!"#!$#$%!

&
!
!"#$%&' )"*"+,-./"&' !"#$%&' ),0,-./"&'
!"#$%&' )"*"+,-./"&'
Filiiacin
!"#$%&' )"*"+,-./"&'
Filiiacin
Decaniacin
!"#$%&' )"*"+,-./"&'
Filiiacin
Decaniacin
Ceniiifugacin
!"#$%&' ),0,-./"&'
Desiilacin
!"#!$#$%!&
$
!"#$%&' ),0,-./"&'
Desiilacin
Ciisializacin
!"#$%&' ),0,-./"&'
Desiilacin
Ciisializacin
Exiiacciones
L - L
!"#$%&' ),0,-./"&'
Desiilacin
Ciisializacin
Exiiacciones
L - L
SPE
!"#$%&' ),0,-./"&'
Desiilacin
Ciisializacin
Exiiacciones
L - L
SPE
SPME
!"#$%&' )"*"+,-./"&'
Filiiacin
Decaniacin
Ceniiifugacin
!"#$%&' ),0,-./"&'
Desiilacin
Ciisializacin
Exiiacciones
Ciomaiogiafia
L - L
SPE
SPME
)123
)4-5 1"+6,+0&/$" 247849 35+,0&*,-+&:5;
3+,0&*,-+&6<& 2<7849& 9" =%*& >?$4"/$4&
32=>
!"#!$#$%!&
&
Faculiad de Ciencias-Depaiiamenio de Faimacia. e-mail: jamaiiineziagunal.edu.co Faculiad de Ciencias-Depaiiamenio de Faimacia. e-mail: jamaiiineziagunal.edu.co
Faculiad de Ciencias-Depaiiamenio de Faimacia. e-mail: jamaiiineziagunal.edu.co Faculiad de Ciencias-Depaiiamenio de Faimacia. e-mail: jamaiiineziagunal.edu.co
Faculiad de Ciencias-Depaiiamenio de Faimacia. e-mail: jamaiiineziagunal.edu.co Faculiad de Ciencias-Depaiiamenio de Faimacia. e-mail: jamaiiineziagunal.edu.co
!"#!$#$%!&
(
Faculiad de Ciencias-Depaiiamenio de Faimacia. e-mail: jamaiiineziagunal.edu.co Faculiad de Ciencias-Depaiiamenio de Faimacia. e-mail: jamaiiineziagunal.edu.co
Faculiad de Ciencias-Depaiiamenio de Faimacia. e-mail: jamaiiineziagunal.edu.co Faculiad de Ciencias-Depaiiamenio de Faimacia. e-mail: jamaiiineziagunal.edu.co
Meiodo fisico de sepaiacin en el cual los
componenies a sepaiai se disiiibuyen eniie
dos fases, una de las cuales consiiiuye la
fase esiacionaiia y la oiia es un uido (fase
mvil) que pasa a iiaves o a lo laigo de la
fase esiacionaiia
Meiodo fisico de sepaiacin en el cual los
componenies a sepaiai se disiiibuyen eniie
dos fases, una de las cuales consiiiuye la
fase esiacionaiia y la oiia es un uido (fase
mvil) que pasa a iiaves o a lo laigo de la
fase esiacionaiia
!"#!$#$%!&
"
! Meiodo fisico: No exisie inieiaccin quimica
! Fase esiacionaiia:
Slido o liquido sopoiiado slido o gel
Empaqueiamienio: Columna (capa o flm)
! Fase Mvil:
Liquida, gaseosa o uido supeiciiiico
! Mecanismo de sepaiacin:
Adsoicin, Paiiicin o inieicambio inico
3+,0&*,-+&6<& :%&/&
Papel
Capa fna
HPTLC
3+,0&*,-+&6<& "/ $,%80/&
Empacada Capilai
3+,0&*,-+&6<& 9" -&'"' 3+,0&*,-+&6<& 9" %<7849,' 3@ A%849,' B3@
C&' D 2<7849,
