2.12.

Hidrlisis enzimtica del almidn Bajo la influencia de la enzima amilasa el almidn se desdobla con laf o r m a c i n d e u n d i s a c r i d o , l a m a l t o s a , l u e g o s e d e s c o m p o n e p o r la maltasa hastal a g l u c o s a . Instrumentos. Soporte con tubos de ensayo. Pipetas. Bao mara contermmetro. Reactivos. Preparado de saliva (1 2 ml de saliva se coloca en un vaso y se diluyen 5 veces con agua destilada, se mezclan cuidadosamente). Los demsreactivos son los mismos que en el experimento anterior. Marcha de los trabajos. En un tubo de ensayo se vierten 3 a 5 m l d e d i s o l u c i n d e almidn y se aaden 0.5 1 ml de saliva, se mezcla cuidadosamente y se pone en ei bao mara durante 10 15 min a una temperatura de 37 a 40 C. Se hacenrepetidamente las pruebas con iodo; la ausencia de coloracin caractersticad e m u e s t r a q u e l a h i d r l i s i s h a finalizado. La presencia de la glucosa se confirma p o r l a r e a c c i n positiva con el licor de Fehling

http://es.answers.yahoo.com/question/index?qid=20100409201340AA65Gl8

La hidrlisis implica la ruptura de un enlace mediante la adicin en medio del mismo de los elementos del agua. Los polisacridos de la dieta se metabolizan mediante hidrlisis a monosacridos. La mayora de los pasos de la degradacin de almidn a glucosa pueden ser catalizados por tres enzimas distintas, si bien hay otras ms que se necesitan para completar el proceso. Las tres primeras enzimas son una -amilasa, -amilasa y almidn fosforilasa. Al parecer solo la amilasa puede atacar grnulos de almidn intactos, por lo que cuando participan la -amilasa y la almidn fosforilasa, es probable que acten sobre los primeros productos liberados por la amilasa. La -amilasa ataca de manera aleatoria enlaces 1,4 en las molculas de amilosa y amilopectina, al principio creando huecos al azar en los granos de almidn y liberando productos que aun son grandes. En cadenas de amilosa no ramificadas, el ataque repetido por la -amilasa produce maltosa, un disacrido que contiene dos unidades de glucosa. Sin embargo, la -amilasa no puede atacar los enlaces 1,6 localizados en los puntos de ramificacin de la amilopectina, por lo que la digestin de amilopectina cesa cuando aun quedan dextrinas ramificadas con cadenas de longitud corta. Muchas -amilasas son activadas por Ca+, lo cual es una de las razones por las que el calcio es un elemento esencial. La -amilasa hidroliza al almidn en -maltosa; la enzima acta primero solo sobre los extremos no reductores. La -maltosa cambia con rapidez, por mutarrotacin, para formar las

mezclas naturales de isomeros y . La hidrlisis de amilosa por la -amilasa es casi completa, pero la degradacin de amilopectina es incompleta porque no son atacados los enlaces de los puntos de ramificacin. La actividad de ambas amilasas implica la incorporacin de una molcula de H2O por cada enlace roto, por lo que son enzimas hidrolasas. Las reacciones hidrolticas no son reversibles, de modo que no se pueden detectar sntesis de almidn por amilasas. Las amilasas estn diseminadas en diversos tejidos pero son mas activas en las semillas que estn germinando, ricas en almidn. Es probable que la -amilasa tenga ms importancia que la -amilasa para la hidrlisis de almidn. Gran parte de la -amilasa se localiza dentro de los cloroplastos, muchas veces unida a los granos de almidn que atacara. Acta tanto en el da como por la noche aunque, por supuesto, durante la luz de da hay produccin neta de almidn por la fotosntesis. La amilopectina solo es degradada parcialmente por la accin del almidn fosforilasa. La reaccin procede de manera consecutiva a partir del extremo no reductor de cada cadena principal o cadena ramificada hasta a unos residuos de glucosa de las uniones -1,6 de las ramificaciones, por lo que de nuevo que dan dextrinas. La amilosa, que tiene pocas ramificaciones, se degrada casi por completo, por eliminacin repetida de unidades de glucosa a partir del extremo no reductor de la cadena. La almidn fosforilasa esta ampliamente distribuida en la planta y a veces resulta difcil determinar que enzima digiere la mayor parte del almidn en las clulas de inters. OBJETIVO Comprobar que las amilasas producidas por semillas de maz hidrolizan al almidn, dando como producto final unidades de maltosa siendo este uno de los mecanismos que la semilla utiliza para obtener energa necesaria para germinar. El alumno estudiara las diferencias en la actividad amiloltica, dependiendo de los estados de germinacin en las semillas y de sus requerimientos energticos. Se aplicara el mtodo de Nelson-Simogy para la determinacin de reductores totales. Determinaremos la actividad enzimtica de las semillas de maz, dependiendo de su tiempo de germinacin. MATERIAL 1 mortero 1 bistur 1 bao de agua hirviendo 6 tubos de centrifuga

