Tesis 162

PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA
FACULTAD DE CIENCIAS
CARRERA DE BACTERIOLOGIA
DISEO Y VALORACION DE UN MEDIO DE CULTIVO SELECTIVO (SULBAC)
PARA Streptococcus mutans
DIANA MILENA PEDRAZA SANCHEZ
YOHANY ANDRES HERNANDEZ VELANDIA
TRABAJO DE GRADO PARA OPTAR AL TITULO DE BACTERIOLOGO(A)
BOGOTA, D.C. COLOMBIA. JUNIO 2006
NOTA DE ADVERTENCIA
Los conceptos y opiniones emitidos
En este trabajo son responsabilidad
Del autor, no compromete en nada
A la Pontificia Universidad Javeriana
Articulo 23 de la resolucin o !3
Julio de !"##$
DEDICATORIA
Dedicamos este trabajo de %rado a
uestros Padres &uienes finalmente
os permitieron lle'ar a este punto"
AGRADECIMIENTOS
A'radecemos al (entro de )nvesti'aciones *dontol'icas
+()*,, &uienes permitieron ejecutar y culminar e-itosamente
Esta idea"
A la Dra" .ar'arita (/aves, por su dedicacin, apoyo y confian0a
En la reali0acin del presente trabajo de %rado"
RESUMEN
Streptococcus mutans es el microor'anismo relacionado con el proceso
cario'enico, desempe1a un papel importante en el inicio de la desminerali0acin,
no siempre se a2sla antes del desarrollo de las lesiones, adem3s es posible
/acerlo en 0onas libres de caries" 4in embar'o, estudios epidemiol'icos
demuestran correlacin si'nificativa entre los niveles de estas bacterias en la
placa y la saliva con la prevalencia de caries e incidencia de caries"
5eniendo en cuenta &ue cada ve0 se /ace necesario aumentar la selectividad de
los medios de cultivo en el proceso de identificacin en los laboratorios de
microbiolo'2a dia'nostica, este estudio pretende mejorar la calidad de aislamiento
&ue se pueda obtener en el medio de cultivo cl3sico llamado Agar Mitis Salivarius
mediante la adicin de compuestos &u2micos como lo son el cloruro ferrico y el
citrato de sodio y tambi6n antibiticos como el sulfiso-a0ole y la bacitracina, los
cuales /an arrojado resultados favorables en el aislamiento de S. mutans.
)ncluye cepas de S. mutans previamente aisladas, biotipificadas y con'eladas
obtenidas en el centro de investi'aciones odontol'icas, i'ualmente se utili0aron
muestras de saliva de !7 pacientes &uienes bajo consentimiento escrito
autori0aron el uso de la muestra, la cual se utili0o para la recuperacin de otros
estreptococos orales, como lo fue Streptococcus sanguis, Streptococcus sobrinus
y Streptococcus rattus.
El medio de cultivo 4UL8A(, result efectivo en el aislamiento selectivo de
Streptococcus mutans, observ3ndose un crecimiento del !779 en las diferentes
concentraciones a las cuales se ensayo dic/o medio, mientras &ue la in/ibicin de
crecimiento en los dos medios con concentraciones mas bajas es: S. sanguis fue
del ;79, S. sobrinus fue del $<9, S. rattus fue del !779, observ3ndose &ue no
se presento crecimiento de nin'uno de estos estreptococos en las dos
concentraciones de medio mas altas, mientras &ue 4" mutans presenta un optimo
crecimiento en todas las concentraciones, confirmando la selectividad del medio
4UL8A( para S. mutans"
ABSTRACT
Streptococcus mutans is t/e microor'anism relationed =it/ t/e cario'enic process,
it plays an important role in t/e be'innin' of deminerali0ation, not al=ays is
isolated before of t/e tissue injury, also is possible isolate it in tissues =it/out
caries" >o=ever, epidemiolo'ical studies s/o= si'nificant correlation bet=een t/e
levels of t/is bacterium in t/e pla&ue and saliva =it/ t/e prevalence of caries and
incidence of caries"
Eac/ moment is more necessary au'ment t/e selectivity of t/e culture medium in
t/e identification process in t/e dia'nostic microbiolo'y, t/is study pretends 'et
better, t/e isolation &uality t/at =e can obtain in t/e classical culture medium
named Mitis Salivarius Agar (MSA), by t/e addition of c/emical compounds li?e
ferric c/loride and sodium citrate and also, t/e addition of antibiotics li?e
sulfiso-a0ole and bacitracin, t/ese antibiotics /ad 'ive very 'ood results in t/e
isolation of S. mutans"
5/is study includes strains of S. mutans previously isolated, c/emical identification
and free0e, obtained from t/e *dontolo'ical )nvesti'ation (entre, also, saliva
specimens =ere obtained from !7 patients, =/o under permission, aut/ori0ed
specimen analysis, for t/e recuperation of ot/er streptococcus from t/e oral cavity
li?e S. sanguis, S. sobrinus, S. rattus"
5/e culture medium 4UL8A( s/o=s /i'/ effectiveness in t/e selective isolation of
S. mutans, s/o=in' t/e 'ro= of t/e bacterium in !779 at different concentrations
of t/e assay, =/ile t/e in/ibition of t/e 'ro= in t/e medium =it/ lo=er
concentration is: S. sanguis 3;"<9, S. sobrinus <79 and S. rattus !779, t/ere is
not 'ro= of any streptococcus in t/e /i'/er concentrations of t/e medium, 4"
mutans s/o=s an optimal 'ro= in all t/e concentrations, it confirms t/e selectivity
of 4UL8A( culture medium for 4" mutans"
TABLA DE CONTENIDO PAG
!" )ntroduccin@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@"""!
2" *bjetivos@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@3
2"! *bjetivo %eneral@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@"@@@@""3
2"2 *bjetivos Espec2ficos@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@"@@@""3
3" Antecedentes 8iblio'r3ficos"""@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@A
3"! %eneralidades del %enero Estreptococo@@@"@@@@@@@@@@@@@@@A
3"2 Estreptococos Biridans@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@$
3"3" %rupo Streptococcus Mutans@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@"$
3"3"! (oloni0acin por .icroor'anismos del %rupo Mutans y (ario'6nesis@@@@@""";
3"3"2" .ecanismos de Ad/erencia@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@"""#
3"A Streptococcus Mutans@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@"""!7
A" .edios de (ultivo@"@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@"@@@"!2
A"! .edios de (ultivo 4electivos@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@"""!3
A"2 Preparacin@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@"!3
A"2"! Disolucin del .edio de (ultivo Des/idratado@@@@@@@@@@@@@@@""!3
A"2"2 Esterili0acin@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@""@@"!A
A"2"3 Bertido en Placas@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@"""!<
<" A'entes )n/ibidores del (recimiento 8acteriano en .edio De (ultivo@@@@@"!$
<"!" Antibiticos@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@""@!$
<"!"!" 4ulfonamidas@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@""@!$
<"!"!"! Propiedades Cu2micas@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@"@@!;
<"!"!"2" Efectos en .icroor'anismos@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@"@@"!;
<"!"2 8acitracina@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@""@!D
<"2 A'entes Cu2micos Actuando (omo 8actericidas o 8acteriost3ticos@@@@"@@!#
<"2"! (loruro E6rrico@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@!#
<"2"2 (itrato de 4odio@@@@@@@@""@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@27
$" .ateriales y .6todos@@@@@@@@@@@@@@@"@@@@@@@@@@@2!
$"! Poblacin y .uestra@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@""2!
$"2 Procesamiento de las .uestras@@@@@@@@@@"@@@@@@@@@@@""2!
$"3" 4iembra de Estreptococos orales@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@23
;" Fesultados@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@"@@@@@@@@@@""2A
D" Discusin de Fesultados@@@@@@@@@@@"@@@@@@@@@@@@@""3A
#" (onclusiones@@@@@@@@@@@@@@@@"@@@@@@@@@@@@@""3$
!7" Fecomendaciones@@@@@@@@@@@@@"@@@@@@@@@@@@@@"3;
!!" 8iblio'raf2a@@@@@@@@@@@@@@@@@"@@@@@@@@@@@@@""3D
Ane-o !@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@"@@@@@@@@@@@@@@@A7
Ane-o 2@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@""@@@@@"@@@@@@@@""@A3
INDICE DE TABLAS PAG
5abla o !"
)dentificacin bio&u2mica de Estreptococos orales@@@@@@@@""@@@@"@@@@"";
5abla 2"
(omponentes y concentraciones del medio 4UL8A(@@@@@@@""@@@@@"@@""22
5abla 3"
(omparacin de crecimiento de las diferentes cepas
utili0adas en el medio ! +8ajo, Primer ensayo" @@@@@@@@@@"@@@@"@@@""2A
5abla A"
utili0adas en el medio ! +8ajo, 4e'undo ensayo" @@@@@@@@@@@@@""@@@""2A
5abla <"
utili0adas en el medio ! +8ajo," 5ercer Ensayo" @@@@@@@@@@@@"@@@@@""2A
5abla $"
utili0adas en el medio ! +8ajo," (uarto Ensayo@@@@@@@@@@@@@@"""@@@""2<
5abla ;"
utili0adas en el medio !" +8ajo," Cuinto ensayo@@@@@@@@@@@@"@"@@@@""2<
5abla D"
utili0adas en el medio 2 +ormal," Primer ensayo" @@@@@@@@@@"""""""""""""@""@""2$
5abla #"
utili0adas en el medio 2 +ormal," 4e'undo Ensayo@@@@@@@@@@"@@@"@@""2$
5abla !7"
utili0adas en el medio 2 +ormal," 5ercer Ensayo@@@@@@@@@@@@"@@@@"""2;
5abla !!"
utili0adas en el medio 2 +ormal," (uarto Ensayo@@@@@@@@@@@"@@@@@""2;
5abla !2"
utili0adas en el medio 2 +ormal," Cuinto Ensayo" @@@@@@@@@@@""""@@@@""2;
5abla !3"
utili0adas en el medio 3 +AL5* GA," Primer Ensayo@@@@@@@@"@@@@@@""@""2D
5abla !A"
utili0adas en el medio 3 +AL5*GA," 4e'undo Ensayo@@@@@@@@@"@@"""@@@""2#
5abla !<"
utili0adas en el medio 3 +AL5* GA," 5ercer Ensayo@@@@@@@@@@"@@@""@@""2#
5abla !$"
(omparacin de crecimiento de las diferentes cepas@@@@@@@@@"@@@@@"@2#
Utili0adas en el medio 3 +AL5* GA," 5ercer Ensayo"
5abla !;"
utili0adas en el medio 3 +AL5* H A, Cuinto ensayo@@@@@@@@@@@"@@""@@""37
5abla !D"
utili0adas en el medio A +AL5* G8," Primer Ensayo@@@@@"@@@@@"@@"@@@""3!
5abla !#"
utili0adas en el medio A +AL5*G8," 4e'undo ensayo@@@@""@@@@@"@@@@@""3!
5abla 27"
utili0adas en el medio A +AL5* H8," 5ercer ensayo@@@@@@@@@@@"@""@@@""3!
5abla 2!"
utili0adas en el medio A +AL5*G8," (uarto ensayo@@@@@"@@@@@@"@""@@@""32
5abla 22"
utili0adas en el medio A +AL5*G8," Cuinto ensayo@@@""@@@@@@@"""""""""""""@@""32
INDICE DE FIGURAS PAG
Ei'ura o" !
Utili0acin de la sucrosa por S. mutans y
pato'6nesis de la caries dental@@@@@@@@@@"@@@@@@@@@@"@@@@@#
Ei'ura o" 2
(omparacin del crecimiento de las cepas utili0adas
en el medio 4UL8A( ! con concentracin baja@@@"""@@@@@@@"@@@@@@@2<
Ei'ura o" 3
en el medio 4UL8A( 2 con concentracin normal@@@""@@@@@"@@@@@@@@2D
Ei'ura o" A
en el medio 4UL8A( 3 con concentracin AL5* H A@@@"@@@@"@@@@@@@@37
Ei'ura o" <
en el medio 4UL8A( A con concentracin AL5* H 8@@@@@@@"@@@@@@@@"32