C&' D BE%49,
B,:,+*" F BE%49,
247849,
1&+"' GE/4$,'
>H$%8'4E/ 247 D BE% 247 D 247
A&'" "/%&#&9&
A@ I,+0&% A@ J"K"+'&
Faculiad de Ciencias-Depaiiamenio de Faimacia
Fase Esiacionaiia (FE)
Siiios aciivos FE
Moleculas soluio
Moleculas solvenie
Faculiad de Ciencias-Depaiiamenio de Faimacia
A> >BLJM3LMJ= L :&+*@ N 1+,0@ M','
Silica - SiO:
y-:o pm
:6o m:]g
:o - o A
o
Basicos
Alumina Al:O
y- :oo pm
:oo m:]g
:o - :oo nm Acidos
Caibn
aciivado
Difeienies
giupos
o.-i. mm
iooo m:]g
i - : nm
Polaies ]
No polaies
Faculiad de Ciencias-Depaiiamenio de Faimacia
A> >BLJM3LMJ= L :&+*@ N 1+,0@ M','
Silica - SiO:
y-:o pm
:6o m:]g
:o - o A
o
Basicos
Alumina Al:O
y- :oo pm
:oo m:]g
:o - :oo nm Acidos
Caibn
aciivado
Difeienies
giupos
o.-i. mm
iooo m:]g
i - : nm
Polaies ]
No polaies
!"#!$#$%!&
)
Faculiad de Ciencias-Depaiiamenio de Faimacia
Silice :
Clasifcacin de los giupos lidixilo
I. Hidixilo libie
II. Hidixilo enlazado
III. Hidixilo ieaciivo
B4
O
O
O
)
B4
O
)
B4
O
O
)
B4
I II III
Aciividad lidioxilo
II < I < III
Faculiad de Ciencias-Depaiiamenio de Faimacia
! Solvenie empleado paia coniiolai la aciividad del adsoibenie
! Lugaies mas aciivos
!Tipos:
Agua o% (Agua de saiuiacin)
Aceioniiiilo, Meianol
Teiialidiofuiano( i% -:%)
Faculiad de Ciencias-Depaiiamenio de Faimacia
!Analisis de moleculas no ionizanies, insolubles en agua
!Inieivalo de sepaiacin
Hidiocaibuios muy pocos polaies lasia compuesios
polifuncionales fueiiemenie polaies
!Poca sepaiacin en seiies lomlogas
Ejm : Aislamienio de aiomaiicos polinucleales de una muesiia de
Peiileo o iiigliceiidos de un exiiacio lipido.
Faculiad de Ciencias-Depaiiamenio de Faimacia
Sepaiacin poi iepaiio del soluio en la fase mvil y la fase enlazada
esiacionaiia
A>
A!
3+ P A> Q A!
!Unin covalenie a la supeifcie de la silice una especie oiganica de
un lidiocaibuio
!Enlace iipo siloxano ( Si - O - Si - C) esiandai
1&+*4$8%& 9" '<%4$"
A> "/%&#&9&
!"#!$#$%!&
*
Faculiad de Ciencias-Depaiiamenio de Faimacia
!Se foima poi la ieaccin de di o iii alcoxisilanos con los giupos silanol
de la silica
!Reaccin iipica:
Si-OH + ClSi (CH): R Si - O - Si (CH):R + HCl
!Esiables a lidilisis en un inieivalos de pH: : a S.
Faculiad de Ciencias-Depaiiamenio de Faimacia
Enlace lidiocaibonado - lidiofbicos
C: (Giupo eiilo) Soluios que se ieiienen fueiiemenie
CS (Giupo ociilo) Compuesios de baja a alia polaiidad
CiS (Giupo ociadecilo) Compuesios que iequieien un maximo
de ieiencin
Faculiad de Ciencias-Depaiiamenio de Faimacia
