g/L) al
poseer una osmolaridad menor a la de los eritrocitos, es esperable que se observa
el fenmeno contrario, la hemlisis, causada por la entrada excesiva de agua a la
clula causando el colapso de las membranas, liberacin de todo el contenido
celular y entonces, la muerte de la clula; como se ve en la tabla 1, esto no
ocurri, esto es debido a los mecanismos de regulacin que tiene la clula para
evitar este acontecimiento; por lo que puede regular su volumen y, flujo de agua y
iones con tal de evitar el colapso; esta resistencia de la clula ante cambios en la
osmolaridad, le da a la clula un intervalo de concentraciones osmolares, donde la
clula permanecer intacta, como fue en este caso
vii
. Por ltimo, la solucin 2, de
osmolaridad igual a la de la clula, no presento cambios, tan solo una pequea
reduccin en su volumen, por lo que se puede decir que la solucin es, en
realidad, levemente hper-tnica con respecto a la muestra de sangre utilizada
viii
.


PERMEABILIDAD SELECTIVA
Durante este trabajo prctico se analiz la permeabilidad selectiva que tiene
la membrana plasmtica, donde se realizaron pruebas con distintas soluciones en
cuanto a su concentracin y soluto; en primer lugar tal como se esperaba, se
produjo hemlisis de los glbulos rojos con un tiempo muy corto, cuando estos
fueron expuestos a soluciones hipotnicas (agua y NaCl 0,05M); como se ha
descrito anteriormente, ante soluciones hipotnicas el agua entra a la clula con
tal de buscar su equilibrio osmtico, sin embargo al entrar tanta agua al eritrocito
este estalla, llevando a la hemlisis. El mismo efecto se observ en presencia de
detergente pero ste ocurre por otro mecanismo, el efecto surfactante del
detergente causa la solubilizacin y destruccin de la membrana celular como tal,
causando la hemlisis en un tiempo sumamente corto (4 a 8 segundos). En las
pruebas posteriores no se observaron cambios en las clulas, pese a que en los
casos donde se sometieron las clulas a soluciones hipertnicas, se esperaba una
decantacin de los eritrocitos causado por la crenacin de las clulas; la cual se
debe a la salida excesiva de agua producida por la diferencia de osmolaridad entre
el glbulo rojo con el medio externo
ix
.
11

Esto pudo no haber ocurrido porque no se esper el tiempo suficiente para
que se observara el cambio, dado que la crenacin es un proceso ms lento y ms
difcil de observar. Por otro lado, tal como lo dice Koeppen en el libro de Fisiologa,
existen mecanismos de resistencia ante medio hipo e hipertnicos, los cuales,
por medio de difusin de iones como K
+
, Na
+
y Cl
-
, logran mantener el equilibrio
osmtico de la clula sin producir el colapso de la membrana. Adems, es sabido
que la membrana plasmtica compuesta principalmente por una bicapa de
fosfolpidos y protenas de membrana, dentro de los mecanismos de transporte
que regulan el flujo de sustancias, est la difusin pasiva a travs de la bicapa, la
cual discrimina por tamao y por carga, siendo la urea y el agua, las molculas
polares que difunden con mayor facilidad a travs de la membrana plasmtica; y
por otro lado, la glucosa al ser de gran tamao y ser altamente polar, su difusin a
travs de la bicapa es prcticamente nula. Sin embargo, dentro de las protenas
presentes en la membrana celular, estn los transportadores que facilitan el
movimiento de molculas que no pueden difundir a travs de la bicapa, como los
son transportadores de glucosa (GLUT), tambin estn los canales, los cuales
permiten el paso de iones segn su gradiente de electroqumico (canales de sodio,
potasio, cloruro, calcio, etc.) o bombas, protenas transportadores que ocupan
energa proveniente del ATP para poder mover iones en contra de su gradiente
x
.
Los transportadores previamente descritos, pueden ser los responsables de
que ante soluciones hipertnicas los glbulos rojos no presentaran crenacin ya
que el movimiento de estas sustancias permiti encontrar el equilibrio osmtico
con cada uno de los medios externos, y as permanecer estables durante el
tiempo que se realiz la observacin.


CONCLUSIONES

- Se logr observar la osmosis y su efecto en el volumen eritrocitario

- Se observ el efecto de soluciones de distinta tonicidad en muestras de
sangre

- Se observ el proceso de hemlisis causado por medios hipotnicos y por
el efecto de detergente.
- Se probaron distintas soluciones con tal de determinar la permeabilidad
selectiva a solutos de la membrana plasmtica.
- Se encontraron mecanismos de resistencia a cambios osmticos en
glbulos rojos.



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ANLISIS CASO CLNICO
10. Qu ocurri con los eritrocitos del paciente en presencia de agua destilada?
xii


Los eritrocitos si se colocan en agua destilada, la concentracin de solutos
en el agua es menor entonces por osmosis; el agua del medio entra al eritrocito, y
este se llena tanto de agua que se lisa, proceso llamado hemlisis.