!. INTRODUCCI"N
La caries dental es desde /ace muc/os a1os, la enfermedad bucal de ori'en
infeccioso &ue se observa con mayor frecuencia en nuestro pa2s" 4e caracteri0a
por la destruccin locali0ada de los tejidos duros del diente" Los factores
principales &ue influyen en la prevalencia de caries dental son: presencia de
microor'anismos cario'6nicos en saliva y placa dental, dientes susceptibles y
sustrato adecuado"
La etiopato'enia se asocia con la presencia de ciertos microor'anismosI los &ue
con mayor frecuencia se relacionan con el inicio y desarrollo de la caries son:
estreptococos del 'rupo mutans, Lactobacillus sp y Actinomyces sp, estos pueden
ser aislados a partir de placa dental supra, sub'in'ival y saliva"
La confirmacin de crecimiento de estas especies bacterianas se reali0a a trav6s
de pruebas bio&u2micas &ue incluyen fermentacin de carbo/idratos y al'unas
pruebas serol'icas de confirmacin"
Para el aislamiento de S. mutans, la dificultad se presenta debido a la baja
selectividad de los medios de cultivo y por la 'ran cantidad de microbiota
acompa1ante &ue es in/ibida en muy poca proporcin" En cuanto a la
identificacin por perfil bio&u2mico, la similitud entre especies bacterianas de la
cavidad oral incrementa el porcentaje de error en la identificacin apropiada de S.
mutans
En este trabajo, con el fin de disminuir el mar'en de error, se dise1o un nuevo
medio de cultivo selectivo para S. mutans. La selectividad se lo'ra adicion3ndole a
los medios sustancias antibiticas como el 4ulfiso-a0ole y la 8acitracina" Adem3s,
el uso de compuestos &u2micos como el cloruro f6rrico y el citrato de sodio
incrementan las probabilidades de crecimiento selectivo"
Partiendo de los /alla0'os encontrados se abre la posibilidad de contar con una
/erramienta se'ura para la identificacin apropiada de S. mutans e in/ibir
microbiota acompa1ante, problem3tica presentada actualmente en los laboratorios
de microbiolo'2a dia'nostica"
2. OBJETIVOS
2"! *8JE5)B* %EEFAL
.odificar el A'ar Mitis Salivarius +A.4, para aumentar la selectividad en el
aislamiento de estreptococos orales, espec2ficamente Streptococcus
mutans.
2"2 *8JE5)B*4 E4PE()E)(*4
Aislar e identificar estreptococos orales de muestras de saliva"
Feali0ar la modificacin del Agar Mitis Salivarius (AMS), con cuatro
concentraciones diferentes del antibitico 4ulfiso-a0ole manteniendo
concentraciones constantes de 8acitracina, (itrato de sodio y (loruro
f6rrico"
Balorar el crecimiento de Streptococcus mutans y otros estreptococos
orales en el medio de cultivo 4UL8A( reali0ando recuentos manuales en
cada una de las cajas sembradas"
Evaluar la capacidad de in/ibicin de otros estreptococos orales en el
medio de cultivo 4UL8A( utili0ando el modelo estad2stico A*BA
empleado por 5a?ada H >irasa=a en el 277<"
#. ANTECEDENTES BIBLIOGRAFICOS
3"! %eneralidades del %enero Estreptococo
En el 3mbito biol'ico, el 'enero Streptococcus se caracteri0a por ser
microor'anismos %ram positivos, catalasa ne'ativa y tienden a a'ruparse en
pares o en cadenas" 4on anaerobios facultativosI de /ec/o, al'unas cepas
podr2an crecer mejor en condiciones anaerobias y otras solamente incrementando
las concentraciones de (*2" +Joneman" 277!,"
Presentan un metabolismo fermentativo y producen especialmente 3cido l3ctico
+/omo fermentativo," 4u temperatura optima de crecimiento es de 3$K( y en
relacin con las condiciones de cultivo son muy variables, desde los mas
e-i'entes /asta las &ue incluso se desarrollan en condiciones /ostiles" +Li6bana J"
2772,
(on respecto a su clasificacin, se /an propuesto mLltiples criterios, de los cuales
se mencionar3n al'unos:
>emlisis: 4e debe a la destruccin de la /emo'lobina en medios &ue
contienen &ue contienen san're y permite distin'uir los estreptococos alfa,
beta y 'amma /emol2ticos" La actividad /emol2tica puede verse influida por
la atmsfera y el tiempo de incubacin"
Estructura anti'6nica: E-isten unos ant2'enos del 'rupo &ue permiten
clasificarlos en los &ue siempre los poseen +sero'rupables, y los &ue
/abitualmente carecen de ellos +no sero'rupables," Este car3cter permite
obtener los llamados sero'rupos de Lancefield, denominados con letras
mayLsculas: A a M, e-cepto L, J, LL y NI van li'ados a un polisac3rido
parietal denominado (, o a los 3cidos teicicos +'rupos D, > y ," Los
sero'rupos a su ve0 se dividen en sero'rupos en funcin de polisac3ridos
parietales +diferentes del (,, ant2'enos capsulares o prote2nas de la pared"
Por otra parte, los no sero'rupables por los 'rupos de Lancefield, pueden
diferenciarse directamente en serotipos en funcin de elementos
estructurales capsulares, prote2nas y polisac3ridos de la pared celular"
(aracter2sticas Eisiol'icas: .ediante al'unas pruebas bio&u2micas
convencionales es posible la identificacin de sero'rupos" As2, los
estreptococos del 'rupo A son sensibles a un disco de bacitracina con 7"7A
unidadesI los del 'rupo 8 /idroli0an el /ipurato o produce (A.P +una
prote2na &ue interactLa con la beta /emolisina de 4taphylococcus aureus
incrementando la /emlisis de esta Lltima bacteria,I los del 'rupo D son
capaces de desarrollarse en un medio con bilis" Aun&ue e-isten
e-cepciones de al'unas cepas las citadas pruebas permiten correlacionar
la mayor2a de ellas con los sero'rupos" 4in embar'o, para diferenciar los no
sero'rupables /ay &ue recurrir a otras no convencionales y al'o complejas"
+Li6bana, 2772," Pruebas bio&u2micas y de 'en6tica molecular son
utili0adas para estudiar la interrelacin de las especies estreptoccicas
entre s2" La combinacin de estos m6todos permiti una clasificacin de los
estreptococos con el fin de emplearla en cl2nica y epidemiolo'2a, pero
conforme la clasificacin evolucion se desarrollaron nuevos m6todos, y
como resultado se describieron varias clasificaciones" En al'unos casos se
emplean nombres diferentes para especies &ue describen los mismos
or'anismosI y otras veces, al'unos miembros de la misma especie se
incluyen en otras especies o se clasifican por separado" Por ejemplo, el
'enero Enterococcus incluye a/ora al'unas especies previamente
clasificadas como estreptococos del 'rupo D" +Adelber', 277<,"
3"2 E45FEP5*(*(*4 B)F)DA4
Estas bacterias tienen su /3bitat principal en la cavidad oralI coloni0an tanto
superficies duras como blandas y son los microor'anismos m3s abundantes en
todos los ecosistemas primarios" 4u si'nificado pat'eno m3s importante va
li'ado a la formacin de placas y a la produccin de cariesI sin embar'o, tambi6n
se relacionan con otros muc/os cuadros patol'icos como 'in'ivitis, abscesos
peri apicales, pulpitis, celulitis, etc" Euera del 3mbito oral, aun&ue cada ve0 con
mas frecuencia se relacionan con procesos infecciososI su papel como pat'enos
no parece tan claro si se e-ceptLa su importante si'nificacin en las endocarditis
suba'udasI &ui03s por ello y por &ue no es OrentableP la completa identificacin de
todas las especies, muc/os laboratorios si'uen emitiendo informes bajo la
denominacin 'lobal de estreptococos viridans o estreptococos del 'rupo viridans"
+Li6bana, 2772,"
%eneralmente no son sero'rupables ni beta /emol2ticos +suelen ser alfa
/emol2ticos, con un /alo verdoso alrededor de las colonias y de /ay su nombre, y
dif2cilmente diferenciables por pruebas fisiol'icas convencionales"
Ecol'icamente y desde el punto de vista de su pato'enicidad, los estreptococos
viridans son las bacterias m3s importantes en la cavidad oral" +Adelber', 277<,"
3"3" %rupo Streptococcus mutans
Streptococcus mutans fue descrito por (lar?e +!#2A,, pero no fue mencionado
como una especie independiente si no /asta la DK edicin del manual de Bergey"
Los estudios serol'icos mostraron &ue las cepas de S. mutans fueron
/etero'6neas y pudieron ser subdivididas dentro de siete sero'rupos distintos" La
clasificacin de las cepas de S. mutans se reali0 con base en tests bio&u2micos y
fisiol'icos propuestos por Eac?lam en !#;A" +4c/leifer, J">" !##D,"
Este 'rupo incluye las especies S. mutans, S. sobrinus y S. cricetus, S. rattus, S.
macacae, S. done!, S. "erus. (4c/leifer, J">" !##D,"
La diferenciacin de los estreptococos del 'rupo mutans se reali0a por
identificacin en la fermentacin de carbo/idratos, ya &ue las
caracter2sticas macroscpicas en cultivo no permite /acer diferenciacin de
las especies presentes"
CEPA E$%&'()* I)&'()* M*)(+,' R*-(),$* S,./(+,'
S. sanguis
Biotipo #
G Q G G G
S. mutans Q Q Q Q Q
S. sobrinus G Q Q G G
T*/'* N, !" )dentificacin bio&u2mica de Estreptococos orales" +Joneman, 277<,
3"3"! (oloni0acin por .icroor'anismos del %rupo Mutans y (ario'6nesis
La coloni0acin de la cavidad oral por microor'anismos del 'rupo mutans tiene
'ran importancia dentro de la ecolo'2a oral, debido a &ue ellos /acen parte de la
flora normal, esto si'nifica &ue el /ec/o de estar coloni0ado no implica
necesariamente el desarrollo de caries dental, ya &ue su presencia debe estar
acompa1ada por los dem3s factores descritos ori'inalmente por Jeyes +dieta
cario'6nica, /u6sped susceptible y tiempo," 4in embar'o, /ay &ue considerar las
diferentes caracter2sticas &ue pueden presentar estos microor'anismos y &ue
pueden /acerlos mas pat'enos" Por ejemplo, e-isten diferencias interG especie
como las &ue presentan S. mutans y S. sobrinus, estas dos especies bacterianas
son muy similares en su comportamiento bio&u2mico y esto /ace &ue su
diferenciacin no sea f3cilI pero en cuanto a su capacidad pat'ena, se /a
su'erido &ue S. sobrinus puede lle'ar a ser mas a'resivo, debido a &ue es mas
acido'6nico" Por otro lado, al'unos estudios /an mostrado &ue la variabilidad
'en6tica de S. mutans se asocia directamente a la aciduridad, acido'enicidad y
s2ntesis de 'lucanos, caracter2sticas &ue est3n sujetas al biotipo de la cepa &ue
los ni1os coloni0ados por ambas especies tienen si'nificativamente mas caries
&ue a&uellos en los &ue solo es detectada una de las dos, lo cual puede indicar
&ue la interaccin de estas dos especies afecta su capacidad cario'6nica" +J/oo,
!##D,"
El momento en el &ue se produce la coloni0acin tambi6n es relevante en el
posterior desarrollo de la enfermedad" Entre mas temprano ocurre la coloni0acin
por S. mutans y S. sobrinus mas alta es la actividad de caries durante la ni1e0 y
precisamente esta es una de las ra0ones por las &ue es importante evidenciar la
edad, la fuente del conta'io y los factores asociados, con el fin de prevenir o
disminuir la enfermedad"
En el proceso cario'6nico el Streptococcus mutans posee caracter2sticas
especiales de ad/erenciaI este proceso se lleva a cabo por la unin a la superficie
dental y la formacin de 3cidos, dos caracter2sticas asociadas con la
cario'enicidad de este microor'anismo" La s2ntesis de novo de un 'lucano
insoluble por parte de la 'lucosiltransferasa de la sucrosa es esencial en el
proceso de ad/erencia" 4in embar'o, a'entes &ue interfieren con la /abilidad de
ad/erencia de Streptococcus mutans podr2an ser utili0ados para controlar la
caries dental"
3"3"2" .ecanismos de Ad/erencia
La ad/erencia de Streptococcus mutans a la superficie dental involucra dos fases:
Una interaccin inicial reversible entre el or'anismo y las superficies dentales
cubiertas en saliva y una fase irreversible &ue es principalmente mediada por un
'lucano insoluble, sinteti0ado a partir de la sucrosa por la accin en0im3tica de la
'lucosiltransferasa" El mecanismo de fijacin inicial de la bacteria a la pel2cula
ad&uirida sobre la superficie dental /a sido revisado profundamente por $ibbons y
%an &oute" En la fi'ura ! se puede observar con precisin como se lleva a cabo
este mecanismo" En presencia de sucrosa, Streptococcus mutans sinteti0a el
'lucano insoluble, el cual es un ad/erente a la superficie slida, incluyendo la
superficie dental" De esta manera, un mecanismo de prevencin de la caries
dental podr2a ser la interrupcin del proceso ad/erente de Streptococcus mutans a
la superficie dental" +>amada, 4" !#DA,"
F(0. ! H Utili0acin de la sucrosa por S. mutans y pato'6nesis de la caries dental"
3"A Streptococcus mutans
Es la especie mas frecuente del 'rupo" 4e a2sla en el ;7 H #79 de la poblacin no
desdentada y resistente a la caries +portadores," En individuos con caries activa o
especialmente predispuestos, su cantidad aumenta si'nificativamente" 4e
considera el microor'anismo cari'eno por e-celencia" Por su especial capacidad
de coloni0ar superficies duras, se a2sla en la cavidad oral, sobretodo a partir de
placas supra'in'ivales, radiculares y saliva, en cuyo caso su ori'en es secundario
a la coloni0acin en las placas" )'ualmente, su papel es importante en las
endocarditis suba'udas, representando entre el ;G!A9 de todas las ori'inadas por
los estreptococos"
4us colonias en a'ar san're son alfa y 'amma /emol2ticas y e-cepcionalmente
beta /emol2ticas" En su estructura anti'6nica /ay &ue destacar &ue posee los
polisac3ridos parietales c, e, f, y prote2nas asociadas a la mure2na conocidas como
ant2'enos )R)) +o tambi6n como 8, P! o Pac," Estas prote2nas u otras similares
participan en procesos ad/esivos: a, como ad/esinas interactuando con
receptores de la pel2cula ad&uirida, tales como prote2nas ricas en prolina y b,
como 'lucosiltransferasas y receptoras de 'lucanos en fenmenos a're'ativos y
coa're'ativos entre bacterias &ue coloni0an los dientes" Estos ant2'enos
+polisac3ridos, prote2nas y 'lucosiltransferasas, se /an usado con desi'uales
resultados para preparar vacunas anticaries"
La relacin S. mutansG(aries se fundamenta en las si'uientes caracter2sticas:
)ncremento cuantitativo en sujetos predispuestos o con caries activasI capacidad
de induccin de la enfermedad en animales de e-perimentacin y proteccin de
los mismos cuando est6n inmuni0ados frente a ant2'enos del microor'anismo y
factores de virulencia relacionados con dic/os procesos" Entre estos Lltimos se
destacan los factores de cario'enicidad: a, s2ntesis de polisac3ridos intracelularesI
b, s2ntesis de polisac3ridos e-tracelulares de tipo 'lucanos insolubles y solubles
por de-tranasas y fructanos +posee %5EG), %5EG4 y E5E,I c, el movimiento de
polisac3ridos intracelulares por 'lic'eno fosforilasa y e-tracelulares solubles por
de-tranasas y fructanasasI d, poder acid'eno, acidfilo y acidLrico, inicio de
crecimiento a p> <"7 y corto efecto postGp>I e, importante capacidad ad/esiva por
las prote2nas parietales &ue posibilitan su ad/esin a superficies duras en
ausencia de 'lucanos, y a're'ativa y coa're'ativa a trav6s de mutanos,
'lucosiltransferasas y prote2nas receptoras de 'lucanos +el papel de los 3cidos
lipoteicicos y fimbrias en estos procesos parece ser poco importante, y f,
produccin de bacteriocinas con actividad sobre estas bacterias 'ram positivas
&ue podr2a tener una si'nificacin ecol'ica, aun&ue no esta demostrada in vivos
su importancia como factor selectivo de la microbiota" +Li6bana" 2772,
(aracter2sticas 8io&u2micas
La catalasa es una en0ima &ue prote'e a las c6lulas frente al per-ido de
/idr'eno producido en el metabolismo del o-2'eno" (atali0a la formacin de a'ua
y o-2'eno a partir del per-ido de /idr'eno"
Es Ltil para distin'uir Streptococcus +ne'ativa, de Staphylococcus +positiva, y
'lostridium +ne'ativa, de Bacillus +positiva,"
La actividad catalasa se detecta a1adiendo unas 'otas de per-ido de /idr'eno
+39, sobre las colonias +en medio &ue no sea a'ar san're ya &ue dar2a lu'ar a
falsos positivos,I la produccin de burbujas indica la presencia de la en0ima"
Las bacterias anaerobias o anaerbicas facultativas a menudo fermentan
carbo/idratos a 3cidos or'3nicos y 'as +>
2
o (*
2
,"
Estos pueden detectarse incluyendo en el medio un indicador de p> y una
campana Dur/am" 4e pueden ensayar diferentes a0Lcares como sustrato para
diferenciar especies, sobre todo de bacterias ent6ricas"
4e inocula la bacteria en un medio conteniendo una pe&ue1a cantidad de peptona,
un indicador de p> y una fuente de carbono fermentable al !G2 9 y se coloca
dentro de los tubos una campana Dur/am"
Para efectos de identificacin de S. mutans, es comLn utili0ar la fermentacin de
a0ucares caracter2sticos para dic/a especie como lo es rafinosa, inulina, sorbitol,
manitol para los cuales S. mutans es positivo, es decir, los utili0a como fuente
ener'6tica, evidenciando esta actividad por la acide0 presente en el medio" La
esculina contiene un carbo/idrato unido a un compuesto arom3tico" Este test se
usa a menudo para distin'uir especies de Streptococcus" >ay microor'anismos
&ue /idroli0an la esculina en esculetina y 'lucosa, la primera reacciona con sales
de /ierro ori'inando un compuesto de color ne'ro" 4e reali0a en tubos inclinados
incubados durante AD/" 4e crecen las bacterias en un medio complejo &ue
contiene 7,7! 9 de esculina y un 7,7< de citrato f6rrico" S. mutans
caracter2sticamente es positivo para esta prueba" +Adelber', 277<,"
A" .edios de (ultivo
Los medios de cultivo son preparados &ue intentan reproducir artificialmente las
condiciones del /3bitat natural de los a'entes bacterianos" 4us componentes
deben cubrir todas las necesidades nutricionales de las bacterias &ue se van a
estudiar y deben incorporarse en una me0cla justa y e&uilibrada esto permitir3 su
crecimiento y multiplicacin obteni6ndose lo &ue se denomina un cultivo
microbiano" La inoculacin del microor'anismo en un medio de cultivo se
denomina siembra" o todas las bacterias tienen las mismas caracter2sticas
nutricionalesI /ay al'unas poco e-i'entes &ue crecen en la mayor2a de los
medios, otras &ue necesitan al'unas sustancias en particular, otras &ue son mas
dif2ciles de cultivar e incluso las /ay &ue no crecen en nin'Ln medio conocido
/asta la fec/a" +Li6bana, 2772,"
A"! .edios de cultivo selectivos
Estos medios permiten el crecimiento de al'unas bacterias e in/iben el de otras"
4e utili0an en casos &ue interese recuperar ciertos tipos de microor'anismos y se
desee impedir el crecimiento de otros" La seleccin se puede conse'uir a, por
in/ibicin, ya sea a1adiendo in/ibidores +colorantes, antibiticos o sales biliares,,
modificando al'unas propiedades f2sicas +concentracin de a(l o p>, o alterando
al'unas condiciones de cultivo como la temperatura y la atmsfera de incubacin
+las bacterias anaerobias no crecen en presencia de *2,, b, por enri&uecimiento,
para lo cual se suelen usar 'eneralmente medios l2&uidos &ue, adem3s de impedir
total o parcialmente el desarrollo de al'unos microor'anismos, estimulan el de
otros +para enri&uecimiento de lactobacilos se usa el caldo Fo'osaG.itc/ellG
Miseman, &ue contiene nutrientes esenciales para ellos y un p> de <"AQRG 7"2 &ue
impide el crecimiento de muc/as especies,I un efecto similar se puede conse'uir
