INTRODUCCION La fotometra visible es una tcnica en la que se puede medir el porcentaje de transmitancia y absorbancia de una muestra coloreada, no tan

diluida ni concentrada, a una radiacin determinada. sta radiacin puede o no ser absorbida por la sustancia y es elegida por un sistema selector, seleccionando las longitudes de onda, a las cuales se desea hacer la medicin. Hay dos conceptos que son muy importantes de concebir, la transmitancia y la absorbancia. La transmitancia hace referencia a la luz no absorbida por la sustancia colorida, saliendo intacta su intensidad y la absorbancia se refiere a la radiacin que es absorbida parcialmente.

En sta prctica se puede demostrar la Ley de Beer, donde vara la concentracin de la solucin coloreada, como resultado la intensidad de la radiacin cambia. A=abc Donde: A: Absorbancia .a: Absortividad especfica .b: Espesor de la celda [cm] .c. Concentracin muestra coloreada [g/L] Para esta medicin, se hace uso de un instrumento llamado espectrofotmetro, que es el que me mide el porcentaje de transmitancia o la absorbancia, segn el instrumento, algunos nos pueden leer varias muestras, y ofrecernos unos espectros para la identificacin de la muestra. Los usos de estos instrumentos varan dependiendo de sus capacidades. Las partes mas generales son

Una fuente de radiacin Sistema selector de una radiacin de longitud de onda especifica. Las celdas Sistema detector, amplificador y de lectura.

Utilizando siempre un blanco de medicin, este blanco es conformado por sustancias que pueden causar interferencia, esta solucin tambin es llamada blanco fotomtrico.

Esta tcnica instrumental es muy utilizada para los anlisis cualitativos, con fines de identificacin, y anlisis cuantitativo, que con base a las mediciones obtenidas en el polarmetro, se construyen curvas de calibracin y curvas espectrales. PROCEDIMIENTO PRIMERA SECCION 1. RECONOCIMIENTO DEL INSTRUMENTO DE MEDICION En esta parte de la primera seccin del laboratorio se hizo un reconocimiento del instrumento tanto de las partes internas (con la ayuda del profesor que destap el instrumento y nos mostro las partes internas) como externas del espectrofotmetro Spekol, conocer que partes eran delicadas y que no, adems del reconocimiento de otra clase de espectrofotmetros, observando sus partes principales, conociendo sus marcas y otras funciones especiales gracias a sus catlogos. 2. MEDICION DE %T Y A DE UNA SOLUCION COLOREADA EN LOS DIFERENTES EQUIPOS Se nos otorgo una muestra problema coloreada la cual las medimos su absorbancia y el %T en los diferentes equipos existentes en el laboratorio, utilizando como blanco indicado. Se lleno la tabla 2 comparativa de caractersticas tcnicas de los diferentes equipos. 3. ESTUDIO DE MAXIMOS DE ABSORBANCIA DE LA SUSTANCIA P1 Se tomo la absorbancia a diferentes longitudes de onda de una sustancia P1, de la cual se obtuvo la longitud de onda del mximo de absorbancia, con los datos de absorbancia medida construimos una grafica (espectro), la cual comparamos con los espectros que tiene el libro de practicas de laboratorio de anlisis instrumental, para determinar su identidad, con los mximos de absorbancia se midi un punto medio entre los dos mximos, luego para la confirmacin parcial de nuestra muestra medimos la absorbancia de nuestra muestra con los mximos obtenidos y graficamos por medio del espectrofotmetro. SEGUNDA SECCION 4. OBSERVACIN DEL ESPECTRO VISIBLE El profesor retiro el portaceldas quedando la rendija de salida visible, se observaron los colores del espectro a medida que se giraba la perilla selectora de longitud de onda entre 350 y 800nm del espectrofotmetro Spekol.

