TEMA 5: El RECEPTOR DE LA CLULA T Tipos de TCR y Caractersticas Moleculares: El complejo CD3 TCR Combinacin de Genes V(D)J para el TCR

Los Correceptores CD4 y CD8 Diferenciacin de los Linfocitos T en Timo Seleccin positiva y Negativa Clulas Reguladoras Naturales Ratones Rag null (KO) y Transgnicos para TCR

Reconocimiento del Antgeno por linfocitos T

Th CD3CD4 Tc CD3CD8

BCR Antgenos

TCR MHC

Exclusivo Linf. T. Clonal Semejante a Ig.

APC

El Receptor de la Clulas T (TCR) Restringido al MHC

Hay 2 tipos de TCR, clulas T maduras:

TCR MHC

>90% <10%

El Receptor de la Clulas T (TCR)

Hay 2 tipos de TCR, clulas T maduras:

110aa

>90% <10%

159aa

49kDa

43kDa

HV1 HV2 HV4 HV3

49kDa 43kDa

40-50kDa

45kDa

Kappler y Marrack 1983

Tonegawa y Brenner 1990s

Reconoce

Ag+MHC-I II

HSP, CD1c, fosfolpidos, MICA, MICB

Desarrollo en ausencia de timo Localizacin Predominates en Diversidad Especificidad Expresan Funciones

No Sangre----Tejidos Adulto CD4 CD8 Th (CD4) Tc (CD8)

S Tejidos epiteliales (<5%) Feto (-) > CD8> CD4 Tc, Reguladora

El Complejo CD3 TCR

CD -CD

zeta - eta

SIMILITUDES ENTRE LAS Igs Y EL TCR

Inmunoglobulina de membrana (IgM)
Reconocimiento

TCR
Reconocimiento

CD3 Cadena ligera Cadena pesada Ig Ig

CD3

ITAMs

Sealizacin

Sealizacin

ITAM: YXXL(X)6-8YXXL/I

Complejo CD3 / TCR

Gicosilacin + + Asociacin / /

Pptido CD3 CD3 CD3 CD3,

Cromosoma 11 11 11 1

IgSF + + + -

ITAM 1 1 1 3

IgSF: Superfamilia de las Inmunoglobulinas

Complejo CD3 / TCR

Generacin de Diversidad de TCR

1. Combinacin V con V y V con V 2. Numerosos genes V 3. Genes D y J 4. TdT (HV3) 5. Exonucleasa y Ligasa (HV3) 6. No hay hipermutaciones somticas

ORGANIZACI ORGANIZACIN GEN GENMICA DE LOS LOCI DE LAS CADENAS DEL TCR
(Brazo largo)

(Brazo largo)

(Brazo corto)

ORGANIZACI ORGANIZACIN GEN GENMICA DE LOS LOCI DE LAS CADENAS DEL TCR

Loci de la cadena del TCR humano (cromosoma 7)

Loci de la cadena del TCR humano (cromosoma 14)

RECOMBINACI RECOMBINACIN DE TCR REGLA 12/23

Reordenamiento de los Genes V(D)J

RAG-1/RAG-2 TdT

Procesamiento Alternativo del RNA

Complejo CD3 / TCR

El CD4 y El CD8

55kDa (Serinas) 38kDa 30kDa

Pptido CD4 CD8

Cromosoma (ratn) 12 (6) 2 (6)

IgSF + +

Gicosilacin ++ +

ITAM -

Asociacin /

FUNCIN DE CD4 Y CD8

Estructura Cristalina de CD4 y CD8

Dominios Ig de CD4 y CD8

CD4 y CD8 en la Activacin de la clula T

Diferenciaci Diferenciacin de C Clulas T en el Timo: Selecci Seleccin Positiva y Selecci Seleccin Negativa. Contribuci Contribucin a la Autotolerancia. Autotolerancia.
1. Relevancia del Timo, su Origen, Desarrollo y Componentes. 2. Diferenciacin de los Timocitos de DN a DP, Factores Implicados y Fases de Diferenciacin. Seleccin Positiva y Seleccin Negativa. 3. Diferenciacin de Timocitos DN a Linfocitos SP. 4. Restriccin del TCR. Reconocimiento del TCR en Periferia. 5. Clulas Reguladoras Naturales 6. Ratones Rag null (KO) y Transgnicos para TCRab

EL TIMO

Anatoma de Gray

Anatoma de Gray

COMPOSICIN CELULAR DEL TIMO

Llegada al Timo del Progenitor Linfoide Comn (CLP)

CD44+ / Ac. Hialurnico / y Prot. Matriz

CCL19 CCR7 CCL21 TECK CCR9

c-Kit / IL7Ra

CPL Humano: CD34+ / CD45RA+ / CD7 CPL Ratn: CD44+ / SCA-1+

DIFERENCIACIN DE LOS LINFOCITOS T

Pro-T

Pre-T

a) Patrn de Expresin de Molculas. b) Patrn de Expresin de Factores de Transcripcin Asociados a Linaje T. c) Puntos de Control: Seleccin y Proliferacin de los Timocitos.