a're'ando solo a&uellos componentes &ue necesite la bacteria &ue se intenta
seleccionar" +Li6bana, 2772,"
A"2 Preparacin
A"2"! Disolucin del medio de cultivo des/idratado
Para la preparacin de medios de cultivo se utili0a a'ua limpia, reci6n destilada o
reci6n desminerali0ada y cuya reaccin sea lo mas cercana posible al p> neutro"
Los recipientes destinados a la preparacin +por lo 'eneral matraces Erlenmeyer,
se limpiaran escrupulosamente con el a'ua &ue se /a descrito anteriormente, con
el fin de eliminar totalmente eventuales residuos de otras sustancias" Los
recipientes destinados a la preparacin de medios de cultivo deben ser lo
suficientemente 'randes para &ue el medio de cultivo &ue se prepara pueda ser
a'itado con facilidad y concien0udamente" A ser posible, no se prepararan m3s de
! H 2 litros por recipiente" Apro-imadamente a la mitad de la cantidad necesaria
de a'ua se a1ade el medio de cultivo des/idratado y pesado y se a'ita
suficientemente para conse'uir una suspensin /omo'6nea" Despu6s se
incorpora la cantidad de a'ua restante, aprovec/ando esta adicin para
desprender e incorporar al conjunto las part2culas de medio de cultivo &ue
/ubieran &uedado ad/eridas a la pared interna del recipiente"
5odo tipo de medio de cultivo es sensible al calentamiento" Por este motivo, no
debe calentarse m3s de lo estrictamente necesario" +.erc?, 277<,"
A"2"2 Esterili0acin
Antes de su esterili0acin, y dentro de lo posible, es conveniente repartir el medio
de cultivo en porciones m3s pe&ue1as, por ejemplo, en los recipientes definitivos o
en los &ue ulteriormente se lleve a cabo el trabajo de investi'acin de &ue se trate
+e-cepto cajas de Petri,
4i las normas de preparacin no indican otra cosa la esterili0acin se lleva a cabo
en autoclave, a !2!K(, durante !< minutos" La esterilidad se consi'ue con
se'uridad cuando se /a desalojado correctamente el aire de la c3mara de
vapori0acin de la autoclave y de los recipientes en ella contenidos" (on este fin,
se deja fluir ampliamente la corriente de vapor manteniendo abierta la v3lvula de
pur'a durante el comien0o de la fase de calentamiento de la autoclave"
5emperaturas m3s altas y calentamientos mas prolon'ados de lo previsto,
perjudican la calidad del medio de cultivo"
A"2"3 Bertido en placas
Para evitar, considerablemente, la formacin de 'otitas de condensacin de a'ua
en la tapa de las placas de Petri, debe verterse en ellas el medio de cultivo a una
temperatura de A< H << K(" Previamente /ay &ue remover bien el medio de cultivo
/aciendo oscilar en sentido circular su recipiente, para 'aranti0ar el
entreme0clamiento uniforme de dic/o medio de cultivo" Las burbujas de aire en la
superficie de la placa se eliminan OabanicandoP brevemente la superficie con la no
luminosa de un mec/ero 8unsen" Antes de sembrar las placas puede secarse la
superficie /Lmeda del A'ar +&ue podr2a favorecer el despla0amiento de
microor'anismos o el desmembramiento de colonias, en estufa a 37 H A7 K(" Para
ello se coloca la parte inferior de la placa de Petri, con su cara interna /acia abajo,
al'o despla0ada sobre la tapa &ue a/ora le sirve de apoyo" Este tiempo de secado
alcan0a 27 H 37 minutos, como m2nimo" En estufas con circulacin de aire se
precisa menos tiempo" +.erc?, 277<,"
<" A'entes in/ibidores del crecimiento bacteriano en medio de cultivo
<"!" Antibiticos
La accin del a'ente antibacteriano es lo'rada mediante los si'uientes
mecanismos de accin:
)n/ibicin de la s2ntesis de la pared celular
)n/ibicin de la s2ntesis de prote2nas
)n/ibicin del metabolismo bacteriano
)n/ibicin de la actividad o s2ntesis del 3cido nucleico
Alteraciones en la permeabilidad de la membrana celular
(on cual&uiera de estas acciones o con una combinacin de ellas, el
microor'anismo es incapa0 de sobrevivir"
<"!"!" 4ulfonamidas
Las sulfonamidas fueron los primeros &uimoter3picos eficaces &ue se utili0aron
por v2a sist6mica para evitar y curar infecciones bacterianas en seres /umanos" La
importancia enorme &ue tuvo su descubrimiento en la medicina y la salud pLblica y
su empleo ampl2simo se reflejaron r3pidamente en la disminucin neta de las
cifras de morbilidad y mortalidad de enfermedades infecciosas tratables" El
advenimiento de la penicilina y de los antibiticos disminuyo la utili0acin de las
sulfonamidas y, en la actualidad, su importancia es relativamente pe&ue1a en el
armamentario terap6utico del m6dico" 4in embar'o, la introduccin de la
combinacin de trimetoprin y de sulfameto-a0ole a mediados del decenio de !#;7
/i0o &ue se utili0aran m3s las sulfonamidas en el tratamiento de infecciones
microbianas espec2ficas" Para este estudio, se utili0o una sulfonamida, como es
el sulfiso-a0ole, antibitico utili0ado ampliamente para proporcionar selectividad a
los medios de cultivo, especialmente para microor'anismos de la cavidad oral"
<"!"!"! Propiedades Cu2micas
El termino sul"onamida se utili0a como nombre 'en6rico para derivados de la paraG
aminoben0enosulfonamida +sulfanilamida,I muc/os de estos miembros son
relativamente insolubles en a'ua, pero sus sales sdicas son bastante solubles" El
'rupo H4*
2
>
2
no es esencial en si, pero la caracter2stica importante es &ue el
a0ufre esta li'ado directamente al anillo benceno" El 'rupo para >
2
+cuyo
nitr'eno /a sido /oy denominado
A
, es esencial y puede sustituirse solamente
por radicales &ue se transformen in vivo en 'rupo amino libre" Las sustituciones
del 'rupo amida >
2
+cuyo se /a desi'nado como
!
, ori'inan efectos variables
en la actividad antibacteriana de la mol6cula" o obstante, la sustitucin del nLcleo
arom3tico /eteroc2clico en
!
'enera compuestos e-traordinariamente potentes"
+%oodman, 277$,"
<"!"!"2" Efectos en microor'anismos
Las sulfonamidas poseen muy diversas actividades antimicrobianas contra
bacterias 'rampositivas y 'ramne'ativas" 4in embar'o, en a1os recientes, /an
sur'ido cada ve0 m3s cepas resistentes y, por consecuencia, /a disminuido su
utilidad" En t6rminos 'enerales, estas ejercen solo un efecto bacteriost3tico, y los
mecanismos de defensa celular y /umoral del /u6sped son esenciales para
erradicar finalmente la infeccin"
Espectro antibacteriano: Entre los microor'anismos &ue suelen ser sensibles
in %itro a las sulfonamidas est3n Streptococcus pyogenes, Streptococcus
pneumoniae, &aemophilus in"luen(ae, &. ducreyi, )ocardia, Actinomices,
'alymmatobacterium granulomatis y 'hlamydia trachomatis. Las
concentraciones in/ibidoras m2nimas +.)(, var2an de 7"!u'RmL, en el caso de
(. trachomatis, a A a 2A $A u'RmL para Escherichia coli" Las cifras plasm3ticas
m3-imas del f3rmaco alcan0ables in vivo son de !77 a 277 u'RmL"
.ecanismo de accin: Las sulfonamidas son an3lo'os estructurales y
anta'onistas competitivos del 3cidoGparaGaminobe0oico +PA8A, y, por tal ra0n,
impiden &ue la bacteria utilice de manera normal el PA8A en la s2ntesis de
3cido flico +3cido pteroil'lut3mico," De modo mas especifico, las sulfonamidas
son in/ibidores competitivos de la di/idropteroato sintetasa, la en0ima
bacteriana &ue incorpora PA8A en el 3cido di/idropteroico, precursor inmediato
del 3cido flico" Los microor'anismos sensibles sinteti0an su propio 3cido
flicoI no son afectadas las bacterias &ue usan al 3cido flico preformado" La
bacteriostasis inducida por las sulfonamidas es anta'oni0ada en forma
competitiva por PA8A" Ellas no afectan las c6lulas de mam2fero por este
mecanismo por&ue necesitan 3cido flico preformado y no lo sinteti0anI por tal
ra0n son similares a las bacterias no sensibles a sulfonamidas &ue utili0an
3cido flico preformado" +%oodman" 277$,"
<"!"2 8acitracina
La bacitracina es un antibitico producido por la cepa 5raciG! de Bacillus subtilis,
aislada en !#A3 del tejido da1ado y polvo callejero desbridado de una fractura
compuesta en una ni1a llamada 5racy, de la cual deriv el nombre de bacitracina"
Meleney y *onson +!#A#, /an revisado la /istoria, las propiedades y el uso de este
antibitico"
Propiedades &u2micas
Las bacitracinas son un 'rupo de antibiticos polip6ptidos y se /an /allado
componentes mLltiples en m3s productos comerciales" El componente principal es
la bacitracina A y su probable frmula estructural es la si'uiente:
BACITRACINA
Una unidad del antibitico e&uivale a 2$u' del est3ndar U4P"
Actividad antibacteriana
Diversos cocos y bacilos 'rampositivos, )eisseria, &. in"luen(ae y +reponema
pallidum son sensibles a 7"!URml o menos de bacitracina" Actinomyces y
,usobacterium son in/ibidas por cifras de 7"< a < URml" 4on resistentes a la
bacitracina Enterobacteriaceae, -seudomonas, especies de '.ndida y )ocardia"
La bacitracina in/ibe la s2ntesis de la pared bacteriana" +%oodman" 277$,"
<"2 A'entes Cu2micos actuando como 8actericidas o 8acteriost3ticos
<"2"! (loruro E6rrico
El cloruro f6rrico en solucin se obtiene mediante la reaccin de mineral
de /ierro con 3cido clor/2drico y cloro"
El cloruro f6rrico /e-a/idrato es un producto elaborado a partir de
la c/atarra de /ierro y utili0ando tambi6n el 3cido clor/2drico y el cloro" La solucin
presenta una 'ravedad espec2fica de !"A3 'Rml, en tanto &ue la del slido es !"$#
'Rml" El cloruro f6rrico es soluble en etanol, acetona, 'licerina y benceno, as2 como
en a'ua en todas las proporciones"
El producto es altamente o-idante, ataca a los metales incluyendo al cobre"
+(/an', 2772,"
<"2"2 (itrato de 4odio
El citrato de sodio como una fuente de carbono, esto es, se desarrollar3 en un
medio de cultivo &u2micamente definido en el cual el citrato de sodio es el Lnico
compuesto de carbono" +(/an', 2772,"
S. mutans tiene re&uerimientos nutricionales con ciertos metales incluyendo
.a'nesio, .an'aneso y tambi6n >ierro 3Q" El S. mutans re&uiere /ierro a una
concentracin de 3"$umol para un crecimiento ptimo" Esta concentracin es la
m3s cercana a la concentracin en saliva /umana" Un transportador en S. mutans
A8( &ue codifica para un opern sloA8(F, a sido previamente identificado como
un transportador de /iero" Al'unos ensayos /an mostrado &ue el /ierro incrementa
el p> en la placa dental !n vivo, sin embar'o el mecanismo aun no es conocido"
6. MATERIALES Y METODOS
$"! Poblacin y .uestra
4e incluyeron !A cepas de Streptococcus mutans previamente aisladas e
identificadas en el ()* +(entro de )nvesti'aciones *dontol'icas,, de pacientes
con dia'nostico de caries dental" Adicionalmente se utili0aron !< muestras de
saliva provenientes de pacientes con caries previo consentimiento informado
+Ane-o !," (omo cepa control se utili0o la cepa A5(( 3!#D# de S. mutans.
$"2 Procesamiento de las .uestras
Las !A muestras de saliva y la cepa control se sembraron en el A'ar .itis
4alivarius cl3sico +Difco" Lote 2232A23, en condiciones de anaerobiosis +8ec?ton
dic?inson Anaerobic system 88L Lot A3;!7A7, a 3;K( durante AD /oras" Al'unas
de las colonias obtenidas en este medio se identificaron por medio de: (oloracin
de %ram", obteniendo cocos %ram positivos en cadenaI prueba de catalasa,
dando como resultado catalasa ne'ativa" A al'unas de las colonias se procedi a
/acer identificacin por medio de panel de bater2as bio&u2micas +)nulina, .anitol,
4orbitol, Fafinosa y Esculina,, y como resultado se obtienen otras especies del
'enero estreptococo de la cavidad oral como lo son S. sanguis, S. sobrinus y S.
rattus, los cuales se sembraron en medio de mantenimiento, el A'ar 5ripticasa
soya +Difco, Lote 23A77!, bajo una atmsfera de (*2 al <9 durante AD /oras"
Las !< cepas de S. mutans con'eladas se recuperaron en caldo 5odd H >e=itt
+Difco, Lote A<;D##, incub3ndolas bajo condiciones de anaerobiosis durante AD
/oras" 5ras esta recuperacin, se /i0o un pase de colonias al A'ar 5ripticasa 4oya
y se incub a 3;K( con una concentracin de (*2 al <9 durante AD /oras" Una
ve0 recuperadas en este medio slido de enri&uecimiento y mantenimiento, se
reali0 un pase bacteriano al A'ar .itis 4alivarius cl3sico, se incubo bajo
condiciones de anaerobiosis durante AD /oras , se procedi a la identificacin
bio&u2mica de las colonias obtenidas cuyas caracter2sticas macroscpicas fueran
compatibles con Streptococcus mutans/ conve-as, de borde ondulado, opacas, de
color a0ul oscuroI las 0< cepas presentaron un crecimiento t2pico y de estas
colonias se procedi a la identificacin con la fermentacin de a0ucares +)nulina,
Fafinosa, .anitol, 4orbitol, y Esculina" El !779 de las cepas se identificaron
como Streptococcus mutans.
Preparacin del medio de cultivo 4UL8A(
El A'ar .itis 4alivarius se preparo de acuerdo a las instrucciones del fabricante"
Una ve0 esterili0ado este medio, se preparo a cuatro concentraciones diferentes
con el antibitico sulfiso-a0ole +.P8 (ode !72##3,, manteniendo las
concentraciones constantes de bacitracina +.erc?" (ode ;D<A#,, citrato de sodio
+Analitical (arlo Erba Lote 3EA!27#3, y cloruro f6rrico +Analitical (arlo Erba
Lote A<;D#;DA,, las cuales se muestran a continuacin"
C,12,)3)+3
M34(, !
(B*5,)
M34(, 2
(N,.1*')
M34(, #
(A'+, 6 A)
M34(, 7
(A'+, 6 B)
B*%(+.*%()* 377 U)RL 377 U)RL 377 U)RL 377 U)RL
S&'-($,8*9,'3 7"! 'RL 7"2 'RL 7"A 'RL 7"D 'RL
C',.&.,
F:..(%,
!"2 mLRL !"2 mLRL !"2 mLRL !"2 mLRL
C(+.*+, 43
S,4(,
2 'RL 2'RL 2'RL 2'RL
T*/'* 2. (omponentes y concentraciones del medio 4UL8A("
$"3 4iembra de Estreptococos orales
4e sembraron las diferentes cepas de estreptococos obtenidos, identificadas y
mantenidas en A'ar 5ripticasa 4oya" Este procedimiento se reali0, preparando
una suspensin de bacterias similar al tubo o < del Patrn de .c Earland,
sembrando !77 SL de cada cepa en cinco 'rupos de medios +un 'rupo de medios
consta deI un medio de concentracin bajo, normal, alto HA, alto H8,, se incubaron
bajo una atmsfera de anaerobiosis durante AD /oras a 3;K(" Posterior a este
crecimiento, se procedi a /acer identificacin bio&u2mica de los medios en los
cuales se obtuvo al'Ln tipo de crecimiento, confirmando &ue el microor'anismo
sembrado inicialmente era el mismo &ue creci en el medio 4UL8A("
Este procedimiento se reali0 en < oportunidades, confirmando inmediatamente
los datos del proceso anterior"
;. RESULTADOS
4UL8A( G! .edio con concentracin 8aja
CEPA UFC<1L =
S. sobrinus ;"D T !7
;
#3"#9
S. sanguis $"$ - !7
;
;#"<9
S. rattus A"! - !7
$
A"#9
S. mutans D"3 - !7
;
!77
T*/'* #. (omparacin de crecimiento de las diferentes cepas utili0adas en el
medio ! +8ajo, Primer ensayo"
CEPA UFC<1L =
;
#3"#9
S. sanguis $"$ - !7
;
;#"<9
S. rattus D"3 - !7
$
!79
S. mutans D"3 - !7
;
!77
T*/'* 7" (omparacin de crecimiento de las diferentes cepas utili0adas en el
medio ! +8ajo, 4e'undo ensayo"
CEPA UFC<1L =
S. sobrinus ;"A - !7
;
D#"!9
S. sanguis ;"7 - !7
;
DA"39
S. rattus A"! - !7
$
A"#9
S. mutans D"3 - !7
;
!779
T*/'* >. (omparacin de crecimiento de las diferentes cepas utili0adas en el
medio ! +8ajo," 5ercer Ensayo"
CEPA UFC<1L =
S. sobrinus ;"D - !7
;
#3"#9
S. sanguis ;"A - !7
;
D#"!9
S. rattus A"! - !7
$
A"#9
S. mutans ;"D - !7
;
#3"#9
medio ! +8ajo," (uarto Ensayo"
CEPA UFC<1L =
;
#3"#9
S. sanguis $"$ - !7
;
;#"<9
S. rattus D"3 - !7
$
!79
S. mutans D"3 - !7
;
!77
T*/'* ;" (omparacin de crecimiento de las diferentes cepas utili0adas en el
medio !" +8ajo," Cuinto ensayo"
F(0. 2" (omparacin del crecimiento de las cepas utili0adas en el medio 4UL8A(
! con concentracin baja" S. sobrinus, S. sanguis y S. mutans muestran un
crecimiento optimo de #2"#9, D2"39 y #D";9 respectivamente, mientras &ue S.
rattus muestra un crecimiento del $"#A9, si'nificativamente menor con respecto a
las dem3s cepas"
4UL8A( G ! +8ajo,
0
!0
20
#0
70
>0
60
;0
?0
@0
!00
S. $,/.()&$ S. $*)0&($ S. .*++&$ S. 1&+*)$
(epa
9 ( r e c i m i e n t o
4UL8A( H 2 .edio con concentracin ormal:
CEPA UFC< 1L MEDIO 2 (NORMAL)
S. sobrinus <"3 - !7
;
$<9
S. sanguis <"D - !7
;
;79
S. rattus 7 79
S. mutans D"3 - !7
;
!779
T*/'* ?. (omparacin de crecimiento de las diferentes cepas utili0adas en el
medio 2 +ormal," Primer ensayo"
CEPA UFC<1L MEDIO 2 (NORMAL)
S. sobrinus $"2 - !7
;
;<9
S. sanguis A"# - !7
;
$79
S. rattus 7 79
S. mutans ;"A - !7
;
#79
T*/'* @" (omparacin de crecimiento de las diferentes cepas utili0adas en el
medio 2 +ormal," 4e'undo Ensayo"
S. sobrinus <"D - !7
;
;79
S. sanguis A"# - !7
;
$79
S. rattus 7 79
S. mutans D"3 - !7
;
!779
T*/'* !0" (omparacin de crecimiento de las diferentes cepas utili0adas en el
medio 2 +ormal," 5ercer Ensayo"
S. sobrinus $"2 - !7
;
;<9
S. sanguis A"# - !7
;
$79
S. rattus 7 79
S. mutans ;"A - !7
;
#79
T*/'* !!. (omparacin de crecimiento de las diferentes cepas utili0adas en el
medio 2 +ormal," (uarto Ensayo"
S. sobrinus <"D T !7
;
;79
S. sanguis A"# T !7
;
$79
S. rattus 7 79
S. mutans D"3 T !7
;
!779
medio 2 +ormal," Cuinto Ensayo"
F(0. #. (omparacin del crecimiento de las cepas utili0adas en el medio 4UL8A(
2 con concentracin normal" El aumento en la concentracin de sulfiso-a0ole en el
medio comien0a a evidenciarse en la disminucin del crecimiento de S. sobrinus
;!9, S. sanguis $29 y un crecimiento nulo de S. rattus, mientras &ue S. mutans
conserva unas caracter2sticas optimas de crecimiento"
4UL8A( H 3 .edio con concentracin AL5* H A
CEPA UFC<1L MEDIO # (ALTO AA)
S. sobrinus !"2 - !7
;
!<9
S. sanguis 7 79
S. rattus 7 79
S. mutans ;"A - !7
;
#79
4UL8A( G2 +ormal,
0
!0
20
#0
70
>0
60
;0
?0
@0
!00
S. $,/.()&$ S. $*)0&($ S. .*++&$ S. 1&+*)$
(epa
P o r c e n t a j e
T*/'* !#" (omparacin de crecimiento de las diferentes cepas utili0adas en el
medio 3 +AL5* GA," Primer Ensayo"
S. sobrinus D"3 - !7
$
!79
S. sanguis A"! - !7
$
<9
S. rattus 7 79
S. mutans ;"D - !7
;
#<9
T*/'* !7. (omparacin de crecimiento de las diferentes cepas utili0adas en el
medio 3 +AL5*GA," 4e'undo Ensayo"
S. sobrinus D"3 - !7
$
!79
S. sanguis 7 79
S. rattus 7 79
S. mutans ;"A - !7
;
#79
T*/'* !>" (omparacin de crecimiento de las diferentes cepas utili0adas en el
medio 3 +AL5* GA," 5ercer Ensayo"
;
!<9
S. sanguis 7 79
S. rattus 7 79
S. mutans ;"A - !7
;
#79
medio 3 +AL5* GA," 5ercer Ensayo"
;
!<9
S. sanguis 7 79
S. rattus 7 79
S. mutans ;"A - !7
;
#79
T*/'* !;" (omparacin de crecimiento de las diferentes cepas utili0adas en el
medio 3 +AL5* H A, Cuinto ensayo"
F(0. 7. (omparacin del crecimiento de las cepas utili0adas en el medio 4UL8A(
3 con concentracin AL5* H A" El aumento pro'resivo en la concentracin del
antibitico sulfiso-a0ole aumenta cada ve0 m3s la capacidad in/ibitoria del medio
de cultivo mostrando un crecimiento de !39 para S. sobrinus, !9 para S. sanguis"
79 para S. rattus y poco in/ibitorio para S. mutans con un crecimiento del #!9"
4UL8A( A" .edio con concentracin AL5* H 8
CEPA UFC<1L MEDIO 7 (ALTO AB)
S. sobrinus A"! - !7
$
<9
S. sanguis 7 79
S. rattus 7 79
S. mutans ;"D - !7
;
#<9
4UL8A( G3 +AL5* G A,
0
!0
20
#0
70
>0
60
;0
?0
@0
!00
S. $,/.()&$ S. $*)0&($ S. .*++&$ S. 1&+*)$
(epa
P
o
r
c
e
n
t
a
j
e