11. En relacin a lo estudiado, cmo explica que en clnica se utilicen 0.9%de
NaCl o 5% de glucosa en el suero?
xii


El Plasma posee en composicin agua, componentes inorgnicos entre
otros y dentro de ellos se encuentran concentraciones de iones, como el NaCl y de
otros solutos como la glucosa, es por eso que el suero debe tener dichos
componentes que se asemejen al medio del plasma para lograr denuevo el
equilibrio. Es posible que se utilice una menor concentracin de NaCl (0.9 %), ya
que este al entrar en contacto con agua se disocia aumentando su concentracin
que la glucosa que no se disocia (5 %)

Estos componentes cumplen una funcin muy importante en el organismo, El ion
Na+ es causante de la regulacin osmtica celular regulando el potencial de
membrana. La glucosa en cambio forma parte importante en los procesos de
respiracin celular.

12. Considerando la funcin de los eritrocitos, Por qu los niveles de oxgeno del
paciente disminuyeron?
xii


Los niveles de oxgeno del paciente disminuyeron ya que al destruirse los
eritrocitos, bajan la concentracin de estos y directamente tambin no se produce
la funcin que ellos cumplen que es transportan el oxgeno desde el plasma
sanguneo a las clulas, por lo tanto si no se realiza esta funcin bajan los niveles
de oxgeno.

13. Despus del error de Miguel, hay algo que se pueda hacer para salvar la vida
del paciente?
xii


Si se realiza una transfusin de sangre de forma inmediata podra
restablecerse los nivelesde oxgeno normales, dependiendo del factor del tiempo
tambin se podra realizar de forma inmediata un lavado gstrico para poder sacar
el agua destilada antes que se ingrese al torrente sanguneo.

14. Luego de algunos anlisis determinaron hemoglobinuria (hemoglobina en la
orina). Por qu ocurri esto?
xii


Los eritrocitos al destruirse se descomponen en restos celulares y en la
protena que contienen que es la hemoglobina, esta al estar inutilizada el cuerpo
13

debe eliminarla y la forma de hacerlo es a travs de la orina, es por eso que al
destruirse los eritrocitos tenemos como evidencia la cantidad de hemoglobina en
la orina.

RESPUESTAS ACTIVIDAD

15. Se encuentran en equilibrio las soluciones? Explique.
xii


Estas soluciones no se encuentran en equilibrio (aunque se indica la mi sma
cantidad molar) ya que la concentracin de Nacl del compartimiento de la derecha
presenta ms molculas, porque estas estar en una disolucin de agua se disocia
en iones Na y Cl, en cambio la glucosa a pesar de que estn en la misma
concentracin molar no se disocia en agua.

16. Y si no estuvieran en equilibrio Cmo se alcanzara?
xii


Si la membrana presenta permeabilidad solo al paso del agua, es posible
que se restablezca por osmosis, es decir, que el agua se desplace al
compartimiento donde haya mayor cantidad de solutos (Nacl) para que as haya
mayor cantidad de agua por concentracin molar en esa rea y se iguale a la
concentracin molar por volumen de la otra solucin.

Por otro lado si la membrana fuese permeable tanto al paso del agua como a la de
solutos a travs de protenas transportadoras, pudiese ocurrir paso de agua;
osmosis como difusin de solutos, en este caso desde el cantidad de gradiente
mayor, NaCl, hacia la gradiente menor que es la glucosa.


















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BIBLIOGRAFA

i
Pocock G. Richards C. (2005) Fisiologa Humana: La Base de la Medicina,
Editorial Masson, Segunda edicin, pp. 3 - 4
ii
Pocock G. Richards C. (2005) Fisiologa Humana: La Base de la Medicina,
Editorial Masson, Segunda edicin, pp. 25 26
iii
Chang R. (2010) Qumica, Editorial McGraw Hill, Dcima Edicin, pp. 517 - 520
iv
Crdova A. (2003) Fisiologa Dinmica, Editorial Masson, pp. 13 14
v
Koeppen B. Stanton B. (2009) Berne y Levy: Fisiologa, Editorial ElSeiver, Sexta
Edicin pp. 13 14
vi
Koeppen B. Stanton B. (2009) Berne y Levy: Fisiologa, Editorial ElSeiver, Sexta
Edicin pp. 15 16
vii
Koeppen B. Stanton B. (2009) Berne y Levy: Fisiologa, Editorial ElSeiver, Sexta
Edicin pp. 27 28
viii
Crdova A. (2003) Fisiologa Dinmica, Editorial Masson, pp. 16 18
ix
Koeppen B. Stanton B. (2009) Berne y Levy: Fisiologa, Editorial ElSeiver, Sexta
Edicin pp. 17 20
x
Crdova A. (2003) Fisiologa Dinmica, Editorial Masson, pp. 13 16
xii
Preguntas extradas de LabTutor Osmosis y Permeabilidad Selectiva para
Qumica.



DISTRIBUCIN

Natalia Elgueta: Introduccin
Anlisis caso clnico
Respuestas actividad
Nota: 7,0
Dbora Salazar: Permeabilidad selectiva
Respuestas actividad
Nota: 7,0
Rodrigo Vargas: Osmosis
Respuestas actividad
Nota: 7,0