UNIVERSIDAD DE LAS FUERZAS ARMADAS-ESPE

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS DE LA VIDA Y LA AGRICULTURA

CARRERA DE INGENIERIA AGROPECUARIA


PERIODO : Marzo - Agosto
ASIGNATURA : Fitopatologa


NOMBRE : Cristian Jaramillo
NIVEL : Cuarto
DOCENTE : Ing. Gustavo Nez
FECHA : 22 de Abril del 2014



AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS PATGENOS EN PLANTAS



SANTO DOMINGO-ECUADOR
2013



I. OBJETIVOS
Objetivo General:
Ejercitarse en las tcnicas de aislamiento y purificacin de microorganismos
patgenos en plantas.
Objetivo Especficos:
Conocer cmo crecen los hongos patgenos comunes.

II. INTRODUCCIN
El crecimiento de los microorganismos no se puede estudiar individualmente debido
a su tamao tan pequeo, por lo que es necesario recurrir a medios nutritivos
artificiales, donde se puedan desarrollar rpidamente y producir grandes
poblaciones. En estas condiciones se pueden manipular y efectuar las
investigaciones (CORTES, 2011).

Medios de cultivo
Al identificar las enfermedades de plantas, es recomendable aislar los
microorganismos que son posibles agentes patgenos. Para lograr este objetivo, los
microorganismos (principalmente hongos y bacterias) se aslan en medios de cultivo
artificiales, con el fin de poder purificarlos y estimular su esporulacin para la
produccin de inculo. ste se utiliza en la inoculacin de plantas para reproducir
sntomas, paso necesario en la identificacin de patgenos (postulados de Koch).
Aislamiento a partir de hojas
En caso de que la infeccin de las hojas de una planta avance en forma de tizn o
mancha foliar fungosa y en el caso de que las esporas del hongo aparezcan sobre la
superficie, algunas de estas esporas deben depositarse sobre una caja Petri que
contenga medio de cultivo. Si el hongo crece en cultivo, al cabo de unos cuantos das
aparecern colonias de micelio aisladas debido a la germinacin de las esporas.
Sin embargo, el mtodo ms comn para aislar a los patgenos de las hojas
infectadas y de otros rganos de la planta es aquel en el que se seleccionan varios
cortes pequeos de 5 a 10 mm
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a partir del borde de la lesin infectada, a fn de que
contenga tejidos enfermos y tejidos al parecer sanos (ZUIGA, 2009).
Esos cortes se colocan en una de las soluciones esterilizantes de superficie, y al
cabo de 15 30 segundos los cortes se toman aspticamente uno por uno a



intervalos regulares de tiempo (por ejemplo cada 10-15 segundos), con el objeto de
que cada uno de ellos se esterilice (a nivel de la superficie) a diferente tiempo.
Posteriormente los cortes se secan con trozos limpios de papel estril o se pasan por
tres cambios con agua estril, y por ltimo se colocan sobre el medio nutritivo
(generalmente, de 3 a 5 por caja de Petri) (ZUIGA, 2009).
Los cortes esterilizados en su superficie durante menos tiempo generalmente
contienen al patgeno y a varios contaminantes, mientras que los que se han
esterilizado durante ms tiempo no permiten el desarrollo de cualquier tipo de
microorganismos debido a que han sido destruidos por el esterilizante de superficie.
Sin embargo alguno de los cortes depositados en el esterilizante de superficie
durante periodos de tiempo intermedios permitirn que slo el patgeno se desarrolle
y forme colonias puras en el cultivo, ya que ha permitido que el esterilizante acte el
tiempo suficiente para destruir a todos los contaminantes de superficie, pero no el
tiempo necesario para destruir al patgeno, el cual se ha propagado desde el tejido
enfermo hasta el tejido sano (ZUIGA, 2009).
Posteriormente las colonias del patgeno se resiembran aspticamente para su
posterior estudio. El mtodo de dilucin seriada con frecuencia se utiliza para aislar
bacterias patgenas de tejidos enfermos contaminados por otras bacterias.
Despus de haber efectuado la esterilizacin superficial de los cortes de tejidos
enfermos a nivel del margen de la infeccin, los cortes se muelen aspticamente
(pero con bastante cuidado) en un pequeo volumen de agua estril y
posteriormente parte de este homogeneizado se diluye serialmente en volmenes
iguales o diez veces ms el volumen de agua inicial (ZUIGA, 2009).
Por ltimo, las placas con agar nutritivo se siembran con un asa que ha sido mojada
en cada una de las distintas diluciones seriadas, con el fin de que en ellas se
desarrollen colonias individuales de la bacteria patgena a partir de las diluciones
ms altas que todava contengan bacterias (ZUIGA, 2009).

III. MATERIALES
Equipos:
Estufa de incubacin Estufa de
esterilizacin
Cmara de flujo laminar




Materiales:
Muestras de plantas Kit de diseccin
Tabla de diseccin Platos petri conteniendo medio de
cultivo
Agar Alcohol-mechero

IV. METODOLOGA

Preparacin y dispensacin de PDA

Utilizamos el medio de cultivo a base de Agar-papa-dextrosa (APD), que se usa para
aislar la mayora de los hongos y contiene lo siguiente:
Almidn de papa, dextrosa, agar y agua destilada

Siembra de material vegetativo enfermo
Lavamos la parte afectada, seleccionamos y seccionamos con un bistur unas
muestras que contengan un rea sana, un rea en proceso de infeccin y un rea
enferma. Sumergimos las secciones en hipoclorito al 1% por 2

min, luego pasamos
las secciones a una solucin de etanol al 70% por 2 min, despus sumergimos en
agua destilada por 2 min, y por ltimo volvemos a sumergir en agua destilada por
2min. Llevamos el recipiente a la cmara y procedemos a sembrar 4 muestras de la
misma zona afectada en forma de cruz en las cajas Petri.
Finalmente llevamos las cajas Petri a la incubadora a 28C por 48h
V. RESULTADOS




Muestra de pltano enferma de
donde se tom la muestra
Secciones de la muestra enferma
para aislar al patgeno


























VI. CONCLUSIONES

Para cultivar microorganismos necesitamos aadir sustancias altamente
nutritivas.
Se pudo lograr la realizacin del aislamiento del material vegetal enfermo.
Con la realizacin de este aislamiento se podr observar los diferentes tipos
de hongos patgenos que atacan a los cultivos.
El patgeno tuvo un crecimiento muy rpido y visible color blanquecino.

VII. RECOMENDACIONES

Esterilizar todos los implementos a utilizar con el fin de que no haya fallas al
final de la prctica.
Tener mucha precaucin al manipular las sustancias de uso para el
aislamiento.

Soluciones en donde se desinfecto
la muestra para aislarla
Crecimiento del patgeno a los 3 das
despus de la siembra, tuvo un
crecimiento muy rpido color
blanquecino
Crecimiento del patgeno a los 6
das.



VII. BIBLIOGRAFIA
ZIGA, R., Aislamiento e identificacin de Levaduras nativas etanognicas,
Santiago, Universidad Metropolitana de Ciencias de la Educacin, Facultad
de Ciencias Bsicas, 2009.
CORTES Rocio, 2011. MANUAL DE PRCTICAS DE FITOPATOLOGA.
PAGINA WEB
http://ocwus.us.es/produccion-vegetal/sanidad
Vegetal/Sanidad_vegetal/Tema%2022_HTML/page_10.htm/
http://www.uacj.mx/ICB/cqb/licenciaturaenbiolog%C3%ADa/Documents/Manu
ales/optativas/FITOPATOLOGIA.pdf