T*/'* !?" (omparacin de crecimiento de las diferentes cepas utili0adas en el
medio A +AL5* G8," Primer Ensayo"
S. sobrinus !"$ - !7
$
29
S. sanguis A"! - !7
$
<9
S. rattus 7 79
S. mutans D"3 - !7
;
!779
T*/'* !@. (omparacin de crecimiento de las diferentes cepas utili0adas en el
medio A +AL5*G8," 4e'undo ensayo"
S. sobrinus A"! T !7
$
<9
S. sanguis A"! T !7
$
<9
S. rattus 7 79
S. mutans ;"D T !7
;
#<9
T*/'* 20. (omparacin de crecimiento de las diferentes cepas utili0adas en el
medio A +AL5* H8," 5ercer ensayo"
S. sobrinus 7 79
S. sanguis A"! - !7
$
<9
S. rattus 7 79
S. mutans ;"A - !7
;
#79
T*/'* 2!" (omparacin de crecimiento de las diferentes cepas utili0adas en el
medio A +AL5*G8," (uarto ensayo"
S. sobrinus !"$ - !7
$
29
S. sanguis A"! - !7
$
<9
S. rattus 7 79
S. mutans D"3 - !7
;
!779
medio A +AL5*G8," Cuinto ensayo"
F(0. >. (omparacin del crecimiento de las cepas utili0adas en el medio 4UL8A(
A con concentracin AL5* H 8" La concentracin optima de sulfiso-a0ole utili0ada
en este ensayo aumenta las propiedades in/ibitorias del medio 4UL8A(
permitiendo un crecimiento apenas de 2"D9 para S. sobrinus, A9 para S. sanguis
y 79 para S. rattus, mientras &ue en el crecimiento de S" mutans persiste una
'ran adaptabilidad a las condiciones &ue el medio le ofrece"
4UL8A( GA +AL5* G 8,
0
!0
20
#0
70
>0
60
;0
?0
@0
!00
S. $,/.()&$ S. $*)0&($ S. .*++&$ S. 1&+*)$
(epa
P
o
r
c
e
n
t
a
j
e

