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UNIVERSIDAD ABIERTA Y A DISTANCIA UNAD

ESCUELA DE CIENCIAS BASICAS, TECNOLOGIA E INGENIERIA

ACTIVIDAD:14
TRABAJO PRCTICO

SIMULADOR HPLC

ESTUDIANTE:
ELIZABETH MUOZ
LUCY VIVIANA DUQUE
DORIS ADRIANA VEGA. 46453711

TUTORA:
JENNY PAOLA ORTEGA


INGENIERIA DE ALIMENTOS

JUNIO 2014

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INDICE
pag
SECCION A. Reconocimiento de los parmetros cromatograficos en
cromatografa liquida de alta eficiencia (CLAE)
Factor de separacin.3
Resolucin3
Eficiencia4
Factor de retencin4
Tiempo de retencin..5
Tiempo muerto.5
Ancho de banda5
Cromatografa liquida en fase normal.6
Cromatografa liquida en fase reversa6
Gradiente de elucin.7
Elucin socrtica..7
SECCION B. efecto de la estructura e los compuestos (solutos) y de la
composicin de la fase mvil sobre la retencin y la resolucin.
Dibujos de las estructuras de los compuestos indicados8
Usos de cada uno de estos compuestos indicados9
Registro para cada compuesto12
Seccin c: Efecto por porcentaje del modificador en la composicin de la fase
mvil sobre la retencin y la resolucin.
Regustro datos obtenidos de los compuestos Acetophenone (acetofenona) y
Ethylparaben (etilparabeno)15
Bibliografag..

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SECCION A. Reconocimiento de los parmetros cromatograficos en
cromatografa liquida de alta eficiencia (CLAE)
Defina y explique cmo se relacionan los siguientes conceptos. Incluya cuando
corresponda, el smbolo y ecuacin que representa al concepto
1. Factor de separacin. ()
Define que tan selectiva es una columna para separar dos picos. La columna
puede ser selectiva a una separacin, que se identifica por un valor alto de este
factor.

En trminos tomados a partir de un cromatograma se puede calcular:

2. Resolucin. (Rs)
La resolucin de una columna constituye una medida cuantitativa de su
capacidad para separar dos analitos, en este trmino si se toma en cuenta el
ensanchamiento de los picos, as que la magnitud de este valor si permite
asegurar la separacin de dos picos.

Donde WA y WB son los anchos de banda de A y B respectivamente
La resolucin expresada en trminos tericos es:
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3. Eficiencia. (N)
Para realizar una separacin cromatografica optima, debe evitarse en lo posible, el
ensanchamiento de las bandas debido a la dispersin; en efecto cuanto ms
anchas sean las bandas, menor nmero de ellas podrn ser resueltas en un
espacio de tiempo dado; es decir cunto ms agudos sean los picos que emergen
de una columna mejor estar actuando dicha columna. Las anchuras de las
bandas cromatograficas dependen de las caractersticas de la columna (tamao
de las partculas del lecho estacionario, homogeneidad de este, velocidad de la
fase mvil, etc.). Se expresa como el nmero de platos tericos:

El nmero de platos de una columna depende de su longitud, por lo que se debe
tener en cuenta la altura equivalente de un plato terico, que relaciona la eficacia
de una columna con su longitud y se define como el cociente entre la longitud de
la columna y su nmero de platos tericos

4. Factor de retencin.
Este factor ( ) es adimensional expresa la retencin de un compuesto por la fase
estacionaria, independiente del caudal de la fase mvil.
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5. Tiempo de retencin.
Es el tiempo que transcurre despus de la inyeccin de la muestra para que el
pico del analito alcance el detector y se le da el smbolo . O en otras palabras es
el tiempo que tarda cada sustancia en abandonar el sistema cromatografico

6. Tiempo muerto.
Es el tiempo para que la especie no retenida alcance el
detector
Ancho de banda (sigma total)
Corresponde al intervalo de longitudes de onda comprendido entre los puntos en
donde la transmitancia (de la radiacin emitida por la fuente y que llega a la rendija
de salida) alcanza la mitad de su mximo de transmisin o el intervalo de
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longitudes de onda que contiene el 75% de la energa radiante que proviene del
monocromador. La anchura de banda se puede expresar en trminos de la
apertura o amplitud de las rendijas, S, y la dispersin lineal recproca del
monocromador como:
SBW =S.D
-1
Cromatografa liquida en fase normal.
La fase estacionaria es polar (gel de slice, grupos ciano, amino y diol) y la fase
mvil es no polar (hexano o isopropileter). El componente menos polar es el que
eluye primero