5. COLORIMETRA VS FOTOMETRA El profesor nos mostr una gradilla con varios tubos de ensayo que contenan muestras coloridas pero todas de un mismo color, pero diferente intensidad.
6. CELDAS EQUIVALENTES

Debido a que la absorbancia depende directamente del espesor de la celda y su transparencia, se hace estrictamente necesario trabajar con celdas iguales para disminuir las posibilidades de desviaciones por este motivo; para ello, se tomaron 5 celdas que se consideraran semejantes, luego con una de ellas se ajust el cero de absorbancia (celda1) y a las siguientes se les hace la respectiva medicin (sin volver a ajustar el cero). 7. PREPARACIN DE PATRONES Preparacin de patrones La concentracin original del patrn era de 0.008 g/L. Se prepararon cuatro patrones correspondientes (de menos concentracin) a partir del patrn ms concentrado. Las concentraciones utilizadas fueron las siguientes: 0.002g/L 0.004g/L 0.006g/L 0.007g/L

Se tomo la absorbancia de cada uno de los patrones a 625nm, el cual fue el mayor pico de la muestra problema. Con los valores hallados se grafico una curva de calibracin y posteriormente se procedi a interpolar la concentracin de la sustancia problema. TERCERA SECCION 8. APLICACIN DE LA FOTOMETRIA VISIBLE EN EL ANALISIS QUIMICO Se nos entrego un material de acero (clic de hojas) con contenido de manganeso, para cuantificarlo en forma de permanganato. La muestra de acero se trata paralelamente con una muestra estndar. 8.1 PREPARACIN DE PATRONES: Para preparar los patrones, primero se prepararon 100mL de una solucin de permanganato de potasio de concentracin 250mg/L

158 ,04 gKMnO4 250 mgMn 100 gs ln * 0,1L * * 0,072 gS ln L 54 ,93 gMn 99 ,9 gKMnO4

Para ello se tomaron 0,072g de la solucin de permanganato de potasio disponible al 99,9% de pureza, se agregaron a un matraz de 100mL y se afor con agua destilada. De esta solucin se tomaron 10mL y se aforaron a 100mL quedando finalmente una solucin de permanganato de potasio con una concentracin de 25 mg/L. Para los patrones se recomendaban concentraciones de 2, 5, 10, 15 y 20 mg/L, para ello se toman 2, 5, 10, 15 y 20mL Clculo de la cantidad de solucin de 25mg/L que se necesitan tomar para que la concentracin final quede de 2mg/L: Vi * C i = Vf* C f Vi = Cantidad de solucin de 25mg/L que se necesitan C i = 25mg/L Vf= 25mL (Cantidad a preparar de cada patrn (constante para todos)) C f = 2 mg/L (5, 10, 15 y 20mg/L) Vi = (Vf* Cf )/ Ci Vi= 2mL De la misma manera se procedi para los dems volmenes De la solucin de permanganato de potasio se tomaron los volmenes respectivos para cada patrn y se aforaron a 25mL. Finalmente se llevaron al espectrofotmetro Genesis 20 y se determin la absorbancia de cada uno de ellos a 526 nm que corresponde a la longitud de onda a la cual el Manganeso presenta su mayor absorbancia. 8.2 TRATAMIENTO DE LA MUESTRA Y LA SOLUCIN ESTNDAR. Como solucin estndar, se tomaron 5mL de la solucin preparada inicialmente que contena una concentracin de 250 mg/L y a esta se realiz el procedimiento de manera simultnea con la muestra. En forma general, la masa de muestra debe acidificarse para que el Mn contenido en ella pase a Mn+2; seguidamente esta debe oxidarse para que todo el Mn+2 pase a Mn+7 en forma de MnO4-. Primero se pes una cantidad del clic, se pas a un beaker de 250mL y se agregaron 25mL de acido ntrico diluido en la cabina de gases, se cubri

con un vidrio reloj, se hirvi hasta que qued una pequea muestra, la cual se extrajo por filtracin, se agreg una pequea cantidad de a gua, se dej hervir durante un minuto y se aadi en varias etapas 0.5g de peroxidisulfato amnico, hirvi durante 10minutos, se diluyo luego con 25mL de agua, se aadi 5mL de acido fosfrico concentrado y 0.2g de peryodato potsico . Se dej enfriar la disolucin y se transfiri a un matraz aforado de 100mL, aforndose con agua destilada. El tratamiento de la solucin estndar ser til para determinar el porcentaje de error en la determinacin de Mn en la muestra. 8.3 PREPARACIN DEL BLANCO FOTOMTRICO. Para preparar la solucin que sirvi como blanco en la medicin de la absorbancia de la muestra problema y la estndar, se tomaron 10 mL de la solucin de la muestra problema obtenida en el paso anterior, se adicionaron unas cuantas gotas de HCl concentrado y se calent hasta que la coloracin desapareci y qued una solucin translcida. DETERMINACIN DE LA CONCENTRACIN DE MN EN EL ACERO Y CLCULO DEL ERROR EN EL ANLISIS. La solucin estndar y la muestra se llevaron al espectrofotmetro y se les midi la absorbancia, para la determinacin de Mn en el acero.

