INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL ESCUELA SUPERIOR DE INGENIERA QUMICA E INDUSTRIAS EXTRACTIVAS

Tcnicas de separacin

CROMATOGRAFA DE GASES

Aguilar Palacios Gabriela Delgado Zaldvar Rodolfo Moreno Njera Paola Rosales Rivero Bianka Estela Snchez Nava Alma Delia

Grupo 3IM92

Fecha de entrega: 15 Agosto 2013

Cromatografa de Gases

CROMATOGRAFA DE GASES

ANTECEDENTES Y ESTADO DEL ARTE La cromatografa es un potente mtodo de separacin que tiene la aplicacin en todas las ramas de las ciencia. La tcnica fue inventada y denominada as por el botnico ruso Mikhail Tswett a principios del siglo XX. l la utilizaba para separar varios pigmentos vegetales como clorofilas y xantofilas, haciendo pasar soluciones de estos compuestos a travs de una columna de vidrio rellena con carbonato de calcio finalmente dividido. Las especies separadas aparecan como bandas coloreadas en la columna, lo que justifica el nombre que eligi para el mtodo (del griego chroma que significa color, y graphein que significa escribir). Las aplicaciones de la cromatografa han aumentado en forma explosiva en los ltimos 50 aos debido no slo al perfeccionamiento de nuevos diversos tipos de tcnicas cromatogrficas, sino tambin a las necesidades crecientes de los cientficos de mejores mtodos para la caracterizacin de mezclas complejas. La tremenda influencia de esos mtodos en la ciencia confirm cuando se otorg el Premio Nobel de Qumica de 1952 a A. J. P. Martin y R. L. M. Synge por sus descubrimientos en este campo. Muchos de los Premios Nobel concedidos desde entonces se han basado en trabajos en los que la cromatografa desempea un papel vital. La cromatografa de gases es la tcnica analtica de separacin que ha experimentado un desarrollo ms espectacular desde sus inicios en los aos cincuenta. Se ha utilizado para resolver numerosos problemas en la industria, medicina, biologa y anlisis ambienta. Actualmente se emplea como tcnica de rutina y control en una gran variedad de reas. Adems, sus posibilidades han ido amplindose a medida que se ha mejorado la instrumentacin disponible (columnas capilares, integradores computarizados, sistemas de gradiente de temperatura, nuevos detectores, etc.). Esta tcnica cromatogrfica es la que ofrece mejor poder de resolucin para compuestos orgnicos voltiles. Su principal limitacin se encuentra en la labilidad trmica de los solutos, los cuales deben ser estables a la temperatura requerida para su volatilizacin. Existen dos tipos de cromatografa de gases: la cromatografa gas-lquido (CGL) y la cromatografa gas-slido (CGS). La primera tiene gran aplicacin en todos los campos de la ciencia; su denominacin se suele abreviar a cromatografa de gases (CG). La segunda se basa en una fase estacionaria slida en que la retencin de analtos ocurre porque hay adsorcin. Su aplicacin es limitada debido a la 2

Cromatografa de Gases retencin semipermanente de las molculas activas o polares y a la obtencin de picos de elucin con colas muy notables. La formacin de las colas es resultado de la naturaleza no lineal del proceso de adsorcin. Por tanto, sta tcnica no ha encontrado una gran aplicacin excepto para la separacin de ciertas especies gaseosas de bajo peso molecular. En la cromatografa gas-lquido el analito se divide entre una fase mvil gaseosa y una fase lquida inmovilizada sobre la superficie de un relleno slido inerte o en las paredes de un tubo capilar. El concepto de cromatografa gas-lquido fue enunciado por primera vez en 1941 por Martin Synge, quienes tambin perfeccionaron la cromatografa de distribucin lquidolquido. Sin embargo, tuvo que pasar ms de una dcada antes de que la importancia de la cromatografa gas-lquido se demostrara en forma experimental y la tcnica se empezara a utilizar en forma rutinaria como herramienta de laboratorio. En 1955 apareci en el mercado el primer aparato comercial para cromatografa gas-lquido. Desde entonces, sus aplicaciones han crecido de forma espectacular. En la actualidad hay casi un milln de cromatgrafos en todo el mundo. CROMATGRAFO DE GASES Un cromatgrafo de gases consiste en varios mdulos bsicos ensamblados para: 1) proporcionar un gasto o flujo constante del gas transportador (fase mvil), 2) permitir la introduccin de vapores de la muestra en la corriente de gas que fluye, 3) contener la longitud apropiada de fase estacionaria, 4) mantener la columna a la temperatura apropiada (o la secuencia del programa de temperatura), 5) detectar los componentes de la muestra conforme eluyen de la columna, y 6) proveer una seal legible proporcional en magnitud a la cantidad de cada componente

