Momentos de Ciencia, 2014

Estudio De Las Propiedades Biofsicas Del

Eritrocito
Adriana Julieth Montoya-Gonzalez
1,
*, Alexis Felipe
o!as-Cruz
1,
*, Carolina "ozada-#e$a
1,
*, %ie&o
Armando-Casti'lanco
1,
*, Jonathan (a)arro-
*antanilla
1,
*, +atherine Ca)iedes-,riana
1,
*, (elson
Fa'ian Galindez-Mutiz
1,
* - .edmi Carolina Mu$oz-
Castro
1,
*
1
Facultad de Ciencias Bsicas. Programa de Biologa. Universidad de la Amazonia. Florencia (Caquet.
Colom!ia.
eci'ido el 0/ de *eptiem're del 2014
__________________________________________________________________
Resumen
0n las instalaciones de los la'oratorios de la uni)ersidad de la Amazonia 1Florencia 2 Ca3uet45, se lle)6 a
ca'o el proceso experimental acerca del estudio de las propiedades 'io78sicas del eritrocito9 donde se 'usc6
explicar la 7ra&ilidad osm6tica y la resistencia &lo'ular del mismo9 a tra):s de una muestra de san&re
heparinizada, a la cual se le a&re&o )ol;menes re&istrados en la ta'la 1 de reacti)os como manitol, M&Cl2,
(aCl< %espu:s del de'ido procedimiento se lle)6 las muestras al espectro7ot6metro en el cual se realiz6 la
lectura de la a'sor'ancia< %urante el procesamiento de los datos o'tenidos experimentalmente se pudo
o'ser)ar 3ue los resultados presentaron ciertas incoherencias en cuanto a la a'sor'ancia, y con el contraste
de la literatura se lo&r6 lle&ar a la conclusi6n de 3ue hay 3ue ser muy meticulosos con este tipo de pr4ctica y
utilizar 'uen material por3ue esta clase de estudios puede ayudarnos a detectar trastornos san&u8neos<
= 2014 >ni)ersidad de la Amazonia< ,odos los derechos reser)ados<
Palabras clave: 0ritrocito, osmosis, heparinizada, cur)a de 7ra&ilidad osm6tica, hemolisis, concentracion
Introduccin
0l presente estudio 7ue realizado
con c:lulas san&u8neas, conocidas
como eritrocitos o &l6'ulos ro!os<
1?< @loom 1ABC5< 0stos son
importantes en el proceso del
transporte de ox8&eno hacia los
di7erentes te!idos del cuerpo
humano a tra):s de las arterias, con
ayuda de la hemo&lo'ina 3ue
contiene hierro< 1?< Copenha)er
1AC15< Al poseer &randes cantidades
de hierro, est4n implicados en una
serie de procesos Dsiol6&icos 3ue
dependen de los campos el:ctricos
3ue se encuentran presentes en el
or&anismo humano< 1A< Cromer
1ACE5< 0llos est4n implicados en
una serie de procesos Dsico3u8micos
so're el torrente san&u8neo y en los
procesos inmunol6&icos del cuerpo
humano< 1%< FaFcett 1AA/<5
"os eritrocitos son c:lulas
san&u8neas anucleadas y por lo
tanto presentan una mem'rana la
cual es un comple!o de l8pidos y
prote8nas 1'icapa lip8dica5, el cual es
importante para mantener la
elasticidad celular y la
permea'ilidad selecti)a< 1G< Curt8s<
@iolo&8a 1AC/5< 0sta mem'rana
celular constituye una inter7ace
entre el compartimento intra y
extracelular 3ue permite el li're
recam'io de mol:culas de a&ua,
esta'leci:ndose un &radiente
osm6tico< Cuando la c:lula en7renta
un am'iente hipot6nico se &enera
un mo)imiento neto de a&ua li're
hacia su interior< *e&;n el &rado de
hipotonicidad y la capacidad de la
mem'rana para mantener su