Cromatografa liquida en fase reversa
La fase mvil es polar (agua, metanol o acetonitrilo). El componente ms polar es
el primero en eluir y la fase estacionaria es no polar (cadena hidrocarbonada que
puede ser:
Cadena larga: C:18
Cadena intermedia: C:8
Cadena corta: C:2

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7. Gradiente de elucin.
Se utilizan dos o ms disolventes de distinta polaridad y se vara la composicin
de forma continua o mediante etapas escalonadas
8. Elucin socrtica.
Es la separacin con disolvente de composicin constante
SECCION B. efecto de la estructura e los compuestos (solutos) y de la
composicin de la fase mvil sobre la retencin y la resolucin.
Dibuje estructuras de los siguientes compuestos utilizando las convenciones de
cua/slash representando los ngulos de enlace



Nombre Imegen propiedades fisicas
Formula
molecular
8

Acetofenona






Benzofenona






Butilparabeno




C
11
H
14
O
3

Propiofenona




Etilparabeno





Propilparabeno







9

Ketoprofeno





3-nitrofenol




C
6
H
5
NO
3

4-nitrofenol




C6H5N
O3

b. Cules son los principales usos de cada uno de estos compuestos
Acetofenona
Se usa como precursor en la preparacin de fragancias que se asemejan a
la almendra, la cereza, la madreselva, el jazmn y la fresa.
Tambin se usa para preparar resinas y como aditivo en las gomas de
mascar y en cigarrillos.
A finales del siglo XIX se venda como hipntico y anti convulsionante con el
nombre hipnona (Hypnone). Sus efectos sedantes se consideraban
superiores a los del paraldehdo y a los del hidrato de cloral.
Benzofenona
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La benzofenona es una cetona aromtica que ayuda a filtrar las
radiaciones. Esta cetona absorbe la radiacin y la disipa en forma de calor.
Por esa principal caracterstica es utilizada en la produccin de perfumes,
jabones y protectores solares.
En el caso de los perfumes y jabones, la benzofenona provoca que ni el olor
ni el color, pierdan sus propiedades debido a la exposicin con los rayos
UV, mientras que en los protectores solares tienen como funcin absorber
la radiacin y transformarla en energa no nociva para la salud de la piel.
Fabricacin de productos farmacuticos (antihistamnicos, hipnticos,
pantallas solares), cosmticos e insecticidas, en anlisis, qumica fina, etc.
Butilparabeno
Se utiliza muchsimo en muchos productos del cuidado de la piel e incluso
en medicinas tan comunes como el ibuprofeno.
Es el anti fngico ms potente de entre los parabenos. De hecho, su
potencial microbiano es mayor que el del metilparabeno, el propilparabeno
o el etilparabeno. Es particularmente eficaz contra mohos y levaduras, y
menos contra bacterias. En cuanto a cmo funciona, parece que inhibe la
capacidad de sntesis del ADN y el ARN y con ello la capacidad de
transporte de sustancias entre membranas, lo cual retarda el crecimiento
microbiano porque les impide desarrollarse al ritmo habitual. An as, es
frecuente encontrrselo combinado con otras sustancias biocidas como
liberadores de formaldehido, isotiazolinonas y fenoxietanol para aumentar
sus capacidades conservadoras, as como con otros tipos de parabenos.
Propiofenona
Se utiliza en la sntesis de efedrina y derivados de propiofenona tales como
metcarinona y catinona.
Es un intermediario til para la preparacin de medicamentos que actan
sobre el sistema nervioso central tales como los hipnticos, ansiolticos
Se puede tambin utilizar en la sntesis de alquenos arilo tales como
fenilpropanoides
Etilparabeno
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Son utilizados como conservadores protegiendo a los productos de las
levaduras y los hongos. No obstante, no son muy efectivos contra las
bacterias. Su actividad es independiente de la acidez, y adicionalmente, son
poco solubles, lo que limita sus aplicaciones (antimicrobianos y ciertas
propiedades antioxidantes) en formas farmacuticas liquidas como jarabes,
soluciones, suspensiones e inyectables.
son usados en una gran variedad de alimentos y cosmticos.
Propilparabeno
se usa con frecuencia en cosmticos, productos de cuidado para la piel y
comida. Tiene una toxicidad generalmente baja por ingestin
Es muy poco soluble en agua fra, por lo que se trabaja en procesos con
calor. Es anti fermentativo, tiene amplio espectro antimicrobiano es
bacteriosttico y antioxidante, combate mohos y levaduras. Es muy utilizado
en cosmticos (es el segundo producto de este tipo ms utilizado), pero
tambin es empleado en la industria alimenticia, se recomienda utilizarlo del
0,05 al 0,1%; en la preservacin de grasas en una proporcin del 0.1%.
Ketoprofeno
El ketoprofeno de prescripcin se usa para aliviar el dolor, sensibilidad,
inflamacin (hinchazn) y la rigidez causada por la osteoartritis (artritis
causada por un deterioro del recubrimiento de las articulaciones) y la artritis
reumatoide (artritis causada por la hinchazn del recubrimiento de las
articulaciones). Tambin se usa para aliviar el dolor, incluyendo el dolor
menstrual (dolor que se presenta antes o durante el perodo menstrual). El
ketoprofeno sin prescripcin o de venta libre se usa para aliviar dolores
leves causados por cefaleas (dolor de cabeza), perodos menstruales, dolor
de muelas, resfro comn, dolores musculares, dolor de espaldas y para
reducir la fiebre. Pertenece a una clase de medicamentos llamados
antiinflamatorios sin esteroides. Funciona al detener la produccin de una
sustancia que causa dolor, fiebre e inflamacin.
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El ketoprofeno por va oral es efectivo y bien tolerado como tratamiento
agudo en los ataques de migraa.
3-nitrofenol
Se utiliza en peletera como fungicida,
4-nitrofenol
Es usado principalmente en la manufactura de medicamentos, fungicidas, tinturas
y para oscurecer el cuero.
3. Abra el HPLC simulador (http://www.hplcsimulator.org/)