Cromatografa de Gases COLUMNA En cromatografa de gases se usan dos tipos generales de columnas, las empacadas y las tubulares abiertas o capilares. Antes, la mayor parte de los estudios cromatogrficos de gases se ejecutaba con columnas empacadas. En la mayora de aplicaciones actuales, las columnas empacadas dejaron paso a columnas capilares, ms eficaces y rpidas. Las columnas cromatogrficas empacadas varan desde 1 m hasta 5 m de longitud, y las columnas capilares varan de pocos metros hasta 100 m. Estn construidas con slice fundida o con acero inoxidable, pero tambin se usa el vidrio o el Tefln. A fin de poderse colocarse en el interior de un horno con temperatura controlada, se les da la forma de helicoides con dimetros de 10 a 30 cm, como se muestra en la figura.

La temperatura de la columna es una variable importante que se tiene que regular hasta unas dcimas de grado en el caso de un trabajo preciso. Por consiguiente, la columna se suele alojar dentro de un horno con temperatura controlada. La temperatura ptima de la columna depende del punto de ebullicin de la muestra y del grado de separacin requerido. En la prctica, con una temperatura igual o ligeramente superior al punto de ebullicin promedio de la muestra se obtiene un

Cromatografa de Gases tempo de elucin razonable (2 a 30 min). Para muestras cuya temperatura de ebullicin vara ampliamente, lo mejor es aplicar una programacin de temperatura, con la cual se aumenta la temperatura de la columna en forma continua o por etapas a medida que avanza la separacin. HORNO Las columnas cromatogrficas se enrollan y sujetan en una canasta que se monta en el interior de un horno. El horno de la columna debe poder ser calentado y enfriado rpidamente. Esto requiere de un sistema de flujo de aire adecuado y bien diseado. En la mayora de los diseos el chorro de aire pasa a travs de las resistencias de calentamiento, despus por medio de deflectores que conforman la pared interior del horno, pasan por la columna y de vuelta al ventilador para recalentarse y recircular. Los hornos se construyen usualmente con acero inoxidable delgado. Para la programacin de temperatura es deseable disponer de un intervalo de velocidades de programacin desde 0. 1 hasta 50 /min. Debe ser posible sostener la temperatura en cualquier momento dentro del programa durante un tiempo. En general, la resolucin ptima se asocia con una menor temperatura; sin embargo, la consecuencia de una reduccin de temperatura es un aumento en el tiempo de elucin, y por tanto del tiempo que se necesita para completar un anlisis. Las temperaturas iniciales subambientales son tiles cuando se trabaja con columnas capilares. Las temperaturas se deben mantener alrededor de la temperatura deseada con precisin de 1 en el caso de trabajo isotrmico y de 2 . durante la programacin de temperatura.

DETECTOR Un detector ideal debe poseer una serie de caractersticas que determinar su aplicabilidad: a) Originar una seal estable (lnea de base), reproducible (pico) y poco dependiente de las circunstancias experimentales. b) Sensibilidad: se define como la pendiente de la recta de calibrado, es decir, de la representacin grfica de la seal obtenida frente a la concentracin (o velocidad de flujo) del soluto. Debe ser lo ms alta posible. - Para los detectores que dependen de la concentracin, la sensibilidad viene definida normalmente por el producto de rea del pico (A) por la velocidad de flujo (v), dividido por el peso de muestra (p): s= Avt/p. - Para los detectores que dependen de la masa, la sensibilidad es el cociente entre el rea del pico y el peso de muestra, no dependiendo de la velocidad de flujo.