inte&ridad, la c:lula se hincha y
estalla permitiendo, en el caso de
los eritrocitos, la salida de
hemo&lo'ina< 0sta propiedad es
utilizada en la prue'a de la
7ra&ilidad osm6tica eritrocitaria
17oe5, 3ue consiste en exponer
al8cuotas de eritrocitos a
concentraciones decrecientes de
(aCl, usualmente entre 1 H,
manitol I,1H, y M&Cl2 I,4E H, a&ua
destilada y lue&o cuantiDcar el
&rado de hem6lisis en cada una de
ellas< 1*chalm, o< F, et al< 1AB/5< #or
lo tanto, la 7oe permite e)aluar la
resistencia y esta'ilidad de la
mem'rana del eritrocito 7rente a un
estr:s osm6tico<
0l estr:s oxidati)o ha sido deDnido
como un dese3uili'rio en 7a)or de la
producci6n de prooxidantes
1radicales li'res5 so're la capacidad
antioxidante celular 3ue puede
ocasionar trastornos de distinta
ma&nitud en la Dsiolo&8a celular< 1.u,
'<p< 1AA45< "a peroxidaci6n de
prote8nas y l8pidos, causada por la
excesi)a exposici6n a prooxidantes,
conduce a cam'ios de&enerati)os
en la hemo&lo'ina y modiDca,
adem4s, la ar3uitectura de la
mem'rana celular< 10dFards 1AAE<5
%esde el punto de )ista 7uncional, el
da$o oxidati)o de la mem'rana
altera la Juidez, permea'ilidad y
7unci6n meta'6lica, resultando en
un incremento en la 7ra&ilidad de la
mem'rana del eritrocito< 1ChoF, c<K<
1ABA5< "os eritrocitos de mam87eros
son particularmente suscepti'les a
su7rir da$o oxidati)o de'ido a 3ue
sus l8pidos de mem'rana son l4'iles
a la oxidaci6n< 1Galleano, m< et al
1AA/5<
0ste tra'a!o pretende e)aluar, la
7ra&ilidad osm6tica y la resistencia
&lo'ular de los de los eritrocitos, el
comportamiento de la 7oe, como
indicador del da$o oxidati)o<
Metodologa.
Cada &rupo de tra'a!o tu)o dos
!ue&os de tu'os numerados del 1 al
12, donde se los coloco
ordenadamente en la &radilla
respecti)a< Cada &rupo tu)o una de
las tres soluciones salinas de tra'a!o
3ue 7ueron (aCl 1H, manitol I,1H
o M&Cl2 I,4EH, las cuales 7ueron
empleadas para preparar
disoluciones decrecientes de las
mismas en los tu'os numerados y
se a&re&6 a&ua en proporciones
indicadas como lo mostra'a la
ta'la, en la cual se re&istraron los
resultados<
"ue&o se a&re&6 a cada tu'o dos
&otas de san&re heparinizada y se
mezcl6 sua)emente<
Adicionalmente, se prepar6 un tu'o
con 10 ml de a&ua destilada
;nicamente, el cual se le a&re&o dos
&otas de la misma muestra de
san&re heparinizada< 0ste tu'o 7ue
empleado como re7erencia de
o'tenci6n de un 100H de hemolisis
1'lanco o control5< *e de!6 los tu'os
en reposo por I0 minutos para 3ue
los eritrocitos reaccionen con la
soluci6n< *e a&ito sua)emente y se
centri7u&o por / minutos a 2000
rpm en centri7u&a<
Finalmente, se procedi6 a medir la
a'sor'ancia en el
espectro7ot6metro del la'oratorio<
#ara ello, se sac6 los tu'os con
cuidado de la &radilla y se extra!o el
so'renadante con una pipeta
#asteur 1se tu'o cuidado en no
tocar el 'ot6n el 'ot6n del eritrocito
3ue se 7orm6 en el 7ondo del tu'o5 y
se coloc6 en la cu'eta del
espectro7ot6metro destinado para
tal Dn, y se ley6 el re&istro 3ue le
proporciona'a el e3uipo a /40 nm
de lon&itud de onda<
Resultados.