4. configure el simulador as:
c. posteriormente, registre para cada compuesto:
Tiempo de retencin ( )
Factor de retencin (K)
Ancho de banda (sigma total )
Adjunte imagen del cormatograma obtenido
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5. cambie la composicin de la fase mvil de metanol a acetonitrilo
e. posteriormente, registre para cada compuesto:
Tiempo de retencin ( )
Factor de retencin (K)
Ancho de banda (sigma total )
Adjunte imagen del cormatograma obtenido
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f. explique por que se da el cambio en los tiempos de retencin y en la
separacion de los compuestos cuando el metanol es sustituido por el
acetonitrilo.

Los solventes polares arrastran mas eficazmente los compuestos mas
retenidos en la fase estacionaria
Los solventes menos polares, arrastran muy lentamente a los compuestos los
compuestos ms polares estarn menos retenidos que los menos polares.
Los tiempos de retencin disminuyen cuando menor sea la proporcin de
agua, cuando menos polar sea el disolvente empleado.
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El tiempo de retencin aumenta con la adicin de disolvente polar a la
fase mvil y disminuye con la introduccin de disolventes ms
hidrolgicos.
En que caso se obtiene una mejor separacin
En el primer caso, cuando utilizamos metanol, ya que se observan 8 de las 9
muestras y con picos bien definidos y separados, solo encontramos un
compuesto que sale al mismo tiempo con otro. Mientras que en el segundo
caso, utilizando acetonitrilo, vemos 7 de 9 compuestos y en algn caso estn
integrados varios picos en 1
g. Cul es la importancia del agua en la composicin de la fase mvil?
El agua puede contener tampones, sales, o compuestos como el cido
trifluoroactico, que ayudan a la separacin de los compuestos
La cromatografa de fase reversa se basa en el principio de las
interacciones hidrofbicas que resultan de las fuerzas de repulsin entre
un disolvente relativamente polar (el agua es altamente polar) , un
compuesto relativamente apolar, y una fase estacionaria apolar.
Seccin c: Efecto por porcentaje del modificador en la composicin de la
fase mvil sobre la retencin y la resolucin.
1. En el listado de compuestos, elimine 7 solutos dejando solo a
Acetophenone (acetofenona) y Ethylparaben (etilparabeno).
2. Fije las condiciones del simulador de acuerdo con las indicaciones de la
gua:
a) Registre el tiempo de retencin, el factor de retencin y el sigma total para
los dos compuestos. Adjunte una imagen del cromatograma obtenido.


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Compuesto 95% Tiempo de
retencin
(Tr)
factor de
retencin
K
sigma total
Acetofenona

1,1185 0,0516 0,5485
Etilparabeno

1,1196 0,0526 0,5490


b) Calcule el tiempo muerto.
El tiempo muerto es de 65 seg.
c) Calcule la resolucin, , para los dos compuestos.