Cromatografa de Gases c) Rango de linealidad: es el rango de concentraciones en las que la seal del detector es directamente proporcional a la concentracin (o velocidad de flujo) del soluto. Esta propiedad es muy importante para muestras que contengan micro o microcomponentes, as como trazas, ya que podrn cuantificarse cualquiera que sea su concentracin. d) Ruido de fondo: Se refiere a las respuestas errticas producidas en cortos espacios de tiempo y que dependen de factores experimentales (propiedades elctricas, cambios en la temperatura o en el caudal del gas portador, etc.). El ruido de fondo determina el lmite de deteccin: cantidad mnima de soluto que puede ser detectada. Adems de las caractersticas indicadas, es deseable que el detector posea tambin: (a) Tiempo de respuesta corto, (b) Resistencia mecnica y qumica, y (c) Sencillez de manejo y mantenimiento. Detector de conductividad trmica Uno de los primeros detectores que se utilizaron en cromatografa de gases es el detector de conductividad trmica (TCD, por sus siglas en ingls) que todava tiene una gran aplicacin. Este dispositivo contiene una fuente que se calienta mediante electricidad y cuya temperatura a una potencia elctrica constante depende de la conductividad trmica del gas circundante. El elemento calentado puede ser un hilo fino de platino, oro, tungsteno, o tambin un pequeo termistor.

Cromatografa de Gases Detector de fotoionizacin En el detector de fotoionizacin, las molculas que salen de la columna de cromatografa de gases son fotoionizadas mediante radiacin ultravioleta proveniente de una lmpara de hidrgeno de 10.2 eV o de una lmpara de argn de 11.7 eV. Esta fuente ioniza las especies con un potencial de ionizacin por debajo de la energa de la lmpara. Los compuestos con un potencial de ionizacin superior no absorben la energa y, por tanto, no son detectados. Luego, los iones y los electrones producidos por fotoionizacin se colectan en un par de electrodos polarizados. El detector es ms sensible a los hidrocarburos aromticos y los compuestos organosulfurados u organofosforados que se fotoionizan con facilidad. El intervalo lineal es hasta siete rdenes de magnitud. Detectores de emisin atmica En el detector de emisin atmica (AED, por sus siglas en ingls), el efluente procedente de la columna de cromatografa de gases se introduce enun plasma inducido por microondas (MIP), un plasma acoplado por induccin (ICP) o un plasma de corriente continua (DCP). El plasma inducido por microondas es el que se usa ms ampliamente y se encuentra en el comercio. Se utiliza junto con diodos en serie o con un espectrmetro de emisin atmica con un dispositivo de acoplamiento de carga como se muestra en la figura 27.12. El plasma tiene suficiente energa para atomizar todos los elementos de una muestra y excitarlos para obtener as sus espectros de emisin atmica caractersticos. Por tanto el detector de emisin atmica es un detector selectivo de elemento. Como se puede ver a la derecha de la figura, los diodos en serie posicionables son capaces de supervisar de manera simultnea varios elementos en cualquier posicin. Detector fotomtrico de flama El detector fotomtrico de flama (FPD, por sus siglas en ingls) se ha utilizado de manera extensa para el anlisis de contaminantes del aire y del agua, de plaguicidas y de los productos de la hidrogenacin del carbn. Se trata de un detector selectivo que es sensible sobre todo a los compuestos que contienen y azufre y fsforo Detector de captura de electrones (ECD) El detector de captura de electrones (ECD) opera casi de la misma forma que un contador proporcional para la medida de radiacin X. En este caso el efluente de la columna pasa sobre un emisor , como nquel-63 o tritio (adsorbido sobre una lmina de platino o de titanio). Un electrn del emisor provoca la ionizacin del gas portador (con frecuencia se trata de nitrgeno) y la produccin de una rfaga de electrones. De este proceso de ionizacin, en ausencia de especies orgnicas, resulta una corriente constante entre un par de electrodos. Sin embargo, la corriente disminuye en presencia de molculas orgnicas que tiendan a capturar los

Cromatografa de Gases electrones. La respuesta es poco lineal, a no ser que el potencial a travs del detector se aplique en forma de impulsos. El detector de captura de electrones es de respuesta selectiva, siendo muy sensible a las molculas que contienen grupos funcionales electronegativos tales como halgenos, perxidos, quinonas, y grupos nitro; en cambio, no es sensible a grupos funcionales como aminas, alcoholes e hidrocarburos. Una aplicacin importante del detector de captura de electrones es la deteccin y determinacin de insecticidas clorados. Los detectores de captura de electrones son altamente sensibles y tienen la ventaja de no alterar la muestra de manera significativa (a diferencia del detector de llama). Por otra parte, su intervalo lineal de respuesta normalmente se limita a unos dos rdenes de magnitud.