Al tener los tres &rupos de 12 tu'os de ensayo rotulados, cada &rupo con su
respecti)a soluci6n, se o'tu)ieron los si&uientes datos<
Tabla 1. e&istro de porcenta!e de concentraci6n y osmosis o'tenidos en los experimentos<
(L tu'o
Molumen
de
soluto1ml5
N
Molumen
G2O
1ml5
(aCl
1&5
(aCl
1OsmP" 5
NN
Manit
ol 1&5
Manitol
1OsmP"5NN
M&Cl2
1&5
M&Cl2
1OsmP" 5
NN
1 C,/ 1,/ 0,01/ 0,/14 0,04B 0,/1 0,0/I 0,/1E
2 B,/ 2,/ 0,02/ 0,C/E 0,0BC 0,C/1 0,0CC 0,CE1
I E,/ I,/ 0,0I/ 1,1AA 0,10A 1,1A1 0,12I 1,20/
4 E 4 0,04 1,IB 0,124 1,IE1 0,14 1,IBB
/ /,/ 4,/ 0,04/ 1,/41 0,14 1,/I1 0,1/C 1,/4A
E / / 0,0/ 1,B12 0,1// 1,B01 0,1B/ 1,B22
B 4,/ /,/ 0,0// 1,CC4 0,1B1 1,CB2 0,1AI 1,CA4
C 4 E 0,0E 2,0// 0,1CE 2,042 0,21 2,0EE
A I,/ E,/ 0,0E/ 2,22E 0,202 2,212 0,22C 2,2IC
10 I B 0,0B 2,IAB 0,21B 2,IC2 0,24/ 2,41
11 2 C 0,0C 2,B4 0,24C 2,B22 0,2C 2,B//
12 1 A 0,0A I,0C2 0,2BA I,0EI 0,I1/ I,0AA
N(aCl 1H NManitol I,1H NM&Cl2 I,/H NM&Cl2 I,/H
NN(aCl #MQ /C,4 &Pmol NNM&Cl2 #MQ 20I,I &Pmol NNManitol #MQ 1C2,2
#ara el c4lculo de la osmolaridad de cada tu'o de ensayo se tu)o en cuenta<
N Concentraci6n de la soluci6n
NN #eso molecular de las di7erentes sustancias< 1(aCl, M&Cl2 y Manitol5
*e re&istraron los )alores de a'sor'ancia o'tenidas para cada uno de los
so'resalientes por medio de la cu'eta del espectro7ot6metro, donde se
determin6 el porcenta!e de hemolisis para cada uno de ellos<

Tabla . Malores de a'sor'ancia o'tenidas en los experimentos<
(L
tu'o %<O (aCl
H Gemolisis
(aCl %<O Manitol
H Gemolisis
Manitol %<O M&Cl2
H Gemolisis
M&Cl2
1 1,AAA IAAC 1,IB4 2B4C 1,AAA IAAC
2 1,AAA IAAC 1,0A 21C0 1,AAA IAAC
I 1,AAA IAAC 1,112 2224 1,AAA IAAC
4 1,AAA IAAC 1,/4 I0C0 1,AAA IAAC
/ 1,AAA IAAC 1,0IC 20BE 1,AAA IAAC
E 1,AAA IAAC 1,1E4 2I2C 1,AAA IAAC
B 1,AAA IAAC 0,11B 2I4 1,AAA IAAC
C 1,AAA IAAC 0,0/C 11E 1,AAA IAAC
A 1,AAA IAAC 0,1I1 2E2 1,AAA IAAC
10 1,AAA IAAC 0,1IA 2BC 1,AAA IAAC
11 1,AAA IAAC 0,11I 22E 1,AAA IAAC
12 0,12B 2/4 0,14E 2A2 1,21 2420
N%<O @lanco R 0,0/
N,u'o de control representa el 100H de hemolisis<
#ara la ela'oraci6n de la cur)a de 7ra&ilidad osm6tica, se tom6 la
concentraci6n de la soluci6n salina 1"a!la 15 y el porcenta!e de hemolisis
o'tenido 1"a!la #5<