?. DISCUSION DE RESULTADOS
En estudios anteriores se /ab2a confirmado la utilidad y selectividad del Agar Mitis
Salivarius en el aislamiento de estreptococos orales, pero actualmente debido a
las dificultades en el proceso de identificacin del a'ente etiol'ico se /ace
necesario el dise1o de un medio de cultivo con un alto porcentaje de selectividad
/acia S. mutans y mantener in/ibido el crecimiento de estreptococos orales
acompa1antes, especialmente Streptococcus sobrinus y Streptococcus sanguis.
+Little, !#;;,"
4e'Ln reportes anteriores, de 5a?ada, >irasa=a en el a1o 277<, se encontr &ue
se in/ibi en el medio .4G.U5B +.itisGsalivariusGBalinomicina, el ;2"!9 de otros
estreptococos orales, y en este estudio el porcentaje de in/ibicin es del #D9
confirmando la 'ran capacidad in/ibitoria &ue tiene el antibitico sulfiso-a0ole,
utili0ado en ambos estudios y demostrando mayor capacidad in/ibitoria en el
medio 4UL8A( 3 y A +concentraciones alto A y 8,, donde la recuperacin selectiva
de Streptococcus mutans y la in/ibicin de otros estreptococos orales se reali0o
satisfactoriamente, para el caso e-acto de este estudio, la in/ibicin de S.
sanguis, S. sobrinus, S. rattus" +5a?ada, 277<,"
4e utili0o el modelo estad2stico A*BA +Ane-o 2,, para el an3lisis de los datos
obtenidosI se puede deducir &ue el crecimiento en el medio de cultivo 4UL8A(
esta determinado por dos variables directamente relacionadas y anali0adas por el
modelo estaditistico descrito" (omo an3lisis propio, se puede determinar &ue el
crecimiento obtenido depende de la susceptibilidad bacteriana al antibitico
sulfiso-a0ole y la concentracin del mismo utili0ado en los cuatro ensayos" El
an3lisis de la varian0a, muestra &ue el valor E +3!;2"72, es mayor a 2";A, siendo
este ultimo el valor cr2tico para E"
El valor para la varian0a entre los medios relacionado con el crecimiento
bacteriano es de !7;!"D!, cuyo valor critico para E es 2";AD, como se evidencia
entonces es mayor el valor E &ue el E critico por lo cual se deduce &ue el
crecimiento bacteriano esta determinado por el aumento en la concentracin del
antibitico y el tipo de cepa utili0ada"
(omo an3lisis de los datos anteriores, se podr2a concluir &ue la capacidad de
in/ibicin del medio, estar2a dada por las altas concentraciones del sulfiso-a0ole
+el doble de la concentracin normal, junto con el cloruro f6rrico &uien evita la
ad/esin al medio de cultivo, /ec/o &ue puede ser clave para determinados
microor'anismos al momento de coloni0ar y prosperar en el medio de cultivo"
Feportes previos, /an demostrado la efectividad &ue tiene el citrato y el /ierro
+3Q,, en el metabolismo del Streptococcus mutans, ya &ue aumenta su crecimiento
tanto en un medio de cultivo como en la propia placa dental" Al adicionar al medio
4UL8A( las concentraciones determinadas de cloruro f6rrico y citrato de sodio, se
permiti &ue el S. mutans creciera bajo una atmsfera de nutrientes suficientes
similares a los &ue obtiene en la cavidad oral /umana, re&uerimiento nutricional
esencial para el desarrollo del S. mutans. +J/oritos/?i, 277<," De i'ual manera el
uso del cloruro f6rrico y el citrato de sodio como un in/ibidor de crecimiento para
estreptococos orales diferentes al S. mutans, ya &ue estas bacterias no tienen
dentro de su estructura bacteriana 'enes &ue codifi&uen para en0imas &ue sean
capaces de de'radar el citrato o el /ierro lo cual los convierte en a'entes t-icos
para la estructura bacteriana"
@. CONCLUSIONES
4e puede concluir &ue el sulfiso-a0ole en compa12a del cloruro f6rrico y el
citrato de sodio si actLan de manera in/ibitoria en el crecimiento de flora
acompa1ante como lo son los estreptococos orales diferentes a S" mutans
en una muestra de saliva"
En las dos concentraciones mas bajas del medio 4UL8A( preparado, el
porcentaje de in/ibicin es muy bajo y no si'nificante para el estudio"
En las dos concentraciones m3s altas del medio 4UL8A( preparado, el
porcentaje de in/ibicin es muy alto y si'nificante para el estudio,
confirmando as2 la utilidad del sulfiso-a0ole junto con el (loruro E6rrico y el
citrato de sodio a dic/as concentraciones"
El medio 4UL8A( se puede utili0ar directamente para la siembra masiva de
saliva, recuperando cerca del #D9 de los Streptococcus mutans e
in/ibiendo simult3neamente flora acompa1ante no deseada"
La selectividad del medio depende directamente de la concentracin de
antibitico y la sensibilidad bacteriana, como se evidencia en el an3lisis
estad2stico A*BA"
!0. RECOMENDACIONES
(omo en el presente estudio las concentraciones de (loruro E6rrico, citrato de
sodio y 8acitracina permanecieron est3ndar a todos los medios ensayados, se
recomienda reali0ar variaciones aleatorias en las concentraciones de los
compuestos nombrados anteriormente, ya &ue en cierto modo se podr2a aumentar
la selectividad del medio"
!!. BIBLIOGRAFBA
!" Adelber', %eor'e E 8roo?s" Et" Al" .icrobiolo'ia .edica de Ja=et0" )48
#;7;2#!D$2" .e-icoI 8o'ota: Ed" .anual .oderno, 277<"
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mutans. .icrobiol" Fev" AA: 33! H 33A" !#DA"
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.icrobiolo'ia oral" Li6bana J" .c %ra= >ill interamericana" Pa'" 32< H 33<" 2772"
#" .erc? .icrobiolo'y .anual" !2t/ Ed" Darmstadt, %ermany : .erc? J%aA,
277<"
!7" 4c/aec?en J" 4" Eranjen" (omparative recovery of Streptococcus mutans on
"ive isolation media including a ne simple selective medium. Journal of Dental
Fesearc/" Bol $<, #7$G#7D" !#D$"
!!" 4c/leifer, F, %/erin'" et" Al" Felatedness and classification of Streptococcus
mutans and mutans1li2e streptococci. Journal of Dental Fesearc/" Bol $3: !7A; H
!7<7" !##D"
!2" 5a?ada J" . >irasa=a" A ovel 4elective .edium for )solation of
Streptococcus mutans. Journal of .icrobiolo'ical .et/ods" $7: !D# H !#3" 277<"
ANECO !
CONSENTIMIENTO INFORMADO
4e'Ln la resolucin del .inisterio de 4alud de (olombia o" 77DA37 de !##3 y
Pautas Zticas )nternacionales para la )nvesti'acin y E-perimentacin 8iom6dica
en 4eres >umanos de 2777"
Usted esta siendo invitado a participar en un proyecto de investi'acin, propuesto
por el (entro de )nvesti'aciones *dontol'icas" Es muy importante &ue el
investi'ador le e-pli&ue claramente en &ue consiste el estudio y cuales son sus
posibles ries'os" Despu6s de leer y entender la informacin &ue se presenta a
continuacin, si usted desea participar en el estudio, por favor firme este
documento"
!" La participacin en este estudio es totalmente voluntaria"
2" La participacin en este estudio puede no beneficiarlo directamente, pero los
resultados obtenidos, podr2an beneficiar posteriormente a otras personas"
3" Usted tendr3 la libertad de retirarse de la investi'acin en cual&uier momento
sin sancin al'una"
A" in'una persona &ue acepte a participar en este estudio recibir3 beneficios
econmicos como pa'o por su participacin"
<" Este estudio no tiene nin'Ln inter6s econmico por parte del 'rupo de
investi'acin, as2 como tampoco el desarrollo de patentes con base en el
material recolectado"
$" Los re'istros con la informacin de cada individuo es de car3cter
absolutamente confidencial, solamente usted y el e&uipo de investi'acin
tendr3n acceso a ella"
;" (uando los resultados de este estudio se reporten en revistas o con'resos
cient2ficos, se omitir3n los nombres de los participantes"
D" El ries'o e-istente en la toma de muestra+s, para este estudio es muy bajo y
por lo tanto no reviste ries'o de salud para usted"
#" 4i usted tiene dudas con respecto al estudio o desea obtener al'una
informacin adicional, no dude en manifestarlo a los investi'adores"
!7" A usted se le debe entre'ar una copia de este consentimiento informado"
CONSENTIMIENTO INFORMADO
4e'Ln la resolucin del .inisterio de 4alud de (olombia o" 77DA37 de !##3 y
Pautas Zticas )nternacionales para la investi'acin y E-perimentacin 8iom6dica
en 4eres >umanos de 2777, este estudio se denomina: Dise1o y Baloracin de
un .edio de (ultivo 4electivo para el Aislamiento de S. mutans.
El objetivo del estudio es: .odificar el Agar Mitis Slivarius (AMS) para aumentar la
4electividad en el aislamiento de estreptococos orales, espec2ficamente
Streptococcus mutans.
La muestra necesaria para este estudio es saliva"
La+s, muestra+s, ser3+n, conservadas adecuadamente en el (entro de
)nvesti'aciones *dontol'icas de la Pontificia Universidad Javeriana y ser3+n,
utili0ada+s, Lnicamente en esta investi'acin"
Las dudas pueden ser resueltas por comunicacin con: .ar'arita (/aves (lavijo
+mar'arita"c/aves[javeriana"edu"co,, al tel6fono 327D327 e-tensin 2D##"
CERTIFICO DUE ESTOY DE ACUERDO EN PARTICIPAR EN EL ESTUDIO Y
DUE RECIBB COPIA DE ESTE CONSENTIMIENTO INFORMADO.
F3%E* FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF
N,1/.3 43' P*%(3)+3 FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF
F(.1* 43' 2*%(3)+3 FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF
N,. D3 C:4&'* FFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFF
Diseo y valoracion de un medio de cultivo selectivo para S. mutans Diseo y valoracion de un medio de cultivo selectivo para S. mutans
DISEO Y VALORACION
DE UN MEDIO DE CULTIVO
PARA
Streptococcus mutans
Pontificia Universidad Javeriana
Pontificia Universidad Javeriana
Facultad de Ciencias
Facultad de Ciencias
Facultad de Odontologa - CIO
Facultad de Odontologa - CIO
Carrera de Bacteriologa
Carrera de Bacteriologa
Dra. Margarita Chaves Clavio! M"c
Dra. Margarita Chaves Clavio! M"c
Directora
Directora
Dra. #oren$a Jara%illo! M"c
Dra. #oren$a Jara%illo! M"c
Co-Directora
Co-Directora
&U'O()"
&U'O()"
DI&*& MI#)*& P)D(&+& "&*C,)+
DI&*& MI#)*& P)D(&+& "&*C,)+
Bacteriologia -./ "e%estre
0O,&*0 &*D()" ,)(*&*D)+ 1
0O,&*0 &*D()" ,)(*&*D)+ 1
2)*)(&#ID&D)"
2)*)(&#ID&D)"
"tre3tococcus
"tre3tococcus
Constituido por especies que difieren en
Constituido por especies que difieren en
algunas caractersticas metablicas,
algunas caractersticas metablicas,
fisiolgicas y serologicas
fisiolgicas y serologicas
2)*)(&#ID&D)"
2)*)(&#ID&D)"
"tre3tococcus
"tre3tococcus
Gram ositivos
Gram ositivos
Catalasa !egativa
Catalasa !egativa
"grupacion en pares o cadenas
"grupacion en pares o cadenas
"naerobios #acultativos
"naerobios #acultativos
2)*)(&#ID&D)" 2(UPO
2)*)(&#ID&D)" 2(UPO
"tre3tococcus
"tre3tococcus
$omo fermentativos.
$omo fermentativos.
%emperatura optima de crecimiento &
%emperatura optima de crecimiento &
'()C
'()C
2)*)(&#ID&D)" 2(UPO
2)*)(&#ID&D)" 2(UPO
"tre3tococcus
"tre3tococcus