DIFERENCIACIN DE LOS LINFOCITOS T

CD7

SCF IL-7

RAG1+ RAG2+ TdT+

RAG1+ RAG2+

IL-7r Cr

CD4CD8Pro-T Pre-T

a) Patrn de Expresin de Molculas. b) Patrn de Expresin de Factores de Transcripcin Asociados a Linaje T. c) Puntos de Control: Seleccin y Proliferacin de los Timocitos.

Fase de Dobles Negativas

DN1 DN2 DN3 DN4
CD44 CD25 CD34 CD38 CD1a+

SCF/ cKit

Fase de Dobles Negativas

DN1 DN2 DN3 DN4
CD44 CD25

Pax5
CD34 CD38 CD1a+

Notch-1

SCF/ cKit

Fase de Dobles Negativas

DN1 DN2 DN3 DN4
CD44 CD25 CD34 CD38 CD1a+

Notch-1

Primera Proliferacin IL-7 IL-7R

Fase de Dobles Negativas

DN1 DN2 DN3 DN4
CD44 CD25 CD34 CD38 CD1a+

Notch-1

Id2 E2A GATA-3

Primera Proliferacin
RAG1+ RAG2+ TdT

Reordenamiento TCR TCR

Fase de Dobles Negativas

DN1 DN2 DN3 DN4
CD44 CD25 CD34 CD38 CD1a+

IL-7RcKit-

Seleccin

Fase de Dobles Negativas

DN1 DN2 DN3 DN4
CD44 CD25 CD34 CD38 CD1a+

IL-7RcKit-

Seleccin Segunda Proliferacin Sealizacin

Syk / Zap-70 LCK PKC LAT PI3K AKT Rac-MAKK Ras-MAKK

Fase de Dobles Negativas

DN1 DN2 DN3 DN4
CD44 CD25 CD34 CD38 CD1a+

Id3

E2A Hes-1

Pre-T

Diferenciacin de DP

RAG1+ RAG2+

Pre-T

Seleccin Positiva y Negativa de Timocitos TCR DP

CD4

CD8

Diferenciacin a SP

Restriccin MHC

Diferenciacin de DP

RAG1+ RAG2+

Pre-T

Salida de Linfocitos SP del Timo

S1P

Mouse Human 4 8 10 12 14 16 18 20 22
Weeks Weeks

36 Birth

Efecto de la Interaccin MHC-TCR Restriccin de Linfocitos T

Antgeno HLA propio + pptido propio Reaccin de T en Periferia Negativa (tolerancia- supervivencia) Positiva (Defensa frente a la Infeccin) Alorreconocimiento (Rechazo de Transplante) TOLERANCIA PERIFRICA (Inhibicin de T autoreactivas)

HLA propio + pptido extrao

HLA extrao MHC(no propio)+pep HLA propio + pptido propia Clulas nTreg (CD4+CD25+)

Clulas T Reguladoras Naturales CD4/CD25+ (Treg)

Citometra de las Poblaciones de Timocitos de Ratn Ratones inmunodeficientes, RAGnull, SCID, Nude.
wt
SP

Rag-ko

CD4 Rojo

DP
6.37

2.89

DN
100 101 102

SP
103 104

CD4 Rojo
DN
100 101 102 103 104

17.81

70.27

CD8 Verde

CD8 Verde

Doble Negativas (DN): CD4-CD8Doble Positiva (DP): CD4+CD8+ Simple positiva (SP): CD4 CD8

Citometra de las Poblaciones de Timocitos de Ratn

wt
SP

Rag-ko

CD4 Rojo

DP
6.37

2.89

DN
100 101 102

SP
103 104

CD4 Rojo
DN
100 101 102 103 104

17.81

70.27

CD8 Verde

CD8 Verde

Doble Negativas (DN): CD4-CD8Doble Positiva (DP): CD4+CD8+ Simple positiva (SP): CD4 CD8

CD4 Rojo

Ratn Transgnico TCR x RAg-ko

DP

DN
100 101 102 103 104

CD8 Verde