!ra"ca 1< Cur)a de 7ra&ilidad osm6tica para el Cloruro de sodio<
0<01 0<02 0<0I 0<04 0<0/ 0<0E 0<0B 0<0C 0<0A 0<1
0
/00
1000
1/00
2000
2/00
I000
I/00
4000
4/00
FAGS"S%A% O*MO,SCA (aCl
Concentracion (aCl 1&5
H Gemolisis (aCl
!ra"ca . Cur)a de 7ra&ilidad osm6tica para el Manitol<
0 0<0/ 0<1 0<1/ 0<2 0<2/ 0<I
0
/00
1000
1/00
2000
2/00
I000
I/00
FAGS"S%A% O*MO,SCA MA(S,O"
Concentracion de Manitol 1&5
H Gemolisis Manitol
!ra"ca #. Cur)a de 7ra&ilidad osm6tica para el Cloruro de ma&nesio<
0 0<0/ 0<1 0<1/ 0<2 0<2/ 0<I 0<I/
0
/00
1000
1/00
2000
2/00
I000
I/00
4000
4/00
FAGS"S%A% O*MO,SCA M&Cl2
Concentracion M&Cl2 1&5
H Gemolisis M&Cl2
Literatura citada
A< Cromer< 1ACE< F8sica para las ciencias de la
)ida< 2L edici6n, @arcelona, 0spa$a<
A< Frumento< 1AB2< @io78sica< Madrid< 0spa$a<
Mos'yP%oyma "i'ros<
@erne <M<, 1AA/< Fisiolo&8aQ *an&re y hemostasia,
,aimes Mirrur<
ChoF, C<+< 1ABA< (utritional inJuence on cellular
antioxidant de7ense systems< Am< J< Clin< (utr< I2Q
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Coppo J<A< 200C< Fisiolo&8a comparada del medio
interno< 2da edici6n<
%< FaFcett< 1AA/< ,ratado de histolo&8a< Madrid
0spa$a McGraF-Gill 2 Snteramericana<
%escarre&a C< 200E< 0l ma&nesio< 0studio
ela'orado y recopilado si&uiendo los in7ormes de
la'oratorio< Medicina natural y @iol6&ica<
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Galleano, M, #untarulo< 1AA/< *< ole o7
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lipid peroxidation a7ter acute iron o)erload in rats<
@iochem< @iochips< Acta 12B1Q I21-I2E<
G< Curt8s< @iolo&8a< 1AC/< Tuinta edici6n< @uenos
Aires Ar&entina< 0ditorial medica panamericana<
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Gematolo&8a< 2da 0dici6n< 0ditorial M:dica
#anamericana< M:xico<
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edici6n< @arcelona 0spa$a< 0ditorial la'or, *<A<
?< Copenha)er, 1AC1<,ratado de Gistolo&8a<
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.u, @<#< 1AA4< Cellular de7enses a&ainst dama&e
7rom reacti)e oxy&en species< #hysiol< e)< B4Q
1IA21E2<
$%E&'(
1. $e%na &smosis, ' d( e)em*los de su rol en el movimiento de lquidos entre
com*artimientos cor*orales.