3. Cambie gradualmente el porcentaje de metanol en intervalos de 10% iniciando en
95% y terminando en 5% (95%, 85%, 75%, 5%).
3. Registre el tiempo de retencin, el factor de retencin y el sigma total para los dos
compuestos. Adjunte una imagen del cromatograma obtenido.
%
Compuesto Tiempo
de
retencin
(tR)
factor de
retencin
K
sigma
total
Imagen
95 Acetofenona

1,1185 0.0516 0.5485

Etilparabeno

1,1196 0.0526 0.5490
85 Acetofenona

1.1802 0.1096 0.5654

17

Etilparabeno

1.1987 0.1270 0.5739
75 Acetofenona

1.3109 0.2325 0.6243

Etilparabeno

1.3897 0.3066 0.6601
65 Acetofenona

1,5885 0,4935 0.7571

Etilparabeno

1,8506 0,7399 0.8785
55 Acetofenona

2,1774 1,0472 1,0401

Etilparabeno

2,9628 1,7856 1,4101
45 Acetofenona

3,4272 2,2222 1,6380

Etilparabeno

5,6471 4,3094 2,6934
35 Acetofenona

6,0793 4,7157 2,8960

Etilparabeno 12,1254 10,4002 5,7717
25 Acetofenona

11,7073 10,0070 5,5334

Etilparabeno 27,7601 25,0997 13,1177
15 Acetofenona

23,6504 21,2358 11,0663

Etilparabeno 65,4928 60,5755 30,6429
5 Acetofenona

48,9946 45,0642 22,7749

Etilparabeno 156,5566 146,1926 72,7735
e) Calcule el tiempo muerto.
Podemos darnos cuenta que el tiempo muerto va disminuyendo, con el cambio del
porcentaje del metanol, en el 95% el tiempo muerto es de 65 seg, y baja
gradualmente con el cambio de porcentaje, para el 5% el tiempo muerto es de o,8
milicimas de segundo.

f) Calcule la resolucin, , para los dos compuestos.



WA y WB son los anchos de banda de A y B respectivamente.

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Resolucin Acetofenona










Resolucin Etilparabeno











4. Repita el mismo proceso cambiando el metanol por ACETONITRILO.


Tiempo de retencin ( )
Factor de retencin (K)
Ancho de banda (sigma total )
Adjunte imagen del cromatograma obtenido
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4. Repita el mismo proceso cambiando el metanol por acetonitrilo


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5. Con los hallazgos realizados en esta seccin, elabore una conclusin
sobre el efecto del porcentaje del modificador en la composicin de la fase
mvil sobre la retencin y la resolucin.
A medida que se va utilizando mayor cantidad de solvente menos polar los
tiempos de retencin son menores, es decir a menor cantidad de agua como
solvente menor tiempo de retencin.

Si fuera contratado en un laboratorio para separar, por medio de
cromatografa liquida, de una mezcla los compuestos acetofenona y
etilparabeno. Cual seria la mejor composicin de fase mvil a emplear?
Justifique?
Considero que la mejor composicin de fase mvil es la mezcla de agua: metanol
en las condiciones 5 ( 45:55 ) y la 6 (55:45) porque los compuestos salen con
diferencia de tiempo prudencial, los picos estn bien definidos, y gastaramos
menos solventes que en otras condiciones. Los dos reactivos tienen el mismo
riesgo de inflamabilidad (3), igual riesgo de reactividad (0) pero tiene menor riesgo
de salud el metanol (2) y el acetonitrilo (3)







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BIBLIOGRAFIA
http://www3.uah.es/mol_play/1.htm
http://www.quiminet.com/productos/butilparabeno-6373322859.htm
http://www.madrimasd.org/blogs/remtavares/2009/02/20/113222
http://www.hplcsimulator.org/
http://www.youtube.com/watch?v=wYEDJu0pJy4
http://www.hplcsimulator.org/index.php
http://www.ulpgc.es/hege/almacen/download/39/39360/separaciones_po
r cromatografia_1.pdf
http://www.mncn.csic.es/docs/repositorio/es_ES/investigacion/cromatogr
afia/principios_de_cromatografia.pdf file:///D:/DATOS/Downloads/file.pdf http://o
cw.uv.es/ocw-formacio-permanent/2011-1-35_Manual.pdf