5 pipetas graduadas de 10 ml 1 embudo de filtracin de 5 cm de dimetro 1 caja de Petri de 9 cm 1 tripi con tela de asbesto 1 mechero 25 tubos de ensayo de 15X150 1 centrifuga 1 espectrofotmetro 1 gasa 30 semillas de maz

METODOLOGA La preparacin de las semillas de maz, se llevara a cabo cinco das anteriores a la prctica. Se desinfectaran 10 semillas de maz en cloro (hipoclorito de sodio) durante 20 minutos y las enjuagaremos muchas veces con agua hervida; posteriormente las semillas las pondremos a germinar en un frasco limpio, en el frasco se pondr una capa de algodn, las semillas, y se humedecer el algodn. Despus el mismo procedimiento de germinacin se aplicara a otras cuantas semillas limpias pero tres das antes de la prctica. Para empezar la practica se ponen a remojar en agua 2 semillas de maz de ningn da de germinacin; despus se seleccionaron un par de semillas de 5, de 3 y 0 das de germinacin, entonces se les quita el embrin y el escueto, para que solo nos quede el endospermo almidonoso. Una vez limpios los m http://es.scribd.com/doc/19046859/HIDROLISIS-ACIDA-Y-ENZIMATICA-DEL-ALMIDON

C a r a c t e r s t i c a : i n s p i d o , S e p r e s e n t a

p r o p i e d a d e s p o l v o p o r b l a n c o g r a n o s f i n o , p a r a

c o n s t i t u i d o

c o m o

c a r a c t e r s t i c o s

m i c r o s c p i c a m e n t e

c a d a s e

e s p e c i e . P a r a e n u ) ,

s u

c a r a c t e r i z a c i n t a m a o o ( a p r o x . o e n d e l a n c l e o , l a l u z i n s o l u b l e s e R s e t i e d e

t o m a

c u e n t a :

2 - 1 5 0

e s t r a t i f i c a c i o n e s ; c o m p u e s t o s a g u a a z u l d a f r a ; y e n p o l a r i z a d a . E l h i n c h a a

f o r m a , h i l i o a s p e c t o s a l m i d n a g u a

g r a n o s a e s

s i m p l e s

c a l i e n t e c o n

f o r m a n d o e n g r u d o ; a z u l c o m o v i o l e t a p r o d u c t o

g l u c o s a

s o l .

f i n a l

l u g o l ;

h i d r l i s i s Usos: e n d e

t o t a l . p o r d e g r a d a c i n m e z c l a d e c o m o g l u c o s a

a l i m e n t a c i n ; p o l i s a c r i d o s h i d r l i s i s e n s e

p a r c i a l

o b t i e n e

d e n o m i n a d o s c o m o

u n a

d e x t r i n a ; p o r

o b t e n c i n

i n d u s t r i a l

i n d i c a d o r a p r e s t o E l

y o d o m e t r a ; y p a p e l ,

t o t a l ;

c o m o e t c .

r e a c t i v o

d e t e x t i l e s d e

ALFA AMILASA. n o m b r e u n s i n n i m o

d i a s t a s a s d e l a s

c o r r e s p o n d e d e s i g n a r d e a u n q u e l a

s e u s a

p r i n c i p a l m e n t e q u e s e d e

a m i l a s a s , p a r a e x t r a e

a l f a - a m i l a s a , O r i g e n F n g i c o

c e r e a l e s . b a c t e r i a n o d e e n a l f a h a

( A s p e r g i l l u s y d e l

a l f a - a m i l a s a :

o r y z a e ) , B .