"a 6smosis es un 7en6meno en el 3ue se produce el paso o di7usi6n de un
disol)ente a tra):s de una mem'rana semipermea'le 1permite el paso de
disol)entes, pero no de solutos5, desde una disoluci6n m4s diluida a otra m4s
concentrada< "os l83uidos en el cuerpo humano representan el E0H de la masa
corporal 1MC5 40H intracelular y 20H extracelular 3ue a su )ez se di)ide en
"83uido Sntersticial 3ue corresponde a 1/H y un /H restante e3ui)alente al
plasma san&u8neo<
%ichos l83uidos se encuentra en constante mo)imiento son transportados
r4pidamente por la san&re circulante y contiene iones y nutrientes para
mantenimiento de la )ida celular y la distri'uci6n de estos en
compartimientos como el intracelular y el extracelular se determina por la
acci6n osm6tica de los solutos<
0l a&ua es la mol:cula m4s a'undante en el interior de todos los seres )i)os, y
mediante la 6smosis es capaz de atra)esar mem'ranas celulares 3ue son
semipermea'les para penetrar en el interior celular o salir de :l< 0sta
capacidad depende de la di7erencia de concentraci6n entre los l83uidos
extracelular e intracelular, determinada por la presencia de sales minerales y
mol:culas or&4nicas disueltas9 el rol 3ue desempe$a la osmosis es uno de los
m4s importantes en el transporte de l83uidos de'ido a 3ue #or medio de esta,
se da en el plasma san&u8neo el intercam'io de nutrientes, desechos y
productos meta'6licos con el l83uido intersticial al pasar la san&re por los )asos
capilares del cuerpo9 por este mismo 7en6meno tam'i:n se pueden
transportar las &rasas a'sor'idas por el intestino entre muchas otras
acti)idades de transporte 3ue pretenden mantener en e3uili'rio nuestro
or&anismo<
#. +Por qu( los eritrocitos incrementan su volumen e inclusive son
,emolizados, cuando son colocados en una soluci&n de -,# . de cloruro de
sodio/
"as c:lulas pueden estar en estado isot6nico hipert6nico o hipot6nico pero eso
depende de la presi6n osm6tica 3 se e!erza desde 7uera, entonces como el
cloruro de sodio es m4s denso 3ue la san&re, el eritrocito puede entrar en
hipoton8a por 3ue se le salen los l83uidos o en hiperton8a por 3ue le entran
muchos entonces se produce la de7ormaci6n del eritrocito<
0. +1u( es 2ragilidad osm&tica ', cual 2ue la encontrada *or usted *ara el
eritrocito/
3. +1u( ocurrira si *ara la e4*eriencia *rctica de ,o' en lugar de 5aCl se
,u!iese utilizado Al#(6730/ +8a curva de 2ragilidad osm&tica se des*lazara a
la derec,a o a la izquierda/ 9usti%que su res*uesta.
*i en la experiencia de la practica en lu&ar de utilizar (aCl y hu'i:semos
utilizado Al21*O45I la 7uerza i6nica hu'iese aumentado, el a&ua dentro de la
c:lula tiende a salir y de esta 7orma a la c:lula le produce el 7en6meno de
crenaci6n 3ue es muerte celular< "a cur)a de 7ra&ilidad osm6tica se desplazar8a
a la derecha<
:. +Una soluci&n salina que es isot&nica *ara eritrocitos es necesariamente
isot&nica *ara otro ti*o de c(lulas/
(o por3ue est4 especiDcando solamente 3ue es una soluci6n isot6nica
*O"AM0(,0 para los eritrocitos, para otra c:lula puede ser di7erente por3ue
cada c:lula es espec8Dcamente distinta de otra as8 se encuentre en el mismo
or&anismo, pero sus c:lulas en otro 6r&ano pueden tener un medio distinto de
compati'ilidad 3ue este 3ue es soluci6n salino<
E< +Cul ser la *resi&n osm&tica e)ercida *or una soluci&n de glucosa la cual
tiene la misma osmolaridad de una soluci&n de ;Cl -,<:=, tomando en cuenta
que am!as soluciones se encuentran a 0->C/
V R ,M
Aplicando la ecuaci6n se tieneQ
V R
(0,082
atm. L
k . mol
)(303k)(0,75
mol
L
)
V R 1C,EI atm (
101,325 pas
atm
) R 1CCC,14 pascales<
V R 1CCC,14 pascales<
<. $i2erenciar entre una lista de soluciones, cu'a com*osici&n se es*eci%que,
las que son isot&nicas, ,i*ert&nicas o ,i*ot&nicas res*ecto al *lasma
sanguneo.