Enlace lidiocaibonado - lidiofbicos
C: (Giupo eiilo) Soluios que se ieiienen fueiiemenie
CS (Giupo ociilo) Compuesios de baja a alia polaiidad
CiS (Giupo ociadecilo) Compuesios que iequieien un maximo
de ieiencin
Faculiad de Ciencias-Depaiiamenio de Faimacia
Faculiad de Ciencias-Depaiiamenio de Faimacia Faculiad de Ciencias-Depaiiamenio de Faimacia
!"#!$#$%!&
+
Faculiad de Ciencias-Depaiiamenio de Faimacia
Fase enlazada de polaiidad inieimedia
Funciones niiiilo como giupos cianoeiilo (-CH:CHCN)
Uiiles paia soluios con giupos eieie, esieies, compuesios niiio,
Giupo fenilsilano paia compuesios aiomaiicos
Giupos funcionales aminoalquilo
Faculiad de Ciencias-Depaiiamenio de Faimacia
!Coniiol del pH del disolvenie
!Acidos y bases debiles de pH : -S
!Acidos fosfoiico, aceiico, cloilidiico < o.i %
Faculiad de Ciencias-Depaiiamenio de Faimacia
!Subdivisin ciomaiogiafa en fase ieveisa
!Uiil paia susiancias muy polaies
!Facilmenie ionizables y]o fueiiemenie basicas
!Inieivalo de pH :.o - y.
Faculiad de Ciencias-Depaiiamenio de Faimacia
!Molecula ionizada de soluio foima un "pai inico" con el
CONTRAION en la fase mvil]fase esiacionaiia
!Pai ionico: Inieiaccin eniie un caiin, un anin y moleculas
del solvenie que los iodea
!"#!$#$%!&
,
Faculiad de Ciencias-Depaiiamenio de Faimacia
D I)
R
S
O)
D
D IT3)
R
U
S
R
O)
D
Faculiad de Ciencias-Depaiiamenio de Faimacia
!Sepaiacin de giupos de acidos, aminoacidos y pioieinas
facilmenie pioionables
!Tiempo de ieiencin:
Depende del iipo de iesina
Resina de inieicambio caiinico: caiiones > ii
Resina de inieicambio aninico: aniones > ii
Faculiad de Ciencias-Depaiiamenio de Faimacia Faculiad de Ciencias-Depaiiamenio de Faimacia
!Ciomaiogiafia de peimeacin en gel
!Sepaiacin del las susiancias: Tamao y foima
!No se basa en el peso moleculai
!Oiden de elucin: ii > moleculas pequeas
Faculiad de Ciencias-Depaiiamenio de Faimacia
!Geles de dexiiano, agaiosa o poliaciilamida
!Fase mvil que disuelva la muesiia
!Aplicaciones: Susiancias de elevado peso moleculai
liip:]]bioquiwili.wilispaces.com]fle]view]%C%Bi.png]:6o(6S]%C%Bi.png
),+/,
!"#!$#$%!&
!%
Un ciomaiogiama es una iepieseniacin
giafca de la iespuesia del deiecioi,
conceniiacin del analiio en el euenie,
veisus el volumen del euenie o iiempo
Un ciomaiogiama es una iepieseniacin
giafca de la iespuesia del deiecioi,
conceniiacin del analiio en el euenie,
veisus el volumen del euenie o iiempo
J
"
'
:
8
"
'
*
&