( B . s t e a r o t h e r m o p h i l u s , c e r e a l e s a m i l a s a e l t r i g o e l s e y e n c u e n t r a e n

s u b t i l i s ) , e n z i m a

p n c r e a s . L a m s e n

p o c a L a

c a n t i d a d q u e e n

a b u n d a

a q u e l

s i d o

p a r c i a l m e n t e p o r c a n t i d a d C o m o p o r l a e s e n

c o n t r a r i o , s e e s t e

g e r m i n a d o . c e r e a l . e l

e n c u e n t r a

b e t a - a m i l a s a , g r a n

Acciones:

s a b i d o , d e

a l m i d n u n i d a s

e s t p o r

f o r m a d o e n l a c e s l a r e c t a d e

m o l c u l a s

f r a c c i n

g l u c o s a

a m i l o s a

d e c a d e n a t a n t o

g l u c o s d i c o s

a l f a - 1 , 4 ; e n

q u e

f r a c c i n c a d e n a c o n l a a m i l a s a

a m i l o p e c t i n a , g l u c o s d i c o s l a l i n e a l

a d e m s 1 , 6 . L a

d e

l a

r e c t a ,

p r e s e n t a r a m i f i c a c i o n e s h i d r l i s i s y 1 , 4 l a d e l u n a a l f a d e

e n l a c e s

c a t a l i z a

c a d e n a

( a m i l o s a ) e n l a c e s p a r a e l l o

l a r a m i f i c a d a a l m i d n , m e z c l a

r o m p i e n d o

( a m i l o p e c t i n a )

i n t e r i o r e s ( e n d o a m i l a s a ) c o n o c e d e c o m o d e d e x t r i n a s ; P o r e n z i m a

f o r m a r s e

d e x t r i n o g n i c a

( m e z c l a

a m i l o d e x t r i n a , e r i t r o d e x t r i n a , a c r o d e x t r i n a p r o d u c c i n d e y m a l t o d e x t r i n a ) m a l t o s a . c o n p o c a

P o r d e s e r

s u

a c c i n ,

l a p o r

a l f a - a m i l a s a l a e n z i m a q u e

p r o v e e

f r a g m e n t o s L a d e

u t i l i z a d o s

m e n o r e s

p u e d e n

b e t a p o r p H E l e j . ,

a m i l a s a . r e q u i e r e c l o r u r o a p H e l e v a d a p t i m o 5 - 7 ,

e n z i m a E s

a l f a - a m i l a s a s e n s i b l e 1 5 c o m o , a a d e l u n a a c i d e z 3 , 3 p H o

d e y

s o d i o . a

u n a c t i v a d o r

s e v u e l v e 0 C

i n a c t i v a p o r d e n t r o l a L a

m e n o r

d e a c c i n d e

e s t

m i n .

r a n g o

s i e n d o

6 , 5

p a r a

a l f a - a m i l a s a e n z i m a e s

b a c t e r i a n a y

p a n c r e t i c a .

r e s i s t e n t e c o n s e r v a s o b r e L a a

a l u n

c a l o r , 7 0 % d e

p u e s s u y

7 0 C A c t a

a c t i v i d a d .

FUNDAMENTO: H C l 1 0 0 C e

a l m i d o n e s

c r u d o s c i d a y

g e l a t i n i z a d o s . a c c i n d e l

h i d r l i s i s a l m i d n p o r

p o r u n a

t o t a l d e l

p r o d u c e

f o r m a

g l u c o s a , l a

h i d r l i s i s h i d r l i s i s e n z i m a g l u c o s a s e y

m a l t o s a , a l f a

i s o m a l t o s a . p r o d u c e q u e a c c i n

L a d e

e n z i m t i c a p a r c i a l

a m i l a s a

u n a h i d r l i s i s u n a c a d e n a r o m p e r l a

d e x t r i n a n e c e s i t a

p r o d u c i e n d o l m i t e y p a r a - 1 - 6 l o s a l l a

e s

m a l t o s a ,

r a m i f i c a d a OBJETIVOS: d e

p o d e r

g l u c o s i d a s a . d e p r a c t i c a . d e l

- R e c o r d a r h i d r l i s i s

c o n c e p t o s r e a l i z a r l a

I d e n t i f i c a r d a p o r

e s t r u c t u r a q u e e l 2 %

a l m i d n . - R e c o n o c e r SUSTANCIAS: - A l m i d c o n c a l f a h i d r l i s i s n L a l

c o m p u e s t o s

a l m i d n . C l H

- E n z i m a d e

a m i l a s a - A z u c a r e s m a l t o s a ) - R e a c t i v o

( G l u c o s a , B e n e d i c t F i o l MATERIALES:

p o r c e l a n a T u b o s d e

- P l a c a R e v e

d e P

e i

r p

e t a s

e n s a y o -

PROCEDIMIENTO:H I D R L I S I S A g r e g a r u n a c o n c , l a f i o l a , 2 0 l u e g o a g r e g a r l l e v a r l u e g o e l a m l d e