#lasma san&u8neoQ 0<AH #PM
*i esa soluci6n de (aCl es hipert6nica con respecto al interior del eritrocito,
tiene una concentraci6n mayor a 0,AH#PM,lo 3ue indica 3ue hay un mo)imiento
neto de a&ua hacia el exterior de la c:lula, por lo 3ue disminuye el )olumen
celular y se achicharra<
*i es isot6nica, tiene una concentraci6n de 0,AH#PM, no hay mo)imiento neto
de a&ua y el )olumen celular se mantiene<
*i es hipot6nica, tiene una concentraci6n menor a 0,AH#PM, lo 3ue indica 3ue
hay un mo)imiento neto de a&ua hacia el interior de la c:lula la cual se hincha
y se lisa o explota< ,odo ocurre por el 7en6meno de 6smosis<
?. $ada una serie de valores de *orcenta)e de ,em&lisis ' de osmolaridad de
las soluciones, construir una gr%ca que *ermita deducir la 2ragilidad osm&tica
del eritrocito e identi%car la que muestre la m4ima 2ragilidad glo!ular.
0 0<0/ 0<1 0<1/ 0<2 0<2/ 0<I 0<I/
0
/00
1000
1/00
2000
2/00
I000
I/00
4000
4/00
FAGS"S%A% O*MO,SCA
Concentracion 1&5
H Gemolisis
*i se o'ser)a detenidamente la &r4Dca teniendo en cuenta 3ue las c:lulas
san&u8neas poseen una mem'rana semipermea'le 3ue permite el paso de
solutos del medio exterior hacia el interior y )ice)ersa< 0ntonces, se analiza si
sometemos una c:lula san&u8nea a un medio hipot6nico este pasa por un
estado de tur&encia 1se hincha por exceso de l83uido5, es por ello 3ue en la
&r4Dca se lo&ra detallar 3ue permanece constante pero lue&o esta c:lula
estalla de'ido a la presi6n, es decir ocurre el 7en6meno de hemolisis en donde
el contenido eritrocitaria es li'erado al medio externo y por lo tanto la
direcci6n de la &r4Dca cam'ia, es decir, decrece disminuyendo el porcenta!e de
hemolisis<
A< +Cul ser la osmolaridad *lasmtica de una soluci&n que contiene 11-
mg@dl de glucosa/
Osmolaridad plasmatica R
numerodemilimoles desoluto
litros de plasma
*e hallan los n;meros de milimoles de &lucosa<
110m& &lucosa (
g
1000mg
)(
mol glucosa
180 g glucosa
)(
1000milimol
mol
)
=0,61milimoles de glucosa
Aplicando la ecuaci6n se tieneQ
Osmolaridad plasm4tica R
0,61milimoles deglucosa
0,1litros de plasma
Osmolaridad plasm4tica R E,1mOsmP"
1-. +Cul es la osmolaridad de una soluci&n que contiene 13# mAq@8 de 5aB,
11- mAq@8 de ClC
' #? mAq@8 de DC70/
m& R
(mEq)( peso atomico)
valencia
Aplicando la ecuaci6n se tieneQ
m& R
(142mEq)(23 g)
1
m& R I2EEm& W I,2E& de (a
X
Osmolaridad R
numerodemilimoles desoluto
kilogramos de solvente
*e hallan los n;meros de milimoles de (a
X
I,2E& (a (
mol Na
23g Na
)(
1000milimoles
mol
)
=142milimoles de Na

Ahora se supone 3ue la soluci6n se encuentra muy diluida entonces se dice
3ueQ
ml R m&
Aplicando la ecuaci6n se tieneQ
Osmolaridad R
142milimoles de Na
kilogramos
Osmolaridad R 142mOsmP+&
Como se o'ser)6 en el e!ercicio anterior 3ue las unidades m03P" son
e3ui)alente a mOsmP+&, en las dem4s soluciones de Cl y GCOI, solo se
reemplazaron las unidades<
110m03P" de Cl W 110mOsmP+&
2Cm03P" de GCOI W 2CmOsmP+&