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Prctica #2
EL MICROSCOPIO Y LA ORGANIZACIN CELULAR
I. Objetivos
Al final del laboratorio el estudiante debe ser capaz de:
* Identificar y manejar las diferentes partes de un microscopio compuesto.
* Aprender a colocar el microscopio en posicin de trabajo.
* Aplicarlos procedimientos para preparar materiales y observarlos en el microscopio.
* Identificar estructuras celulares y sus respectivas funciones.
* Realizar esquemas de las estructuras celulares y rotularlos adecuadamente utilizando el aumento del
microscopio.
* Familiarizarse con el trabajo en el microscopio.
II. Introduccin
Segn la teora celular, la clula es la estructura biolgica ms pequea y simple que posee todas las
caractersticas bsicas de la vida. Todos los organismos vivos estn compuestos de una o ms clulas y toda
actividad que realiza un organismo vivo est relacionada con las actividades metablicas de las clulas. As,
para entender los procesos de la vida se necesita entender la estructura y la funcin de la clula. Las clulas,
sin embargo, se encuentran por debajo del lmite de la resolucin del ojo humano, haciendo necesario la
utilizacin de un instrumento con capacidad de amplificacin visual y alta resolucin.
El microscopio es un instrumento diseado para hacer posible la
observacin y el examen de objetos muy pequeos, los cuales
no podran ser vistos sin la ayuda de lentes amplificadores. Hay
dos tipos de microscopio segn la fuente utilizada para su
funcionamiento: el microscopio de luz y el microscopio
electrnico. Dentro de los microscopios de luz existen
variaciones; los ms usados y conocidos son los microscopios
simples o lupa, el microscopio compuesto y el microscopio
binocular estereoscopio. Podemos encontrar otros tipos de
microscopios de uso mas especializado en determinados campos
de la biologa y otras ciencias, tales como el microscopio de
contraste de fase, de fluorescencia, UV, de luz polarizada,
confocal., etc.)
Los microscopios que se utilizan en entornos cientficos cuentan
con varias mejoras que permiten un estudio integral del
espcimen. El microscopio ptico comn est conformado por
tres sistemas: (a) sistema mecnico, constituido por una serie de
piezas en las que van instaladas las lentes, y que permiten el
movimiento para el enfoque, (b) sistema ptico que comprende
un conjunto de lentes dispuestas de tal manera que produce el
aumento de las imgenes que se observan a travs de ellas, y (c) sistema de iluminacin que comprende las
partes del microscopio que reflejan, transmiten y regulan la cantidad de luz necesaria para efectuar la
observacin a travs del microscopio.