A C I D A : 1 m l a l d e 2 % C l H e n

a l m i d n u n

m e z c l a r ,

b a o 5 d e

d e

M a r i a d e

h i r v i e n d o , h a c e r u n a

h i d r l i s i s ,

a n o t a r

t i e m p o c a d a

m i n u t o s e n u n a

i n i c i o

r e a c c i n c o n

l u g o l

p l a c a h a s t a s i n o e s

d e q u e q u e

p o r c e l a n a . y a n o h a y a e l a d q u i e r a c i d a b a o . d e a l

H a c e r c o l o r f i o l a

l a

r e a c c i n n e g r u z c o d e l u g o l l a q u e

e l c o l o r e l t i e m p o

c o m o

c a f . e l

A n o t a r y l a

d e l

h i d r l i s i s e s t a r E n m l d e e l e n

s i e m p r e

d e b e

H I D R L I S I S u n t u b o 5

E N Z I M T I C A : e n s a y o 2 % , 1 6 x 1 0 0 a g r e g a r u n m e d i r 2 0 0 y a u l 4 h a c e r b a o

3 7 C

d e a l m i d n p o r

m i n u t o s , a l f a i n i c i o

l u e g o l a

t i e m p o

l a e n z i m a

d e

a m i l a s a , d e l a

h i d r l i s i s r e a c c i n

m e z c l a r ,

a n o t a r c o n e n s a y o A

c a d a 5 l u g o l l o s 0 , 5 a l d e q u e

m i n u t o s h a s t a d e l

h a c e r s i n

1 5 m i n u t o s l o 1 5 5

c o m p l e t a r

s a c a r

1 5

e l

m i n u t o s . t u b o e n d e

m l

h i d r o l i z a d o e n m i n u t o s , e l b a o L u g o d e l

q u e

c o r r e s p o n d e r e l h a c i e n d o m i n u t o s , t u b o

e s t

c o n t i n u a r l o s 3 0

l u e g o

l a r e a c c i n r e t i r a r e l

c o n t u b o

h a s t a

c o n f i r m a r r e a c c i n

a z u c a r e s

b a o . P a r a l a

r e d u c t o r e s

d e B e n e d i c t : S o l . 0 , 5

r e a l i z a r

A l m i d n - 0 , 5

- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -

m l G l u c o s a - -

- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 0 , 5 0 , 5 m l H i d r o l i z a d o m l H i d r o l i z a d o 0 , 5 m l R . 2 , 5 d e m l p o r e n z i m t i c o

m l M a l t o s a - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - ( 1 5 ) - - - ( 3 0 ) - - e n z i m t i c o

- - -

0 , 5

m l H i d r o l i z a d o

c i d o - - - - - - - - - - - - u n b a o d e

- - - - - a g u a

B e n e d i c t - - - - - - - - - - - - c / t u b o H a c e r 5 m i n u t o s , r e t i r a r l o s

- - - - - - - - - t u b o s y

h i r v i e n d o

RESULTADOSR E A C T I V O R E A C C I O N O B S E R V A C I O N E S S a G d l l m u c l i d i o s s i o a n s l + H i

o b s e r v a r .

t s s ( s ( i a t E n e e n 1 i n

o a i z 5 s z

t + s . . i i t p

a H t ) p ) a d + a + r

l i

M d o H r H c i i s c i d a d e a + a i i d t

a r a d a r H l r

l l l i H

t l

o i H l i . i . r s .

H l d

3 s c o l a l

a i l

h i d r l i s i s

s e l o s

p r o d u c e m o n m e r o s e n l a c e s

u n

r o m p i m i e n t o d e l a l m i d n

q u e m a n t i e n e n y s e

t o t a l s e

u n i d o

l o s l a

f o r m a

g l u c o s a , u n h i d r l i s i s r o m p i m i e n t o y s e

m a l t o s a , i s o m a l t o s a . E n e n z i m t i c a p a r c i a l u n i d o q u e f o r m a r e s a d e l a s l o s

p r o d u c e

e n l a c e s q u e g l u c o s a y d e l

m a n t i e n e s d e x t r i n a l m i t e

m a l t o s a ,

u n i d a d e s

a l m i d n

u n a

c a d e n a

r a m i f i c a d a