2ru3o Mutans
2ru3o Mutans
S. sobrinus
S. mutans
S. cricettus
S. rattus
S. macacae
S. downei
S. ferus

DIETA
AZCAR
D*+!%+
S"!,
PELICULA ADQUIRIDA
PRODUCCIN DE CIDOS
DESMINERALIZACIN
METABOLISMO
AZCAR
FISIOPATOGENIA DE
LA CARIES DENTAL
ADHESIN
PAc
CARIES
GTF
GBPs
GLUCANOS INSOLUBLES
Cariogenesis
Cariogenesis
1ariedad de Microorganis%os.
1ariedad de Microorganis%os.
"i%ilitud en identificacion.
"i%ilitud en identificacion.
+/- - - - +/-
". sanguis
+/- + - + +
". rattus
- +/- +/- + +/-
".
so4rinus
+ + + + +
". %utans
)sculina
"or4itol (afinosa
Manitol Inulina
Ce3a
Medios de Cultivo
Medios de Cultivo
Intentan re3roducir
Intentan re3roducir
artificial%ente las
artificial%ente las
condiciones del
condiciones del
h54itat natural de los
h54itat natural de los
agentes 4acterianos
agentes 4acterianos
.
.
"us co%3onentes
"us co%3onentes
de4en cu4rir todas las
de4en cu4rir todas las
necesidades
necesidades
nutricionales de las
nutricionales de las
4acterias.
4acterias.
CO*DICIO*)" 2)*)(&#)" D) U*
CO*DICIO*)" 2)*)(&#)" D) U*
M)DIO D) CU#'I1O
M)DIO D) CU#'I1O
Temperatura
Temperatura
Grado de humedad
Grado de humedad
Presin de oxgeno
Presin de oxgeno
adecuada
adecuada
Grado correcto de
Grado correcto de
acidez o alcalinidad
acidez o alcalinidad
Medios de Cultivo
DIF)()*CI&#)"
DIF)()*CI&#)"
)*(I6U)CIMI)*'O
)*(I6U)CIMI)*'O
M&*')*IMI)*'O
M&*')*IMI)*'O
")#)C'I1O"
")#)C'I1O"