8.4

CUARTA SECCION 9. APLICACIN DE LA FOTOMETRA EN LA DETERMINACIN DE NITRITOS CONTENIDOS EN AGUA RESIDUALES Se preparo una solucin coloreada, un blanco fotomtrico y una serie de patrones para formar una curva de calibracin para la determinacin de la concentracin de la muestra a analizar, y se realizo de la siguiente manera: a) Preparacin del reactivo colorante. A 5mL de agua destilada contenidos en un matraz de 25mL agregarle 2,5mL de H3PO4, luego 0,25g de Sulfanilamida y finalmente 0,025g de Diclorodrato de N-(naftil)-etilendiamina. Aforar con agua destilada. b) Preparacin del blanco fotomtrico. Tomar 2mL del reactivo colorante en un matraz de 50mL y aforar con agua destilada. c) Preparacin de patrones. Solucin Madre de Nitrito: Pesar 0,304g de NaNO2 en un matraz de 1000mL y aforar con agua destilada.

Concentracin:

0,3093g *

1molNaNO2 1molNO2 46gNO2 1000mgNO2 1 * * * 206,2mgNO2 /L 69gNaNO 2 1molNaNO2 1molNO2 1Ls ln 1gNO2

a. Solucin Intermedia de Nitrito: tomar 10mL de la solucin madre y aforar en un matraz de 500mL. Concentracin:

10x10 3 L *

206,2mgNO2 1 * 4,124mgNO2 /L 1LNO2 0,5Ls ln

b. Solucin Estndar de Nitrito: tomar 10mL de solucin Intermedia y aforar en un matraz de 100mL Concentracin:
10 mL *
4,124 mgNO 2 1 1000 mL * * 0,4124 mgNO 2 /L 1000 mL 100 mLs ln 1L

De la solucin estndar se prepararon 5 patrones as: Patrn 1. Se tomaron 5 mL de la solucin estndar se agregaron 2 mL de reactivo colorante y se aforaron a 50 mL quedando una concentracin de 20 mg/L, como se mostraba en la gua. TABLA1. Preparacin de concentraciones

Patrn 1 2 3 4

conc g /L 20 40 60 80

V ml sl estandar 5 10 15 20

Tratamiento
2 ml del reactivo colorante y aforar en un matraz 50 ml.

RESULTADOS Y ANALISIS TABLA 2. Comparacin de las caractersticas tcnicas de los diferentes modelos

de espectrofotmetros.
Equipo Marca Modelo Tipo de haz: sencillo, doble, dividido Regiones: UV, VIS, IR Rango de en nm Fuente(s): para el UV, VIS, IR Monocromador: Czerney, Ebert, Prisma, Filtros Material y espesor de las celdas: cuarzo, slice, vidrio, plstico Detector: fotocelda, fototubo, diodos Amplificacin: ptica, electrnica Instrumento de lectura: anlogo, digital
espectrofotmetro espectrofotmetro espectrofotmetro espectrofotmetro espectrofotmetro

Carl zeissjena Spekol Sencillo

Milton monroy Gnesis 20 Haz dividido

shimadzu UV-1700 Haz doble

Milton monroy Spectronic 20 Sencillo

Thermoscientific Evolution 60 Sencillo y haz dividido UV-VIS 325-1100 190-1100 Tungsteno, xenn y halgenos Red

Visible 400-750 Tungsteno

IR-VIS 350-800 800-1100 Tungsteno y halgenos Rejilla de difraccin Vidrio y metacrilico de 1cm de espesor

UV-VIS 190-1100 Halgeno (200 watts) y deuterio Red monocromtica con cava Vidrio metacrilico y cuarzo de 2cm de espesor Fotodiodo de silicona