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Para la formacin de la imagen, el microscopio ptico de luz dispone de una distribucin especfica de
grupos de lentes que permiten una gran amplificacin. La fuente luminosa es un filamento de tungsteno cuya
luz es dirigida hacia un slo punto mediante la lente condensadora. El haz luminoso incide por debajo de la
preparacin que debe ser lo bastante fina como para que la luz pueda atravesarla. Al pasar por la muestra,
parte de la luz es absorbida por sta y la diferencia de absorcin de la luz en diferentes partes del espcimen
produce contrastes que revelan detalles de su estructura. Tras atravesar la muestra, la luz pasa a travs de las
lentes objetivos localizada por encima de la preparacin. Existen diferentes lentes objetivos con diferentes
capacidades de amplificacin de la muestra y resolucin de la imagen que pueden ir intercambindose a lo
largo del estudio. Finalmente, la luz pasa a travs de las lentes oculares que, amplificndola an ms, hacen
llegar la imagen al observador.
Dado que la imagen de la muestra est ampliada muchas veces e invertida, es difcil moverla de forma
manual. Por ello los soportes de los microscopios cientficos de alta potencia estn montados en una
plataforma que se puede mover con tornillos micromtricos. Algunos microscopios cuentan con soportes
giratorios. Todos los microscopios de investigacin cuentan con tres o ms objetivos montados en un cabezal
mvil que permite variar la potencia de aumento. El tipo de microscopio ms comnmente utilizado es el
llamado microscopio compuesto; con ste se obtiene una imagen bidimensional del objeto observado. Para el
estudio de las clulas, en el presente laboratorio se usar el microscopio de luz compuesto.
El microscopio monocular compuesto es utilizado con altos poderes de amplificacin para hacer
observaciones de objetos sumamente pequeos, los cuales tienen que estar finamente cortados y puestos
sobre vidrios especiales denominados portaobjetos. Adems, deben ser transparentes para que la luz pueda
atravesarlos. Es frecuente tambin cubrir los objetos con otros vidrios especiales ms pequeos que los
anteriores llamados cubreobjetos.
Cuando se trabaja en el laboratorio, es de gran importancia conocer el poder o grado de aumento, el poder
de resolucin y la distancia de trabajo. El grado de aumento es la magnificacin total que sufre la imagen
del objeto que est debido al efecto de los lentes oculares y objetivos. Se obtiene multiplicando el nmero de
veces que aumenta el lente ocular por el nmero de veces que aumenta el lente objetivo. Si el objetivo
aumenta la imagen de un objeto 40 veces, sta al pasar por la lente ocular ser nuevamente aumentada.
Si el ocular aumenta 10 veces, la magnificacin total en este caso ser: 10X x 40X = 400X. En la misma
forma se procede cuando se trabaja con otros lentes de mayor poder. Este resultado permite saber cuantas
veces ms grande estamos viendo la imagen de un objeto.
Igualmente importante es el poder de resolucin, que es la posibilidad de distinguir separados dos puntos
muy cercanos entre s. Cuanto mayor sea el poder de resolucin, menor ser la distancia entre dos puntos a la
cual pueden distinguirse como tales. El poder de resolucin de un microscopio compuesto depende de la
longitud de onda de la fuente luminosa y de la apertura numrica (propiedad ptica de la lente).Cualquier
objeto cuyo dimetro sea menor que 0.1 mm es demasiado pequeo para poder ser observado a simple vista.
La mayor utilidad del microscopio es la capacidad de ampliar el poder de resolucin de la vista humana para
objetos cuyo dimetro es menor que 0.1mm. Por tanto, un microscopio sirve fundamentalmente para dos
cosas: primero provee aumento y, segundo, permite ver detalles de objetos tan pequeos que no podran ser
vistos normalmente. De esta forma, el poder de resolucin es quiz la caracterstica ms importante de un
buen microscopio ya que de nada sirve una imagen muy grande del objeto, si sta se ve borrosa y no pueden
distinguirse sus detalles.
Finalmente, se conoce como distancia de trabajo a la distancia comprendida entre los objetos en observacin
y el lente frontal del objetivo. Es inversamente proporcional al aumento; es decir, cuanto mayor sea el
aumento del lente objetivo menor ser la distancia de trabajo. Cuando se trabaje con un lente de inmersin la
distancia de trabajo ser mnima. En estos casos es necesario usar aceite de inmersin entre el lente objetivo

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y la preparacin debido a que el ndice de refraccin para este tipo de lente es la del aceite y no la del aire.
Esto permite obtener una imagen de gran tamao y al mismo tiempo de gran nitidez.

III. Procedimiento.
Durante la sesin de laboratorio se realizarn seis ejercicios que le permitirn adquirir habilidades y destrezas
necesarias para trabajar con un microscopio compuesto de luz. Para ello, cada subgrupo realizar y analizar
los 6 experimentos, siguiendo las indicaciones de su instructor
Al finalizar los experimentos, se har una discusin de los resultados obtenidos. Cada subgrupo debe estar
preparado para discutir sus resultados
Ejercicio 1.- Partes del microscopio
Este ejercicio lo realizarn simultneamente con el instructor al inicio del laboratorio.
1. Con la ayuda del instructor/asistente el estudiante identificar cada componente del microscopio y el
estereoscopio y har una descripcin de sus funciones. Rotule los esquemas que se presenta en el reporte.
2. Verifique que conoce en forma detallada, cada uno de los pasos para el uso, funcionamiento y cuidados
del microscopio que se presentan a continuacin:

A.- Mtodo de trabajo y cuidados del microscopio.
1. Coloque el microscopio sobre la mesa de trabajo. Cuando traslade el microscopio, hgalo
sostenindolo con las dos manos, con la derecha sujete firmemente el brazo y posicione la izquierda
bajo la base.
2. Antes de usar el microscopio, observe si todas sus partes se encuentran limpias y en buen estado. Si el
ocular y los objetivos se encuentran sucios, proceda a limpiarlos cuidadosamente, utilizando un papel
de seda. No utilice cualquier tipo de papel o limpiador. Si an despus de haber limpiado los lentes
permanecen sucios u opacos, consulte con el asistente, quien proceder a limpiarlos con xilol.
Cualquier dao debe ser informado inmediatamente al instructor.
3. Ponga el objetivo de bajo poder (4x) en lnea, haciendo girar el revlver suavemente hasta que el lente
quede en posicin de trabajo.
4. Encienda la luz y abra el diafragma. La cantidad de luz, regulada por el diafragma, debe ser
directamente proporcional al aumento utilizado. Mire por el lente ocular y ajuste el diafragma para
que todo el campo ptico est igualmente iluminado, con el fin de evitar el deslumbramiento.
5. Ponga la preparacin a estudiar sobre la platina, asegurndose de que est bien prensada y que no
toque el lente frontal del objetivo. Mantenga seca la platina.
6. Una vez hecha la observacin y antes de quitar la preparacin, coloque el objetivo de bajo poder en
posicin de trabajo.
7. La luz debe permanecer apagada mientras el microscopio no est en uso. Asegrese que el
microscopio est limpio antes de entregarlo al concluir sus observaciones.
R E C U E R D E!
Siempre que monte o remueva laminillas de la platina, el lente objetivo
colocado en posicin vertical debe ser el de de 4x e l de 10x. Los
objetivos de 40x o 100x quedan muy cerca de la portaobjeto, lo que
aumenta grandemente la probabilidad de rayar e l objetivo o romper el
portaobjeto.

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B.- Procedimiento para enfocar correctamente el microscopio
1. Ponga la preparacin de prueba (cuadrado, letra, palabras, etc.) sobre la platina del microscopio, de tal
manera que la porcin del portaobjetos que contiene la muestra quede directamente sobre la abertura
circular. Sujete el portaobjetos con las pinzas del carro.
2. Mientras observa por un lado del microscopio observe cuidadosamente el movimiento del tubo ptico
o platina cuando accione la perilla del macromtrico hacia delante o hacia atrs. Anote hacia que
direccin debe girar el macromtrico para acercar o alejar la platina (y el portaobjeto) de la
preparacin.
3. Proceda a girar la perilla del macromtrico de manera que el tubo ptico descienda hasta que el
objetivo de bajo poder est muy cerca del portaobjeto, sin romper el portaobjeto (algunos modelos de
microscopios estn construidos de tal forma que no es el tubo ptico el que se acciona con las perillas
del enfoque, sino que es la platina).
4. Mirando ahora por el ocular, accione lentamente la perilla del macromtrico en la direccin contraria
(objetivo de aleja de la preparacin). Gire el macromtrico hasta que aparezca claramente la imagen
de las letras impresas en el campo ptico.
5. A partir de entonces, ser el micromtrico el que se usar para apreciar los detalles y los planos de la
preparacin. Con la perilla del micromtrico ajuste suavemente el foco hasta obtener una imagen
ntida de las letras. Nuevamente, anote hacia que direccin debe girar el micromtrico para acercar la
platina con el portaobjeto al objetivo con la cual se est trabajando

6. Mueva el carro de tal forma que la preparacin se mueva alejndose de usted y observe por el ocular.
En qu direccin se observa el movimiento de la imagen?
7. Mueva ahora el carro de izquierda a derecha cul es la direccin del movimiento de la imagen
observada por el ocular.
B.- Procedimiento para enfocar correctamente del estereoscopio
El microscopio estereoscpico tiene dos lentes objetivos y posee una profundidad de foco mucho mayor
que la del microscopio compuesto; ambas caractersticas le permiten producir imgenes tridimensionales.
El poder de resolucin y de aumento del estereoscopio son mucho menores que las del microscopio
compuesto y por esta razn el estereoscopio se usa para estudiar objetos y especimenes relativamente
grandes (razn por la cual tambin se le llama microscopio de diseccin). Las partes de este microscopio
son prcticamente las mismas que las discutidas para el microscopio compuesto. En este ejercicio se
aprender el uso correcto del estereoscopio.
Siga la explicacin dada por el Instructor/Asistente
8. Escoja un espcimen. Puede ser una hoja, una flor o un insecto.
9. Ponga el espcimen en el campo de observacin (platina). Si est hmedo colquelo sobre una placa
Petri o una laminilla.
10. Prenda y ajuste la fuente de luz. Algunos estereoscopios tienen la fuente de luz integrada mientras que
otros la tienen aparte. Asegrese de que la fuente de luz est iluminando su espcimen.
11. Enfoque el objeto que desea ver y muvalo hacia arriba, hacia abajo y hacia los lados. Hacia dnde
se mueve la imagen? Puede explicar estas observaciones?