Medios de Cultivo
Medios de Cultivo
SELECTIVIDAD
ANTIBIOTICOS QUIMICOS COLORANTES SALES
SULFISOXAZOLE
BACITRACINA
CLORURO FERRICO
CITRATO DE
SODIO
CRISTAL VIOLETA
AZUL TRIPAN
TELURITO
&gar Mitis salivarius
&gar Mitis salivarius
"electivo 3ara
"electivo 3ara
estre3tococos
estre3tococos
orales.
orales.
Co%3osicion7
Co%3osicion7
Pe3tona
Pe3tona
"acarosa
"acarosa
'elurito de 89
'elurito de 89
Bacitracina
Bacitracina
Cristal 1ioleta
Cristal 1ioleta
&$ul 'ri3an
&$ul 'ri3an
"U#FI"O:&+O#)
"U#FI"O:&+O#)
Sulfonam!a
G"am #os$%os &

G"am n'(a$%os
Ef'c$o
Bac$'"os$)$co
Mecanis%o de &cci;n
Mecanis%o de &cci;n
&n5logos estructurales < antagonistas del
&n5logos estructurales < antagonistas del
P&B&
P&B&
I%3iden la utili$aci;n nor%al del P&B& en
I%3iden la utili$aci;n nor%al del P&B& en
sntesis de =cido F;lico
sntesis de =cido F;lico
Justificaci;n
Justificaci;n
De acuerdo a la similitud entre especies, se -i.o
De acuerdo a la similitud entre especies, se -i.o
necesario plantear nuevas y efectivas
necesario plantear nuevas y efectivas
-erramientas para poder obtener un crecimiento
-erramientas para poder obtener un crecimiento
selectivo de
selectivo de
S. mutans
S. mutans
y mantener in-ibido el
y mantener in-ibido el
crecimiento de estreptococos orales
crecimiento de estreptococos orales
acompaantes, especialmente
acompaantes, especialmente
Streptococcus
Streptococcus
sobrinus
sobrinus
y
y
Streptococcus sanguis
Streptococcus sanguis

OBJ)'I1O 2)*)(&#
OBJ)'I1O 2)*)(&#
/odificar el "gar
/odificar el "gar
Mitis Salivarius
Mitis Salivarius
0"/S1
0"/S1
para aumentar la selectividad en el
para aumentar la selectividad en el
aislamiento de estreptococos orales,
aislamiento de estreptococos orales,
especficamente
especficamente
.
.
OBJ)'I1O" )"P)CIFICO"
"islar e identificar
"islar e identificar

de muestras de saliva.
de muestras de saliva.