UV-VIS 350-900 Tungsteno

Red

Red

Celdas de 1cm de espesor todas

Vidrio cilndrico de 1cm de espesor

Vidrio o cuarzo

Fotoelemento de selenio

Fotodiodos de silicio

Fototubos

Diodos

Electrnica

electrnico

electrnico

ptica

Electrnica

anlogo

digital

digital

Digital o anlogo

Digital

1. MEDICION DE %T Y A DE UNA SOLUCION COLOREADA EN LOS DIFERENTES EQUIPOS TABLA 3. Valores de %T y A medidos a la solucin coloreada en los diferentes equipos
Equipo %T A Gnesis 20 55,00 0,260 shimadzu 51,4 0,289 Carl zeissjena 40,0 0,395 Spectronic 20 45,0 0,347 Evolution 60 54,0 0,265

ANALISIS Al analizar los resultados obtenidos se puede notar que: primero, a 600 nm se presenta una absorbancia mayor que a 400 nm, ello nos lleva a verificar lo que tericamente se presume que cada compuesto tiene una longitud de onda a la

cual presenta una mayor absorbancia; este fenmeno se puede observar cuando se realice una curva espectral, y segundo, los datos de absorbancia y transmitancia a pesar de haber sido tomados con la misma sustancia, difieren segn el espectrofotmetro usado. A continuacin un anlisis de este suceso: La absorbancia o densidad ptica es directamente proporcional a la absortividad del lquido (a) que es constante para cada sustancia, la concentracin de la solucin (c) y al espesor de la celda que contiene la muestra (b). Es decir A= abc, ecuacin conocida como la ley de Beer; adems factores como la temperatura, el pH y la longitud de onda a la cual se mida, tambin pueden ocasionar variaciones. No obstante, al trabajar con una misma sustancia, se evitan las desviaciones por la absortividad, la concentracin y el pH, adems, durante la realizacin de la prctica se puede asumir que la temperatura fue aproximadamente constante. Por lo anterior, los nicos factores que pudieron afectar la medicin fueron la longitud de onda y la celda. 2. ESTUDIO DE MAXIMOS DE ABSORBANCIA DE LA SUSTANCIA P1 TABLA 4. Absorbancia de la sustancia problema P1 a diferentes s
390 % 85,8 T A 0,06 6 410 76,5 0,11 6 430 72,9 0,13 7 450 87,7 0,05 7 470 95,5 0,02 490 95,7 0,01 9 510 92,5 0,03 4 530 550 570 60.1 0,22 1 590 46,5 0,33 2 610 27,5 0,56 1 630 22,1 0,65 6 650 50,1 0,30 670 87,5 0,08 3 690 95,1 0,02 2 710 97,5 730 98,2 750 98,2 0,00 8 770 98,2 0,00 8 790 98,4 0,00 7 810 98,4 0,00 7 87,5 77,4 0,05 8 0,11 1

0,01 0,00 1 8

Luego medimos la A y %T de un valor intermedio de las mximas landas Valor intermedio de = 620nm A medidas= 0,673 %T medido= 21,23 Anlisis: Con los datos de la tabla 3 construimos una grafica que se ve a continuacin, para acercarnos a la posible muestra problema que tenamos Con esta grafica y los espectros referenciados en el manual de practicas de laboratorio utilizado en el curso citado, en la pagina 144 encontramos que nuestra muestra P1 era el verde brillante en medio acuoso. Despus de esto decidimos reiterar nuestro resultados graficando el espectro de nuestra muestra en el refractmetro, dndole a este los datos de landa donde se obtuvo una mayor absorbancia, ver anexo 1.

As con ella reiteramos que nuestra muestra si era el verde brillante en medio acuoso.
0.7 0.6 Absorvancia (A) 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 0 200 400 600 Longitud de onda (nm) 800 1000

GRAFICA 1. Espectro del verde brillante 3. OBSERVACIN DEL ESPECTRO VISIBLE TABLA 5. Espectro visible observado en la prctica Color Violeta Azul Verde Amarillo Naranja Rojo