SISTEMA DE INYECCIN DE LA MUESTRA Con el fin de tener una alta eficiencia de la columna se requiere que la muestra sea de un tamao adecuado y que se introduzca como un tapn de vapor; la inyeccin lenta o muestras demasiado grandes causan dispersin de las bandas y una mala resolucin. Las microjeringas calibradas, como las que se ilustran en la figura 27.3, se utilizan para inyectar muestras lquidas, a travs de un diafragma de goma de silicn, en una cmara caliente especial para la muestra que se ubica en la cabeza de la columna. En el caso de las columnas analticas rellenas ordinarias, el tamao de la muestra vara desde unas pocas dcimas de microlitro a 20 L. Las columnas capilares requieren muestras menores por un factor de 100 o ms. En estos casos se emplea un sistema divisor de la muestra que permite entregar una pequea fraccin conocida (1:50 a 1:500) de la muestra inyectada y el resto se desecha. Los cromatgrafos de gases comerciales con columnas capilares estn equipados con dichos divisores; tambin permiten la inyeccin sin divisin para mejorar la sensibilidad o para usarse con columnas empacadas. En el caso de entradas sin divisin, la vlvula de purga cierra la inyeccin y permanece cerrada de 30 a 60 segundos. Durante este tiempo, el vapor de la muestra slo puede avanzar por la columna. Al abrirse la vlvula de purga, cualquier vapor remanente sale con rapidez. En la cromatografa de gases con capilares tambin hay inyectores en la columna, con las cuales la muestra entera se inyecta en la columna como lquido que luego se vaporiza al programar la temperatura de la columna o de la entrada. En este caso, el analito se separa del solvente por efectos trmicos del mismo solvente. En el trabajo cuantitativo se pueden obtener tamaos de muestra ms reproducibles tanto en el caso de lquidos como en el de gases con una vlvula de muestreo de gas como la que se observa en la figura 27.5. Con estos dispositivos, los tamaos de la muestra pueden reproducirse con menos de 0.5% de error relativo. Estn 8

Cromatografa de Gases disponibles autoinyectores con bandejas automticas de muestreo para la mayora de los cromatgrafos de gases. Con stos se puede mejorar en gran medida la precisin del volumen inyectado en comparacin con la inyeccin manual con jeringa.

Cromatografa de Gases GLOSARIO Resolucin.- Proximidad de dos bandas de un espectro o de un cromatograma que se pueden distinguir como dos picos distintos. En cromatografa se define como la diferencia de tiempos de retencin de dos picos contiguos dividida por su anchura. Selectividad.- Es una medida numrica la cual nos indica hasta qu punto se ha separado la alimentacin. Es recomendable obtener valores mayores a la unidad, aunque pueden existir valores menores de uno, no debemos descartar la posibilidad de encontrar un valor puntual igual a uno cuando se trate de un sistema solutrpico. La selectividad puede comprarse con la volatilidad relativa utilizada en la destilacin. Tiempo de retencin.- Tiempo que tarda un soluto desde la inyeccin, en ser eluido de una columna cromatografa. Tiempo de retencin ajustada (tr); en cromatografa viene dado por el tr = tr -tm, donde tr es el tiempo de retencin de un soluto y tm el tiempo que necesita la fase mvil para atravesar la columna. Calibracin.- Para realizar el calculo de composicin, se inyectan masas del componente puro al cromatgrafo y se determina el rea. Se realiza un grafico relacionando el rea de pico con la masa, se obtendr una curva de calibracin que debe ser lineal y pasar por el origen Gas Portador.- Los gases portadores son los responsables de acompaar a la mezcla a lo largo del recorrido; para conseguir esta funcin el gas debe cumplir una serie de normas, en general podemos decir que debe ser: inerte, seco y puro. Gas de Arrastre.- Este gas debe ser de baja viscosidad (bajo peso molecular), debe ser inerte, seguro, de alta pureza y econmico. Cromatograma.- Es la representacin grafica de la seal en funcin del tiempo una vez que la muestra es inyectada a un sistema cromatogrfico. Para obtener este cromatograma a la salida de la columna se coloca un sistema de deteccin y registro, que permite responder a una propiedad de la solucin que contiene el analito o del propio analito en funcin del tiempo, Funcionamiento del Cromatograma.- Los compuestos eluidos (que han atravesado la fase estacionaria) son transportados por la fase mvil a un detector que los registra en forma de curvas gaussianas (forma de campana). Dichos seales se denominan picos y el conjunto de picos y lnea base registrados se denomina cromatograma. Hasta aqu la cromatografa ha cumplido su primer cometido, separacin de los compuestos de la mezcla pero adems, los picos dan informacin cualitativa y cuantitativa de la mezcla en cuestin: 10