2eali.ar la modificacin del "gar /itis
2eali.ar la modificacin del "gar /itis
Salivarius 0"/S1 a cuatro concentraciones
Salivarius 0"/S1 a cuatro concentraciones
diferentes del antibitico sulfiso3a.ole
diferentes del antibitico sulfiso3a.ole
manteniendo concentraciones constantes
manteniendo concentraciones constantes
de citrato de sodio y cloruro ferrico,
de citrato de sodio y cloruro ferrico,
adem4s de las establecidas en la
adem4s de las establecidas en la
preparacin del "gar /itis Salivarius
preparacin del "gar /itis Salivarius
0"/S1.
0"/S1.
5alorar el crecimiento de
5alorar el crecimiento de
Streptococcus
Streptococcus
mutans
mutans
en el medio de cultivo S678"C.
en el medio de cultivo S678"C.
+valuar la capacidad de in-ibicin de
+valuar la capacidad de in-ibicin de
otros estreptococos orales en el medio de
otros estreptococos orales en el medio de
cultivo S678"C.
cultivo S678"C.
PROCESO
PROCESO
EXPERIMENTAL
EXPERIMENTAL

14 Cepas S. mutans.
CIO!
1" Muest#as Pa$%entes
Ot#&s
est#ept&$&$&s
&#a'es.
CEPA
ATCC *+,-, !' S.
mutans
()CUP)(&CIO* D) C)P&"
()CUP)(&CIO* D) C)P&"
14
ce!s
"CIO#
$% & C'
A(!e)o*iosis
Todd+,e-itt
4. ,o)!s
AMS'
A(!e)o*iosis
$%&C
Ide(ti/ic!ci0(
1io2u34ic!'
15615

15 4uest)!s
de s!liv!
Sie4*)!
di)ect! e(
AMS
I(cu*!ci0( $%&C'
A(!e)o*iosis'
4. ,o)!s
Ide(ti/ic!ci0(
1io2u34ic!
ID)*'IFIC&CIO* BIO6UIMIC&
ID)*'IFIC&CIO* BIO6UIMIC&
"tre3tococcus rattus
"tre3tococcus rattus
"tre3tococcus so4rinus
"tre3tococcus so4rinus
"tre3tococcus sanguis B>
"tre3tococcus sanguis B>
P()P&(&CIO* M)DIO D) CU#'I1O
P()P&(&CIO* M)DIO D) CU#'I1O
"U#B&C
"U#B&C
Base de 3re3araci;n &M".
Base de 3re3araci;n &M".
&dici;n de co%3uestos ?u%icos.
&dici;n de co%3uestos ?u%icos.
Componente
Medo !
"B#$o%
Medo &
"No'm#(%
Medo )
"A(to * A%
Medo +
"A(to * B%
B#,t'#,n# '99 6*:7 '99 6*:7 '99 6*:7 '99 6*:7
S-(./o01 21! 34L 21& 34L 21+ 34L 215 34L
C(o'-'o
Fe'',o
;.< m7:7 ;.< m7:7 ;.< m7:7 ;.< m7:7
Ct'#to de
Sodo
< g:7 <g:7 <g:7 <g:7
P()P&(&CIO* M)DIO "U#B&C
P()P&(&CIO* M)DIO "U#B&C
+sterili.acion a ;<;)C a ;= libras de
+sterili.acion a ;<;)C a ;= libras de
presin durante ;= /inutos.
presin durante ;= /inutos.
"dicin de compuestos labiles.
"dicin de compuestos labiles.

Control de )sterilidad
Control de )sterilidad
> %edios de cada concentraci;n
> %edios de cada concentraci;n
Incu4acion7 &t%;sfera de anaero4iosis durante
Incu4acion7 &t%;sfera de anaero4iosis durante
@A horas.
@A horas.
*o se o4servo creci%iento
*o se o4servo creci%iento
2(UPO D) M)DIO"
2(UPO D) M)DIO"
B&JO
B&JO
*O(M&#
*O(M&# B'aCada! ,irasaDa. E..FG B'aCada! ,irasaDa. E..FG
&#'O-&
&#'O-&
&#'O-B
&#'O-B
"I)MB(& M)DIO "U#B&C
"I)MB(& M)DIO "U#B&C
*ncubadas ba>o anaerobiosis durante ?@
*ncubadas ba>o anaerobiosis durante ?@
-oras a 'A)C
-oras a 'A)C
.
.
/orfologa de colonias
/orfologa de colonias
identificacin bioqumica
identificacin bioqumica
RESULTADOS
()"U#'&DO"
()"U#'&DO"
(ecuento de Colonias.
(ecuento de Colonias.
". %utans
". %utans

A.@ H -.
A.@ H -. I I
UFCJ%#.
UFCJ%#.
-..K
-..K

SULBAC ! "BA6O%
9
<9
?9
(9
@9
;99
S. sobrinus S. sanguis S. rattus S. mutans
Cep#
P
o
'
,
e
n
t
#
$
e

C
'
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,
e
n
t
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MEDIO SULBAC "NORMAL%
9
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Cep#
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A
6
E

C
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SULBAC ) "ALTO 7A%
9
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?9
(9
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;99
Cep#
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Re7)es!
SULBAC + "ALTO 7B%
9
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Cep#
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#
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C
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INHIBICION DE OTROS
ESTREPTOCOCOS ORALES
9
<9
?9
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@9
;99
S678"C ; S678"C < S678"C ' S678"C ?
MEDIO
P
O
R
C
E
N
T
A
6
E
DISCUSION
DI"CU"IO*
DI"CU"IO*
2esultados obtenidos por %aBada,
2esultados obtenidos por %aBada,
$irasaCa en el ao <99=, evidencian un
$irasaCa en el ao <99=, evidencian un
porcenta>e de in-ibicion de otros
porcenta>e de in-ibicion de otros
estreptococos orales del A<.;D en su
estreptococos orales del A<.;D en su
medio /SE/6%5.
medio /SE/6%5.

DI"CU"IO*
DI"CU"IO*
M"-MU'1L Inhi4e
al IE.-K. BOtros
)stre3tococos
oralesG
"U#B&CL Inhi4e al
MAK BOtros
)stre3tococos
oralesG
DI"CU"IO*
DI"CU"IO*
2eportes previos, -an demostrado la
2eportes previos, -an demostrado la
efectividad que tiene el citrato y el -ierro
efectividad que tiene el citrato y el -ierro
0'F1, en el metabolismo del
0'F1, en el metabolismo del
Streptococcus
Streptococcus
mutans
mutans
, ya que aumenta su crecimiento
, ya que aumenta su crecimiento
tanto en un medio de cultivo como en la
tanto en un medio de cultivo como en la
propia placa dental.
propia placa dental.
B8orithosCi! E..FG
B8orithosCi! E..FG
&n5lisis )stadstico
&n5lisis )stadstico
"e utili$o el %odelo estadstico &*O1&
"e utili$o el %odelo estadstico &*O1&
B&n5lisis de 1arian$aG.
B&n5lisis de 1arian$aG.
(a'&# F $#%t%$&) *.+4,
(a'&# F $#%t%$&) *.+4,
(a'&# F pa#a e' estu-%&) .1+*./*
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0&) C&n$ent#a$%&n Su'1%s&2a3&'e n&
0&) C&n$ent#a$%&n Su'1%s&2a3&'e n&
a1e$ta $#e$%m%ent& 4a$te#%an&.
a1e$ta $#e$%m%ent& 4a$te#%an&.
0a) C&n$ent#a$%&n Su'1%s&2a3&'e a1e$ta
0a) C&n$ent#a$%&n Su'1%s&2a3&'e a1e$ta
e' $#e$%m%ent& 4a$te#%an&.
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CONCLUSIONES
CO*C#U"IO*)"
CO*C#U"IO*)"
+l medio S678"C ' y ?, demuestra una
+l medio S678"C ' y ?, demuestra una
recuperacin selectiva de
recuperacin selectiva de
Streptococcus
Streptococcus
mutans
mutans
y la in-ibicin de otros
y la in-ibicin de otros
estreptococos orales, para el caso e3acto
estreptococos orales, para el caso e3acto
de este estudio,
de este estudio,
S. sanguis, S. sobrinus,
S. sanguis, S. sobrinus,
S. rattus.
S. rattus.

CO*C#U"IO*)"
CO*C#U"IO*)"
+l sulfiso3a.ole >unto con el cloruro ferrico
+l sulfiso3a.ole >unto con el cloruro ferrico
y el citrato de sodio actGan de manera
y el citrato de sodio actGan de manera
in-ibitoria en el crecimiento de flora
in-ibitoria en el crecimiento de flora
acompaante.
acompaante.
CO*C#U"IO*)"
CO*C#U"IO*)"
+n las dos concentraciones m4s altas del medio
+n las dos concentraciones m4s altas del medio
S678"C preparado, el porcenta>e de in-ibicin
S678"C preparado, el porcenta>e de in-ibicin
es muy alto y significante para el estudio,
es muy alto y significante para el estudio,
confirmando as la utilidad del sulfiso3a.ole
confirmando as la utilidad del sulfiso3a.ole
>unto con el cloruro ferrico y el citrato de sodio a
>unto con el cloruro ferrico y el citrato de sodio a
dic-as concentraciones.
dic-as concentraciones.
CO*C#U"IO*)"
CO*C#U"IO*)"
+l medio S678"C se puede utili.ar
+l medio S678"C se puede utili.ar
directamente para la siembra masiva de
directamente para la siembra masiva de
saliva, recuperando cerca del H@D de los
saliva, recuperando cerca del H@D de los
e in-ibiendo
e in-ibiendo
simult4neamente flora acompaante no
simult4neamente flora acompaante no
deseada.
deseada.
CO*C#U"IO*)"
CO*C#U"IO*)"
"egNn el %odelo estadstico! se conclu<e
"egNn el %odelo estadstico! se conclu<e
de for%a general ?ue la selectividad del
de for%a general ?ue la selectividad del
%edio "U#B&C! esta dada 3or la
%edio "U#B&C! esta dada 3or la
susce3ti4ilidad de la 4acteria al anti4i;tico
susce3ti4ilidad de la 4acteria al anti4i;tico
< las concentraciones de sulfisoHa$ole.
< las concentraciones de sulfisoHa$ole.
()COM)*D&CIO*)"
()COM)*D&CIO*)"
Mod.,#,8n de (#/ ,on,ent'#,one/ de9
Mod.,#,8n de (#/ ,on,ent'#,one/ de9
CLORURO FERRICO
CLORURO FERRICO
CITRATO DE SODIO
CITRATO DE SODIO
BACITRACINA
BACITRACINA
&2(&D)CIMI)*'O"
&2(&D)CIMI)*'O"
Dra. Margarita Chaves.
Dra. Margarita Chaves.
Centro de Investigaciones Odontologicas
Centro de Investigaciones Odontologicas
GRACIAS
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Tesis 162

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