Rango de ( ) en nm 376-430 430-495 495-563 563-579 579-599 599-762

TABLA 6. Espectro visible de la literatura

COLOR VIOLETA AZUL VERDE AMARILLO ANARANJADO ROJO Rango de ( ) en nm 380450 450495 495570 570590 590620 620750

ANLISIS: Comparando la tabla 4 y la 5, se observa una gran diferencia respecto a los rangos de longitud de onda; esto puede explicarse por la baja sensibilidad del ojo humano para detectar cambios de color, siendo ste anlisis muy subjetivo. 4. COLORIMETRA VS FOTOMETRA Podemos llegar a la conclusin de que la diferencia entre colorimetra y fotometra es: La fotometra mide %T de cualquier sustancia colorida, y la colorimetra relaciona la concentracin de unas sustancias respecto con su intensidad del color, siendo este ultimo igual para las sustancias a comparar. 5. CELDAS EQUIVALENTES Debido a que la absorbancia depende directamente del espesor de la celda y su transparencia, se hace estrictamente necesario trabajar con celdas iguales para disminuir las posibilidades de desviaciones por este motivo; para ello, se tomaron 5 celdas que se consideraran semejantes, luego con una de ellas se ajust el cero de absorbancia (celda1) y a las siguientes se les hace la respectiva medicin (sin volver a ajustar el cero). TABLA 7. Valores de absorbancia medidos a 400nm con agua destilada en un espectrofotmetro Gnesis 20D para encontrar celdas equivalentes.
Celda Absorbancia (A) 1 2 3 4 5 0,000 0,001 0,000 0,000 0,003

ANLISIS: Como vemos las celdas utilizadas para comprobar que eran celdas equivalentes mediante la medicin del cero absoluto por medio de un blanco de agua nos confirma que el fabricante cumple con los valores que establece.

6. PREPARACION DE PATRONES

La absorbancia que presento cada una de los siguientes patrones fue: Tabla 8. Absorbancia de los patrones preparados. Concentracion de Patrones (g/L) A(absorbancia) 0,002 0,391 0,004 0,504 0,006 0,813 0,007 0,973 La muestra problema presento una absorbancia de A=0.626

Posteriormente se grafico la siguiente curva de calibracin:

1.2 1 Absorbancia 0.8 0.6 0.4 0.2 0 0 0.002 0.004 Concentracion (gL) 0.006 0.008

Grafica 2. Curva de calibracin para determinar concentracin de muestra problema 10. X=(0.626-0.106)/118.8= 0.004377 g/L Concentracin obtenida= 0.004377g/L Concentracin real= 0.004g/L %error= ((0.004377-0.004)/0.004)*100= 9.43% Podemos atribuir el alto porcentaje de error a la suciedad de las celdas utilizadas, o a errores cometidos por el analista.

7. APLICACIN DE LA FOTOMETRIA VISIBLE EN EL ANALISIS QUIMICO TABLA 9. Datos para construir la curva de calibracin y para determinar la concentracin de Mn en la solucin de la muestra de acero y el estndar. Patrn no 1 2 3 4 5 Concentracin 2 5 10 15 20 en (mg/L) %T 83,95 56.23 40.74 24.38 15,56 A 0,076 0,250 0,390 0,613 0,808

0.9 0.8 0.7 A (absorbancia) 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 0 5 10 15 20 y = 0.0396x + 0.0161 25 concentracion

Grafica 3. Curva de calibracin del manganeso en la muestra de acero Anlisis: La grfica presenta un comportamiento lineal que obedece a la ecuacin:

A 0,0396C
Esto nos permite comprobar que el Manganeso cumple la ley de Beer, ello implica que si se tuvieran que hacer anlisis posteriores, no habra necesidad de realizar nuevamente una curva de calibracin, pues la ecuacin permitira efectuar los clculos.

6.4 Determinacin de la concentracin de Mn en el acero y clculo del error en el anlisis. TABLA 10. Resultados de Absorbancia para la muestra y la solucin estndar

Absorbancia Concentracin1 (mg/L) (A) Estndar Muestra 0,404 0,372 10,20 9,394

A continuacin, los clculos pertenecientes a las concentraciones y a los datos estadsticos. Concentracin de la sustancia Mn en la muestra de acero:

A 0,0396C 0,372 C 0,0396 C 9,394 mg

Coeficiente de correlacin: Sensibilidad:

S A 0,0396 C

Limite de Cuantificacin:
C A S

Porcentaje de error instrumental:

%E %E %E dn 100 mC

 Concentracin de la solucin estndar:

A 0,0396C 0,404 C 0.0394 C 10,20 mg

Porcentaje de Mn en el acero 9,394 mg / L * 0,1L % Mn 100 0,412 % 227 ,8mg Porcentaje de manganeso en el estndar 10 ,20 mg / L * 0,1L % Mn 100 0,426 % 239 ,3mg 8. APLICACIN DE LA FOTOMETRA EN LA DETERMINACIN DE NITRITOS CONTENIDOS EN AGUA RESIDUALES Cuando se obtiene las lecturas de absorbancia de cada patrn se obtiene la tabla No7. Y se obtiene la respectiva curva de calibracin, como el sistema obedece a la ley de beer se realiza el ajuste de la grafica para que pase por cero y se obtiene la ecuacin. Tabla 11. Absorbancia de patrones, para la curva de calibracin de nitritos. Patrn 1 2 3 4 Concentracin g NO2- /L 20 40 60 80 absorbancia 0,014 0,031 0,056 0,076

0.08 0.07 0.06 Absorbancia 0.05 0.04 0.03 0.02 0.01 0 0 20 40 60 80 100 Concentracion de NO2- (g/L)

Grafica 4. Curva de Calibracin para determinacin de Nitritos en Aguas. (Patrones)

La ecuacin obtenida es Y=0.0009X Donde, Y=absorbancia obtenida X=concentracin de la solucin. Determinacin del contenido de nitritos en la muestra. Con la absorbancia que se obtiene de la muestra problema se calcula a partir de la ecuacin de la curva la concentracin final, en los 50 ml de volumen. Concentracin final 3= Absorbancia / La pendiente de la curva Teniendo en cuenta las diluciones que se realizaron a la muestra tenemos que:

Cm1= ?

25 ml Mc

50 ml

Cm2= ?

50 ml Cm3 = ?

25 ml

Cm 1, 2,3= concentracin de la muestra 1, 2, 3. Absorbancia de la muestra Problema=0.023 Concentracin de la muestra final (X)= 0.023/0.00093= 24.7312 g NO2- /L Ya teniendo la concentracin de la muestra final, se obtiene la concentracin de nitritos en la muestra original=

g NO2 /L= g NO2- /L (en los 50 ml vol. Final) Ml muestra

x 50 ml.

Concentracin de nitritos en la muestra original= 49.4624 g NO2- /L

CONCLUSIONES El espectrofotmetro Shimadzu arroja un valor de absorbancia y transmitancia ms preciso y exacto debido a su ancho de banda tan reducido. Las mediciones deben realizarse en el mismo equipo, puesto que a la hora de realizar un anlisis cuantitativo, la variacin de la longitud de onda entre un equipo y otro, afecta notoriamente los resultados. Cuando se desea hacer un anlisis a cualquier sustancia mediante el mtodo de fonometra visible, se debe conocer cual es la longitud de onda a la que presenta su mximo de absorcin, ya que primero, permite una idea de cual es la sustancia pues estos mximos son caractersticos para cada especie, y segundo permite resultados ptimos. Los patrones deben quedar en el rango de linealidad (0,16 - 0,8) en el cual se tiene cierta seguridad respecto al comportamiento de las sustancias respecto a la ley de Beer.

Conocer que una sustancia obedece a la ley de Beer, facilita los clculos posteriores, puesto que si ya se conoce la ecuacin de la curva de calibracin, conocer concentraciones o absorbancias de otra muestra puede despejarse. Si no se trabaja en un espectrofotometro Shimadzu es necesario buscar celdas equivalentes para disminuir las desviaciones en las mediciones por este motivo. Hallar la concentracin de determinada molcula en una mezcla, se puede hacer fcilmente por fotometra siempre y cuando esta molcula forme un complejo coloreado con algn reactivo; de no ser as la tcnica no sera la apropiada para hacerlo pues el principio de esta es la absorcin, y si una solucin es transparente no se presentar dicho efecto.

PRACTICA DE ESPECTROFOTOMETRIA

Marcela Patricia Gmez Yuliana Prez Snchez

UNIVERSIDAD TECNOLOGICA DE PEREIRA FACULTAD DE QUIMICA RISARALDA PEREIRA