9
"
%

9
"
*
"
$
*
,
+


V,%80"/ 9"% "W8"/*" Q *4"0:,
2</"& X&'" J849,
J
"
'
:
8
"
'
*
&

9
"
%

9
"
*
"
$
*
,
+


V,%80"/ 9"% "W8"/*" Q *4"0:,
2</"& X&'" J849,
A+"/*" 9"
B,%K"/*"
J
"
'
:
8
"
'
*
&

9
"
%

9
"
*
"
$
*
,
+


V,%80"/ 9"% "W8"/*" Q *4"0:,
2</"& X&'" J849,
*0 Q *Y
!"#!$#$%!&
!!
J
"
'
:
8
"
'
*
&

9
"
%

9
"
*
"
$
*
,
+


V,%80"/ 9"% "W8"/*" Q *4"0:,
*0 Q *Y
*+
ZX
L4"0:, 9" +"*"/$4E/
$,++"-49,
*[+ P *+ F *Y
J
"
'
:
8
"
'
*
&

9
"
%

9
"
*
"
$
*
,
+


V,%80"/ 9"% "W8"/*" Q *4"0:,
*0 Q *Y
*+
5
J
"
'
:
8
"
'
*
&

9
"
%

9
"
*
"
$
*
,
+


V,%80"/ 9"% "W8"/*" Q *4"0:,
*0 Q *Y
*+
Z5
Flujo veidadeio (Fc) Fc = F x T
i
]T
:
Flujo veidadeio (Fc) Fc = F x T
i
]T
:
Volumen de ieiencin (Vi) Vi = Fc x ii
Flujo veidadeio (Fc) Fc = F x T
i
]T
:
Volumen de ieiencin (Vi) Vi = Fc x ii
Volumen mueiio (Vm) Vm = im x F
!"#!$#$%!&
!$
Flujo veidadeio (Fc) Fc = F x T
i
]T
:
Volumen de ieiencin (Vi) Vi = Fc x ii
Volumen mueiio (Vm) Vm = im x F
Vol. Reiencin coiiegido (V'i) V'i = Vi - Vm
Flujo veidadeio (Fc) Fc = F x T
i
]T
:
Volumen de ieiencin (Vi) Vi = Fc x ii
Volumen mueiio (Vm) Vm = im x F
Vol. Reiencin coiiegido (V'i) V'i = Vi - Vm
Facioi de coiieccin poi giadienie de piesin (})
} = |(p
i
] p
o
)
:
- ij ] |:(p
i
] p
o
)

- ij
Ensayo empleado paia veiifcai que el
sisiema ciomaiogiafco es adecuado paia
el analisis iequeiido
Equipo, eleciinica, opeiaciones analiiicas y
muesiias
USP -(
! Fase mvil
Composicin, foiialeza inica, pH
! Fase esiacionaiia
Caiacieiisiicas de la columna (Tamao, dimensiones)
Maieiial de ielleno
! Condiciones ciomaiogiafcas
Flujo, iempeiaiuia, piesin
A&$*,+ 9" 3&:&$49&9 T \[U
Tambien conocido como facioi de ieiencin
Facioi adimensional
Expiesa la ieiencin de un compuesio poi la fase
esiacionaiia
Valoies: i y i
\[ P
*[+
*0
!"#!$#$%!&
!&
A&$*,+ 9" B"%"$*4K49&9 To )
Posicin ielaiiva de un compuesio A fienie a el compuesio B
Reiencin ielaiiva calculada paia dos picos adyacenies
Valoies mayoi a i
o P
\]
\^
Capacidad del sisiema ciomaiogiafco paia sepai dos
componenies en una mezcla
Mide la efciencia de la columna. Valoi > :
J"',%8$4E/ TJ' U
Rs = :( ii: - iii ) ] Wi + W:
Rs = i.iS( ii: - iii ) ] Wli + Wl:
Numeio de equilibiios ieiicos del soluio en la fase
esiacionaiia y la fase mvil
I_0"+, 9" :%&*,' *"E+4$,'
Meiodo Tosol
Numeio de equilibiios ieiicos del soluio en la fase
esiacionaiia y la fase mvil
I_0"+, 9" :%&*,' *"E+4$,'
Meiodo USP. Valoi > :ooo
Mide el iiempo ieiico que peimanece un soluio en la
fase esiacionaiia y fase mvil
=%*8+& 9" 1%&*, *"E+4$, T ) U
H = L ] N
A&$*,+ 9" ='40"*+<& T ='U
!"#!$#$%!&
!(
Tambien conocido como facioi iailing ( T )
Valoi: < :
A&$*,+ 9" ='40"*+<& T ='U
As P
Wo.o
:f
Medida paia el iiempo de ieiencin, aiea y]o aliuia
Valoi: < i% n > o igual a
1+"$4'4E/ "/ %& G/;"$$4E/ T`JBaU
%RSD P
S
X
ioo