Cromatografa de Gases (a) Cualitativa: el tiempo de retencin tR es siempre constante bajo condiciones cromatogrficas idnticas. Por tanto un pico puede ser identificado por comparacin de tiempos de retencin. (b) Cuantitativa: el rea de un pico es proporcional a la cantidad de muestra inyectada. Como veremos ms adelante se puede crear una curva de calibrado a partir de las reas obtenidas de varias disoluciones de las que conocemos exactamente las concentraciones. Posteriormente por comparacin del rea de un pico podemos determinar su concentracin.

Split.- Es un modo donde slo una cierta cantidad de la muestra inyectada llega a la columna(porque sta "se divide" antes de entrar; una entra a la columna, otra se expulsa a travs de una vlvula, split vent). Esta cantidad se determina por la relacin de split, la cual normalmente se encuentra en el rango 1:20-1:200. Dado que el sistema de split-injection puede provocar discriminacin de los componentes de mayor punto de ebullicin, no siempre puede ser utilizado con fines cuantitativos. Con Split los picos de los cromatogramas salen ms estilizados y normalmente es ms limpio. Esto es porque si en la muestra el analito es mayoritario, el resto de componentes (suciedad, interferencias, etc.) se ven notablemente reducidos. En el modo Splitless, la mayora de muestra inyecta entra a la columna. De hecho, el analito se reconcentra en la cabeza de columna. Es ideal para muestras diluidas o detectar trazas. rea del Pico. Existen varias tcnicas para la determinacin del rea de un Pico Cromatogrfico: Integracin Manual Mtodos Geomtricos Triangulacin: En esta tcnica se trazan lneas tangentes a cada lado del pico. La altura se mide desde la lnea base hasta la interseccin de las dos tangentes. El ancho se mide tomando la interseccin de las dos lneas tangentes con la lnea base. Luego se utiliza la frmula A=1/2*Altura del Pico* Base del Pico. Las limitaciones de esta tcnica estn en el trazado de las lneas tangentes, un pequeo error al trazar las tangentes puede afectar la medida de la altura. 11

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Altura por ancho a la mitad de la Altura: Mtodos Mecnicos Planimtricos Corte y Pesada: Esta tcnica requiere recortar el pico del cromatograma, luego pesarlo en una balanza analtica. El recorte y pesada depende mucho de la habilidad del operador. Pueden introducirse errores por cambios en la humedad del papel, la grasa de las manos del operador, homogeneidad del papel. Generalmente se recomienda utilizar una fotocopia del cromatograma para no destruir el original.

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Referencias bibliogrficas:
D. A. Skoog, F. J. Holler, S. R. Crouch, Principios de anlisis instrumental, 6ta edicin, Cengage Learning, Mxico, 2008. M. Valcrcel Cases, A. Gmez Hens, Tecnicas Analticas de separacin, Editorial Revert, S.A., Espaa 1998 Tsis Caracterizacin de grasas de sobrepaso por medio de cromatografa de gases, Erika Virginia de Lucio Rodrguez, Instituto Politcnico Nacional.

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