R E C U E R D E!
En general el micromtrico no debe moverse ms de 2 vueltas para
obtener una imagen ntida.
NUNCA DEBE GIRAR EL MACROMTRICO USANDO UN
OBJETIVO DE ALTO PODER.


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Ejercicio 2.- Medidas microscpicas
1. Haga un dibujo en el reporte de la preparacin (lmina con letra) utilizando el lente de bajo aumento
2. Gire el revlver suavemente hasta colocar en posicin de trabajo el lente objetivo de mediano poder
(10x). Cuando el lente est en la posicin correcta, queda aprisionado por una pieza mecnica que
sujeta el revlver al cuerpo del microscopio.
3. Observe cuidadosamente la imagen. Mueva el micromtrico cuidadosamente hasta obtener una
imagen ntida.
4. Repita los pasos 2 y 3 con el objetivo del alto poder (40x).
5. Cuando se observa con lentes de mayor aumento, es la iluminacin igual, mayor o menor, que
cuando se observa con el lente de bajo poder?
6. Haga los cambios y ajustes necesarios con el diafragma para obtener una iluminacin ptima. Tenga
cuidado de mantener el microscopio limpio y seco.
7. Haga un dibujo en el reporte de la preparacin utilizando el lente de bajo aumento (4x) y el de alto
aumento (40x).

Cuando observamos un objeto al microscopio su tamao
aparece tantas veces mayor cuantas veces sea el aumento del
microscopio. Por ello para calcular el aumento real de lo que
observamos al microscopio bastar dividir el tamao aparente
con que lo vemos por el aumento.
La unidad de medicin del microscopio es la micra o micrn
(una milsima de un milmetro, 0.001 mm) y se designa con la
letra griega . En los laboratorios de investigacin se utiliza el
micrmetro para realizar las mediciones microscpicas.
Supongamos que vemos un organismo al microscopio con un tamao aparente de 0.4 mm, y que el aparato
est equipado con un objetivo 20x y un ocular 10x (aumento=200), entonces, el tamao real del organismo
ser:
Tamao real = tamao aparente = 0,4 = 0,002 mm = 2,0m.
Aumento 200
En nuestro caso, por no poseer micrmetros, se obtienen las medidas haciendo una comparacin entre el
tamao de la imagen del objeto observado al microscopio y el tamao real del mismo.
Para averiguar el tamao aproximado del campo ptico, realice los siguientes pasos:
1. Recortar un cuadrado de papel milimetrado fotocopiado en acetato, o colocar la lmina preparada con
cuadriculado.
2. Poner en el portaobjeto
3. Utilizando el objetivo de bajo poder (BP), mida el tamao del campo visual haciendo coincidir una de
las lneas del papel milimetrado con el borde del campo visual. Esto da la medida del dimetro del
campo visual (D
BP
) para ste aumento (AMP
BP
)
4. Para calcular el dimetro del campo visual en aumentos mayores (D
AP
), hay que recordar que cuanto
mayor sea el aumento, el campo visual ser proporcionalmente menor, es decir
D
AP
= D
BP
* AMP
BP
/ AMP
AP

5. Una vez calculado el campo visual, se puede obtener el tamao aproximado del objeto observado
dividiendo el valor del dimetro del campo visual entre el nmero de veces que el objeto cabe en ese
campo.

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6. Ponga la preparacin que tiene la letra e y enfquela. Compare el tamao de la letra con el tamao
del campo ptico. Determine el tamao de la letra

Ejercicio 3 - Poder de resolucin
Siguiendo los pasos anteriores, utilice la lmina que tiene un trocito de papel con puntos, cuente el nmero de
puntos presentes en los tres poderes del microscopio; note las diferencias. Haga dibujos esquemticos. Este
ejercicio es un ejemplo del poder de resolucin del microscopio.

C.- Preparacin del material de estudio
Los materiales que son estudiados al microscopio se colocan sobre una lmina de vidrio llamada
portaobjetos. Generalmente el material es cubierto con un vidrio pequeo llamado cubreobjetos. Ambos
deben estar limpios y secos.
En el presente laboratorio, usted examinar las caractersticas comunes de las clulas eucariticas, sin
embargo, no todas las clulas son iguales. Algunos organismos son unicelulares (una nica clula); stos
realizan todas las funciones de respiracin, digestin, reproduccin y excrecin con una sola clula. Otros
forman agregados o grupos de clulas llamadas colonias. Las colonias simples no tienen conexiones
fisiolgicas pero mantienen una estructura multicelular. Las colonias ms complejas tienen conexiones
fisiolgicas y cierta especializacin de tipos de clulas.
Limpie los portaobjetos con agua, tomndolos con los dedos por los bordes, frtelos con un pauelo limpio y
seco o con una toalla absorbente. Los cubreobjetos son muy frgiles y deben ser tratados con mucho cuidado.

Ejercicio 4.- Organismos unicelulares

Observe cada una de las siguientes muestras. En su reporte, haga un dibujo de lo que observa en el
microscopio. Rotule las estructuras que observa. No olvide indicar el aumento utilizado en cada dibujo y el
tamao de cada organismo
Recuerde siempre manipular los portaobjetos y cubreobjetos por los bordes.

(A) Agua de charco
Tome una gota de agua de charco, colquela sobre un portaobjetos, cbrala con un cubreobjetos, primero
a bajo poder; luego a mediano y alto poder. Identifique los organismos que observa.

Ejercicio 5.- Organismos multicelulares: Clulas de plantas
Los organismos multicelulares tienen un gran nmero de clulas con estructura y funcin especializadas, de
modo que una clula de stas no puede existir aislada.
En caso de no contar con una preparacin fija, proceda de la siguiente manera: haga un corte de la muestra,
pngalo sobre el portaobjetos y con un gotero deposite una gota de agua, cubra la muestra con el
cubreobjetos teniendo el cuidado de evitar la formacin de burbujas.
(A) Clulas de epidermis de cebolla (Allium cepa)
Escoja epidermis de cebolla y colquela en forma estirada en un portaobjetos con una gota de agua.
Cbrala con un cubreobjetos y obsrvela al microscopio con un aumento de 10 X. Observe los lmites de
la clula y coloque el objetivo de 40 X.

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Retire la preparacin del microscopio y aada una gota de orcena sin quitar el cubreobjetos (en los
bordes de ste), observe la muestra en lente de 10 X y anote los cambios que ocurren. Luego, observe con
aumento de 40 X, dibuje e identifique las siguientes estructuras: pared celular, ncleo, citoplasma.
(B) Clulas de hoja de Elodea (planta acutica)
Prepare una hoja joven de Elodea sobre un portaobjetos con una gota de agua, cbrala con el
cubreobjetos y observe a 10 X y a 40 X.
Observar las siguientes estructuras: pared celular, citoplasma, vacuola central, cloroplasto, ncleo.
Observe el movimiento citoplasmtico llamado ciclosis. El citoplasma es transparente pero se nota el
movimiento de partculas verdes: cloroplastos.
(C) Cromoplastos
Coloque un corte delgado de epidermis de chile (Capsicum sp); colquela sobre el portaobjetos, cbrala
con agua y observe la preparacin a mayor aumento. Observe las estructuras que presenta.
(D) Amiloplastos
Haga un corte muy fino de papa (Solanum tuberosum); colquelo sobre un portaobjetos, agrguele una
gota de lugol y cbralo. Observe a 10X; luego a 40X. Los amiloplastos tienen color azul al teirse con
lugol.

Ejercicio 6.- Organismos multicelulares: Clulas de animales
Un grupo de clulas ntimamente asociadas y que cumplen una funcin nica especfica se denomina tejido.
Los tejidos animales generalmente se clasifican en tejido epitelial, conectivo, muscular y nervioso. Cada uno
de estos tipos de tejidos est formado por clulas con tamao, forma y organizacin caracterstica.

(A) Clulas epiteliales
Con ayuda de una paleta o palillo de dientes, extraiga clulas epiteliales de la parte interna de sus
mejillas. Colquelas en un portaobjetos, aada una gota de agua y remueva. Luego, aada una gota de
orcena y coloque un cubreobjetos. Observe la preparacin a 10x; luego a 40x. Identifique: ncleo,
nuclolo, citoplasma, membrana celular.

(B)Tipos de tejidos: epitelial, muscular y nervioso
Observa detenidamente cada una de las lminas disponibles en el laboratorio y describa las caractersticas
de cada tipo de tejido en base al tipo de clula, tamao celular, distribucin en el cuerpo







PARA LA PRXIMA PRCTICA:
Los estudiantes deben traer a la sesin de laboratorio
Reglas transparentes